專利名稱：Ll-f28249化合物的13-烷基-23-亞氨基和13-鹵代-23-亞氨基衍生物以及它們作為殺體 ...的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一類13-烷基-23-亞氨基和13-鹵代-23-亞氨基-LL-F28249化合物和它們作為防治溫血?jiǎng)游镏畜w內(nèi)和體外寄生蟲感染和傳染以及控制家蠅的使用。該化合物也可以施用于多種農(nóng)作物以及種植過作物和作物正在生長(zhǎng)的環(huán)境以保護(hù)作物免受由蟲、螨和線蟲所引起的破壞。
所述的LL-F28249是指由保藏于NRRL保藏中心(保藏號(hào)為15773)的蘭灰色鏈霉菌(streptomyces cyaneogrisens)、不生氰亞種(subspecies noncyanogenus)的發(fā)酵肉湯所產(chǎn)生的化合物。所說的化合物的形態(tài)特征以及它們的生產(chǎn)方法已經(jīng)在申請(qǐng)?zhí)枮?32，252(1985年5月10日提交)的共同待批專利中描述過了。
本發(fā)明的化合物具有下列結(jié)構(gòu)式
其中R1是甲基，乙基或異丙基;
R7是氫，R8是OR2，或者當(dāng)加上與它們所連接的碳原子時(shí)，R7和R8代表C＝O;
R2是氫，C1-C4烷基或
;
R4是氫，C1-C4烷基、C1-C4鹵代烷基，C1-C4烷氧基，苯氧基，C1-C4烷氧基甲基、苯氧基甲基或者由1個(gè)硝基，1-3個(gè)鹵素，1-3個(gè)C1-C4烷基，或1-3個(gè)C1-C4烷氧基任意取代的苯基;
R3是氫，甲基或乙基;
X是氟，溴，氯或碘;
W是氧或N＝Y(jié);
Y是OR5或NHR6;
R5是C1-C4烷基或C1-C4?；?和R6是C1-C4酰基;和C26-C27與氧構(gòu)成的虛線三角形表示這兒存在雙鍵或者環(huán)氧化物。
一組較佳的13-鹵代-23-亞氨基-LL-F28249化合物具有上面所示的結(jié)構(gòu)式，其中R1是異丙基;
R7是氫，R8是OR2;
R2是氫，C1-C4烷基，或
R4是氫，甲基，氯甲基，二氯甲基，三氯甲基或甲氧基甲基;
R3是甲基;
X是氟;
W是N＝Y(jié);
Y是OR5;和R5是C1-C4烷基，此外，本發(fā)明的化合物具有下列結(jié)構(gòu)式
其中R1是C1-C4烷基;
R2是氫，甲基或乙基;
R3是氫，C1-C4烷基或
R5是氫，C1-C4烷基，C1-C4鹵代烷基、C1-C4烷氧基，苯氧基，C1-C4烷氧基甲基，苯氧基甲基或由1個(gè)硝基，1-3個(gè)鹵素，1-3個(gè)C1-C4烷基或1-3個(gè)C1-C4烷氧基任意取代的苯基;
R4是甲基，乙基或異丙基;
R6是氫，C1-C4烷基、C1-C4烷氧基甲基，C1-C4鏈烷醇基，芐基或苯基;
X是氧，NOR6或NNHR7;
R7是C1-C4?；珻1-C4烷基或苯甲?；?。
一組較佳的13-烷基-23-亞氨基-LL-F28249化合物具有上面所示的結(jié)構(gòu)式，其中R1是甲基，乙基或異丙基，
R2是甲基;
R3是氫，C1-C4烷基或
R5是氫，C1-C4烷氧基甲基，C1-C4鹵代甲基或甲酰基;
R4是異丙基;
X是NOR6;和R6是C1-C4烷基，LL-F28249化合物由下列結(jié)構(gòu)式所表示
本發(fā)明的化合物是有效的抗體內(nèi)寄生蟲和抗體外寄生蟲劑并可用于保護(hù)溫血?jiǎng)游锸共辉馐苌鲜龊οx的感染和傳染。它們可用于多種農(nóng)作物以及種植過作物和作物正在生長(zhǎng)的環(huán)境以保護(hù)作物使不遭受由蟲、螨和線蟲所引起的破壞。當(dāng)施加到家蠅棲息地，食物源或繁殖場(chǎng)合時(shí)，它們能高效地控制家蠅。
令人驚奇地是，業(yè)已發(fā)現(xiàn)對(duì)上面所示的LL-F28249化合物的5、13、23、26和27位進(jìn)行化學(xué)修飾會(huì)增強(qiáng)所說的化合物殺體內(nèi)和體外寄生蟲、殺蟲、殺螨和殺線蟲的活性。更具體地說，5-羥基和5-取代的LL-F28249和26，27-環(huán)氧-LL-F28249化合物的13-鹵代-23-亞氨基衍生物以及5-羥基和5-O取代的LL-F28249化合物的13-烷基-23-亞氨基衍生物顯示了潛在的殺體內(nèi)外寄生蟲和殺蟲活性。
在上面所示的LL-F28249化合物的13-鹵代-23-亞氨基衍生物的13位上的官能作用，通過用在二甲基甲酰胺中的重鉻酸吡啶嗡氧化5和23位的羥基得到5，23-二氧-LL-F28249化合物(Ⅰ)，然后再與二氧化硒和甲酸反應(yīng)得到13-(甲酸基)-5，23-二氧-F28249化合物(Ⅱ)而達(dá)成。這樣所得到的化合物(Ⅱ)通過酸解轉(zhuǎn)化為13-羥基-5，23-二氧-LL-F28249化合物(Ⅲ)，然后與二氨基三氟化硫(DAST)反應(yīng)而給出13-氟-5，23-二氧-LL-F28249化合物(Ⅳ)。將化合物(Ⅳ)相繼與甲氧基胺氫氯化物和硼氫化鈉反應(yīng)而給出13-氟-23-甲氧基亞氨基-LL-F28249化合物(Ⅵ)。以LL-F28249 α作為起始物料，上述反應(yīng)序列在下面所示的流程圖Ⅰ中列舉。
化合物(Ⅲ)被用作為共同中間體并與鹵化劑(如三溴化磷和亞硫酰二氯)反應(yīng)而給出由化合物(Ⅳ)代表的13-溴或13-氯或13-碘-5，23-二氧-LL-F28249，其中F是Br或Cl或Ⅰ，然后相繼與烷氧基胺或羥胺和硼氫化鈉反應(yīng)而給出由化合物(Ⅴ)代表的相應(yīng)的13-鹵代-23-亞氨基-LL-F28249化合物，其中F是Br或Cl或Ⅰ，如上面的流程圖Ⅰ中所示。
給出新的5-烷氧基和5-酰氧基-13-鹵代-23-亞氨基-LL-F28249化合物的5-羥基部分的衍生作用，是通過使化合物(Ⅵ)與烷基化或?；瘎┓磻?yīng)而達(dá)成，如流程圖Ⅱ中所列舉。
R1、R3、X和Y如上所述。
或者，本發(fā)明的化合物是通過使LL-F28249起始物料與?；u，如對(duì)硝基苯甲酰氯反應(yīng)，然后進(jìn)行23-羥基氧化并在13位碳上實(shí)行官能作用，給出中間體化合物(Ⅶ)而制得，如流程圖Ⅲ中所列舉。
流程圖Ⅲ
用鹵化劑，如二氨基三氟化硫、亞硫酰二氯或三溴化磷處理化合物(Ⅶ)，然后將其與烷氧基或羥胺反應(yīng)，而給出所需要的13-鹵代-23-亞氨基-5-(酰氧基)-LL-F28249化合物，例如化合物(Ⅷ)?？蛇x擇地，將化合物(Ⅷ)在堿中水解，而給出相應(yīng)的13-鹵代-23-亞氨基-LL-F28249化合物。反應(yīng)序列在流程圖Ⅳ中列舉。
流程圖Ⅳ
R1、R3、R4、X和Y如上所述。
有益的是，13-鹵代-23-亞氨基-LL-F28249化合物的26，27位環(huán)氧衍生物可通過將13-鹵代-23-氧代前體與間氯過苯甲酸反應(yīng)，然后用烷氧基，酰氧基或羥基肟處理26，27位環(huán)氧產(chǎn)物，以給出所需要的化合物(Ⅸ)而制得，如流程圖Ⅴ中所列舉。
R1、R2、R3、X和Y如上所述。
