檉柳組培苗生根培養(yǎng)的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于植物培植領(lǐng)域，涉及一種植物的培養(yǎng)方法，具體涉及一種檉柳組培苗 生根培養(yǎng)的方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 檉柳為鹽生木本植物，具有高耐鹽堿、耐嚴(yán)寒、耐干旱、耐水濕等優(yōu)良特點(diǎn)，生命力 頑強(qiáng)，在含鹽量3%。以上的鹽堿地上能夠旺盛生長(zhǎng)，在鹽堿地上不換土就能成活，是沿海防 護(hù)林和重度鹽堿地綠化的首選樹種。中國(guó)檉柳還具有強(qiáng)大的泌鹽能力和發(fā)達(dá)的根系，能夠 把吸收的鹽分通過(guò)葉片排出體外，起到防風(fēng)固沙、改善土壤等作用。具有優(yōu)良特性的檉柳對(duì) 鹽堿地改良、鹽堿地綠化、沿海防護(hù)林的建設(shè)及鹽堿地的生態(tài)改善具有重要的意義。此外， 檉柳還是一種中藥材，具有疏風(fēng)、解表、透瘆、解讀的功效。
[0003] 檉柳屬于檉柳科檉柳屬，有關(guān)檉柳的離體培養(yǎng)研宄中指出檉柳組培擴(kuò)繁中最適宜 的基本培養(yǎng)基為MS，常用激素為6-BA、KT和NAA，生根常用激素為NAA。檉柳組培擴(kuò)繁主 要分為無(wú)菌苗的獲得，增殖培養(yǎng)基的篩選、生根培養(yǎng)基的篩選、生根苗的煉苗移栽。但是現(xiàn) 有技術(shù)所公開的內(nèi)容僅限于實(shí)驗(yàn)室理論研宄水平，無(wú)法直接投入生產(chǎn)。加之在無(wú)菌苗獲取 過(guò)程中，使用升汞等有毒的消毒劑，導(dǎo)致外植體褐化現(xiàn)象嚴(yán)重，難以形成產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)。且現(xiàn) 有技術(shù)中多是將增殖培養(yǎng)與生根培養(yǎng)作為兩個(gè)獨(dú)立的階段，在實(shí)際產(chǎn)業(yè)化過(guò)程中，人工成 本及物料成本大。
[0004] 檉柳組培苗在繼代過(guò)程中會(huì)有褐化現(xiàn)象，植物體釋放出的醌類物質(zhì)使植株周圍的 培養(yǎng)基變成棕褐色，但植株本身并無(wú)褐化。這種現(xiàn)象在外植體誘導(dǎo)過(guò)程中并未出現(xiàn)，但在繼 代過(guò)程中和轉(zhuǎn)接入生根培養(yǎng)基后均會(huì)發(fā)生，產(chǎn)生褐化現(xiàn)象的組培苗仍能生長(zhǎng)并生根，但增 殖速度和生根率受到明顯影響，情況嚴(yán)重還會(huì)導(dǎo)致組培苗基部逐漸褐化并危及其生存。由 于褐化現(xiàn)象只出現(xiàn)在少數(shù)組培苗中，而且與外植體材料的生理狀態(tài)有一定的關(guān)系，因此在 外植體選材時(shí)需盡量選取幼嫩的生長(zhǎng)旺盛的外植體，繼代過(guò)程中需要拋棄老枝部分，只將 新生部分繼代，這樣可以減少部分褐化現(xiàn)象，但是這種操作所培養(yǎng)出的組培苗數(shù)量較少，不 適宜大規(guī)模的生產(chǎn)。
[0005] 現(xiàn)有技術(shù)中有報(bào)道少量褐化苗，只需在發(fā)生褐化后更換新的培養(yǎng)基或?qū)⒚缫浦镣?一培養(yǎng)基的不同部位，褐化現(xiàn)象則基本得到解決，褐化嚴(yán)重的在更換兩次培養(yǎng)基后也不再 出現(xiàn)褐化，但是這種操作不僅增加了操作步驟，還增加了生產(chǎn)成本。
