一種生產(chǎn)栝樓組培苗的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬植物生物技術(shù)組織培養(yǎng)領(lǐng)域，具體涉及一種生產(chǎn)栝樓組培苗的方法。
技術(shù)背景
[0002]栝樓(Trichosanthes kirilowii Maxim.)別名天瓜、吊瓜、老鴉瓜，葫蘆科栝樓屬。是我國重要的傳統(tǒng)中藥材之一，在醫(yī)療與保健方面有很高的應(yīng)用價(jià)值和廣泛的開發(fā)前景。但是，在其組培苗商品化生產(chǎn)中，至今幾乎無一例外地都選用細(xì)胞分裂素(CTKs)中的6-BA(N6-BA, N6-芐基腺嘌呤)和生長素(Auxin)中的IAA(吲哚乙酸)、NAA(萘乙酸)或IBA(吲哚丁酸)等生長調(diào)節(jié)劑，按照不同的配比，分別復(fù)配成“外植體啟動(dòng)”、“無根苗繼代擴(kuò)繁”和“繼代苗生根”等三個(gè)生產(chǎn)步驟所需三種不相同的培養(yǎng)基，依次逐步完成組培苗的生產(chǎn)。生產(chǎn)程序麻煩，成苗率低，成本高。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0003]本發(fā)明要解決的技術(shù)問題是提供一種生產(chǎn)程序簡單，成苗率高，成本低的生產(chǎn)栝樓組培苗的方法。
[0004]本發(fā)明以如下技術(shù)方案解決上述技術(shù)問題:
[0005]一種生產(chǎn)栝樓組培苗的方法，包括以下步驟:
[0006](I)從健壯栝樓植株采集帶腋芽的單節(jié)莖段并進(jìn)行常規(guī)消毒滅菌；
[0007](2)將所述莖段扦插于添加有靈發(fā)素-LFS的MS改良固體培養(yǎng)基中進(jìn)行栝樓組培苗生產(chǎn)，所述MS改良固體培養(yǎng)基的配方為MS+LFS 0.1?0.5mg.L'
[0008]所述MS改良固體培養(yǎng)基的配方為MS+LFS 0.3mg.Γ1。
[0009]本發(fā)明的顯著優(yōu)點(diǎn)在于:
[0010]使用由LFS配制成的單一激素培養(yǎng)基可以完成傳統(tǒng)上需要用“外植體啟動(dòng)培養(yǎng)基”、“無根苗繼代培養(yǎng)基”和“繼代苗生根培養(yǎng)基”三種培養(yǎng)基才能完成的組培苗生產(chǎn)，從而大大簡化栝樓組培苗生產(chǎn)程序，提高成苗效率，降低生產(chǎn)成本。
【具體實(shí)施方式】
[0011]以下實(shí)施實(shí)例僅用于說明本發(fā)明，而不是用來限制本發(fā)明的范圍。在未背離本發(fā)明精神和實(shí)質(zhì)的情況下，對(duì)本發(fā)明的方法、步驟或條件所作的修改或替換，均屬于本發(fā)明的范圍。
[0012]實(shí)施例1:
[0013]從健壯栝樓植株采集帶腋芽的單節(jié)莖段并進(jìn)行常規(guī)消毒滅菌；將上述莖段扦插于用MS+LFS 0.1mg噸―1配制的固體培養(yǎng)基，無需再添加任何其他植物激素和調(diào)節(jié)劑，培養(yǎng)30d就能直接誘導(dǎo)60%栝樓腋芽外植體正常萌發(fā)生長，繼而建成根、苗齊全的再生植株，即組培苗。這些再生植株莖葉形態(tài)正常，平均株高達(dá)3.8 cm，不定根平均2.5條/株，可以作為繼代材料，繼續(xù)在同樣的培養(yǎng)基中擴(kuò)繁，無需另外再配制“繼代培養(yǎng)基”。也可以出瓶移栽，銷售，無需再設(shè)“生根程序”和配制“生根培養(yǎng)基”。因此，用MS+LFS 0.1mg.171這種單一激素的固體培養(yǎng)基就能替代常規(guī)用的三種培養(yǎng)基才能完成的栝樓組培苗生產(chǎn)全過程。
