一種白花樹無性快繁技術(shù)的制作方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及農(nóng)業(yè)生物技術(shù)中植物組織培養(yǎng)的方法，具體地說，涉及一種白花樹無性快繁技術(shù)。
【背景技術(shù)】
[0002]白花樹(tonkinensis)又名越南安息香,為安息香科安息香屬落葉喬木，是集藥用、油用、材用和觀賞于一身的優(yōu)良樹種。主要分布于熱帶和亞熱帶海拔在100?2000m的疏林中，我國云南、貴州、廣東、廣西、福建、湖南和江西等地天然林中有零星分布。
[0003]安息香是安息香屬植物分泌的樹脂，含有較多的香脂酸，具有提神、活血、止痛等作用。白花樹樹脂中安息香含量可達(dá)25%以上，因此是一種貴重醫(yī)藥用用材。白花樹木材為散孔材，樹干通直，結(jié)構(gòu)致密，材質(zhì)松軟，可作火柴桿、家具及板材。白花樹種子油稱為“白花油”，主要成分為油酸、亞油酸、棕櫚酸和花生酸，其中不飽和脂肪酸總含量達(dá)85.4%，僅次于茶油、橄欖油和芝麻油，是一種用途廣泛的食用油。此外，白花樹還是一種優(yōu)良觀賞樹種。目前我國南方正在發(fā)展規(guī)模化種植白花樹，缺乏優(yōu)質(zhì)白花樹種苗是制約其規(guī)?；N植的瓶頸。然而，目前白花樹主要采用種子播種、扦插繁殖、根蘗繁殖方式進(jìn)行育苗，效率低。因此，非常有必要建立一套完整的白花樹組無性快繁技術(shù)。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明的目的在于提供出一種白花樹無性快繁技術(shù)，通本發(fā)明利用無菌播種獲得無菌苗，取其帶腋芽莖段作為外植體，通過增殖培養(yǎng)、生根培養(yǎng)、煉苗及移栽等步驟實(shí)現(xiàn)了白花樹種苗的快速繁殖，從而實(shí)現(xiàn)了本發(fā)明的目的。
[0005]本發(fā)明的一種白花樹無性快繁技術(shù)，包括以下的步驟:
(I)果實(shí)采收:采收白花樹優(yōu)良單株的當(dāng)年采收的果實(shí)，果實(shí)采收回后陰干并脫去果皮后保存于4 C冰箱中備用。
[0006](2)無菌播種:將白花樹的種仁先用75%乙醇消毒5?30s后用無菌水洗3?5次，再用0.1%升汞溶液消毒10?25min，用無菌水沖洗4?6次后于超凈工作臺中將種仁外的胚乳切除后將胚接種于MS培養(yǎng)基上進(jìn)行種子萌發(fā)培養(yǎng)。
[0007](3)增殖培養(yǎng):將步驟(I)獲得的無菌苗的芽切成1.5?2.0cm長，每段至少帶一個(gè)健壯的芽，并入增殖培養(yǎng)基上進(jìn)行增殖培養(yǎng)，接種后先在25?28°C條件下全暗培養(yǎng)7?14天，然后置于每天光照12?16小時(shí)，光照強(qiáng)度為1500?25001x，置于培養(yǎng)溫度為25?28°C的條件下培養(yǎng)，35?40天轉(zhuǎn)接一次。
[0008](4)生根培養(yǎng):將步驟(I)或(2)無菌苗的芽切成1.5?2.0cm長，每段至少帶一個(gè)健壯的芽分切接種到生根培養(yǎng)基上進(jìn)行生根培養(yǎng)，接種后先在25?28°C條件下全暗培養(yǎng)7?14天，然后置于每天光照14?16小時(shí)，光照強(qiáng)度為2000?30001x，培養(yǎng)溫度為25?28°C的條件下培養(yǎng)至生根。
[0009](5)煉苗移栽:將高約8?1cm的生根試管苗去瓶蓋置于自然光照下煉苗5?7天后，將試管苗從培養(yǎng)瓶中取出，洗掉根部培養(yǎng)基，栽入由泥炭土和黃沙泥混合成的基質(zhì)中并定植于大田中。
[0010]上述步驟(3)所述的增殖培養(yǎng)基為:MS+6-BA0.3?0.9mg/L+NAA0.2?0.4mg/L+鹿糖 15 ?30g/L+ 瓊脂 3.5 ?6.0g/L, pH 為 5.4 ?5.8。
[0011]上述步驟(4)所述的生根培養(yǎng)基為:MS+NAA0.2?0.5mg/L+IBA0.2?0.5mg/L+蔗糖 15 ?30g/L+ 瓊脂 3.5 ?6.0g/L, pH 為 5.4 ?5.8。
