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      一種高精度改良Nitsch(含固定介質(zhì)和碳源)培養(yǎng)基質(zhì)的規(guī)?;谱鞣椒?

      文檔序號:8325178閱讀:299來源:國知局
      一種高精度改良Nitsch(含固定介質(zhì)和碳源)培養(yǎng)基質(zhì)的規(guī)?;谱鞣椒?br>【專利說明】 一種高精度改良Nitsch (含固定介質(zhì)和碳源)培養(yǎng)基質(zhì)的
      規(guī)?;谱鞣椒?br>技術(shù)領(lǐng)域
      [0001]本發(fā)明公開了一種高精度改良Nitsch (含固定介質(zhì)和碳源)培養(yǎng)基質(zhì)的規(guī)模化制作方法,屬于植物生物技術(shù)領(lǐng)域。更具體地說是一種包括有準確計算、精確稱量、先少后多地混合、密封、單獨母液制備、啟封使用等六個步驟,以期獲得不同批次和批次之間誤差極小的培養(yǎng)基質(zhì)、減少試驗誤差的方法。
      【背景技術(shù)】
      [0002]植物組織培養(yǎng)技術(shù)或無土栽培技術(shù)通常需要配制培養(yǎng)基母液,即配制擴大一定倍數(shù)、含有各種類型試劑的液體。然而,由于母液含有不同類型試劑,常常分為大量元素、微量元素、鐵鹽和有機元素四大類,而四大類所擴大的倍數(shù)不同,導(dǎo)致藥品使用質(zhì)量不一致,一則容易出現(xiàn)計算誤差;二則藥品的廠家、質(zhì)量不一致,即使計算、稱量一致,也會影響試驗結(jié)果;三則由于母液為液體狀態(tài),在春夏之交季節(jié),由于氣溫上升以及濕度增大,極其容易導(dǎo)致母液感染細菌、霉菌,導(dǎo)致母液中呈現(xiàn)不同顏色或出現(xiàn)沉淀的現(xiàn)象,浪費了原料;四則會因稱量者對容器刻度的認知(尤其是微量元素)、儀器精密度的不同而出現(xiàn)較大誤差。
      [0003]鑒于母液配制的上述缺點,用常規(guī)的母液配制培養(yǎng)基,常常會出現(xiàn)因稱量者、藥品、季節(jié)等因素而導(dǎo)致的試驗結(jié)果失敗或無法重復(fù)的現(xiàn)象,極大的影響了運用植物組織培養(yǎng)或無土栽培技術(shù)開展試驗的進程,打擊了試驗者的信心。

      【發(fā)明內(nèi)容】

      [0004]—種高精度改良Nitsch (含固定介質(zhì)和碳源)培養(yǎng)基質(zhì)的規(guī)模化制作方法,其特征在于,所述的方法中包括有準確計算、精確稱量、先少后多地混合、密封、單獨母液制備、啟封使用等六個步驟。
      [0005]根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法,其特征在于,所述的六個步驟具體操作如下:
      ①準確計算:將改良Nitsch基本培養(yǎng)基所含的15種元素擴大1000倍,即七水硫酸鋅0.05g,鹽酸吡哆醇、鹽酸硫胺素和泛酸鈣各0.25g,硼酸0.5g,煙酸1.25g,四水硫酸錳3g,甘氨酸7.5g,檸檬酸鐵10g,七水硫酸鎂125g,磷酸二氫鉀125g,硝酸鉀125g,四水硝酸鈣500g,瓊脂粉5000g,蔗糖30000g ;2種元素二水鑰酸鈉和五水硫酸銅擴大10000倍,即各0.25g ;
      ②精確稱量:按照①中計算的結(jié)果準確稱量,尤其是要用萬分之一天平準確稱量各0.25g的二水鑰酸鈉和五水硫酸銅;
      ③先少后多地混合:按照量的少多進行先后混合,即按照七水硫酸鋅,鹽酸吡哆醇,鹽酸硫胺素,泛酸鈣各,硼酸,煙酸,四水硫酸錳,甘氨酸,檸檬酸鐵,七水硫酸鎂,磷酸二氫鉀,硝酸鉀,四水硝酸鈣,瓊脂粉,蔗糖的順序混合均勻,共計30898.05g ;
      ④密封:將混合后的固體基質(zhì)按照10g每瓶的要求分裝于塑料容器中,并進行密封;