本發(fā)明的LL-F28249化合物的13-烷基-23-亞氨基衍生物可以通過將LL-F28249化合物與醋酸酐反應(yīng)，以產(chǎn)生5-乙酸基-LL-F28249化合物(Ⅱ)而制備。使5-乙酸基-LL-F28249化合物與碳酸鈣和甲基草酰氯反應(yīng)，然后用鹽酸處理之則產(chǎn)生5-乙酸基-23｛[(甲氧基羰基)-羰基]氧基｝-LL-F28249化合物(Ⅲ)。如此獲得的化合物(Ⅲ)可通過用甲酸和二氧化硒處理，然后與鹽酸反應(yīng)而轉(zhuǎn)化為5-乙酸基-13 β-羥基-23｛[(甲氧基羰基)羰基]氧基｝LL-F28249(Ⅳ)。使分子式(Ⅳ)的化合物與氯甲酸乙酯，吡啶和4-二甲基氨基吡啶反應(yīng)產(chǎn)生5-乙酸基-13 β-[(乙氧基羰基)氧基]-23-｛[(甲氧基羰基)羰基]-氧基｝-LL-F28249化合物(Ⅴ)。使所說的分子式(Ⅴ)的化合物與三烷基鋁反應(yīng)產(chǎn)生5-乙酸基-13 β-烷基-LL-F28249化合物(Ⅵ)。分子式(Ⅵ)的化合物通過用4-甲基嗎啉N-氧化物和過釕酸四丙銨處理而轉(zhuǎn)化為5-乙酸基-13 β-烷基-23-氧-LL-F28249化合物(Ⅶ)，然后與烷氧基氫氯化胺反應(yīng)產(chǎn)生5-乙酸基-13 β-烷基-23-(O-烷基肟)-LL-F28249化合物(Ⅷ)。使化合物(Ⅷ)與強(qiáng)堿，例如氫氧化鈉反應(yīng)產(chǎn)生所需要的分子式(Ⅰ)的13 β-烷基-23-(O-烷基肟)-LL-F28249化合物。該反應(yīng)簡(jiǎn)圖在流程圖Ⅵ中列舉流程圖Ⅵ
流程圖Ⅵ 續(xù)
流程圖Ⅵ 續(xù)
令人驚奇的是，業(yè)已發(fā)現(xiàn)本發(fā)明的化合物是用于治療溫血?jiǎng)游锏母咝У臍Ⅲw內(nèi)和體外寄生蟲劑。還發(fā)現(xiàn)所說的化合物是極好的殺蟲、殺線蟲和殺螨劑，可用于防治所說的害蟲并保護(hù)農(nóng)作物使不遭受由所說的害蟲引起的破壞。
為了用于治療溫血?jiǎng)游?，如牛、羊、豬、馬、狗或其它哺乳動(dòng)物，本發(fā)明的化合物可以以諸如膠囊、巨丸、片劑或液體灌劑的劑量單元形式通過口服給藥。灌劑通常是活性成分(通常在水中)與懸浮劑(如膨潤(rùn)土)和濕潤(rùn)劑或類賦形劑和消泡劑一起的溶液、懸浮液或分散液。灌劑配方通常含有0.001-0.5%(重量)的活性化合物。膠囊和巨丸含有載體(如淀粉、滑石、硬脂酸鎂或磷酸二鈣相摻合的活性成分)。
當(dāng)需要以干的，固體的劑量單元形式施用LL-F28249衍生物時(shí)，通常采用含有所需要的量的活性化合物的膠囊，巨丸。這些劑量單元形式是通過將活性成分與合適的細(xì)分碎的稀釋劑，填料，崩解劑和/或粘合劑(如淀粉、乳糖、滑石、硬脂酸鎂、植物膠等)緊密和均勻地?fù)胶隙频?。這類劑量單元配方就其總重量和殺寄生蟲劑含量而言可以有很廣的變化，取決于諸如所要治療的宿主動(dòng)物的類型，感染的嚴(yán)重程度和類型以及宿主的重量等因素。
當(dāng)活性化合物要通過動(dòng)物飼料給藥時(shí)，將其緊密分散于飼料中，或用于局部包敷或以丸劑形式使用，后者可以加入到最終的飼料中或可供選擇地分開喂食?；蛘撸景l(fā)明的殺寄生蟲化合物也可以通過諸如瘤胃內(nèi)、肌肉，氣管內(nèi)或通過皮下注射而進(jìn)行動(dòng)物腸外給藥，這樣的給藥途徑中活性成分是溶解或分散于液體載體中。對(duì)于腸外給藥來說，活性物質(zhì)是與可接受的載體，較佳是植物油，例如花生油、棉籽油等相摻合。其它腸外(給藥)載體，例如采用酮縮醇溶膠(solketal)，丙二醇，丙三醇縮甲醛和含水非經(jīng)腸的組成的有機(jī)制劑也可以用于制備施用于溫血?jiǎng)游锏哪c外配方。
在這些配方中，一種或多種活性化合物以足夠的量溶解或懸浮于制劑中，其量為活性化合物占所說制劑的0.005%-5%(重量)。
本發(fā)明的化合物對(duì)于治療溫血?jiǎng)游锏捏w內(nèi)寄生蟲，如腸蟲是有用的。所說的化合物對(duì)于預(yù)防和治療家養(yǎng)動(dòng)物和家禽中由體外寄生蟲，如節(jié)肢動(dòng)物體外寄生蟲(例如螨、蜱、虱、蚤、和其它叮咬害蟲)所引起的疾病也是有效的。
進(jìn)一步說，這里所描述的13-鹵代-23-亞氨基-LL-F28249化合物是極好的殺蟲、殺線蟲和殺螨劑，可用于保護(hù)正在生長(zhǎng)的和已收割的作物使不遭受由上面所述的害蟲的侵蝕。本發(fā)明的化合物可以配制成干的壓實(shí)的顆粒劑、流動(dòng)劑、可濕性粉劑、粉劑、高含量粉劑、微滴乳液劑等，所有這些制劑均適合于土壤、水和/或葉面施用，并提供所需要的植物保護(hù)。這些組成包含與農(nóng)業(yè)上可接受的固態(tài)或液態(tài)載體相摻合的本發(fā)明的化合物。
業(yè)已發(fā)現(xiàn)，本發(fā)明的化合物顯示了強(qiáng)烈的殺蟲、殺線蟲和殺螨的特性，這使它們可用于防治蟲、線蟲和螨并保護(hù)農(nóng)作物、樹、灌木、貯存的谷物和觀賞植物使不遭受由蟲、線蟲和螨引起的破壞。
對(duì)于植物應(yīng)用來說，本發(fā)明的化合物可以配成干的壓實(shí)的顆粒劑，流動(dòng)劑、可濕性粉劑、粉劑、高含量粉劑、微滴乳液劑等，所有這些制劑均可適合于土壤、水和/或葉面施用，并提供所需要的植物保護(hù)。這些組成包含與農(nóng)業(yè)上可接受的固態(tài)或液態(tài)載體相摻合的本發(fā)明的化合物。
在這些組成中，化合物以足夠的量與組分緊密摻合或與組分一起研磨，活性化合物的量為占所說組成的3-20%(重量)。
本發(fā)明的組成對(duì)于對(duì)付使正在生長(zhǎng)的或貯存的作物遭受破壞的農(nóng)業(yè)害蟲是有用的。該類化合物采用已知的技術(shù)應(yīng)用，例如以噴霧劑、粉劑、乳液劑、可濕性粉劑、流體劑等施用于正在生長(zhǎng)的或貯存的作物以提供保護(hù)，保護(hù)其免遭農(nóng)業(yè)害蟲的感染。
更進(jìn)一步地說，本發(fā)明的化合物對(duì)于從所說的家蠅棲息地，食物源或繁殖場(chǎng)所來控制家蠅是極其有效的。該類化合物可以采用噴霧劑、粉劑、乳液劑、可濕性粉劑、流動(dòng)劑、微滴乳液劑、顆粒劑組成等如上所述那般施用于所說的家蠅的棲息地，食物源或繁殖場(chǎng)所。
為了使人們能進(jìn)一步理解本發(fā)明，下列實(shí)例被列出以便更詳細(xì)地說明本發(fā)明。本發(fā)明不局限于此，除非如權(quán)利要求中所限定的。
除了另外指明外，所有的部分均以重量示之。
實(shí)例15，23-二氧-LL-F28249 α的制備在氮?dú)夥障?，用重鉻酸吡啶嗡(58.0g，0.15mole)分批地處理LL-F28249 α(10.0g，0.016mole)和在二甲基甲酰胺中的硅藻土(160.0g)的混合物，在室溫下攪拌4小時(shí)，用1升二乙醚處理，攪拌15分鐘并過濾。濾液先用水，然后用鹽水洗滌，通過Mg SO4干燥并真空濃縮而給出黃色油狀殘余物。將該殘余物進(jìn)行快速色譜分離(二氧化硅，二氯甲烷∶異丙醇＝99∶1作為洗脫劑)而得到呈淡黃色固體(4.84g，49.7%)目標(biāo)產(chǎn)品，通過1HNMR、13CNMR和質(zhì)譜分析鑒定。
