一種有機(jī)添加物誘導(dǎo)多葉斑葉蘭植株再生及高效繁殖方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于瀕危野生植物中重要植物材料的快速繁殖方法，特別是涉及野生蘭花的組織培養(yǎng)方法。
【背景技術(shù)】
[0002]多葉斑葉蘭(Goodyera fol1sa (Lindley) Benth.)屬于蘭科斑葉蘭屬，是植物中被列入瀕危野生動植物種國際貿(mào)易公約的物種之一，屬國家二級保護(hù)植物，分布:中國的福建、廣東、廣西、四川、臺灣、西藏、云南，以及不丹、印度、日本、朝鮮半島、緬甸、尼泊爾、越南。為解決現(xiàn)有技術(shù)中自然繁衍能力、傳播擴(kuò)散能力不強(qiáng)，自然更新困難、優(yōu)良種苗稀缺等問題。本發(fā)明采用組織培養(yǎng)技術(shù)快速繁殖大量優(yōu)質(zhì)種苗，有助于解決資源匱乏、緩解野生資源遭受嚴(yán)重破壞的壓力，有效地保護(hù)有限的野生，為規(guī)模化、產(chǎn)業(yè)化提供技術(shù)支持。有關(guān)多葉斑葉蘭植株再生及快速繁殖技術(shù)未見報(bào)道。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0003]本發(fā)明目的是提供一種有機(jī)添加物誘導(dǎo)多葉斑葉蘭植株再生及高效繁殖方法，為規(guī)?；?、產(chǎn)業(yè)化提供技術(shù)支持。
[0004]本發(fā)明的方法是以如下方式實(shí)現(xiàn)的:
一種有機(jī)添加物誘導(dǎo)多葉斑葉蘭植株再生及高效繁殖方法，具體步驟如下:
1)材料選取與消毒:將采集的野生植株用流水洗凈植物表面沙土，用手術(shù)剪剪去植株上葉片三分之二后置于飽和漂白粉上清液中浸泡lOmin，并用軟毛刷刷洗，清洗干凈后，自來水下沖滴15?30 min，雙蒸水沖洗2?3次，置超凈工作臺內(nèi)用75%酒精消毒30s，加入
0.1%升未處理8?13min，無菌水沖蕩3?4遍，用消毒濾紙吸干表面水分后進(jìn)行接種；
2)誘導(dǎo)培養(yǎng):將經(jīng)消毒處理后的材料，切成帶1-2個節(jié)點(diǎn)、長l-2cm的莖段平放接種于經(jīng)高溫、高壓滅菌的芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基中；培養(yǎng)條件:培養(yǎng)室溫度為23±2°C，光照時間10h/d，光照強(qiáng)度1000?15001x，培養(yǎng)時間15-20d ；
3)增殖培養(yǎng):將經(jīng)步驟2)誘導(dǎo)培養(yǎng)，所得到的生長良好的叢生芽切開并剪成長度為
1.5-2.5 cm，接種在增殖培養(yǎng)基中，光照時間10h/d，光照強(qiáng)度1300?18001x，，增殖培養(yǎng)時間 20-30d ；
4)誘導(dǎo)生根:將經(jīng)步驟3)增殖培養(yǎng)的帶有葉2?3片，株高4?5cm的無根幼苗單株切下，轉(zhuǎn)移到生根培養(yǎng)基中；光照時間llh/d，光照強(qiáng)度1500?20001x，誘導(dǎo)生根時間20-25d ；
5)移栽:當(dāng)誘導(dǎo)生根培養(yǎng)試管苗生長至高5-6cm，根3?5條，葉5片，葉長2?3cm時，將試管苗放在自然光下煉苗4?6天，再打開瓶蓋煉苗1-2天，然后用從培養(yǎng)瓶中取出，洗去附著在根系上的培養(yǎng)基，移入蛭石和腐殖土質(zhì)量比為1:2的混合基質(zhì)中，溫度控制在15?35 °C，濕度保持在75%?85%，避免陽光直射。