[0014]實(shí)施例2:
[0015]從健壯栝樓植株采集帶腋芽的單節(jié)莖段并進(jìn)行常規(guī)消毒滅菌；將上述莖段扦插于用MS+LFS 0.5mg噸4配制的固體培養(yǎng)基，無需再添加任何其他植物激素和調(diào)節(jié)劑，培養(yǎng)25d就能直接誘導(dǎo)100%栝樓腋芽外植體正常萌發(fā)生長，繼而建成根、苗齊全的再生植株，即組培苗。這些再生植株莖葉形態(tài)正常，平均株高達(dá)5.2 cm，不定根平均3.5條/株。這些再生植株可以作為繼代材料，在同樣的培養(yǎng)基中擴(kuò)繁，無需另外再配制“繼代培養(yǎng)基”。也可以出瓶移栽，銷售，無需再設(shè)“生根程序”和配制“生根培養(yǎng)基”。因此，用MS+LFS 0.Smg.!/1這種單一激素的固體培養(yǎng)基就能替代常規(guī)用的三種培養(yǎng)基才能完成的栝樓組培苗生產(chǎn)全過程。
[0016]實(shí)施例3:
[0017]以下是用本發(fā)明方法，經(jīng)過優(yōu)選的配方MS+LFS 0.Smg*!/1配制的單一激素固體培養(yǎng)基和常規(guī)所用含不同激素的三種培養(yǎng)基進(jìn)行栝樓組培苗生產(chǎn)時(shí)，在“啟動(dòng)”、“繼代”和“生根”三個(gè)關(guān)鍵階段的比較:
[0018]1.“腋芽外植體啟動(dòng)”階段:
[0019]外植體:從健壯植株采集帶腋芽的單節(jié)莖段并進(jìn)行常規(guī)消毒滅菌。每組培養(yǎng)基30瓶，每瓶接種I個(gè)外植體。培養(yǎng)7d后淘汰污染瓶，每組隨機(jī)取5瓶，觀察統(tǒng)計(jì):成苗率=成苗外植體數(shù)/接種外植體數(shù)X 100%、平均株高(頂芽至生根節(jié))、平均不定根數(shù)(條/株)。
[0020]A-1組:本發(fā)明固體培養(yǎng)基:MS+LFS 0.3mg.L—1;
[0021]B-1 組:傳統(tǒng)啟動(dòng)培養(yǎng)基 MS+6-BA 0.3mg.L_1+NAA0.06mg.Γ1;
[0022]結(jié)果:
[0023]A-1組:培養(yǎng)20d，成苗率達(dá)80%，25d達(dá)100%，莖葉形態(tài)正常，平均株高達(dá)5.4cm。
[0024]培養(yǎng)至15d，開始有不定根發(fā)生，25d不定根平均3.2條/株，建成完整再生植株。
[0025]B-1組:培養(yǎng)20d，成苗率僅20 %，25d將近30 %，平均株高2.2 Cm，完全沒有不定根發(fā)生，葉片明顯較小。
[0026]2.“繼代擴(kuò)繁”階段:
[0027]繼代材料:將上述A-1組獲得的正常無菌苗在凈化工作臺(tái)上切去兩端，取+2?+4節(jié)，分切成單節(jié)帶芽莖段，同時(shí)切除葉片，保留部分葉柄保護(hù)腋芽。分別扦插于下述兩組培養(yǎng)基，每組12瓶，每瓶5個(gè)莖段。培養(yǎng)7d后淘汰污染瓶，每組隨機(jī)取5瓶，統(tǒng)計(jì)形態(tài)學(xué)指標(biāo)同上。
[0028]A-2組:本發(fā)明固體培養(yǎng)基:MS+LFS 0.3mg.?Λ
[0029]Β-2 組:傳統(tǒng)繼代擴(kuò)繁培養(yǎng)基:MS+6-BA 0.2mg.L_1+NAA0.1mg.?Λ