實(shí)例213-(甲酸基)-5，23-二氧-LL-F28249 α的制備在氮?dú)夥障拢枚趸?1.0g，9.0mmole)處理在88%甲酸中的5，23-二氧-LL-F28249 α的混合物，在50℃下攪拌2小時(shí)，冷卻至室溫，用3倍體積的二氯甲烷處理，攪拌10分鐘并通過硅藻土過濾。分離出濾液，有機(jī)相在真空中濃縮而給出淡褐色固體殘余物。對(duì)殘余物進(jìn)行快速柱色譜分離(二氧化硅，己烷∶乙酸乙酯＝2∶1作為洗脫劑)獲得呈米色固體的目標(biāo)產(chǎn)品(1.3g，43%)，通過1HNMR和13CNMR光譜鑒定。
實(shí)例313-羥基-5，23-二氧-LL-F28249 α的制備在0-5℃下，用20ml 1.2N的HCl處理13-(甲酸基)-5，23-二氧-LL-F28249 α(800mg，1.1mmole)、甲醇和二噁烷的混合物，在室溫下攪拌4小時(shí)，在40℃下靜置16小時(shí)，并真空濃縮。用乙酸乙酯吸收殘余物，先用碳酸氫鈉溶液，然后用鹽水洗滌之，通過Mg SO4干燥并真空濃縮而給出呈米色固體的目標(biāo)化合物(700mg，91%)，通過1HNMR、13CNMR和質(zhì)譜分析鑒定。
實(shí)例413-氟-5，23-二氧-LL-F28249 α和13-氟-23-氧-LL-F28249 α的制備在氮?dú)夥障潞?40℃，通過注射器以二甲氨基三氟化硫(40 μl，29.4mg，0.22mmole)處理13-羥基-5，23-二氧-LL-F28249 α(100mg，0.15mmole)在二氯甲烷中的混合物，并在-40--30℃下攪拌3小時(shí)。將反應(yīng)混合物傾注入冰水中，并分離各相。用乙酸乙酯抽提水相。合并有機(jī)相，用水和鹽水洗滌之，通過Mg SO4干燥并真空濃縮而給出呈黃色固體的目標(biāo)產(chǎn)品混合物112mg。高壓液相色譜(HPLC)分析表明在混合物中存在57%13-氟-5，23-二氧-LL-F28249 α和13%13-氟-23-氧-LL-F28249 α。產(chǎn)品混合物的柱色譜分離(二氧化硅，己烷∶乙酸乙酯＝4∶1作為洗脫劑)獲得呈黃色固體的純的13-氟-5，23-二氧-LL-F28249 α，通過1H、13C和19F NMR和質(zhì)譜分析鑒定。
實(shí)例513-氟-23-(O-甲基肟)-LL-F28249 α的制備在氮?dú)夥蘸?10℃--5℃下，用咪唑(10mg，0.15mmole)處理13-氟-5，23-二氧-LL-F28249 α(30mg，0.05mmole)在無水乙醇中的混合物，然后加入甲氧基胺氫氯化物(12.5mg，0.15mmole)，在-10℃--5℃下攪拌2小時(shí)，用硼氫化鈉(12.0mg，0.30mmole)處理之，并在-10℃--5℃下攪拌1小時(shí)。反應(yīng)混合物用水急冷，在環(huán)境溫度下攪拌15分鐘并真空濃縮。將所得的殘余物分散于乙酸乙酯和水中，分離各相，先用水，然后用鹽水洗滌有機(jī)相，通過Mg SO4干燥并真空濃縮而得到殘余物。將該殘余物進(jìn)行柱色譜分離(二氧化硅，己烷、乙醚＝4∶1作為洗脫劑)而獲得呈白色固體的目標(biāo)產(chǎn)品，通過1H、13C和19FNMR和質(zhì)譜分析鑒定。
實(shí)例613-氟-5-(甲酸基)-23-(O-甲基肟)-LL-F28249α的制備在氮?dú)夥蘸?℃下，用1.0ml乙酸和甲酸的混合酐處理13-氟-23-(O-甲基肟)-LL-F28249α(80mg，0.12mmole)的混合物，在室溫下攪拌1/2小時(shí)，然后傾倒入冰和飽和碳酸氫鈉溶液的混合物中。用乙醚抽提反應(yīng)混合物，用冷的稀鹽酸溶液洗滌乙醚抽提物，然后進(jìn)行水洗滌和飽和碳酸氫鈉洗滌。通過Na2SO4干燥有機(jī)相并真空濃縮。所得到的殘余物進(jìn)行快速色譜分離(二氧化硅，二氯甲烷∶乙酸乙酯＝40∶1作為洗脫劑)而獲得呈白色固體的標(biāo)題產(chǎn)物(34.4mg，42%)，通過1H和13C NMR和質(zhì)譜分析鑒定。
實(shí)例75-(二氯乙酸基)-13-氟-23-(O-甲基肟)-LL-F28249α的制備在氮?dú)夥蘸?-10℃下，先以吡啶(501L，0.62mmole)，然后以二氯乙酰氯(0.02 l L，0.208mmole)處理13-氟-23-(O-甲基肟)-LL-F28249α(85mg，0.12mmole)和二甲基氨基吡啶(2.9mg，0.024mmole)在二氯甲烷中的攪拌混合物。在5-10℃下經(jīng)2小時(shí)后，將反應(yīng)混合物傾倒入飽和的碳酸氫鈉和冰中，并用乙醚抽提。相繼以稀鹽酸(0.5%)、水和飽和碳酸氫鈉溶液洗滌有機(jī)相，通過Na2SO4干燥并真空濃縮。殘余物進(jìn)行急速色譜分離(二氧化硅，0.25-0.5%異丙醇在二氯甲烷中，梯度洗脫)而給出呈白色固體的目標(biāo)產(chǎn)品，通過1H和13C NMR以及質(zhì)譜分析鑒定。
實(shí)例813-氟-23-(O-甲基肟)-5-(三氯乙酸基)-LL-F28249 α的制備在氮?dú)夥蘸?-10℃下，先以吡啶(501L，0.62mmole)然后以三氯乙酰氯(201L，0.18mmole)處理13-氟-23-(O-甲基肟)-LL-F28249 α(80mg，0.12mmole)和二甲基氨基吡啶(2.9mg，0.024mmole)在二氯甲烷中的攪拌混合物。在5-10℃下經(jīng)1 1/4 小時(shí)后，將反應(yīng)混合物傾倒入飽和碳酸氫鈉和冰中，并用乙醚抽提。有機(jī)相相繼用稀鹽酸(0.5%)，水和飽和碳酸氫鈉洗滌，通過Na2SO4干燥并真空濃縮而給出白色泡沫殘余物。該殘余物進(jìn)行快速色譜分離(二氧化硅、0.10%-0.25%異丙醇在二氯甲烷中，梯度洗脫)而獲得呈米色固體的目標(biāo)產(chǎn)品(63.4mg，66%)，通過1H、13C NMR和質(zhì)譜分析鑒定。
實(shí)例95-[(對(duì)-硝基苯甲?；?氧基]-LL-F28249 α的制備在20-25℃下，用對(duì)-硝基苯甲酰氯(2.45g，13.2mmole)處理LL-F28249 α(6.36g，10.4mmole)和吡啶(1.98g，25mmole)在二氯甲烷中的混合物，攪拌4小時(shí)，靜置16小時(shí)，并用飽和碳酸氫鈉和二氯甲烷處理。將反應(yīng)混合物攪拌5分鐘，分離各相。有機(jī)相相繼以飽和碳酸氫鈉、5%鹽酸和鹽水洗滌，通過Mg SO4干燥并真空濃縮而獲得呈白色固態(tài)泡沫體的目標(biāo)產(chǎn)品(7.9g，93.5%純度，通過液相色譜分析)，通過1HNMR和質(zhì)譜分析和微量分析鑒定。
實(shí)例105-[(對(duì)-硝基苯甲?；?氧基]-23-氧-LL-F28249 α的制備在20-25℃下，用重鉻酸吡啶鎓迅速處理5-[對(duì)-硝基苯甲?；?氧基]-LL-F28249 α(6.3g，8.4mmole)在二甲基甲酰胺中的攪拌混合物。將反應(yīng)混合物攪拌6小時(shí)，傾倒入水中，攪拌15分鐘并過濾。濾餅用水洗滌之，空氣干燥并用回流的乙酸乙酯吸收它，用硅藻土處理并過濾。濾液真空濃縮而給出紅褐色固體殘余物。殘余物從正丙醇中重結(jié)晶而得到呈白色晶體的目標(biāo)產(chǎn)品(3.3g，51.7%)，通過H NMR和質(zhì)譜分析鑒定。
