一種香菇扭結(jié)促進(jìn)劑的制作方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于農(nóng)業(yè)研究技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種香菇扭結(jié)促進(jìn)劑。
【背景技術(shù)】
[0002]香菇從菌絲栽培成子實(shí)體的過程主要經(jīng)過菌絲生長、菌絲扭結(jié)形成原基、轉(zhuǎn)色、出菇這幾個(gè)環(huán)節(jié)，其中，菌絲扭結(jié)形成原基對(duì)于提高香菇產(chǎn)量及香菇質(zhì)量都有重要作用，而目前對(duì)于促進(jìn)菌絲扭結(jié)成原基的研究還較少。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0003]本發(fā)明的目的在于提供一種香菇扭結(jié)促進(jìn)劑，其可有效促進(jìn)香菇菌絲扭結(jié)形成原基，從而縮短香菇的出菇時(shí)間及生長周期，提高所栽培香菇的質(zhì)量，明顯提高香菇種植的經(jīng)濟(jì)效益，對(duì)促進(jìn)食用菌產(chǎn)業(yè)發(fā)展具有重要意義。
[0004]為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用如下技術(shù)方案:
一種香菇扭結(jié)促進(jìn)劑是從雙孢蘑菇子實(shí)體中經(jīng)分離純化得到的；其分離純化方法具體包括如下步驟:
1)將雙孢蘑菇子實(shí)體按質(zhì)量體積比1:5加入質(zhì)量濃度為0.9%的生理鹽水，4°C下浸泡18h，然后用高速組織搗碎機(jī)進(jìn)行勻漿后再次于4°C下放置4h ;
2)將紗布疊成4層用于漿液過濾，所得濾液于4°C下9000r/min冷凍離心20min，取出上清液；按10mL上清液加固體硫酸銨22.6g的比例將硫酸銨加入到所取上清液中，然后將硫酸銨溶液加入到所取上清液中，攪拌混勻后進(jìn)行鹽析，并于4°C下放置18h使其充分沉淀，即為40%的飽和溶液部分；
3)將所得40%的飽和溶液于4°C下9000r/min冷凍離心20min，取出上清液；按10mL上清液加固體硫酸銨12.0g的比例將硫酸銨加入到所取上清液中，然后將硫酸銨溶液加入到所取上清液中，攪拌混勻后進(jìn)行鹽析，并于4°C下放置18h使其充分沉淀，即為60%的飽和溶液部分；
4)將所得60%的飽和溶液于4°C下9000r/min冷凍離心20min，取出沉淀，將沉淀溶于lmol/L的NaCl溶液中，裝入透析袋中，用相同鹽濃度的溶液透析至外透析液無SO42檢出為止;
5)將透析袋中的溶液加入聚乙二醇濃縮后，上DEAE-S^haroseFast Flow柱，用含有NaCl, pH為7.8的PBS緩沖液為洗脫劑進(jìn)行梯度洗脫，在280nm的檢測波長下對(duì)出現(xiàn)的色譜峰進(jìn)行分管收集，以鴿子血檢測各峰的凝血活性，收集活性部分；
6)將所收集的活性部分濃縮后上SephadexG-100柱進(jìn)行純化，流速為4mL/管、1min/管，以濃度為0.05mol/L、pH為8.0的PBS緩沖液作為洗脫液，在280nm的檢測波長下對(duì)出現(xiàn)的色譜峰進(jìn)行分管收集，以鴿子血檢測各峰的凝血活性，收集活性部分，經(jīng)冷凍干燥即得。
[0005]所述香菇扭結(jié)促進(jìn)劑是一種凝集素，于香菇菌絲扭結(jié)形成原基的初期加入到培養(yǎng)基中，可促進(jìn)香菇菌絲的扭結(jié)。
[0006]本發(fā)明的顯著優(yōu)點(diǎn)在于:本發(fā)明香菇扭結(jié)促進(jìn)劑在香菇菌絲扭結(jié)形成原基的初期使用，可顯著促進(jìn)菌絲扭結(jié)，縮短菌絲扭結(jié)的時(shí)間，從而縮短香菇的出菇時(shí)間及香菇的生長周期，提高所栽培香菇的質(zhì)量，明顯提高香菇種植的經(jīng)濟(jì)效益，對(duì)促進(jìn)食用菌產(chǎn)業(yè)發(fā)展具有重要意義。
【附圖說明】
[0007]圖1為未滴加香菇扭結(jié)促進(jìn)劑與滴加香菇扭結(jié)促進(jìn)劑后“武香I號(hào)”香菇菌塊的菌絲扭結(jié)情況，其中A為未滴加香菇扭結(jié)促進(jìn)劑，B為滴加香菇扭結(jié)促進(jìn)劑。