[0005]上述方法涉及的培養(yǎng)基配制如下: (1)芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基:MS+1.5 mg/L-1 6-BA +0.5 mg/L-1 KT+0.3mg/L_1 NAA+ Ig.L—1 蛋白胨 +20g/L 鹿糖 +6.5g/L_1 Agar+1.5 g.I71 活性炭 +30 g.廠1 香蕉 +50 g.L-1 土豆；
(2)增殖培養(yǎng)基:MS+3.0mg/Γ1 6-BA+0.5 mg/L-1 KT+ 0.5mg/L_1 NAA +20/L 蔗糖+6.5g/L Agar +1.5 g.I71 活性炭 + 2g.L ―1蛋白胨 +30 g.廠1 香蕉 +50 g.L-1 土豆；
(3)生根培養(yǎng)基:1/2MS+1.0 mg/L-1 ΙΒΑ+0.1 mg/L-1 NAA+1 g.L—1 花寶 2 號+20g/L鹿糖 +6.5g/L_1 Agar +1.5 g.L—1 活性炭。
[0006]本發(fā)明的顯著優(yōu)點(diǎn):
一:通過本發(fā)明方法可以最大限度地應(yīng)用現(xiàn)有資源，通過生物技術(shù)手段在短時間內(nèi)解決稀缺資源的應(yīng)用需求；
二:有助于解決資源匱乏、緩解野生資源遭受嚴(yán)重破壞的壓力，有效地保護(hù)有限的野生，為規(guī)?；a(chǎn)業(yè)化提供技術(shù)支持。
[0007]三:有關(guān)有機(jī)添加物誘導(dǎo)多葉斑葉蘭植株再生及高效繁殖方法未見報(bào)道。
[0008]四:有機(jī)添加物誘導(dǎo)多葉斑葉蘭配方，增殖系數(shù)高、生根率高，植物生長需求時間短，栽培后適應(yīng)性強(qiáng)，苗木健壯挺拔，長勢良好，整齊一致，大大縮短了苗木培養(yǎng)過程，節(jié)約了大量成本。為多葉斑葉蘭的保護(hù)，以及規(guī)?；?、產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)推廣應(yīng)用提供技術(shù)支持。
[0009]五:總結(jié)出一套可供生產(chǎn)單位應(yīng)用的多葉斑葉蘭高效繁殖技術(shù)，通過應(yīng)用該技術(shù)建立多葉斑葉蘭生產(chǎn)基地。因此，多葉斑葉蘭繁育的廣泛應(yīng)用可直接提高珍稀品種人工林地產(chǎn)量、質(zhì)量和園林綠化水平，實(shí)現(xiàn)資源高效培育，具有十分廣闊的產(chǎn)業(yè)化發(fā)展前景。本發(fā)明創(chuàng)新性強(qiáng)，技術(shù)含量高，公益性強(qiáng)，項(xiàng)目的實(shí)施對于促進(jìn)珍稀蘭花品種的研宄、利用，有著良好前景和及其重要意義，為開發(fā)利用該種資源提供了理論依據(jù)和技術(shù)支持。
【附圖說明】
[0010]圖1為誘導(dǎo)培養(yǎng)。
[0011]圖2為增殖培養(yǎng)。
[0012]圖3為誘導(dǎo)生根。
[0013]圖4為試管苗移栽。
[0014]圖5為試管苗移栽。
【具體實(shí)施方式】
[0015]實(shí)施例1
一種誘導(dǎo)多葉斑葉蘭植株再生及快速繁殖的方法，具體步驟如下:
1)材料選取與消毒:將采集的野生植株用流水沖洗干凈，剪去植株上的葉片后置于飽和漂白粉上清液中浸泡lOmin，并用軟毛刷刷洗，沖洗干凈后，自來水下沖滴20min，再用雙蒸水沖洗2次，置超凈工作臺內(nèi)用75%酒精消毒30s，加入0.1%升汞處理lOmin，再用無菌水沖3遍，用消毒濾紙吸干表面水分后進(jìn)行接種；