實(shí)例1113-羥基-5-[(對(duì)-硝基苯甲酰基)氧基]-23-氧-LL-F28249 α的制備將5-[(對(duì)-硝基苯甲?；?氧基]-23-氧-LL-F28249 α(1.25g，1.36mmole)和二氧化硒(0.78g，7.02mmol)在20ml的三氟乙醇∶水為9∶1中的攪拌的混合物在40℃下加熱4小時(shí)，冷卻至室溫并通過硅藻土過濾。濾液進(jìn)行真空濃縮;用二氯甲烷吸收所得到的殘余物并過濾除去殘余的二氧化硒，濾液真空濃縮;將所得到的殘余物進(jìn)行快速色譜分離(二氧化硅，乙酸乙酯∶乙烷＝1∶2作為洗脫劑)而獲得呈白色固體的目標(biāo)產(chǎn)品(0.29g，27%)，通過1H、13C NMR和質(zhì)譜分析鑒定。
實(shí)例1213-氟-5-[(對(duì)-硝基苯甲?；?氧基]-23-氧-LL-F28249 α的制備在氮?dú)夥蘸?70℃下，通過注射器逐滴地用二甲基氨基三氟化硫(801L，0.60mmole)處理13-羥基-5-[(對(duì)-硝基苯甲酰基)氧基]-23-氧-LL-F28249 α(0.5mmole)在干二氯甲烷中的混合物。在-70℃下經(jīng)20分鐘后，用1/2ml水和1ml甲醇將反應(yīng)混合物急冷，并在-78-0℃下攪拌15分鐘，使之升至室溫，并真空濃縮。將殘余物進(jìn)行快速色譜分離(二氧化硅，二氯甲烷/乙酸乙酯混合物作為洗脫劑)而獲得呈白色固體的目標(biāo)產(chǎn)品(236mg，58.7%)，通過1H、13C和APT NMR以及質(zhì)譜分析鑒定。
實(shí)例1313-氟-23-氧-LL-F28249 α的制備在5℃下，逐滴地用1N NaOH(0.35ml，0.35mmol)處理13-氟-5-[(對(duì)-硝基苯甲酰基)氧基]-23-氧-LL-F28249 α(187mg，0.24mmole)在二噁烷中的急速攪拌的混合物，在10-15℃下攪拌3小時(shí)，用乙酸乙酯和水稀釋并充分混合。分離各相，用水洗滌有機(jī)相，通過Na SO4干燥并真空濃縮。將殘余物進(jìn)行快速色譜分離(二氧化硅，乙酸乙酯∶己烷為1∶2-1∶1梯度洗脫)而給出呈白色粉末的目標(biāo)產(chǎn)品(117mg，78%)，通過1H和13C NMR和質(zhì)譜分析鑒定。
實(shí)例1426，27-環(huán)氧-13-氟-23-氧-LL-F28249 α(Ⅰ)和3，4∶26，27-二環(huán)氧-13-氟-23-氧-LL-F28249 α(Ⅱ)的制備在5-10℃下，用純化的間-氯過苯甲酸(41.7mg，0.24mmole)處理13-氟-23-氧-LL-F28249 α(62.8mg，0.10mmole)在二氯甲烷中的攪拌的混合物，在5-10℃下攪拌3小時(shí)，并用10%碳酸氫鈉溶液急冷。分離各相，對(duì)有機(jī)相進(jìn)行真空濃縮。將所得到的殘余物進(jìn)行快速色譜分離(二氧化硅，己烷∶乙酸乙酯梯度洗脫，2∶1-1∶1)而給出目標(biāo)產(chǎn)品的混合物。該混合物通過制備的反相高壓液相色譜法(HPLC)(C-18柱，丙腈∶水＝65∶35)進(jìn)一步純化而獲得呈白色粉末的目標(biāo)產(chǎn)品(Ⅰ)(18mg，29%)和呈白色粉末的目標(biāo)產(chǎn)品(Ⅱ)(16mg，26%)。兩種化合物(Ⅰ)和(Ⅱ)均通過1H、13C NMR和質(zhì)譜分析鑒定。
實(shí)例1526，27-環(huán)氧-13-氟-23-(O-甲基肟)-LL-F28249 α的制備將26，27-環(huán)氧-13-氟-23-LL-F28249 α(7.6mg，0.012mmole)、羥胺氫氯化物(4.5mg，0.05mmole)和乙酸鈉(6.6mg，0.08mmole)在甲醇中的混合物在室溫下攪拌6小時(shí)，并真空濃縮。殘余物在水和二氯甲烷之間分配。分離出有機(jī)相并真空濃縮。將所得到的殘余物進(jìn)行色譜分離(二氧化硅，乙酸乙酯∶己烷＝1∶1)而獲得呈白色粉末的目標(biāo)產(chǎn)品(6.0mg，76%)，通過1H和13CNMR和質(zhì)譜分析鑒定。
實(shí)例1613-氯-5，23-二氧-LL-F28249 α的制備在氮?dú)夥蘸?-10℃下，通過注射器逐滴地用亞硫酰二氯(30 lL，18.4mg，0.15mmole)處理13-羥基-5，23-二氧-LL-F28249 α(70mg，0.10mmole)在二氯甲烷中的混合物，在5-10℃下攪拌2小時(shí)，并在室溫下攪拌16小時(shí)，然后真空濃縮(二氧化硅，己烷∶乙酸乙酯∶75∶25)而獲得呈米色固體的目標(biāo)產(chǎn)品(38.5mg，60%)，通過1HNMR和質(zhì)譜分析鑒定。
實(shí)例1713-溴-5，23-二氧-LL-F28249 α的制備在氮?dú)夥蘸?-10℃下，通過注射器用三溴化磷(20 lL，57.6mg，0.21mmole)處理13-羥基-5，23-二氧-LL-F28249 α(97mg，0.15mmole)在苯中的混合物，在5-10℃下攪拌1小時(shí)，傾倒入水中并用乙酸乙酯抽提。用鹽水洗滌有機(jī)相，通過Mg SO4干燥，并真空濃縮。將半固體殘余物進(jìn)行色譜分離兩次(二氧化硅，己烷∶乙酸乙酯＝9∶1)而獲得呈淡黃色固體的目標(biāo)產(chǎn)品，通過質(zhì)譜分析鑒定。
實(shí)例18試驗(yàn)化合物抗寄生蟲活性的評(píng)價(jià)本發(fā)明的化合物在各種活性成分濃度下對(duì)于腸蟲、螨和節(jié)肢動(dòng)物的體外寄生蟲的抗寄生蟲活性通過下列試驗(yàn)實(shí)例來確定。這些試驗(yàn)的結(jié)果匯總于表Ⅰ中。
試驗(yàn)化合物用于控制溫血?jiǎng)游镏械纳咝蚊珗A線蟲的評(píng)價(jià)在這些試驗(yàn)中，將活性成分以足夠的量溶解于聚乙二醇和二甲基亞砜(PEG∶DMSO)(1∶2V/V)中以對(duì)動(dòng)物提供0.0156-0.1250mg試驗(yàn)化合物/kg的處理。
為了評(píng)價(jià)試驗(yàn)化合物，在0天時(shí)，用400-600個(gè)傳染的羊源蛇形毛圓線蟲的幼蟲感染5周齡的雄性沙土鼠。在第7天，將沙土鼠稱重并開始處理(治療)。在處理后的第7天，通過管飼法施用試驗(yàn)化合物。在處理后的第11天，殺死沙土鼠并對(duì)保留下來的寄生蟲進(jìn)行清點(diǎn)。通過在經(jīng)處理的動(dòng)物中的寄生蟲的計(jì)數(shù)和未經(jīng)處理的感染的對(duì)照物中寄生蟲的計(jì)數(shù)的比較來計(jì)算百分效率，采用下列公式(對(duì)照物平均值-經(jīng)處理的平均值)/(對(duì)照物平均值) ×100＝效率%在這些評(píng)價(jià)中，每次試驗(yàn)重復(fù)三次。
所獲得的數(shù)據(jù)匯總于表Ⅰ中。