      ⑤單獨母液制備:二水鑰酸鈉和五水硫酸銅各稱量0.25g,溶于IL蒸餾水中,配制成10000倍母液;
      ⑥啟封使用:根據(jù)需要,每IL蒸餾水中加入準確稱量的上述固體基質(zhì)30.9g,加熱待
      其完全溶解后加入10PL 二水鑰酸鈉和五水硫酸銅的單獨母液,進而加入其它所需試劑即
      可。
      [0006]本發(fā)明的有益效果:該高精密度培養(yǎng)基質(zhì)的規(guī)?;谱鞣椒ň哂幸韵绿攸c,即不同批次的基質(zhì)之間無計算誤差;由于15種試劑都擴大了 1000倍,2種試劑擴大了 10000倍,不同批次的基質(zhì)之間的稱量誤差極小,精密度高;理論上,由于固體基質(zhì)每次為1000倍的使用量(以每次IL計算),即可以配制1000L的上述配方,液體母液每次僅需要ΙΟΟμ?,批次內(nèi)部不會出現(xiàn)因為使用不同廠家、不同時期的試劑而導(dǎo)致的人為誤差;擴大后的固體基質(zhì)為每10g密封于一個塑料容器中,可避免因天氣、溫度、水分等外界因素影響導(dǎo)致出現(xiàn)液體母液常見的沉淀、發(fā)霉等現(xiàn)象,而液體基質(zhì)僅為兩種元素的混合。擴大10000倍后精密度高;上述的諸多優(yōu)點都為以該培養(yǎng)基為基質(zhì)開展的后續(xù)試驗,獲得準確的試驗結(jié)果奠定基石出O O
      [0007]【具體實施方式】:
      下面結(jié)合具體實施例對本發(fā)明進行進一步的描述。
      [0008]本實施例中一種高精度改良Nitsch(含固定介質(zhì)和碳源)(含固定介質(zhì)和碳源和固定介質(zhì))固體培養(yǎng)基質(zhì)的規(guī)模化制作方法,包括有準確計算、精確稱量、先少后多地混合、密封、單獨母液制備、啟封使用等六個步驟。
      [0009]上述六個步驟具體操作如下:
      ①準確計算:將改良Nitsch基本培養(yǎng)基所含的15種元素擴大1000倍,即七水硫酸鋅0.05g,鹽酸吡哆醇、鹽酸硫胺素和泛酸鈣各0.25g,硼酸0.5g,煙酸1.25g,四水硫酸錳3g,甘氨酸7.5g,檸檬酸鐵10g,七水硫酸鎂125g,磷酸二氫鉀125g,硝酸鉀125g,四水硝酸鈣500g,瓊脂粉5000g,蔗糖30000g ;2種元素二水鑰酸鈉和五水硫酸銅擴大10000倍,即各0.25g ;
      ②精確稱量:按照①中計算的結(jié)果準確稱量,尤其是要用萬分之一天平準確稱量各0.25g的二水鑰酸鈉和五水硫酸銅;
      ③先少后多地混合:按照量的少多進行先后混合,即按照七水硫酸鋅,鹽酸吡哆醇,鹽酸硫胺素,泛酸鈣各,硼酸,煙酸,四水硫酸錳,甘氨酸,檸檬酸鐵,七水硫酸鎂,磷酸二氫鉀,硝酸鉀,四水硝酸鈣,瓊脂粉,蔗糖的順序混合均勻,共計30898.05g ;
      ④密封:將混合后的固體基質(zhì)按照10g每瓶的要求分裝于塑料容器中,并進行密封;
      ⑤單獨母液制備:二水鑰酸鈉和五水硫酸銅各稱量0.25g,溶于IL蒸餾水中,配制成10000倍母液;
      ⑥啟封使用:根據(jù)需要,每IL蒸餾水中加入準確稱量的上述固體基質(zhì)30.9g,加熱待其完全溶解后加入10PL 二水鑰酸鈉和五水硫酸銅的單獨母液,進而加入其它所需試劑即可。
      [0010]將上述基質(zhì)配制后的IL溶液加入Iml的IN的Κ0Η,溶解完全后分裝于30個200ml的玻璃瓶中,121°C滅菌20min后。于超凈工作臺上接種雛菊莖段,25°C光照12h條件下培養(yǎng)15d后,生根良好。
      【主權(quán)項】
      1.一種高精度改良Nitsch (含固定介質(zhì)和碳源)培養(yǎng)基質(zhì)的規(guī)模化制作方法,其特征在于,所述的方法中包括有準確計算、精確稱量、先少后多地混合、密封、單獨母液制備、啟封使用等六個步驟。