[0012]與現(xiàn)有技術(shù)相比本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)是:本發(fā)明通過植物組織培養(yǎng)技術(shù)獲得性狀穩(wěn)定種苗的育苗方法。利用無菌播種獲得無菌苗，取其帶腋芽莖段作為外植體，通過增殖培養(yǎng)、生根培養(yǎng)、煉苗及移栽等步驟實(shí)現(xiàn)了白花樹種苗的快速繁殖，解決了這一集藥用、油用、材用和觀賞于一身的優(yōu)良樹種種苗缺乏的問題，對充分開發(fā)這一具有極高觀賞價(jià)值和食用價(jià)值的野生植物具有現(xiàn)實(shí)意義。
【具體實(shí)施方式】
[0013]以下實(shí)施例是對本發(fā)明的進(jìn)一步說明，不是對本發(fā)明的限制。
[0014]實(shí)施例1:
(I)果實(shí)采收:采收白花樹優(yōu)良單株的當(dāng)年采收的果實(shí)，果實(shí)采收回后陰干并脫去果皮后保存于4 C冰箱中備用。
[0015](2)無菌播種:將白花樹的種仁先用75%乙醇消毒1s后用無菌水洗3次,再用
0.1%升汞溶液消毒lOmin，用無菌水沖洗4次后于超凈工作臺中將種仁外的胚乳切除后將胚接種于MS培養(yǎng)基上進(jìn)行種子萌發(fā)培養(yǎng)。污染率低至5%以下，成活率可達(dá)92%。
[0016](3)增殖培養(yǎng):將步驟(I)獲得的無菌苗的芽切成1.5?2.0cm長，每段至少帶一個(gè)健壯的芽，并入增殖培養(yǎng)基上進(jìn)行增殖培養(yǎng)，接種后先在25°C條件下全暗培養(yǎng)7天，然后置于每天光照12小時(shí)，光照強(qiáng)度為15001x，置于培養(yǎng)溫度為25°C的條件下培養(yǎng)，35天轉(zhuǎn)接一次。培養(yǎng)I個(gè)月后，芽的平均生長高度為5.02cm，增殖系數(shù)為4.8，植株生長良好。所述增殖培養(yǎng)基為:MS+6-BA0.3mg/L+NAA0.2mg/L+ 蔗糖 15g/L+ 瓊脂 3.5g/L，pH 為 5.8。
[0017](4)生根培養(yǎng):將步驟(I)或(2)無菌苗的芽切成1.5?2.0cm長，每段至少帶一個(gè)健壯的芽分切接種到生根培養(yǎng)基上進(jìn)行生根培養(yǎng)，接種后先在25°C條件下全暗培養(yǎng)7天，然后置于每天光照14小時(shí)，光照強(qiáng)度為20001χ，培養(yǎng)溫度為25V的條件下培養(yǎng)至生根。培養(yǎng)35天后,平均根生達(dá)6.0cm,根系發(fā)達(dá),生根率達(dá)86%以上。所述生根培養(yǎng)基為:MS+NAA0.2mg/L+IBA0.2mg/L+ 蔗糖 15g/L+ 瓊脂 3.5g/L, pH 為 5.8。
[0018](5)煉苗移栽:將高約8?1cm的生根試管苗去瓶蓋置于自然光照下煉苗5?7天后，將試管苗從培養(yǎng)瓶中取出，洗掉根部培養(yǎng)基，栽入由泥炭土和黃沙泥混合成的基質(zhì)中并定植于大田中，移栽成成活率達(dá)91%。
[0019]實(shí)施例2:
(I)果實(shí)采收:采收白花樹優(yōu)良單株的當(dāng)年采收的果實(shí)，果實(shí)采收回后陰干并脫去果皮后保存于4 C冰箱中備用。
[0020](2)無菌播種:將白花樹的種仁先用75%乙醇消毒13s后用無菌水洗5次，再用
0.1%升汞溶液消毒15min，用無菌水沖洗4次后于超凈工作臺中將種仁外的胚乳切除后將胚接種于MS培養(yǎng)基上進(jìn)行種子萌發(fā)培養(yǎng)。污染率低至3%以下，成活率可達(dá)90%。
[0021](3)增殖培養(yǎng):將步驟(I)獲得的無菌苗的芽切成1.5?2.0cm長，每段至少帶一個(gè)健壯的芽，并入增殖培養(yǎng)基上進(jìn)行增殖培養(yǎng)，接種后先在25°C條件下全暗培養(yǎng)7天，然后置于每天光照13小時(shí)，光照強(qiáng)度為20001x，置于培養(yǎng)溫度為25°C的條件下培養(yǎng)，38天轉(zhuǎn)接一次。培養(yǎng)35天后，芽的平均生長高度為4.92cm，增殖系數(shù)為5.7，植株生長良好。所述增殖培養(yǎng)基為:MS+6-BA0.5mg/L+NAA0.4mg/L+ 蔗糖 15g/L+ 瓊脂 3.5g/L，pH 為 5.8。