試驗(yàn)化合物對(duì)于控制兔耳癢螨(耳螨)的評(píng)價(jià)在試驗(yàn)前一天或試驗(yàn)?zāi)翘斓脑缟?，將試?yàn)化合物溶解于丙酮中并稀釋至所需要的濃度。要對(duì)濃度進(jìn)行計(jì)算以使400 l L中含有欲置于每一張濾紙上的量。將400 l L該溶液通過移液管吸入過濾紙片的頂部(3.7cm直徑)和底部(3.5cm直徑)，然后將濾紙片置于陶瓷板上干燥[注意該步驟應(yīng)在通風(fēng)櫥內(nèi)進(jìn)行]。濾紙為一面粗糙和一面光滑。將試驗(yàn)溶液加入粗糙面，當(dāng)干燥時(shí)，粗糙面往上放。干燥時(shí)，將兩片濾紙置于陪替氏培養(yǎng)皿中，兩個(gè)粗糙面呈面對(duì)面放置，它們之間通過折成塞條形狀的硬紙小片隔開。將培養(yǎng)皿保持于室溫下過夜(如果需要，可在試驗(yàn)前一天進(jìn)行)。每一個(gè)試驗(yàn)均依次采用0.01、0.1和1.0 l L/cm2的標(biāo)準(zhǔn)物。
試驗(yàn)?zāi)翘斓脑绯浚瑥母腥镜耐玫亩渖鲜占臧_(含螨蟲)。將該材料置于在照明放大鏡下的大的陪替氏培養(yǎng)皿中。螨蟲從疥癬中爬出，很容易被收集于解剖針的針尖上或微小鑷子的一個(gè)叉頭上。將每一個(gè)培養(yǎng)皿的頂部濾紙移出，將12個(gè)螨蟲放于底部濾紙上再將頂部濾紙放回原處。在重新將頂部濾紙放回陪替氏培養(yǎng)皿之前，要用凡士林(Vaseline)涂抹培養(yǎng)皿的邊緣以阻止螨蟲逃出。
為了評(píng)價(jià)試驗(yàn)，每一個(gè)劑量下的試驗(yàn)通常進(jìn)行4次，在4小時(shí)2次，在24小時(shí)2次。
在螨蟲加入至培養(yǎng)皿之后，將每一次重復(fù)實(shí)驗(yàn)的培養(yǎng)皿置于一個(gè)淺盤中，然后將淺盤置于帶有幾塊濕毛巾的塑料袋中并維持于室溫。
4或24小時(shí)后，在解剖放大鏡下檢查培養(yǎng)皿，操作如下1.小心打開培養(yǎng)皿，移出頂部濾紙并集攏。
2.用軟鉛筆在底部濾紙上畫一個(gè)約1/2cm直徑的小圓。
3.采用一支一次性吸液管輕輕地濕潤(rùn)劃圓或圓周圍的區(qū)域。
4.將所有的螨蟲從培養(yǎng)皿中移入該圓中。仔細(xì)觀察-蓋上、頂部濾紙上和底部濾紙下面的螨蟲。
5.清點(diǎn)并記錄圓中的螨蟲數(shù)目。
6.重新蓋上頂蓋并將培養(yǎng)皿置于邊上。
7.至少在15分鐘后，清點(diǎn)殘留于圓中的螨蟲(這些是死的螨蟲)。
8.計(jì)算并記錄存活的螨蟲數(shù)。
9.如下那般計(jì)算效率百分?jǐn)?shù)(死螨蟲總數(shù))/(螨蟲總數(shù)) ×100%＝效率%所得到的數(shù)據(jù)匯總于表Ⅰ中。
控制家蠅的試驗(yàn)化合物的評(píng)價(jià)在該試驗(yàn)系列中，將剛羽化的家蠅幼蟲置于含經(jīng)發(fā)酵的全脂牛奶和干燥牛血的非限定培養(yǎng)基中生長(zhǎng)。試驗(yàn)化合物加入牛奶中，通過幼蟲不能化蛹來測(cè)定活性。
試驗(yàn)在1 oz塑料藥杯中進(jìn)行。將紙巾(Scott C-Fold紙巾，＃150)切成約3.5×10cm的片。將其中的三片折疊成手風(fēng)琴狀并置入每一個(gè)紙杯中。在試驗(yàn)前24小時(shí)，將1/2加侖全脂牛奶加入到51L的燒杯中并置于39℃下的培養(yǎng)箱中。試驗(yàn)?zāi)翘斓脑缟?，將?jīng)發(fā)酵的牛奶從培養(yǎng)箱中取出。攪拌并傾倒入小燒杯中(均為100ml)。往每個(gè)小燒杯中加入1-2g干牛血，加以攪拌以分散牛血并保溫。
計(jì)算試驗(yàn)化合物的劑量以使其0.1ml含有欲加入到100ml牛奶中的試驗(yàn)化合物的量?；衔飸?yīng)該溶解于丙酮中。往每一個(gè)對(duì)照燒杯中加入100 l L丙酮。
從培養(yǎng)箱中拿出每一個(gè)燒杯并置于磁力攪拌器上。加入試驗(yàn)化合物并徹底地混合。然后移出20ml的部分并將其加入經(jīng)標(biāo)記的試驗(yàn)杯中(4倫琴當(dāng)量/每次試驗(yàn))。采用一把小型涂抹刷將20條幼蟲轉(zhuǎn)移到每一個(gè)杯中，然后用其上具有幾個(gè)針孔的塑料袋將燒杯封閉起來。將裝有燒杯的塑料袋放于一個(gè)平盤上，將平盤置于27℃培養(yǎng)箱中一星期。
從培養(yǎng)箱中取出盤子并記錄每一個(gè)袋中蛹數(shù)。取出紙巾并仔細(xì)檢查殘留于杯中的任何蛹。大多數(shù)蛹分散于塑料袋中。如下那般計(jì)算百分效率(從4個(gè)試驗(yàn)杯中得到的蛹數(shù))/(杯子數(shù)/每次試驗(yàn)×20) ×100以對(duì)蛹化的百分抑制表示的最終的結(jié)果被用于校正對(duì)照物死亡率，采用Abbott′s公式。所得到的數(shù)據(jù)匯總于表Ⅰ中。
實(shí)例19試驗(yàn)化合物的殺蟲和殺螨活性的評(píng)價(jià)在下列評(píng)價(jià)中，試驗(yàn)溶液是通過將試驗(yàn)化合物溶解于含35%丙酮和水混合物中至濃度為10，000ppm而制得的。然后根據(jù)需要用水進(jìn)行隨后的稀釋。
Heliothis virescens，卵，煙芽夜蛾將約6-7cm長(zhǎng)的棉花幼芽葉子浸入試驗(yàn)溶液中，攪拌3秒鐘。將卵集攏于一塊干酪包布上，將干酪包布分成10-20mm2，每塊中含有50-100個(gè)卵(6-30小時(shí)齡)。將帶有卵的方形干酪包布也浸入試驗(yàn)溶液中并放在經(jīng)處理的葉子上。將該組合體置于通風(fēng)櫥中至干燥，然后將它們放入其中已放置有5cm長(zhǎng)的潮濕的齒形紗布條的8oz紙杯中。將一個(gè)透明的塑料蓋子蓋于杯子頂部，在計(jì)算死亡率以前維持試驗(yàn)3天。
Heliothis virescens，第三齡期，煙芽夜蛾將棉花子葉浸泡于試驗(yàn)溶液中，并在通風(fēng)櫥中干燥。干燥后，每片子葉切成四等分，將其中10個(gè)切片各自放入含有5-7mm長(zhǎng)的潮濕的齒形紗布條的30ml塑料藥杯中。往每一個(gè)杯中加入一個(gè)第三齡期毛蟲，用一個(gè)紙板蓋蓋住杯子。在清點(diǎn)死亡數(shù)和估算對(duì)投飼破壞的減少以前，試驗(yàn)維持3天。
Spondoptera eridania，第三齡期幼蟲，南方灰翅夜蛾將長(zhǎng)至7-8cm長(zhǎng)的Sieva利馬豆葉浸泡于試驗(yàn)溶液中，攪拌3秒鐘并置于通風(fēng)櫥中至干燥。然后將該葉子置于其底部有潮濕濾紙和10個(gè)第三齡期毛蟲的一個(gè)100×10mm陪替氏培養(yǎng)皿中。在3天和5天時(shí)，對(duì)死亡率、減少投飼或任何干擾正常蛻皮進(jìn)行觀察。
Aphis fabae，混合齡期，豆蚜在試驗(yàn)前1天用約100-200個(gè)蚜蟲感染具有約5cm高的單株旱金蓮植物(Tropaeolup sp.)的缽。在通風(fēng)櫥中，采用＃154 De Vilbiss噴霧器將試驗(yàn)溶液噴灑每一個(gè)缽，噴灑進(jìn)行2個(gè)循環(huán)(4轉(zhuǎn)/分轉(zhuǎn)臺(tái))。噴灑口保持離植物約15cm，噴灑直接進(jìn)行以完全覆蓋植物和蚜蟲。將經(jīng)噴灑的缽側(cè)著放在白色搪瓷淺盤上并保持2天，然后進(jìn)行死亡率估算。
