專利名稱：耐低溫輪蟲(chóng)育種方法
一種耐低溫輪蟲(chóng)育種方法，屬于水產(chǎn)養(yǎng)殖技術(shù)領(lǐng)域，主要用于培養(yǎng)耐低溫的作為仔魚(yú)蝦類開(kāi)口餌料的輪蟲(chóng)，發(fā)展水產(chǎn)養(yǎng)殖事業(yè)。
在已有技術(shù)中物種個(gè)體小、廣鹽性、繁殖率高、易于高密度培養(yǎng)的褶皺臂尾輪蟲(chóng)(Brachionus Plicatilis)從60年代起在日本就被用來(lái)作為仔魚(yú)的開(kāi)口餌料，目前已廣泛用來(lái)作魚(yú)蝦餌料，因此世界沿海各國(guó)對(duì)輪蟲(chóng)的研究十分重視，但對(duì)這種輪蟲(chóng)的研究多停留在生態(tài)分布、形態(tài)分類、營(yíng)養(yǎng)、繁殖、養(yǎng)殖和生化等方面，在育種方面只有日本人曾選育出大型(L)和小型(S)輪蟲(chóng)品系，但它們是通過(guò)自然篩選法得到的，不屬于人工育種之列。另?yè)?jù)報(bào)導(dǎo)我國(guó)臺(tái)灣省曾從裴濟(jì)引進(jìn)了一種小型輪蟲(chóng)(S)亦不是育種?，F(xiàn)有研究成果均表明輪蟲(chóng)是喜溫性動(dòng)物，適宜生長(zhǎng)溫度為20～30℃，最適溫度為25℃。我國(guó)北方對(duì)蝦人工育苗一般是在每年4～5月份進(jìn)行，這時(shí)的水溫在20℃以下，輪蟲(chóng)難以繁殖生長(zhǎng)，因此我國(guó)對(duì)蝦育苗主要是以蛋黃、合成餌料以及鹵蟲(chóng)卵為餌料，而無(wú)法用褶皺臂尾輪蟲(chóng)這種理想的餌料。大量使用蛋黃及合成餌料易造成蝦池水質(zhì)污染引起蝦病，鹵蟲(chóng)不僅資源貧乏，而且鹵蟲(chóng)卵孵化率低，不得不從國(guó)外購(gòu)買鹵蟲(chóng)卵。為了提高對(duì)蝦人工育苗的經(jīng)濟(jì)效益，發(fā)展養(yǎng)殖事業(yè)，必須研究出能在對(duì)蝦育苗時(shí)期能快速繁殖和生長(zhǎng)的耐低溫的輪蟲(chóng)的育種方法。
經(jīng)查閱劉卓等編著，1990年農(nóng)業(yè)出版社出版的“餌料浮游動(dòng)物培養(yǎng)”、鄭技修所寫(xiě)刊登在(臺(tái))中國(guó)水產(chǎn)1989年第二期上的報(bào)導(dǎo)“裴濟(jì)產(chǎn)小型輪蟲(chóng)之引進(jìn)與大量培養(yǎng)”、朱九明1988年著“激光輻射在細(xì)胞學(xué)遺傳學(xué)領(lǐng)域的應(yīng)用”、Wendy Fulks of al，1991，Roti fer and Microalgae Culture Syetems，以及截止到目前我國(guó)專利局出版的專利公報(bào)均未發(fā)現(xiàn)有與本發(fā)明相同或相類似的技術(shù)，1991年7月2日請(qǐng)青島市科技情報(bào)研究所使用美國(guó)“DIALOG”國(guó)際聯(lián)機(jī)情報(bào)檢索系統(tǒng)進(jìn)行了檢索，亦未發(fā)現(xiàn)有關(guān)報(bào)導(dǎo)。
本發(fā)明的目的在于提供一種方法比較簡(jiǎn)單易學(xué)，所用儀器設(shè)備不多，投資少，見(jiàn)效快，能人工培育出在15℃低溫下快速繁殖生長(zhǎng)且廣溫性，適于大規(guī)模培養(yǎng)、和我國(guó)北方對(duì)蝦育苗季節(jié)相適應(yīng)，能給對(duì)蝦育苗提供理想餌料的耐低溫輪蟲(chóng)育種的新方法。
根據(jù)遺傳變化基本原理特別是260～266nm的短波激光能改變DNA模板活性使其單鏈斷裂，使DNA分子構(gòu)裂發(fā)生變化的事實(shí)和褶皺臂尾輪蟲(chóng)生態(tài)和形態(tài)特征，針對(duì)已有技術(shù)中存在的主要問(wèn)題，本發(fā)明的基本構(gòu)思是以激光及化學(xué)誘變劑處理輪蟲(chóng)，使其卵巢內(nèi)卵細(xì)胞的DNA發(fā)生遺傳變化;待卵細(xì)胞發(fā)育成為輪蟲(chóng)后，即得到突變個(gè)體;利用激光及化學(xué)誘變交替進(jìn)行，以提高突變頻率;再使用低溫作為選擇壓力，對(duì)不定向的突變進(jìn)行低溫定向選擇，從而得到耐低溫的輪蟲(chóng)品系。