[0022](4)生根培養(yǎng):將步驟(I)或(2)無菌苗的芽切成1.5?2.0cm長，每段至少帶一個(gè)健壯的芽分切接種到生根培養(yǎng)基上進(jìn)行生根培養(yǎng)，接種后先在25°C條件下全暗培養(yǎng)7天，然后置于每天光照14小時(shí)，光照強(qiáng)度為20001χ，培養(yǎng)溫度為25V的條件下培養(yǎng)至生根。培養(yǎng)38天后,平均根生達(dá)5.6cm,根系發(fā)達(dá),生根率達(dá)88%以上。所述生根培養(yǎng)基為:MS+NAA0.3mg/L+IBA0.6mg/L+ 蔗糖 15g/L+ 瓊脂 3.5g/L, pH 為 5.8。
[0023](5)煉苗移栽:將高約8?1cm的生根試管苗去瓶蓋置于自然光照下煉苗5?7天后，將試管苗從培養(yǎng)瓶中取出，洗掉根部培養(yǎng)基，栽入由泥炭土和黃沙泥混合成的基質(zhì)中并定植于大田中，移栽成成活率達(dá)94%。
【主權(quán)項(xiàng)】
1.一種白花樹無性快繁技術(shù)，其特征在于包括以下步驟: (I)果實(shí)采收:采收白花樹優(yōu)良單株的當(dāng)年采收的果實(shí)，果實(shí)采收回后陰干并脫去果皮后保存于4 C冰箱中備用； (2)無菌播種:將白花樹的種仁先用75%乙醇消毒5?30s后用無菌水洗3?5次,再用0.1%升汞溶液消毒10?25min，用無菌水沖洗4?6次后于工作臺中將種仁外的胚乳切除后將胚接種于MS培養(yǎng)基上進(jìn)行種子萌發(fā)培養(yǎng)； (3)增殖培養(yǎng):將步驟(I)獲得的無菌苗的芽切成1.5?2.0cm長，每段至少帶一個(gè)健壯的芽，并入增殖培養(yǎng)基上進(jìn)行增殖培養(yǎng)，接種后先在25?28°C條件下全暗培養(yǎng)7?14天，然后置于每天光照12?16小時(shí)，光照強(qiáng)度為1500?25001x，置于培養(yǎng)溫度為25?28°C的條件下培養(yǎng)，35?40天轉(zhuǎn)接一次； (4)生根培養(yǎng):將步驟(I)或(2)無菌苗的芽切成1.5?2.0cm長，每段至少帶一個(gè)健壯的芽分切接種到生根培養(yǎng)基上進(jìn)行生根培養(yǎng)，接種后先在25?28°C條件下全暗培養(yǎng)7?14天，然后置于每天光照14?16小時(shí)，光照強(qiáng)度為2000?30001x，培養(yǎng)溫度為25?28°C的條件下培養(yǎng)至生根； (5)煉苗移栽:將高約8?1cm的生根試管苗去瓶蓋置于自然光照下煉苗5?7天后,將試管苗從培養(yǎng)瓶中取出，洗掉根部培養(yǎng)基,栽入由泥炭土和黃沙泥混合成的基質(zhì)中并定植于大田中。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種白花樹無性快繁技術(shù)，其特征在于步驟(3)所述的增殖培養(yǎng)基為:MS+6-BA0.3 ?0.9mg/L+NAA0.2 ?0.4mg/L+蔗糖 15 ?30g/L+ 瓊脂 3.5 ?6.0g/L，pH 為 5.4 ?5.8。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種白花樹無性快繁技術(shù)，其特征在于步驟(4)所述的生根培養(yǎng)基為:MS+NAA0.2 ?0.5mg/L+IBA0.2 ?0.5mg/L+ 蔗糖 15 ?30g/L+ 瓊脂 3.5 ?6.0g/L，pH 為 5.4 ?5.8。
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種白花樹無性快繁技術(shù)，涉及白花樹（Styrax tonkinensis）通過植物組織培養(yǎng)技術(shù)獲得性狀穩(wěn)定種苗的育苗方法。本發(fā)明利用無菌播種獲得無菌苗，取其帶腋芽莖段作為外植體，通過增殖培養(yǎng)、生根培養(yǎng)、煉苗及移栽等步驟實(shí)現(xiàn)了白花樹種苗的快速繁殖，解決了這一集藥用、油用、材用和觀賞于一身的優(yōu)良樹種種苗缺乏的問題，對充分開發(fā)這一具有極高觀賞價(jià)值和食用價(jià)值的野生植物具有現(xiàn)實(shí)意義。
【IPC分類】A01H4-00
【公開號】CN104686342
【申請?zhí)枴緾N201510085932
【發(fā)明人】梁仕華
【申請人】梁仕華
【公開日】2015年6月10日
【申請日】2015年2月22日