Empoasca abrupta，成蟲，西部馬鈴薯微葉蟬在攪拌下，將約5cm長(zhǎng)的Sieva利馬豆葉子浸泡于試驗(yàn)溶液中3秒鐘，置于通風(fēng)櫥中至干燥。將葉子放入其底部含有潮濕濾紙的100×10mm陪替氏培養(yǎng)皿中。往每一個(gè)培養(yǎng)皿中加入約10個(gè)成蟲微葉蟬，在進(jìn)行死亡率計(jì)算以前，試驗(yàn)進(jìn)行3天。
Tetranychus urtical，P-抗性棉葉螨(棉紅蜘蛛)選出具有長(zhǎng)成7-8cm的初生葉的Sieva利馬豆科植物并修剪為每缽一株植物。從來自螨的主要群落的葉子中切下一小片，并將該小片放于試驗(yàn)植物的每一片葉子上。在試驗(yàn)前，如上狀態(tài)保持約2小時(shí)以使螨蟲能移至試驗(yàn)植物上并產(chǎn)卵。切片的大小不同以使每片葉子具有約100個(gè)螨蟲。試驗(yàn)時(shí)，取出用于轉(zhuǎn)移螨蟲的葉子并毀掉。在攪拌下，將經(jīng)感染了螨蟲的植物浸泡于試驗(yàn)溶液中3秒鐘，并置于通風(fēng)櫥中至干燥。在采用第一片葉子對(duì)成蟲殺死率進(jìn)行估算前，將植物保持2天。在對(duì)卵和/或新羽化若蟲的殺死進(jìn)行觀察以前，將第二片葉子在植物上再保持5天。
評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)0＝無效 5＝50-65%殺死1＝10-25%殺死 6＝66-75%殺死2＝26-35%殺死 7＝76-85%殺死3＝36-45%殺死 8＝86-99%殺死
4＝46-55%殺死 9＝100% 殺死所得到的數(shù)據(jù)匯總于表Ⅱ中。
實(shí)例205-乙酸基-LL-F28249 α的制備往LL-F28249 α(32.57g，39.3mmol)和吡啶(200ml)的0℃溶液中加入乙酸酐(20ml，212mmol)。將反應(yīng)混合物在0℃下攪拌3天。反應(yīng)混合物真空濃縮而產(chǎn)生黃色殘余物。將殘余物溶解于乙酸乙酯中，相繼用水、稀鹽酸溶液、水、10%碳酸氫鈉溶液和鹽水洗滌，通過無水硫酸鈉干燥，并真空濃縮而產(chǎn)生呈淡黃色泡沫體的目標(biāo)化合物(35.47g)，通過NMR譜分析鑒定。
實(shí)例215-乙酸基-23-｛[(甲氧基羰基)羰基]氧基｝-LL-F28249 α的制備往5-乙酸基-LL-F28249α(35.47g，53.1mmol)、碳酸鈣(11.04g，110.3mmol)和二氯甲烷的混合物中加入甲基草酰氯(8.0ml，87mmol)。在室溫下將反應(yīng)混合物攪拌2小時(shí)。然后將反應(yīng)混合物冷至0℃并將2N鹽酸溶液(60ml)緩慢加入到混合物。往混合物中加水，實(shí)現(xiàn)層分離。用二氯甲烷稀釋有機(jī)層，相繼用水、10%碳酸氫鈉溶液、水和鹽水洗滌，通過無水硫酸鈉干燥，并真空濃縮而產(chǎn)生呈黃色泡沫體的目標(biāo)化合物(41.28g)，通過NMR譜分析鑒定。
實(shí)例225-乙酸基-13 β-羥基-23-｛[(甲氧基羰基)羰基]氧基｝-LL-F28249 α的制備往5-乙酸基-23-｛[(甲氧基羰基)羰基]氧基｝-LL-F28249 α(41.28g，55.71mmol]和88%甲酸溶液(200ml)的混合物中加入二氧化硒(8.6g，77.5mmol)。將反應(yīng)混合物在室溫下攪拌90分鐘，然后用乙酸乙酯稀釋混合物，并通過硅藻土過濾。濾液在冰/丙酮浴中冷卻。然后在攪拌下將20%氫氧化鈉溶液(550ml)緩慢加入冷的濾液中。分離出有機(jī)相，并相繼以10%碳酸氫鈉溶液，水和鹽水洗滌之，通過無水硫酸鈉干燥，并真空濃縮而得到橙色泡沫體。將該泡沫體溶解于甲醇中并加入2N鹽酸溶液(25ml)。將反應(yīng)溶液在室溫下攪拌21/2小時(shí)，然后加入10%碳酸氫鈉溶液(30ml)。將混合物真空濃縮產(chǎn)生深紅色殘余物。將紅色殘余物溶解于乙酸乙酯中，相繼用水、10%碳酸氫鈉溶液和鹽水洗滌，通過無水硫酸鈉干燥，并真空濃縮而產(chǎn)生橙色泡沫體。對(duì)該泡沫體進(jìn)行色譜分離(采用硅膠和己烷/乙酸乙酯(1∶1)作為洗脫劑)而產(chǎn)生呈米色粉末的目標(biāo)化合物(11.50g)，通過NMR譜分析鑒定。
實(shí)例235-乙酸基-13 β-[(乙氧基羰基)氧基]-23-｛[(甲氧基羰基)羰基]氧基｝-LL-F28249 α的制備在氮?dú)夥占笆覝叵拢寐燃姿嵋阴?0.23g，2.12mmol)，吡啶(0.25g，3.16mmol)和4-二甲基氨基吡啶(0.05g，0.41mmol)處理5-乙酸基-13 β-羥基-23-｛[(甲氧基羰基)羰基]氧基｝-LL-F28249 α在二氯甲烷中的混合物。在室溫下繼續(xù)攪拌2小時(shí)，然后用乙酸乙酯稀釋反應(yīng)混合物，再相繼用水、5%鹽酸溶液、水、10%碳酸氫鈉溶液和鹽水洗滌之，通過無水硫酸鈉干燥，并真空濃縮而給出殘余物。該殘余物用硅膠進(jìn)行色譜分離，并用己烷/乙酸乙酯(3∶1)洗脫而產(chǎn)生呈白色粉末的目標(biāo)化合物(0.33g，59%)，通過1HNMR、13CNMR和質(zhì)譜分析鑒定。
實(shí)例245-乙酸基-13 β-甲基-LL-F28249 α的制備在氮?dú)夥障拢萌谆X(0.46g，6.4mmol)將5-乙酸基-13 β-[(乙氧基羰基)氧基]-23-｛[(甲氧基羰基)羰基]氧基｝-LL--F28249 α(0.26g，0.31mmol)在二氯甲烷中的-78℃的混合物處理一個(gè)2分鐘的周期。在-78℃下繼續(xù)攪拌15分鐘，然后使反應(yīng)混合物升溫至0℃并用冰浴維持0℃達(dá)30分鐘，移去冰浴，將反應(yīng)混合物在室溫下攪拌4小時(shí)。
當(dāng)用冰浴冷卻時(shí)，將水(0.5ml)緩慢地加入到反應(yīng)混合物中。氣體放出后，將反應(yīng)混合物傾倒入乙酸乙酯和2N鹽酸溶液的混合物中。分離出乙酸乙酯層，并相繼以水、10%碳酸氫鈉溶液和鹽水洗滌。通過無水硫酸鈉干燥，并真空濃縮而產(chǎn)生殘余物。殘余物進(jìn)行色譜分離(使用硅膠，二氯甲烷/丙腈(9∶1)作為洗脫劑)而獲得呈白色粉末的目標(biāo)化合物(0.144g，56%)，通過1HNMR、13C NMR和質(zhì)譜分析鑒定。
按實(shí)例5的程序，但是用三乙基鋁取代三甲基鋁產(chǎn)生5-乙酸基-13 β-乙基-LL-F28249 α。
實(shí)例255-乙酸基-13 β甲基-23-氧-LL-F28249 α的制備往5-乙酸基-13 β-甲基-LL-F28249 α(0.188g，0.28mmol)、幾個(gè)4
分子篩和丙腈的混合物中加入4-甲基嗎啉N-氧化物(0.131g，1.12mmol)。在室溫下攪拌15分鐘后將過釕酸四丙銨(0.047g，0.13mmol)加入該混合物并繼續(xù)攪拌1小時(shí)。反應(yīng)混合物通過硅藻土過濾，用乙酸乙酯稀釋并相繼用水、稀鹽酸溶液、水、10%碳酸氫鈉溶液和鹽水洗滌，通過無水硫酸鈉干燥，并真空濃縮而獲得殘余物。對(duì)該殘余物進(jìn)行色譜分離(使用硅膠，二氯甲烷/丙腈(19∶1)作為洗脫劑)而獲得呈白色粉末的目標(biāo)化合物(0.108g，57%)，通過1H NMR、13C NMR和質(zhì)譜分析鑒定。
按實(shí)例6的程序，但用5-乙酸基-13 β-乙基-LL-F28249α代替5-乙酸基-13 β-甲基-LL-F28249 α獲得5-乙酸基-13β-乙基-23-氧-LL-F28249α。