本發(fā)明的特征在于所述的耐低溫輪蟲(chóng)育種方法，由激光誘變及化學(xué)誘變交替進(jìn)行和群體定向選擇與個(gè)體定向選擇相結(jié)合兩個(gè)部份構(gòu)成;上述的激光誘變的條件是激光波長(zhǎng)260～266nm，單脈沖輸出功率為4～8mj，光斑直徑4～6mm，脈沖寬度為10～20n8;激光誘變的具體方法是先從養(yǎng)殖生長(zhǎng)良好的輪蟲(chóng)的水體中抽出部份水，使這種生長(zhǎng)良好的輪蟲(chóng)濃縮，即單位水體內(nèi)輪蟲(chóng)個(gè)數(shù)增多，然后用細(xì)滴管將上述濃縮后的輪蟲(chóng)滴到細(xì)胞培養(yǎng)板上，每滴的直徑4～6mm，里面含有5～20個(gè)輪蟲(chóng)，再將激光光斑對(duì)準(zhǔn)小滴照射1～2次，每次一個(gè)脈沖;上述的化學(xué)誘變，其誘變劑為N-甲基-N′-硝基-亞硝基胍(MNNG)，濃度為20～40ppm，處理時(shí)間為20～60分鐘，處理方法是先用帶有上述化學(xué)誘變劑的培養(yǎng)液浸泡輪蟲(chóng)，再用干凈海水沖洗，然后進(jìn)行培養(yǎng);上述的群體定向選擇和個(gè)體定向選擇相結(jié)合是選擇壓力溫度為10～15℃，先將上述誘變處理過(guò)的輪蟲(chóng)至少分放到10個(gè)容器中，每個(gè)容器內(nèi)所含有的輪蟲(chóng)數(shù)量均相同，經(jīng)40～60天相同條件下的培養(yǎng)，從中選出1～3個(gè)生長(zhǎng)最好的群體，再?gòu)倪x定的這1～3個(gè)優(yōu)良群體中，每個(gè)群體各取出50～100個(gè)輪蟲(chóng)個(gè)體，進(jìn)行單克隆化個(gè)體選擇，然后從生長(zhǎng)最好的克隆中選出5～10個(gè)個(gè)體進(jìn)行生長(zhǎng)參數(shù)測(cè)試，最后從中選取2～3個(gè)品系進(jìn)行大規(guī)模培養(yǎng)和餌料效果實(shí)驗(yàn)。上述的激光誘變及化學(xué)誘變交替，可以兩次激光誘變和一次化學(xué)誘變交替，也可以兩次激光誘變和兩次化學(xué)誘變互相穿插交替進(jìn)行。
本發(fā)明的突出優(yōu)點(diǎn)是方法比較簡(jiǎn)單易學(xué)，可操作性明顯，所用儀器設(shè)備不多投資少，見(jiàn)效快，用此法能人工培育出在15℃低溫下快速繁殖生長(zhǎng)且為廣溫性(4.5℃到34℃)的輪蟲(chóng)新品種，和魚(yú)蝦人工育苗的季節(jié)相適應(yīng)，為魚(yú)蝦幼苗提供最理想最經(jīng)濟(jì)的開(kāi)口餌料，使魚(yú)、蝦苗生長(zhǎng)快，成活率高，用此法培育的輪蟲(chóng)適于大規(guī)模培養(yǎng)工廠化生產(chǎn)，最高密度可達(dá)100個(gè)/cm3水體，經(jīng)濟(jì)效益明顯，能促進(jìn)水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)的發(fā)展。
本發(fā)明的最佳實(shí)施例本發(fā)明人從1990年1月至1991年9月于本校養(yǎng)殖基地采用激光波長(zhǎng)266nm，單脈沖輸出功率0mj，光斑直徑5mm，脈沖寬度15n8，選取生長(zhǎng)良好的輪蟲(chóng)抽去 2/3 的水份濃縮后用細(xì)滴管吸取濃縮后的輪蟲(chóng)滴到細(xì)胞培養(yǎng)板上，滴徑5mm，里面有約15～16個(gè)輪蟲(chóng)，每滴照射1次，化學(xué)誘變劑MNNG濃度取30ppm，處理40分鐘浸泡用干凈海水沖洗后分放在12個(gè)容器中，在10～15℃低溫下培養(yǎng)50天每個(gè)容器內(nèi)均約500個(gè)，經(jīng)過(guò)群體定向選擇和個(gè)體定向選擇最后選出耐低溫輪蟲(chóng)品系A(chǔ)C-36-37。兩次激光誘變中間穿插一次化學(xué)誘變。這個(gè)輪蟲(chóng)品系能在15℃條件下迅速繁殖，而且能忍受4.5℃低溫和34℃高溫。1992年春，對(duì)這種輪蟲(chóng)品系A(chǔ)C-36-37在360m3水體中進(jìn)行大規(guī)模培養(yǎng)，最大密度高達(dá)100個(gè)/cm3。用來(lái)飼喂對(duì)蝦幼體，取得了良好的餌料效果，對(duì)蝦幼體變態(tài)成活率提高了10%。