[0008]圖2為滴加不同濃度香菇扭結(jié)促進(jìn)劑后“武香I號(hào)”香菇菌塊的菌絲扭結(jié)情況，其中 I 為 15mg/mL，2 為 10mg/mL，3 為 5mg/mL，4 為 Omg/mL。
【具體實(shí)施方式】
[0009]為了使本發(fā)明所述的內(nèi)容更加便于理解，下面結(jié)合【具體實(shí)施方式】對(duì)本發(fā)明所述的技術(shù)方案做進(jìn)一步的說明，但是本發(fā)明不僅限于此。
[0010]一種香菇扭結(jié)促進(jìn)劑，其分離純化方法具體包括如下步驟:
1)從-200C冰箱中取出雙孢蘑菇子實(shí)體，先將其解凍，然后將雙孢蘑菇子實(shí)體按質(zhì)量體積比1:5加入質(zhì)量濃度為0.9%的生理鹽水，4°C下浸泡18h，然后用高速組織搗碎機(jī)進(jìn)行勻漿后再次于4°C下放置4h;
2);將紗布疊成4層用于漿液過濾，所得濾液(全程要注意帶一次性手套而防止染菌)于4°C下9000r/min冷凍離心20min，取出上清液；按10mL上清液加固體硫酸錢22.6g的比例將硫酸銨加入到所取上清液中，然后將硫酸銨溶液加入到所取上清液中，并用79-1磁力加熱攪拌器攪拌混勻后進(jìn)行鹽析，并于4°C下放置18h使其充分沉淀，即為40%的飽和溶液部分；
3)將所得40%的飽和溶液于4°C下9000r/min冷凍離心20min，取出上清液；按10mL上清液加固體硫酸銨12.0g的比例將硫酸銨加入到所取上清液中，然后將硫酸銨溶液加入到所取上清液中，并用79-1磁力加熱攪拌器攪拌混勻后進(jìn)行鹽析，并于4°C下放置18h使其充分沉淀，即為60%的飽和溶液部分；
4)將所得60%的飽和溶液于4°C下9000r/min冷凍離心20min，取出沉淀，將沉淀溶于lmol/L的NaCl溶液中，裝入透析袋中，用相同鹽濃度的溶液透析至外透析液無SO42檢出為止;
5)將透析袋中的溶液加入聚乙二醇濃縮后，上DEAE-SepharoseFast Flow柱(1.6cmX30cm),用含有0.05-0.5mol/L NaCUpH為7.8的PBS緩沖液為洗脫劑進(jìn)行梯度洗脫，在280nm的檢測波長下對(duì)出現(xiàn)的色譜峰進(jìn)行分管收集，以鴿子血檢測各峰的凝血活性，收集活性部分；
6)將所收集的活性部分濃縮后上SephadexG-100柱(2.6cmX60cm)進(jìn)行純化，流速為4mL/管、1min/管，以濃度為0.05mol/L、pH為8.0的PBS緩沖液作為洗脫液，在280nm的檢測波長下對(duì)出現(xiàn)的色譜峰進(jìn)行分管收集，以鴿子血檢測各峰的凝血活性，收集活性部分，經(jīng)冷凍干燥即得。
[0011]以“武香I號(hào)”香菇品種進(jìn)行試驗(yàn): 1.分別在兩個(gè)平板培養(yǎng)基中央接入一塊大小為0.5cm2的“武香I號(hào)”香菇菌塊(接種過程要全程保持不染菌)，放在于25°C恒溫培養(yǎng)箱培養(yǎng)，待菌絲布滿菌塊后，在其中一個(gè)培養(yǎng)基中滴加15 μ 1、濃度為5mg/mL的香菇扭結(jié)促進(jìn)劑作為實(shí)驗(yàn)組，另一個(gè)培養(yǎng)基滴加等量純凈水作為對(duì)照組，用透氣袋固定，繼續(xù)放在培養(yǎng)箱中倒置黑暗培養(yǎng)1d左右，然后將培養(yǎng)皿分別轉(zhuǎn)移到10-15°C條件下，自然光照，80%濕度繼續(xù)培養(yǎng)2d后觀察結(jié)果，其結(jié)果見圖1。
[0012]從圖1可見，與未滴加香菇扭結(jié)促進(jìn)劑的對(duì)照組相比，滴加香菇扭結(jié)促進(jìn)劑的實(shí)驗(yàn)組中菌絲更粗壯、濃密，說明該香菇扭結(jié)促進(jìn)劑可促進(jìn)菌絲扭結(jié)。
[0013]2.在平板培養(yǎng)基中央接入一塊大小為0.5cm2的“武香I號(hào)”香菇菌塊(接種過程要全程保持不染菌)，于25°C恒溫培養(yǎng)箱培養(yǎng)，待菌絲布滿菌塊后，將培養(yǎng)基分為四個(gè)區(qū)域，將不同濃度(15、10、5、0mg/mL)的香菇扭結(jié)促進(jìn)劑分別滴加到各區(qū)域，滴加劑量為15 μ 1，繼續(xù)放在培養(yǎng)箱中倒置黑暗培養(yǎng)10d，然后將培養(yǎng)皿轉(zhuǎn)移到10-15°C條件下，自然光照，80%濕度繼續(xù)培養(yǎng)20d后觀察結(jié)果，其結(jié)果見圖2。