實(shí)例265-乙酸基-13 β-甲基-23-(O-甲基肟)-LL-F28249 α的制備在室溫下，將5-乙酸基-13 β-甲基-23-氧-LL-F28249 α(0.144g，0.22mmol)，乙酸鈉(0.096g，1.17mmol)、甲氧基胺氫氯化物(0.092g，1.1mmol)和甲醇的混合物攪拌1小時(shí)。用乙酸乙酯稀釋，相繼以水和鹽水洗滌之，通過無水硫酸鈉干燥，并真空濃縮而得到殘余物。將殘余物進(jìn)行色譜分離(使用硅膠，己烷/乙酸乙酯(4∶1)作為洗脫劑)而獲得呈白色固體的目標(biāo)化合物(0.125g，83%)，通過1HNMR、13C NMR和質(zhì)譜分析鑒定。
按實(shí)例7的程序，但用5-乙酸基-13 β-乙基-23-氧-LL-F28249 α代替5-乙酸基-13 β-甲基-23-氧-LL-F28249 α而獲得5-乙酸基-13 β-乙基-23-(O-甲基肟)-LL-F28249α。
實(shí)例2713β-甲基-23-(O-甲基肟)-LL-F28249 α的制備往5-乙酸基-13 β-甲基-23-(O-甲基肟)-LL-F28249 α(0.11g，0.16mmol)和甲醇的0℃的溶液中加入氫氧化鈉(0.5ml、0.50mmol)。在0℃下繼續(xù)攪拌2小時(shí)，然后用乙酸乙酯稀釋反應(yīng)混合物，相繼以水和鹽水洗滌，通過無水硫酸鈉干燥，并真空濃縮而得到殘余物。將該殘余物進(jìn)行色譜分離(采用硅膠和己烷/乙酸乙酯)(3∶1)作為洗脫劑)而得到呈白色泡沫體的目標(biāo)化合物(0.079g，77%)，通過1H NMR、13C NMR和質(zhì)譜分析鑒定。
按實(shí)例8的程序，但用5-乙酸基-13 β-乙基-23-(O-甲基肟)-LL-F28249 α代替5-乙酸基-13 β-甲基-23-(O-甲基肟)-LL-F28249 α而獲得5-乙酸基-13 β-乙基-23-(O-甲基肟)-LL-F28249 α。
實(shí)例28試驗(yàn)化合物的抗寄生蟲活性的評(píng)價(jià)在不同濃度下本發(fā)明的化合物的抗寄生蟲的活性是通過下列試驗(yàn)實(shí)例來確定的。這些試驗(yàn)的結(jié)果匯總于表Ⅰ中。
試驗(yàn)化合物用于控制溫血?jiǎng)游镏械纳咝蚊珗A線蟲的評(píng)價(jià)在這些試驗(yàn)中，將活性成分以足夠的量溶解于聚乙二醇和二甲基亞砜(PEG∶DMSO)(1∶2v/v)以提供0.0156-0.1250mg試驗(yàn)化合物/Kg的處理給動(dòng)物。
為了評(píng)價(jià)試驗(yàn)化合物，在0天時(shí)，用400-600個(gè)傳染的羊源蛇形毛圓線蟲的幼蟲感染5周齡的雄性沙土鼠。在第7天，將沙土鼠稱重并開始處理(治療)。在處理后的第7天，通過管飼法施用試驗(yàn)化合物。在處理后的第11天，殺死沙土鼠并對(duì)保留下來的寄生蟲進(jìn)行清點(diǎn)。通過在經(jīng)處理的動(dòng)物中的寄生蟲的計(jì)數(shù)和未經(jīng)處理的感染的對(duì)照物中寄生蟲的計(jì)數(shù)來比較來計(jì)算百分效率，采用下列公式(對(duì)照物平均值-經(jīng)處理的平均值)/(對(duì)照物平均值) ×100＝效率%在這些評(píng)價(jià)中，每次試驗(yàn)重復(fù)三次。
所獲得的數(shù)據(jù)匯總于表Ⅰ中。
試驗(yàn)化合物對(duì)于控制兔耳癢螨(耳螨)的評(píng)價(jià)在試驗(yàn)前一天或試驗(yàn)?zāi)翘斓脑缟?，將試?yàn)化合物溶解于丙酮中并稀釋至所需要的濃度。要對(duì)濃度進(jìn)行計(jì)算以使400lL中含有欲置于每一張濾紙上的量。將400lL該溶液通過移液管吸入濾紙片的頂部(3.7cm直徑)和底部(3.5cm直徑)，然后將濾紙片置于陶瓷板上干燥[注意該步驟應(yīng)在通風(fēng)櫥內(nèi)進(jìn)行]。濾紙為一面粗糙和一面光滑。將試驗(yàn)溶液加入粗糙面，當(dāng)干燥時(shí)，粗糙面往上放。干燥時(shí)，將兩片濾紙置于陪替氏培養(yǎng)皿中，兩個(gè)粗糙面呈面對(duì)面放置，它們之間通過折成塞條形狀的硬紙小片隔開。將培養(yǎng)皿保持于室溫下過夜(如果需要，可在試驗(yàn)前一天進(jìn)行)。每一個(gè)試驗(yàn)均依次采用0.01、0.1和1.01L/cm2的標(biāo)準(zhǔn)物。
試驗(yàn)?zāi)翘斓脑绯?，從感染的兔的耳朵上收集疥癬(含螨蟲)。將該材料置于在照明放大鏡下的陪替氏培養(yǎng)皿中。螨蟲從疥癬中爬出，很容易被收集于解剖針的針尖上或微小鑷子的一個(gè)叉頭上。將每一個(gè)培養(yǎng)皿的頂部濾紙移出，將12個(gè)螨蟲放于底部濾紙上再將頂部濾紙放回原處。在重新將頂部濾紙放回陪替氏培養(yǎng)皿之前，要用凡士林(Vaseline)涂抹培養(yǎng)皿的邊緣以阻止螨蟲逃出。
為了評(píng)價(jià)試驗(yàn)，每一個(gè)劑量下的試驗(yàn)通常進(jìn)行4次，在4小時(shí)2次，在24小時(shí)2次。
在螨蟲加入至培養(yǎng)皿之后，將每一次重復(fù)實(shí)驗(yàn)的培養(yǎng)皿置于一個(gè)淺盤中，然后將淺盤置于帶有幾塊濕毛巾的塑料袋中并維持于室溫。
4或24小時(shí)后，在解剖放大鏡下檢查培養(yǎng)皿，操作如下1.仔細(xì)打開培養(yǎng)皿，移出頂部濾紙并集攏。
2.用軟鉛筆在底部濾紙上畫一個(gè)約1/2cm直徑的小圓。
3.采用一支一次性吸液管輕輕地濕潤(rùn)劃圓或圓周圍的區(qū)域。
4.將所有的螨蟲從培養(yǎng)皿中移入該圓中。仔細(xì)觀察-蓋上、頂部濾紙上和底部濾紙下面的螨蟲。
5.清點(diǎn)并記錄圓中的螨蟲數(shù)目。
6.重新蓋上頂蓋并將培養(yǎng)皿置于邊上。
7.至少在15分鐘后，清點(diǎn)殘留于圓中的螨蟲(這些是死的螨蟲)。
8.計(jì)算并記錄存活的螨蟲數(shù)。
9.如下那般計(jì)算效率百分?jǐn)?shù)
(死螨蟲總數(shù))/(螨蟲總數(shù)) ×100%＝效率%所得到的數(shù)據(jù)匯總于表Ⅲ中。
實(shí)例29試驗(yàn)化合物的殺蟲和殺螨活性的評(píng)價(jià)在下列評(píng)價(jià)中，試驗(yàn)溶液是通過將試驗(yàn)化合物溶解于含35%丙酮和水混合物中至濃度為10，000ppm而制得的。然后根據(jù)需要用水進(jìn)行隨后的稀釋。
Heliothis virescens，卵，煙芽夜蛾將約6-7cm長(zhǎng)的棉花幼芽葉子浸入試驗(yàn)溶液中，攪拌3秒鐘。將卵集攏于一塊干酪包布上，將干酷包布分成10-20mm2，每塊中含有50-100個(gè)卵，(6-30小時(shí)齡)。將帶有卵的方形干酪包布也浸入試驗(yàn)溶液中并放在經(jīng)處理的葉子上。將該組合體置于通風(fēng)櫥中至干燥，然后將它們放入其中已放置有5cm長(zhǎng)的潮濕的齒形紗布條的8oz紙杯中。將一個(gè)透明的塑料蓋子蓋于杯子頂部，在計(jì)算死亡率以前保持試驗(yàn)3天。