[0006] 因此，研宄一種能夠克服檉柳外植體的褐化現(xiàn)象，縮短培養(yǎng)周期的一步成苗方法， 具有重要的意義。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0007] 本發(fā)明要解決的技術(shù)問(wèn)題，是提供一種檉柳組培苗生根培養(yǎng)的方法，為一步成苗 法，在培養(yǎng)基中添加了活性炭成分，克服了檉柳外植體褐化的現(xiàn)象，縮短培養(yǎng)周期，降低糖 的用量，對(duì)實(shí)現(xiàn)檉柳組培產(chǎn)業(yè)化具有重要意義，不僅降低了生產(chǎn)成本、更降低了物料成本、 同時(shí)確保了檉柳遺傳性狀的穩(wěn)定，實(shí)現(xiàn)在短期內(nèi)獲得大量?jī)?yōu)質(zhì)檉柳組培苗木。
[0008] 為解決上述技術(shù)問(wèn)題，本發(fā)明所采取的技術(shù)方案是：
[0009] 一種檉柳組培苗生根培養(yǎng)的方法，它按照以下步驟順序進(jìn)行：
[0010] ⑴無(wú)菌苗的獲取
[0011] 以新生嫩枝或嫩芽為外植體，用洗衣粉水浸泡沖洗兩次，后用清水沖洗30? 50min;再用70?75%酒精消毒20?30s，無(wú)菌水沖洗2次，后用0. 05?0. 1 %升汞IOOml 和0. 05ml吐溫-20消毒l〇-15min，最后在超凈工作臺(tái)內(nèi)用無(wú)菌水沖洗6?8次，去除外植 體表面的水，進(jìn)行修剪，將經(jīng)修剪的外植體轉(zhuǎn)接至培養(yǎng)基A中進(jìn)行培養(yǎng)，培養(yǎng)條件為：光照 培養(yǎng)13h，光照強(qiáng)度為1500?3500勒克斯，溫度為23?27°C;培育15-20天后即得無(wú)菌 苗；
[0012] (2)增殖生根培養(yǎng)
[0013] 將無(wú)菌苗繼續(xù)在培養(yǎng)基A中，培養(yǎng)44-49天，即得葉色嫩綠、葉片舒展，無(wú)玻璃化、 無(wú)黃葉落葉的叢生狀態(tài)的檉柳組培生根苗；所得苗為株高大于I. 8cm，根長(zhǎng)大于lcm，根數(shù) 大于2。
[0014] 作為本發(fā)明的一種限定，所述的檉柳組培生根苗能夠直接移栽至大棚內(nèi)種植或進(jìn) 行繼代培養(yǎng)制備檉柳組培生根苗。
[0015] 作為上述限定的進(jìn)一步限定，所述的繼代培養(yǎng)方法為將檉柳組培生根苗切除根 系，每一叢種苗分為7或8小叢，每一小叢帶有6?10個(gè)小枝，平均尚度l_3cm，將每小叢組 培苗接種到培養(yǎng)基A中，接種深度為0. 3?0. 5cm，培養(yǎng)44-49天后，即可得檉柳組培生根 苗；其中生根培養(yǎng)條件為：光照培養(yǎng)13h，光照強(qiáng)度1500-3500勒克斯，溫度為23-27°C。
[0016] 作為本發(fā)明的另一種限定，所述的培養(yǎng)基A是以MS為基礎(chǔ)培養(yǎng)基，還添加有15? 20g/L的蔗糖，5. 5 ?7.Og/L的瓊脂，0? 05 ?0? 5mg/L的 6-BA，0? 1 ?0? 3mg/L的KT和質(zhì)量 分?jǐn)?shù)為0.05-0. 15%的活性炭，調(diào)節(jié)pH值至6.0?6. 9。
[0017] 作為上述限定的進(jìn)一步限定，所述的pH值至6. 5。
[0018] 作為上述限定的進(jìn)一步限定，所述的蔗糖的用量為20g/L。
[0019] 由于采用了上述的技術(shù)方案，本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比，所取得的技術(shù)進(jìn)步在于：
[0020] 本發(fā)明提供了檉柳組培苗生根培養(yǎng)的方法，為一步成苗法，在培養(yǎng)基中添加了活 性炭成分，減少了檉柳外植體褐化的現(xiàn)象，縮短培養(yǎng)周期，降低糖的用量，不僅降低了生產(chǎn) 成本、更降低了物料成本、同時(shí)確保了檉柳遺傳性狀的穩(wěn)定，實(shí)現(xiàn)在短期內(nèi)獲得大量?jī)?yōu)質(zhì)檉 柳組培苗木對(duì)實(shí)現(xiàn)檉柳組培產(chǎn)業(yè)化具有重要意義。