[0014]從圖2可見，滴加濃度為5、10、15mg/mL香菇扭結(jié)促進(jìn)劑處理后的區(qū)域均有扭結(jié)現(xiàn)象出現(xiàn)，且隨著濃度增加，扭結(jié)現(xiàn)象越明顯，在15mg/mL濃度下的菌絲扭結(jié)現(xiàn)象最明顯；而香菇扭結(jié)促進(jìn)劑滴加濃度為15mg/mL的區(qū)域只有幼蕾形成?？梢酝茰y，隨香菇扭結(jié)促進(jìn)劑用量的增加可縮短出菇時(shí)間，從而縮短香菇的生長周期。
[0015]以上所述僅為本發(fā)明的較佳實(shí)施例，凡依本發(fā)明申請(qǐng)專利范圍所做的均等變化與修飾，皆應(yīng)屬本發(fā)明的涵蓋范圍。
【主權(quán)項(xiàng)】
1.一種香菇扭結(jié)促進(jìn)劑，其特征在于:所述扭結(jié)促進(jìn)劑是從雙孢蘑菇子實(shí)體中經(jīng)分離純化得到的； 其分離純化方法具體包括如下步驟: 1)將雙孢蘑菇子實(shí)體按質(zhì)量體積比1:5加入質(zhì)量濃度為0.9%的生理鹽水，4°C下浸泡18h，經(jīng)勻漿后再次于4°C下放置4h ; 2)將漿液過濾，所得濾液于4°C下9000r/min冷凍離心20min，取出上清液；按10mL上清液加固體硫酸銨22.6g的比例將硫酸銨加入到所取上清液中，攪拌混勻后進(jìn)行鹽析，并于4°C下放置18h使其充分沉淀，即為40%的飽和溶液部分； 3)將所得40%的飽和溶液于4°C下9000r/min冷凍離心20min，取出上清液；按10mL上清液溶液加固體硫酸銨12.0g的比例將硫酸銨溶液加入到所取上清液中，攪拌混勻后進(jìn)行鹽析，并于4°C下放置18h使其充分沉淀，即為60%的飽和溶液部分； 4)將所得60%的飽和溶液于4°C下9000r/min冷凍離心20min，取出沉淀，將沉淀溶于lmol/L的NaCl溶液中，裝入透析袋中，用相同鹽濃度的溶液透析至外透析液無SO42檢出為止; 5)將透析袋中的溶液加入聚乙二醇濃縮后，上DEAE-S^haroseFast Flow柱，用含有NaCl, pH為7.8的PBS緩沖液為洗脫劑進(jìn)行梯度洗脫，在280nm的檢測波長下對(duì)出現(xiàn)的色譜峰進(jìn)行分管收集，以鴿子血檢測各峰的凝血活性，收集活性部分； 6)將所收集的活性部分濃縮后上SephadexG-100柱進(jìn)行純化，流速為4mL/管、1min/管，以濃度為0.05mol/L、pH為8.0的PBS緩沖液作為洗脫液進(jìn)行洗脫，在280nm的檢測波長下對(duì)出現(xiàn)的色譜峰進(jìn)行分管收集，以鴿子血檢測各峰的凝血活性，收集活性部分，經(jīng)冷凍干燥即得。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述香菇扭結(jié)促進(jìn)劑，其特征在于:用于香菇菌絲扭結(jié)形成原基的初期。
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種香菇扭結(jié)促進(jìn)劑，其是將雙孢蘑菇子實(shí)體經(jīng)勻漿、分級(jí)沉淀、透析后進(jìn)一步分離、純化得到的，所得扭結(jié)促進(jìn)劑在香菇菌絲扭結(jié)形成原基的初期使用，可顯著促進(jìn)菌絲扭結(jié)，縮短菌絲扭結(jié)的時(shí)間，從而縮短香菇的出菇時(shí)間及香菇的生長周期，提高所栽培香菇的質(zhì)量，明顯提高香菇種植的經(jīng)濟(jì)效益，對(duì)促進(jìn)食用菌產(chǎn)業(yè)發(fā)展具有重要意義。
【IPC分類】A01G1/04, A01N65/00, A01P21/00
【公開號(hào)】CN105028489
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201510397414
【發(fā)明人】林勇, 肖冬來, 王宏雨, 張迪, 王澤生, 歐陽桐嬌, 廖劍華
【申請(qǐng)人】福建省農(nóng)業(yè)科學(xué)院食用菌研究所
【公開日】2015年11月11日
【申請(qǐng)日】2015年7月9日