2)誘導(dǎo)培養(yǎng):將經(jīng)消毒處理后的材料，切成帶I個節(jié)點(diǎn)、長Icm的莖段平放接種于經(jīng)高溫、高壓滅菌的芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基中；培養(yǎng)條件:培養(yǎng)室溫度為23°C，光照時間10h/d，光照強(qiáng)度18001x，培養(yǎng)時間18d ；
3)增殖培養(yǎng):將經(jīng)步驟2)誘導(dǎo)培養(yǎng)，所得到的生長良好的叢生芽切開并剪成長度為2cm，接種在增殖培養(yǎng)基中，光照時間10h/d，光照強(qiáng)度15001x，，增殖培養(yǎng)時間25d ；
4)誘導(dǎo)生根:將經(jīng)步驟3)增殖培養(yǎng)的帶有葉2片，株高4cm的無根幼苗單株切下，轉(zhuǎn)移到生根培養(yǎng)基中；光照時間llh/d，光照強(qiáng)度18001x，誘導(dǎo)生根時間23d ；
5)移栽:當(dāng)誘導(dǎo)生根培養(yǎng)試管苗生長至高5cm，根4條，葉5片，葉長約2cm時，將試管苗放在自然光下煉苗5天，再打開瓶蓋煉苗I天左右以增強(qiáng)試管苗對室外環(huán)境的適應(yīng)能力；，然后用攝子從培養(yǎng)瓶中取出，洗去附著在根系上的培養(yǎng)基，移入蛭石和腐殖土質(zhì)量比為1:2的混合基質(zhì)中，保濕遮陰(溫度控制在25°C，濕度應(yīng)保持在80%左右，避免陽光直射，成活率可達(dá)96%以上。1-2周后植株適應(yīng)能力逐漸增強(qiáng)，獲得生長健壯的完整再生植株。
[0016]上述方法涉及的培養(yǎng)基配制如下:
(1)芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基:MS+1.5 mg/Γ1 6-BA +0.5 mg/L-1 KT+0.3mg/L_1 NAA+ Ig.L—1 蛋白胨 +20g/L 鹿糖 +6.5g/L_1 Agar+1.5 g.I71 活性炭 +30 g.廠1 香蕉 +50 g.L-1 土豆；
(2)增殖培養(yǎng)基:MS+3.0mg/Γ1 6-BA+0.5 mg/L-1 KT+ 0.5mg/L_1 NAA +20/L 蔗糖+6.5g/L Agar +1.5 g.I71 活性炭 + 2g.L ―1蛋白胨 +30 g.廠1 香蕉 +50 g.L-1 土豆；
(3)生根培養(yǎng)基:1/2MS+1.0 mg/L-1 ΙΒΑ+0.1 mg/L-1 NAA+1 g.L—1 花寶 2 號+20g/L鹿糖 +6.5g/L_1 Agar +1.5 g.L—1 活性炭。
【主權(quán)項(xiàng)】
1.一種有機(jī)添加物誘導(dǎo)多葉斑葉蘭植株再生及高效繁殖方法，其特征在于:所述方法的具體步驟如下: 1)材料選取與消毒:將采集的野生植株用流水洗凈植物表面沙土，用手術(shù)剪剪去植株上葉片三分之二后置于飽和漂白粉上清液中浸泡lOmin，并用軟毛刷刷洗，清洗干凈后，自來水下沖滴15?30 min，雙蒸水沖洗2?3次，置超凈工作臺內(nèi)用75%酒精消毒30s，加入0.1%升未處理8?13min，無菌水沖蕩3?4遍，用消毒濾紙吸干表面水分后進(jìn)行接種； 2)誘導(dǎo)培養(yǎng):將經(jīng)消毒處理后的材料，切成帶1-2個節(jié)點(diǎn)、長l-2cm的莖段平放接種于經(jīng)高溫、高壓滅菌的芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基中；培養(yǎng)條件:培養(yǎng)室溫度為23±2°C，光照時間10h/d，光照強(qiáng)度1000?15001x，培養(yǎng)時間15-20d ； 3)增殖培養(yǎng):將經(jīng)步驟2)誘導(dǎo)培養(yǎng)，所得到的生長良好的叢生芽切開并剪成長度為1.5-2.5 cm，接種在增殖培養(yǎng)基中，光照時間10h/d，光照強(qiáng)度1300?18001x，，增殖培養(yǎng)時間 20-30d ； 4)誘導(dǎo)生根:將經(jīng)步驟3)增殖培養(yǎng)的帶有葉2?3片，株高4?5cm的無根幼苗單株切下，轉(zhuǎn)移到生根培養(yǎng)基中；光照時間llh/d，光照強(qiáng)度1500?20001x，誘導(dǎo)生根時間20-25d ； 5)移栽:當(dāng)誘導(dǎo)生根培養(yǎng)試管苗生長至高5-6cm，根3?5條，葉5片，葉長2?3cm時，將試管苗放在自然光下煉苗4?6天，再打開瓶蓋煉苗1-2天，然后用從培養(yǎng)瓶中取出，洗去附著在根系上的培養(yǎng)基，移入蛭石和腐殖土質(zhì)量比為1:2的混合基質(zhì)中，溫度控制在15?35 °C，濕度保持在75%?85%，避免陽光直射； 上述方法涉及的培養(yǎng)基配制如下:(1)芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基:MS+1.5 mg/Γ1 6-BA +0.5 mg/L-1 KT+0.3mg/L_1 NAA+ Ig.L—1 蛋白胨 +20g/L 鹿糖 +6.5g/L_1 Agar+1.5 g.I71 活性炭 +30 g.廠1 香蕉 +50 g.L-1 土豆； (2)增殖培養(yǎng)基:MS+3.0mg/Γ1 6-BA+0.5 mg/L-1 KT+ 0.5mg/L_1 NAA +20/L 蔗糖+6.5g/L Agar +1.5 g.I71 活性炭 + 2g.L ―1蛋白胨 +30 g.廠1 香蕉 +50 g.L-1 土豆； (3)生根培養(yǎng)基:1/2MS+1.0 mg/L-1 ΙΒΑ+0.1 mg/L-1 NAA+1 g.L—1 花寶 2 號+20g/L鹿糖 +6.5g/L_1 Agar +1.5 g.L—1 活性炭。
【專利摘要】本發(fā)明屬于瀕危野生植物中重要植物材料的快速繁殖方法，特別是涉及野生蘭花的組織培養(yǎng)方法。本發(fā)明目的是提供一種有機(jī)添加物誘導(dǎo)多葉斑葉蘭植株再生及高效繁殖方法，該方法包括材料選取與消毒、誘導(dǎo)培養(yǎng)、增殖培養(yǎng)、誘導(dǎo)生根和移栽。其中涉及芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基、增殖培養(yǎng)基和生根培養(yǎng)基。本發(fā)明的培養(yǎng)基配方，增殖系數(shù)高、生根率高，植物生長需求時間短，栽培后適應(yīng)性強(qiáng)，苗木健壯挺拔，長勢良好，整齊一致，大大縮短了苗木培養(yǎng)過程，節(jié)約了大量成本。為多葉斑葉蘭的保護(hù)，以及規(guī)?；?、產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)推廣應(yīng)用提供技術(shù)支持。
【IPC分類】A01H4-00
【公開號】CN104770303
【申請?zhí)枴緾N201510194116
【發(fā)明人】何碧珠, 林蔚, 劉江楓, 何官榕
【申請人】福建農(nóng)林大學(xué)
【公開日】2015年7月15日
【申請日】2015年4月23日