[0021] 本發(fā)明適用于檉柳組培苗的生根培養(yǎng)，進(jìn)一步用于大棚內(nèi)種植或組培苗的繼代培 養(yǎng)。
[0022] 本發(fā)明下面將結(jié)合具體實(shí)施例作進(jìn)一步詳細(xì)說(shuō)明。
【具體實(shí)施方式】
[0023] 實(shí)施例1 一種檉柳組培苗生根培養(yǎng)的方法
[0024] 一種檉柳組培苗生根培養(yǎng)的方法，它按照以下步驟順序進(jìn)行：
[0025] (1)無(wú)菌苗的獲取
[0026] 以新生嫩枝或嫩芽為外植體，用洗衣粉水浸泡沖洗兩次，后用清水沖洗30min;再 用70 %酒精消毒20s，無(wú)菌水沖洗2次，后用0.I%升采IOOml和0. 05ml吐溫-20消毒lOmin，最后在超凈工作臺(tái)內(nèi)用無(wú)菌水沖洗6次，去除外植體表面的水，進(jìn)行修剪，將經(jīng)修剪 的外植體轉(zhuǎn)接至培養(yǎng)基A中進(jìn)行培養(yǎng)，培養(yǎng)條件為：光照培養(yǎng)13h，光照強(qiáng)度為2000勒克 斯，溫度為25°C;培育20天后即得無(wú)菌苗；
[0027] (2)增殖生根培養(yǎng)
[0028] 將無(wú)菌苗繼續(xù)在培養(yǎng)基A中，培養(yǎng)45天，即得葉色嫩綠、葉片舒展，無(wú)玻璃化、無(wú)黃 葉落葉的叢生狀態(tài)的檉柳組培生根苗；
[0029] 其中，培養(yǎng)基A是以MS為基礎(chǔ)培養(yǎng)基，還添加有20g/L的蔗糖，6.Og/L的瓊脂， 0? 25mg/L的6-BA，0? 2mg/L的KT和質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0? 1 %的活性炭，調(diào)節(jié)pH值至6. 5。
[0030] 所得苗為株高為I. 8cm，根長(zhǎng)為1cm，根數(shù)為2根。所培養(yǎng)出的檉柳組培生根苗能 夠直接移栽至大棚內(nèi)種植或進(jìn)行繼代培養(yǎng)制備檉柳組培生根苗。
[0031] 進(jìn)行直接移栽至大棚內(nèi)種植時(shí)，方法為：將檉柳組培生根苗，洗除基部培養(yǎng)基后， 將其直接栽種至鋪滿沙土的苗床上，移栽時(shí)將根系埋入土中即可，隨后進(jìn)行常規(guī)的大棚養(yǎng) 護(hù)，30天后大棚移栽成活率達(dá)85 %，且檉柳組培生根苗生長(zhǎng)勢(shì)整齊一致。而檉柳扦插一般 成活率為80%，且扦插苗長(zhǎng)勢(shì)不一，高矮參差不齊。
[0032] 進(jìn)行繼代培養(yǎng)時(shí)，培養(yǎng)方法為：將檉柳組培生根苗切除根系，每一叢種苗分為7小 叢，每一小叢帶有8個(gè)小枝，平均高度2cm，將每小叢組培苗接種到培養(yǎng)基A中，接種深度為 0. 3cm，培養(yǎng)條件為：光照培養(yǎng)13h，光照強(qiáng)度2000勒克斯，溫度為25°C，培養(yǎng)45天后，即可 得檉柳組培生根苗。該檉柳組培生根苗能夠繼續(xù)進(jìn)行繼代培養(yǎng)循環(huán)，以獲取檉柳組培生根 苗，再次進(jìn)行繼代培養(yǎng)和大棚內(nèi)種植。
[0033] 實(shí)施例2-6檉柳組培苗生根培養(yǎng)的方法
[0034] 實(shí)施例2-6分別為一種檉柳組培苗生根培養(yǎng)的方法，與實(shí)施例1的培養(yǎng)方法相似， 不同之處僅在于其中所涉及的技術(shù)參數(shù)和所制得的檉柳組培苗的指標(biāo)的不同，具體如下表 所示：
[0035]
