一種神經(jīng)干細(xì)胞的凍存液及其使用方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于細(xì)胞生物學(xué)、神經(jīng)生物學(xué)的技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種神經(jīng)干細(xì)胞凍存 液及其使用方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 神經(jīng)干細(xì)胞是一類具有增殖、自我更新能力和多方向分化潛能的細(xì)胞群，可分化 出神經(jīng)元、星形膠質(zhì)細(xì)胞和少突膠質(zhì)細(xì)胞等神經(jīng)組織的各類細(xì)胞。神經(jīng)干細(xì)胞在體外能分 化為中樞神經(jīng)系統(tǒng)不同類型的細(xì)胞，這為研宄中樞神經(jīng)系統(tǒng)的發(fā)育提供了良好的模型，另 夕卜，移植神經(jīng)干細(xì)胞治療急、慢性脊髓損傷以及多種神經(jīng)系統(tǒng)疾病如多發(fā)性硬化癥，阿爾茲 海默病、帕金森病、缺血性腦損傷等具有廣闊的臨床應(yīng)用前景。由于神經(jīng)干細(xì)胞低溫保存效 果的優(yōu)劣直接影響著神經(jīng)干細(xì)胞的質(zhì)和量，因此經(jīng)低溫保存后的神經(jīng)干細(xì)胞是否能存活并 保持其生物學(xué)特性將成為決定移植成功與否的重要因素之。
[0003] 細(xì)胞凍存的過(guò)程會(huì)顯著改變細(xì)胞的熱力學(xué)、化學(xué)和物理環(huán)境，同時(shí)伴隨生物性損 傷的危險(xiǎn)。影響凍存效率的因素主要有：細(xì)胞濃度、冷凍速率以及凍存液。細(xì)胞懸液通常在 加入5%-15%細(xì)胞保護(hù)劑二甲基亞楓（DMSO)后進(jìn)行冷凍。常用到的細(xì)胞保護(hù)劑還有羥乙 基淀粉0ES)、聚乙二醇（PEG)等。但是，DMSO會(huì)對(duì)細(xì)胞產(chǎn)生毒性作用，對(duì)凍存的干細(xì)胞造 成不可逆的損傷。為獲得來(lái)源方便的神經(jīng)干細(xì)胞，開展有效的神經(jīng)干細(xì)胞移植及建立神經(jīng) 干細(xì)胞庫(kù)，改進(jìn)神經(jīng)干細(xì)胞凍存復(fù)蘇技術(shù)，建立一種長(zhǎng)期低溫保存神經(jīng)干細(xì)胞的方法對(duì)于 促進(jìn)神經(jīng)干細(xì)胞的研宄和應(yīng)用具有重大意義。
【發(fā)明內(nèi)容】
[0004] 本發(fā)明的目的是提供一種神經(jīng)干細(xì)胞凍存液及其使用方法，解決現(xiàn)有的神經(jīng)干細(xì) 胞凍存后復(fù)蘇率低的問(wèn)題，提高神經(jīng)干細(xì)胞的凍存復(fù)蘇率。
[0005] 一種神經(jīng)干細(xì)胞凍存液，是在Neurobasal-Amedium中含有
[0006]
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種神經(jīng)干細(xì)胞凍存液，其特征在于，是在Neurobasal-Amedium中含有
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的神經(jīng)干細(xì)胞凍存液，其特征在于，是在Neurobasal-Amedium 中含有
3. 權(quán)利要求1所述的神經(jīng)干細(xì)胞凍存液，其特征在于，取培養(yǎng)7-10d生長(zhǎng)良好的細(xì)胞， 用吸管在原代培養(yǎng)瓶中輕輕吹打，使沉聚于瓶底的細(xì)胞球浮起；然后將原代培養(yǎng)形成的神 經(jīng)球懸液移至離心管，離心棄上清后，用木瓜蛋白酶對(duì)收集到的神經(jīng)干細(xì)胞進(jìn)行消化，用本 發(fā)明神經(jīng)干細(xì)胞凍存液凍存獲得的細(xì)胞，按凍存細(xì)胞數(shù)所需濃度為5X106個(gè)細(xì)胞/ml凍 存液，定量加入預(yù)冷的本發(fā)明神經(jīng)干細(xì)胞凍存液，充分混勻后，將此細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到冷凍管 中，每管lmL，封口，標(biāo)記凍存日期；分級(jí)冷凍細(xì)胞：4°C，40min;-20°C，30min;-80°C，過(guò)夜； 次日緩降至液氮表面直至投入液氮保存。
4. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的神經(jīng)干細(xì)胞凍存液的使用方法，其特征在于，所使用的木瓜 蛋白酶消化為2mg/ml木瓜蛋白酶37°C消化10分鐘。
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種神經(jīng)干細(xì)胞凍存液及其使用方法。該凍存液是在Neurobasal-A medium中含有B-27 Supplement without retinoic acid，L-Glutamine，EGF，F(xiàn)GF，維生素E。該凍存液不僅成低，而且關(guān)鍵是解決了現(xiàn)有的神經(jīng)干細(xì)胞凍存后復(fù)蘇率低的問(wèn)題，提高神經(jīng)干細(xì)胞的凍存復(fù)蘇率。
【IPC分類】A01N1-02
【公開號(hào)】CN104542576
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201510037248
【發(fā)明人】李志遠(yuǎn), 鄧思浩, 曹文宇, 盧大華, 徐楊
【申請(qǐng)人】中南大學(xué), 長(zhǎng)沙科雅生物科技有限公司
【公開日】2015年4月29日
【申請(qǐng)日】2015年1月24日