Aphis fabae，混合齡期，豆蚜在試驗(yàn)前1天用約100-200個(gè)蚜蟲感染具有約5cm高的單株旱金蓮植物(Tropaeolup sp.)的缽。在通風(fēng)櫥中，采用＃154De Vilbiss噴霧器將試驗(yàn)溶液噴灑每一個(gè)缽，噴灑進(jìn)行2個(gè)循環(huán)(4轉(zhuǎn)/分轉(zhuǎn)臺(tái))。噴灑口保持離植物約15cm，噴灑直接進(jìn)行以完全覆蓋植物和蚜蟲。將經(jīng)噴灑的缽側(cè)著放在白色搪瓷淺盤上并保持2天，然后進(jìn)行死亡率估算。
Tetranychus urticae，P-抗性棉葉螨(棉紅蜘蛛)選出具有長(zhǎng)成7-8cm的初生葉的Sieva利馬豆科植物并修剪為每缽一株植物。從來自螨的主要群落的葉子中切下一小片，并將該小片放于試驗(yàn)植物的每一片葉子上。在試驗(yàn)前，如上狀態(tài)保持約2小時(shí)以使螨蟲能移至試驗(yàn)植物上并產(chǎn)卵。切片的大小不同以使每片葉子具有約100個(gè)螨蟲。試驗(yàn)時(shí)，取出用于轉(zhuǎn)移螨蟲的葉子并毀掉。在攪拌下，將經(jīng)感染了螨蟲的植物浸泡于試驗(yàn)溶液中3秒鐘，并置于通風(fēng)櫥中至干燥。在采用第一片葉子對(duì)成蟲殺死率進(jìn)行估算前，將植物保持2天。在對(duì)卵和/或新羽化若蟲的殺死現(xiàn)象進(jìn)行觀察以前，將第二片葉子在植物上再保持5天。
評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)0＝無效 5＝50-65%殺死1＝10-25%殺死 6＝66-75%殺死2＝26-35%殺死 7＝76-85%殺死3＝36-45%殺死 8＝86-99%殺死4＝46-55%殺死 9＝100%殺死所得到的數(shù)據(jù)匯總于表Ⅳ中。
權(quán)利要求
1.一種具有下列結(jié)構(gòu)式的化合物
其特征在于其中R1是甲基、乙基或異丙基；R7是氫和R8是OR2，或當(dāng)加上與它們所連接的碳原子時(shí)，R7和R8代表C=O；R2是氫、C1-C4烷基或
R4是氫、C1-C4烷基、C1-C4鹵代烷基、C1-C4烷氧基、苯氧基、C1-C4烷氧基甲基、苯氧基甲基或者用1個(gè)硝基、1-3個(gè)鹵素、1-3個(gè)C1-C4烷基，或1-3個(gè)C1-C4烷氧基任意取代的苯基；R3是氫、甲基或乙基；X是氟、溴、氯或碘；W是氧或N=Y；Y是OR5或NHR6；R5是C1-C4烷基或C1-C4?；?；R6是C1-C4?；?；和C26-C27與氧構(gòu)成的虛線三角形表示這里存在雙鍵或環(huán)氧化物。
2.如權(quán)利要求1所述的化合物，其特征在于R1是異丙基;R7是氫、R8是OR2;R2是氫、C1-C4烷基或
;R4是氫、甲基、氯甲基、二氯甲基、三氯甲基或甲氧基甲基;R3是甲基;X是氟;W是N＝Y(jié);Y是OR5;和R5是C1-C4烷基。
3.如權(quán)利要求1所述的化合物，其特征在于其中R1是異丙基;R7和R8與它們所連接的碳原子一起時(shí)，它們代表C＝OR3是甲基;X是氟;W是氧。
4.一種用于預(yù)防、治療或控制溫血?jiǎng)游镏畜w內(nèi)和體外寄生蟲感染的方法，其特征在于它是將具有權(quán)利要求1的結(jié)構(gòu)式的化合物以殺體內(nèi)或體外寄生蟲的有效量給藥于動(dòng)物。
5.如權(quán)利要求4所述的方法，其特征在于所說的化合物具有如權(quán)利要求4中所描述的結(jié)構(gòu)式，且R1是異丙基;R7是氫;R8是OR2;R2是氫、C1-C4烷基，或
;R4是氫、甲基、氯甲基、二氯甲基、三氯甲基或甲氧基甲基;R3是甲基;X是氟;W是N＝Y(jié);Y是OR5;和R5是C1-C4烷基。
6.一種保護(hù)作物、樹、灌木、貯存的谷類和觀賞植物使不遭受蟲、螨和線蟲的侵蝕的方法，其特征在于將具有權(quán)利要求1的結(jié)構(gòu)式的化合物以殺蟲、殺螨或殺線蟲的有效量施加于所說的作物、樹、灌木、貯存的谷類。
7.如權(quán)利要求6所述的方法，其特征在于該化合物具有權(quán)利要求6中所描述的結(jié)構(gòu)式，且R1是異丙基;R7是氫，R8是OR2;R2是氫、C1-C4烷基或
;R4是氫、甲基、氯甲基、二氯甲基、三氯甲基或甲氧基甲基;R3是甲基;X是氟;W是N＝Y(jié);Y是OR5;和R5是C1-C4烷基。
8.一種用于控制體內(nèi)和體外寄生蟲、蟲、螨和線蟲的組合物，其特征在于農(nóng)業(yè)上可接受的載體包括預(yù)防、治療、藥理上或殺蟲有效量的具有權(quán)利要求1的結(jié)構(gòu)式的化合物。
9.一種具有下列分子式的化合物
其中R1是C1-C4烷基;R2是氫、甲基或乙基;R3是氫、C1-C4烷基或
;R5是氫、C1-C4烷基、C1-C4鹵代烷基、C1-C4烷氧基、苯氧基、C1-C4烷氧基甲基、苯氧基甲基，或用1個(gè)硝基、1-3個(gè)鹵素、1-3個(gè)C1-C4烷基或1-3個(gè)C1-C4烷氧基任意取代的苯基;R4是甲基，乙基或異丙基;X是氧、NOR6或N-NHR7;R6是氫、C1-C4烷基、C1-C4烷氧基甲基、C1-C4鏈烷醇基、芐基或苯基;和R7是C1-C4?；?、C1-C4烷基或苯甲酰基。
10.如權(quán)利要求9所述的化合物，其特征在于R1是甲基、乙基或異丙基;R2是甲基;R3是氫、C1-C4烷基或
;R5是氫、C1-C4烷氧基甲基、C1-C4鹵代甲基或甲?；?R4是異丙基;X是NOR6;和R6是C1-C4烷基。
11.一種用于控制體內(nèi)和體外寄生蟲、蟲、螨和線蟲的組合物，其特征在于農(nóng)業(yè)上可接受的載體包括預(yù)防、治療、藥理上或殺蟲有效量的權(quán)利要求9的化合物。
12.一種用于處理，控制和保護(hù)溫血?jiǎng)游锸共辉馐荏w內(nèi)和體外寄生蟲感染和傳染的方法，其特征在于對(duì)所說的動(dòng)物施加以殺體內(nèi)或體外寄生蟲有效量的權(quán)利要求9的化合物，其中R1是甲基、乙基或異丙基;R2是甲基;R3是氫、C1-C4烷基或
;R5是氫、C1-C4烷氧基甲基、C1-C4鹵代甲基或甲?；?R4是異丙基;X是NOR6，和R6是C1-C4烷基。
13.一種用于保護(hù)作物、樹、灌木、貯存的谷類或觀賞植物使不遭受由蟲、螨或線蟲的破壞的方法，其特征在于對(duì)所說的作物、樹、灌木、貯存的谷類或觀賞植物施加殺蟲、殺螨或殺線蟲有效量的權(quán)利要求9的化合物，其中R1是甲基、乙基或異丙基;R2是甲基;R3是氫、C1-C4烷基或
;R5是氫、C1-C4烷氧基甲基、C1-C4鹵代甲基或甲?；?R4是異丙基;X是NOR6;和R6是C1-C4烷基。
全文摘要
本發(fā)明提供了一類13-烷基-23-亞氨基和13-鹵代-23亞氨基-LL-F28249化合物，它們對(duì)于控制體內(nèi)和體外寄生蟲、蟲、螨和線蟲是有用的。
文檔編號(hào)A01N43/90GK1050193SQ9010701
公開日1991年3月27日 申請(qǐng)日期1990年8月30日 優(yōu)先權(quán)日1989年9月11日
發(fā)明者布賴恩·李·巴克沃爾特, 夏因·夏昂·采恩, 蒂莫因·克勞德·巴頓 申請(qǐng)人:美國(guó)氰胺公司