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種檉柳組培苗生根培養(yǎng)的方法，其特征在于它按照以下步驟順序進(jìn)行： (1) 無(wú)菌苗的獲取 以新生嫩枝或嫩芽為外植體，用洗衣粉水浸泡沖洗兩次，后用清水沖洗30?50min;再 用70?75 %酒精消毒20?30s，無(wú)菌水沖洗2次，后用0. 05?0. 1 %升汞IOOml和0. 05ml 吐溫-20消毒10_15min，最后在超凈工作臺(tái)內(nèi)用無(wú)菌水沖洗6?8次，去除外植體表面的 水，進(jìn)行修剪，將經(jīng)修剪的外植體轉(zhuǎn)接至培養(yǎng)基A中進(jìn)行培養(yǎng)，培養(yǎng)條件為：光照培養(yǎng)13h， 光照強(qiáng)度為1500?3500勒克斯，溫度為23?27°C;培養(yǎng)15-20天后即得無(wú)菌苗； (2) 增殖生根培養(yǎng) 將無(wú)菌苗繼續(xù)在培養(yǎng)基A中，培養(yǎng)44-49天，即得葉色嫩綠、葉片舒展，無(wú)玻璃化、無(wú)黃 葉落葉的叢生狀態(tài)的檉柳組培生根苗；所得苗為株高大于I. 8cm，根長(zhǎng)大于lcm，根數(shù)大于 2〇
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的檉柳組培苗生根培養(yǎng)的方法，其特征在于：所述的檉柳組培 生根苗能夠直接移栽至大棚內(nèi)種植或進(jìn)行繼代培養(yǎng)制備檉柳組培生根苗。
3. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的檉柳組培苗生根培養(yǎng)的方法，其特征在于：所述的繼代培 養(yǎng)方法為將檉柳組培生根苗切除根系，每一叢種苗分為7或8小叢，每一小叢帶有6?10 個(gè)小枝，平均高度l_3cm，將每小叢組培苗接種到培養(yǎng)基A中，接種深度為0. 3?0. 5cm， 培養(yǎng)44-49天后，即可得檉柳組培生根苗；其中生根培養(yǎng)條件為：光照培養(yǎng)13h，光照強(qiáng)度 1500-3500勒克斯，溫度為23-27°C。
4. 根據(jù)權(quán)利要求1-3中任一項(xiàng)所述的檉柳組培苗生根培養(yǎng)的方法，其特征在于所述的 培養(yǎng)基A是以MS為基礎(chǔ)培養(yǎng)基，還添加有15?20g/L的蔗糖，5. 5?7.Og/L的瓊脂，0. 05? 0? 5mg/L的6-BA，0. 1?0? 3mg/L的KT和質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0? 05-0. 15%的活性炭，調(diào)節(jié)pH值至 6. 0 ?6. 9。
5. 根據(jù)權(quán)利要求4所述的檉柳組培苗生根培養(yǎng)的方法，其特征在于：所述的pH值至 6. 5〇
6. 根據(jù)權(quán)利要求4所述的檉柳組培苗生根培養(yǎng)的方法，其特征在于：所述的蔗糖的用 量為20g/L。
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種檉柳組培苗繼代培養(yǎng)的方法，為一步成苗法，在培養(yǎng)基中添加了活性炭成分，減少了檉柳外植體褐化的現(xiàn)象，縮短培養(yǎng)周期，降低糖的用量，不僅降低了生產(chǎn)成本、更降低了物料成本、同時(shí)確保了檉柳遺傳性狀的穩(wěn)定，實(shí)現(xiàn)在短期內(nèi)獲得大量?jī)?yōu)質(zhì)檉柳組培苗木對(duì)實(shí)現(xiàn)檉柳組培產(chǎn)業(yè)化具有重要意義。本發(fā)明適用于檉柳組培苗的生根培養(yǎng)，進(jìn)一步用于大棚內(nèi)種植或組培苗的繼代培養(yǎng)。
【IPC分類】A01H4-00
【公開號(hào)】CN104542294
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201510017370
【發(fā)明人】劉伯燕, 王蘇洋, 劉戈, 陳娜, 林大為, 張承妹, 董舉文, 陳銘, 高暢, 蘇涌
【申請(qǐng)人】上海杉一植物科技有限公司
【公開日】2015年4月29日
【申請(qǐng)日】2015年1月14日