[0030]結(jié)果:
[0031]Α-2組:培養(yǎng)15d發(fā)根率平均達(dá)50%，25d達(dá)100%。平均每株有根3.5條，平均根長4.3 cm，平均株高4.8 cm。莖葉生長正常，建成完整健壯的再生植株。這些再生植株可以直接出瓶移栽到營養(yǎng)杯進(jìn)行育苗出售，亦可繼續(xù)繼代增殖。解剖證明，這些再生植株的不定根發(fā)生自髓部分生組織，洗苗時(shí)不易脫落，移栽成活率多95%。
[0032]B-2組:培養(yǎng)25d仍無不定根發(fā)生，平均株高3.2cm。莖葉形態(tài)正常。
[0033]3.“增殖苗生根”階段:
[0034]生根材料:用上述B-2組所得無根苗，分別扦插于下述2組培養(yǎng)基。每組10瓶，每瓶5個(gè)莖段。統(tǒng)計(jì):發(fā)根率=發(fā)根株數(shù)/接種株數(shù)X 100% ;平均不定根數(shù)(條)；平均不定根長(cm)。
[0035]A-3組:本發(fā)明固體培養(yǎng)基:MS+LFS 0.3mg.?Λ
[0036]Β-3 組:傳統(tǒng)生根培養(yǎng)基 MS+NAA 0.3mg.Γ1；
[0037]結(jié)果:
[0038]A-3組:培養(yǎng)15d發(fā)根率30%，20d達(dá)80%，25d達(dá)100%。平均根數(shù)3.6條/株，平均根長4.5 cm。常規(guī)移栽成活率多95%。
[0039]B-3組:培養(yǎng)15d發(fā)根率15%，25d 70%，延長培養(yǎng)至35d才能達(dá)到80%。苗的長勢良好。但是解剖證明，該組植株不定根2/3以上發(fā)生自愈傷組織，洗苗時(shí)極容易脫落，移栽成活率僅80%左右，明顯低于A-3組。
【主權(quán)項(xiàng)】
1.一種生產(chǎn)栝樓組培苗的方法，其特征在于，包括以下步驟: (1)從健壯栝樓植株采集帶腋芽的單節(jié)莖段并進(jìn)行常規(guī)消毒滅菌； (2)將所述莖段扦插于添加有靈發(fā)素-LFS的MS改良固體培養(yǎng)基中進(jìn)行栝樓組培苗生產(chǎn)，所述MS改良固體培養(yǎng)基的配方為MS+LFS 0.1?0.5mg.L'
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種生產(chǎn)栝樓組培苗的方法，其特征在于，所述MS改良固體培養(yǎng)基的配方為MS+LFS 0.3mg.L'
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種生產(chǎn)栝樓組培苗的方法，包括以下步驟：(1)從健壯栝樓植株采集帶腋芽的單節(jié)莖段并進(jìn)行常規(guī)消毒滅菌；(2)將所述莖段扦插于添加有靈發(fā)素-LFS的MS改良固體培養(yǎng)基中進(jìn)行栝樓組培苗生產(chǎn)，所述MS改良固體培養(yǎng)基的配方為MS+LFS 0.1～0.5mg·L-1。該MS改良固體培養(yǎng)基可以誘導(dǎo)外植體直接建成根、苗齊全的栝樓組培苗。本發(fā)明方法具有生產(chǎn)程序簡單，組培苗質(zhì)量高，成本低的優(yōu)點(diǎn)。
【IPC分類】A01H4-00
【公開號(hào)】CN104521756
【申請?zhí)枴緾N201410814578
【發(fā)明人】周鳳玨, 許鴻源, 龔銀花, 梁瓊月, 許皓翔, 莫淑媚
【申請人】廣西大學(xué)
【公開日】2015年4月22日
【申請日】2014年12月24日