作為本實(shí)施例的變更1、激光波長(zhǎng)、單脈沖輸出功率、光斑直徑、脈沖寬度、小滴直徑、內(nèi)含輪蟲(chóng)數(shù)、化學(xué)誘變劑濃度等有關(guān)參數(shù)均可在許可的范圍內(nèi)適當(dāng)變更;
2、激光誘變和化學(xué)誘變交替進(jìn)行的交替方式和次數(shù)均可適當(dāng)變更。
權(quán)利要求
1.一種耐低溫輪蟲(chóng)育種方法，其特征在于所述的耐低溫輪蟲(chóng)育種方法，由激光誘變及化學(xué)誘變交替進(jìn)行和群體定向選擇與個(gè)體定向選擇相結(jié)合兩個(gè)部份構(gòu)成；上述的激光誘變的條件是激光波長(zhǎng)260～266nm，單脈沖輸出功率為4～8mj，光斑直徑4～6mm，脈沖寬度10～20ns；激光誘變的具體方法是先將生長(zhǎng)良好的輪蟲(chóng)濃縮，然后用細(xì)滴管將上述濃縮后的輪蟲(chóng)滴到細(xì)胞培養(yǎng)板上，每滴的直徑4～6mm，里面含有5～20個(gè)輪蟲(chóng)，再將激光光斑對(duì)準(zhǔn)小滴照射1～2次，每次一個(gè)脈沖；上述的化學(xué)誘變，其誘變劑為N-甲基-N’-硝基-亞硝基胍(MNNG)，濃度為20～40ppm，處理時(shí)間為20～60分鐘，處理方法是先用帶有上述化學(xué)誘變劑的培養(yǎng)液浸泡輪蟲(chóng)，再用干凈海水沖洗，然后進(jìn)行培養(yǎng)，上述的群體定向選擇和個(gè)體定向選擇相結(jié)合是選擇壓力溫度為10°～15℃，先將上述誘變處理過(guò)的輪蟲(chóng)至少分放到10個(gè)容器中，每個(gè)容器內(nèi)所含有的輪蟲(chóng)數(shù)量均相同，經(jīng)40～60天相同條件下的培養(yǎng)，從中選出1～3個(gè)生長(zhǎng)最好的群體，再?gòu)倪x定的這1～3個(gè)優(yōu)良群體中，每個(gè)群體各取出50～100個(gè)輪蟲(chóng)個(gè)體，進(jìn)行單克隆化個(gè)體選擇，然后從生長(zhǎng)最好的克隆中選出5～10個(gè)個(gè)體進(jìn)行生長(zhǎng)參數(shù)測(cè)試，最后從中選取2～3個(gè)品系進(jìn)行大規(guī)模培養(yǎng)和餌料效果實(shí)驗(yàn)。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的耐低溫輪蟲(chóng)育種方法，其特征在于上述的激光誘變及化學(xué)誘變交替，可以兩次激光誘變和一次化學(xué)誘變交替，也可以兩次激光誘變和兩次化學(xué)誘變互相穿插交替進(jìn)行。
全文摘要
一種耐低溫輪蟲(chóng)育種方法，屬于水產(chǎn)養(yǎng)殖技術(shù)，主要用于在魚(yú)蝦育苗季節(jié)大量培養(yǎng)輪蟲(chóng)。其特征在于該方法由激光誘變及化學(xué)誘變交替進(jìn)行和群體定向選擇與個(gè)體定向選擇相結(jié)合兩個(gè)部分構(gòu)成。具有方法較為簡(jiǎn)單易學(xué)、所用儀器設(shè)備少、投資少見(jiàn)效快，用此法能人工培育出低溫下快速繁殖生長(zhǎng)且為廣溫性，能大規(guī)模培養(yǎng)的輪蟲(chóng)，為魚(yú)蝦人工育出的仔魚(yú)蝦提供最理想的開(kāi)口餌料，經(jīng)濟(jì)效益明顯等優(yōu)點(diǎn)。
文檔編號(hào)A01K61/00GK1071804SQ9211391
公開(kāi)日1993年5月12日 申請(qǐng)日期1992年11月14日 優(yōu)先權(quán)日1992年11月14日
發(fā)明者張學(xué)成 申請(qǐng)人:青島海洋大學(xué)