      2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法,其特征在于,所述的六個步驟具體操作如下: ①準確計算:將改良Nitsch基本培養(yǎng)基所含的15種元素擴大1000倍,即七水硫酸鋅0.05g,鹽酸吡哆醇、鹽酸硫胺素和泛酸鈣各0.25g,硼酸0.5g,煙酸1.25g,四水硫酸錳3g,甘氨酸7.5g,檸檬酸鐵10g,七水硫酸鎂125g,磷酸二氫鉀125g,硝酸鉀125g,四水硝酸鈣500g,瓊脂粉5000g,蔗糖30000g ;2種元素二水鑰酸鈉和五水硫酸銅擴大10000倍,即各0.25g ; ②精確稱量:按照①中計算的結(jié)果準確稱量,尤其是要用萬分之一天平準確稱量各0.25g的二水鑰酸鈉和五水硫酸銅; ③先少后多地混合:按照量的少多進行先后混合,即按照七水硫酸鋅,鹽酸吡哆醇,鹽酸硫胺素,泛酸鈣各,硼酸,煙酸,四水硫酸錳,甘氨酸,檸檬酸鐵,七水硫酸鎂,磷酸二氫鉀,硝酸鉀,四水硝酸鈣,瓊脂粉,蔗糖的順序混合均勻,共計30898.05g ; ④密封:將混合后的固體基質(zhì)按照10g每瓶的要求分裝于塑料容器中,并進行密封; ⑤單獨母液制備:二水鑰酸鈉和五水硫酸銅各稱量0.25g,溶于IL蒸餾水中,配制成10000倍母液; ⑥啟封使用:根據(jù)需要,每IL蒸餾水中加入準確稱量的上述固體基質(zhì)30.9g,加熱待其完全溶解后加入10PL 二水鑰酸鈉和五水硫酸銅的單獨母液,進而加入其它所需試劑即可。
      3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法,其特征在于,該高精密度培養(yǎng)基質(zhì)的規(guī)模化制作方法具有以下特點,即不同批次的基質(zhì)之間無計算誤差;由于15種試劑都擴大了 1000倍,2種試劑擴大了 10000倍,不同批次的基質(zhì)之間的稱量誤差極小,精密度高;理論上,由于固體基質(zhì)每次為1000倍的使用量(以每次IL計算),即可以配制1000L的上述配方,液體母液每次僅需要ΙΟΟμ?,批次內(nèi)部不會出現(xiàn)因為使用不同廠家、不同時期的試劑而導(dǎo)致的人為誤差;擴大后的固體基質(zhì)為每10g密封于一個塑料容器中,可避免因天氣、溫度、水分等外界因素影響導(dǎo)致出現(xiàn)液體母液常見的沉淀、發(fā)霉等現(xiàn)象,而液體基質(zhì)僅為兩種元素的混合;擴大10000倍后精密度高;上述的諸多優(yōu)點都為以該培養(yǎng)基為基質(zhì)開展的后續(xù)試驗,獲得準確的試驗結(jié)果奠定基礎(chǔ)。
      【專利摘要】本發(fā)明公開了一種高精度改良Nitsch(含固定介質(zhì)和碳源)培養(yǎng)基質(zhì)的規(guī)?;谱鞣椒?,屬于植物生物技術(shù)領(lǐng)域。首先計算基質(zhì)所含15種元素擴大1000倍后需求量以及需求量極少的CuSO4·5H2O和Na2MoO4·2H2O擴大10000倍后的需求量;準確稱取藥品;將15種元素按照需求量的少多進行先后混合、密封;將CuSO4·5H2O和Na2MoO4·2H2O用1L蒸餾水溶解后備用;根據(jù)需要分別進行啟封使用。通過該方法可制備的基質(zhì)具有精度高、操作方便、快速、應(yīng)用簡單、不同批次以及批次內(nèi)誤差小的特點,且避免了人為操作以及外界因素影響導(dǎo)致出現(xiàn)誤差大、沉淀、發(fā)霉等現(xiàn)象,可運用于植物組織培養(yǎng)等生物技術(shù)用途。
      【IPC分類】A01G31-00, A01H4-00
      【公開號】CN104642116
      【申請?zhí)枴緾N201510082201
      【發(fā)明人】錢家靜
      【申請人】錢家靜
      【公開日】2015年5月27日
      【申請日】2015年2月16日
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