一種金葉復(fù)葉槭的組培快繁方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及植物組織培養(yǎng)方法，具體涉及一種金葉復(fù)葉槭的組培快繁方法。
【背景技術(shù)】
[0002]金葉復(fù)葉槭(Acernegundo‘Aurea’)屬槭樹科(Aceraceae)槭屬(Acer)樹種，是復(fù)葉槭的栽培變種，落葉喬木，是我國近幾年從歐洲引進的優(yōu)良觀賞樹種。金葉復(fù)葉槭生長勢旺盛，小枝光滑，金黃色；奇數(shù)羽狀復(fù)葉對生，葉較大，葉色柔和，春季金黃色，漸變?yōu)辄S綠色，具有極高的觀賞價值。金葉復(fù)葉槭適生范圍廣，抗性強，耐干旱、耐寒冷(可耐_40-45°C低溫)、耐輕度鹽堿地、耐煙塵，根萌蘗性強。因其較強的適生性和較高的觀賞價值，我國華北、東北、西北及華東地區(qū)均有作園林綠化樹種栽培，目前市場供不應(yīng)求。
[0003]生產(chǎn)中金葉復(fù)葉槭的主要繁殖方式為嫁接繁殖。嫁接繁殖成活率較高，但砧木選擇不當(dāng)會影響后期樹勢生長，且繁殖系數(shù)較低、投入成本較大。組織培養(yǎng)技術(shù)是良種快繁的主要途徑之一，繁殖系數(shù)高，變異小。關(guān)于金葉復(fù)葉槭組織培養(yǎng)的報道很少，只是對其組培性能的初探，同其他槭樹科樹種的組織培養(yǎng)一樣，存在新芽啟動慢、增殖系數(shù)低、生根性能較差、成活率低的缺陷。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明提供了一種金葉復(fù)葉槭的組培快繁方法，克服了金葉復(fù)葉槭的組培培養(yǎng)中啟動慢、增殖系數(shù)低、生根性能差、成活率低的不足。
[0005]為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采取的技術(shù)方案為:
[0006]一種金葉復(fù)葉槭的組培快繁方法，包括如下步驟:
[0007]S1、于春季休眠芽抽條后采集5cm左右的新生嫩枝，表面消毒后接種于附加0.5-1.0mg/L的6-芐基氨基嘌呤(6-BA)的MS培養(yǎng)基中，于20±2°C -25±2°C，14小時光照，光照強度20001χ條件下培養(yǎng)，誘導(dǎo)腋芽萌發(fā)至6-8cm長的嫩莖；
[0008]S2、取步驟SI獲得的嫩莖，剪成2-3cm帶2個葉柄的節(jié)段，接種于附加0.5mg/L6-芐基氨基嘌呤(6-BA) ,0.01-0.05mg/L噻苯隆(TDZ) ,0.05mg/L萘乙酸(NAA)的MS培養(yǎng)基中，于20±2°C -25±2°C，14小時光照，光照強度20001x條件下，進行增殖培養(yǎng)；
[0009]S3、選取步驟S2所得的生長健壯、長3-4cm的單芽接種于含0.01-0.05mg/L吲哚丁酸(IBA)的1/2MS培養(yǎng)基中，于20±2°C -25±2°C，14小時光照，光照強度20001x條件下，進行生根培養(yǎng)。
[0010]S4、當(dāng)根長至3-6cm時，將瓶蓋打開，煉苗3天后，用鑷子輕輕夾出幼苗，在流水中輕輕沖洗根部培養(yǎng)基，移栽至裝有基質(zhì)的一次性塑料杯中，將塑料杯每10個置于塑料自封袋中，室溫?zé)捗?0天后，將生根苗上盆栽于含有珍珠巖、蛭石和田園土的基質(zhì)中生長。
[0011]其中，所述步驟SI中的培養(yǎng)基中還包含6g/L瓊脂粉、30g/L蔗糖。
[0012]其中，所述步驟S2中增殖培養(yǎng)基還包含6g/L瓊脂粉、30g/L蔗糖、0.25g/L 2-嗎啉乙磺酸(MES)、0.2g/L左旋谷酰胺。
[0013]其中，所述步驟S3中生根培養(yǎng)基還包含7g/L瓊脂粉、15g/L蔗糖、0.25g/L 2-嗎啉乙磺酸(MES)。
[0014]其中，所述步驟S4中一次性塑料杯的基質(zhì)由珍珠巖和泥炭土按1:1的比例混合rfn 。
[0015]其中，所述步驟S4中珍珠巖、蛭石、田園土的比例為3: 2: 5。
[0016]本發(fā)明具有以下有益效果:
[0017]解決了槭樹科樹種組培過程中新芽啟動慢、增殖系數(shù)低、生根性差、移栽成活率低的問題。通過培養(yǎng)基組分的調(diào)整和培養(yǎng)條件的控制，能夠較快啟動金葉復(fù)葉槭離體材料腋芽萌發(fā)，誘導(dǎo)試管苗莖段不經(jīng)愈傷組織直接產(chǎn)生數(shù)目較多的不定芽，平均每個外植體增殖芽子數(shù)可達5.8個，不定芽生根率達100 %，主根發(fā)達，須根數(shù)量多，移栽成活率達85 %，為金葉復(fù)葉槭工廠化育苗提供了一條有效途徑。
【具體實施方式】
[0018]為了使本發(fā)明的目的及優(yōu)點更加清楚明白，以下結(jié)合實施例對本發(fā)明進行進一步詳細說明。應(yīng)當(dāng)理解，此處所描述的具體實施例僅僅用以解釋本發(fā)明，并不用于限定本發(fā)明。
[0019]實施例1
[0020]于春季休眠芽抽條后采集5cm左右的新生嫩枝，表面消毒后接種于含不同濃度梯度的6-BA (O、0.5、1.0mg/L)、6g/L瓊脂粉、30g/L蔗糖的MS培養(yǎng)基中，于25 ± 2°C，14小時光照，光照強度20001χ條件下培養(yǎng)，誘導(dǎo)腋芽萌發(fā)。統(tǒng)計腋芽萌發(fā)時間及萌發(fā)莖段狀態(tài)。結(jié)果表明，含0mg/L、0.5mg/L、l.0mg/L 6_BA的培養(yǎng)基中外植體的腋芽萌發(fā)時間分別為25天、15天、12天，添加6-BA可提前腋芽啟動時間，含0.5-1.0mg/L 6-BA培養(yǎng)基中萌發(fā)的嫩莖狀態(tài)正常，葉片平展，萌發(fā)嫩莖伸長速度較快。
[0021]實施例2
[0022]于春季休眠芽抽條后采集5cm左右的新生嫩枝，表面消毒后接種于含0.5mg/L6-BA、6g/L瓊脂粉、30g/L蔗糖的MS培養(yǎng)基中，于25±2°C，14小時光照，光照強度20001x條件下培養(yǎng)，誘導(dǎo)腋芽萌發(fā)。將腋芽萌發(fā)獲得的嫩莖，剪成2-3cm帶2個葉柄的節(jié)段，接種在含 0.5mg/L 6BA、0.05mg/L NAA、不同濃度梯度的 TDZ (0,0.01,0.05,0.lmg/L)、6g/L 瓊脂粉、30g/L蔗糖、0.25g/L MES、0.2g/L左旋谷酰胺的MS培養(yǎng)基中，于25±2°C，14小時光照，光照強度20001x條件下培養(yǎng)進行增殖培養(yǎng)。培養(yǎng)50天后統(tǒng)計增殖倍數(shù)。結(jié)果表明，含Omg/L、0.01mg/L、0.05mg/L、0.lmg/L TDZ的培養(yǎng)基中平均每個莖段增殖的芽子數(shù)分別為2個、4.8個、5.8個、2.6個。前三種濃度下增殖的芽子生長正常，后一種濃度下增殖的芽子粗短、扭曲，外植體切口處愈傷組織化嚴重。
[0023]實施例3
[0024]于春季休眠芽抽條后采集5cm左右的新生嫩枝，表面消毒后接種于含0.5mg/L6-BA、6g/L瓊脂粉、30g/L蔗糖的MS培養(yǎng)基中，于25±2°C，14小時光照，光照強度20001x條件下培養(yǎng)，誘導(dǎo)腋芽萌發(fā)。將腋芽萌發(fā)獲得的嫩莖，剪成2-3cm帶2個葉柄的節(jié)段，接種在含 0.5mg/L 6BA、0.05mg/L NAA、0.05mg/L TDZ、6g/L 瓊脂粉、30g/L 蔗糖、0.25g/L MES,0.2g/L左旋谷酰胺的MS培養(yǎng)基中，于25±2°C，14小時光照，光照強度20001x條件下培養(yǎng)進行增殖培養(yǎng)。將增殖獲得的生長健壯、長3-4cm的單芽分別接種在1/2MS附件不同濃度梯度的IBA (0.01,0.05,0.lmg/L)培養(yǎng)基中，以及1/2MS附件不同濃度梯度的NAA (0.01、0.05、0.lmg/L)培養(yǎng)基中進行生根培養(yǎng)，各種培養(yǎng)基中還包含7g/L瓊脂粉、15g/L蔗糖、0.25g/LMESo培養(yǎng)條件25±2°C，14小時光照，光照強度20001x。統(tǒng)計生根時間、50天后的生根率、觀察記錄生根情況。結(jié)果表明，在含NAA的生根培養(yǎng)基中培養(yǎng)的不定芽生根慢、根短、細弱，主根不明顯，最早生根時間為21天，最大生根率62%,平均根長1.54cm。在含0.0U0.05、0.lmg/L I