一種草莓組織培養(yǎng)基及其配制方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及植物組織培養(yǎng)技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種組織培養(yǎng)基及其配制方法。
【背景技術(shù)】
[0002]MS培養(yǎng)基是目前植物組織培養(yǎng)中最為常用的培養(yǎng)基，從1962年發(fā)明該培養(yǎng)基以來(lái)，經(jīng)過(guò)多年的發(fā)展，該培養(yǎng)基已經(jīng)越來(lái)越廣泛的應(yīng)用于植物的組織培養(yǎng)中。MS培養(yǎng)基是Murashige和Skoog于1962年為煙草細(xì)胞培養(yǎng)設(shè)計(jì)的，其特點(diǎn)是無(wú)機(jī)鹽和離子濃度較高，是較穩(wěn)定的離子平衡溶液。大多數(shù)植物的試管苗繁殖大多采用MS培養(yǎng)基，因此目前在植物組織培養(yǎng)中，MS培養(yǎng)基的用量是非常大的。MS培養(yǎng)基有較高濃度的無(wú)機(jī)鹽，對(duì)保證組織生長(zhǎng)所需的礦質(zhì)營(yíng)養(yǎng)和加速愈傷組織的生長(zhǎng)十分有利，其中銨態(tài)氮的來(lái)源是硝酸銨，由于硝酸銨是工業(yè)上制造炸藥所需的原料，近年來(lái)，國(guó)家監(jiān)管此類物品越來(lái)越嚴(yán)格，實(shí)驗(yàn)室購(gòu)買硝酸銨的難度很大。因此，在組織培養(yǎng)過(guò)程中，硝酸銨的缺失是目前的一個(gè)重要問(wèn)題，能不能用其他物質(zhì)代替硝酸銨而且讓植物正常生長(zhǎng)是本發(fā)明的主要任務(wù)。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0003]發(fā)明目的:本發(fā)明的目的在于為了克服現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種無(wú)需硝酸銨的草莓組織培養(yǎng)基及其配制方法，使不同品種的草莓在該養(yǎng)基中都能夠正常生長(zhǎng)。
[0004]技術(shù)方案:本發(fā)明所述的一種草莓組織培養(yǎng)基，每升MS母液中包括(NH4)#04硫酸銨640 mg/L,CO (NH2)2尿素1000 mg/L，使用硫酸銨和尿素第一能夠提供草莓生長(zhǎng)所需要的氮元素，提供的量足夠保證草莓正常生長(zhǎng)，其次這兩種物質(zhì)不會(huì)帶入對(duì)草莓生長(zhǎng)有害的一些元素，對(duì)草莓生長(zhǎng)不產(chǎn)生副作用。
[0005]進(jìn)一步，還包括大量元素，每升MS母液中含有KNO3硝酸鉀1500 mg/L, MgSO 4.7Η20七水合硫酸鎂200 mg/L,KH2PO4磷酸二氫鉀170 mg/L，提供草莓組培苗生長(zhǎng)必須的鉀元素、鎂元素以及磷元素，配合使用能夠保證草莓組培苗吸收足夠的大量元素，生長(zhǎng)健壯。
[0006]進(jìn)一步，為了提供草莓組培苗生長(zhǎng)必須的微量元素，每升MS母液中含有KI碘化鉀
1.1 mg/L, MnSO4.4Η20 四水合硫酸錳 20 mg/L, ZnS04*7H20 七水合硫酸鋅 10 mg/L、H3BO3W酸 5 mg/Lο
[0007]進(jìn)一步，還包括鐵鹽，每升MS母液中含有Fe-EDDHA乙二胺鄰二羥基乙酸鐵10mg/L ο
[0008]進(jìn)一步，還包括鈣鹽，每升MS母液中含有CaCl2CH2O 二水合氯化鈣440 mg/L,組織培養(yǎng)時(shí)，草莓缺鈣會(huì)引起植株黃化，因此需要加入一定的鈣元素保證組培苗正常生長(zhǎng)。
[0009]進(jìn)一步，還包括有機(jī)物，每升MS母液中含有肌醇100 mg/L、煙酸I mg/L、維生素B10.5 mg/L、維生素 B6I mg/L、維生素 C2 mg/L。
[0010]上述草莓組織培養(yǎng)基的配制方法，分配置大量元素母液、微量元素母液、鐵鹽母液、鈣鹽母液、有機(jī)物母液，每種母液配制成濃縮液，冷藏備用，配置培養(yǎng)基時(shí)每升添加葡萄糖15克，植物凝膠2.5克。
[0011]有益效果:1、本發(fā)明配方不使用硝酸銨，使用目前容易購(gòu)買到的硫酸銨和尿素來(lái)替代，解決了硝酸銨購(gòu)買難的問(wèn)題；
2、由于使用了硫酸銨，因此硫酸根的濃度增加，因此將傳統(tǒng)MS培養(yǎng)基中的硫酸亞鐵和乙二胺四乙酸二鈉配制的鐵鹽換成Fe-EDDHA乙二胺鄰二羥基乙酸鐵，試驗(yàn)效果證明植物生長(zhǎng)更好，由于Fe-EDDHA乙二胺鄰二羥基乙酸鐵是一種螯合鐵，植物生長(zhǎng)中吸收鐵元素以螯合鐵更容易吸收，傳統(tǒng)培養(yǎng)基中使用硫酸亞鐵配制螯合鐵，這樣，硫酸根離子濃度過(guò)大，因此，使用Fe-EDDHA乙二胺鄰二羥基乙酸鐵更容易使植物良好吸收鐵；
3、去掉了MS培養(yǎng)基中的氯化鈷和硫酸銅，因?yàn)檫@兩個(gè)物質(zhì)用量及其少，配制過(guò)程中由于不好稱量，常常需要先配置這兩個(gè)物質(zhì)的濃縮液，在按照一定濃度添加到母液中，費(fèi)時(shí)費(fèi)力，實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)增加兩個(gè)物質(zhì)對(duì)植物生長(zhǎng)沒(méi)有影響，因此去掉，簡(jiǎn)化配制流程；
4、在有機(jī)元素中添加維生素C，利于草莓組織培養(yǎng)植株的生長(zhǎng)；維生素C是一種抗氧化劑，能幫助植物抵抗干旱、臭氧和紫外線，維生素C保護(hù)植物免受光合作用中有害副作用的侵害;
5、在配置培養(yǎng)基時(shí)不適用瓊脂粉和蔗糖，使用植物凝膠和葡萄糖，這樣植物能夠更好的吸收營(yíng)養(yǎng)元素，生長(zhǎng)更好。
【具體實(shí)施方式】
[0012]下面對(duì)本發(fā)明技術(shù)方案進(jìn)行詳細(xì)說(shuō)明，但是本發(fā)明的保護(hù)范圍不局限于所述實(shí)施例。
[0013]實(shí)施例:以配置一升的草莓組織培養(yǎng)基為例:
第一步，配置I升大量元素，大量元素配置成25倍的濃縮溶液，為母液一。
[0014]稱取:KN03硝酸鉀37.5g、(NH 4) 2S04硫酸銨 16g、CO (NH 2) 2 尿素 25g、MgSO4.7Η20 七水合硫酸鎂5g、KH2PO4磷酸二氫鉀4.25g，溶解于I升蒸餾水中。
[0015]第二步，配置200豪升微量元素，配置成1000倍的濃縮溶液，為母液二。
[0016]稱取:KI碘化鉀0.22g、MnS04*4H20四水合硫酸錳4g、ZnS04*7H20七水合硫酸鋅2g、H3BO3硼酸lg，溶解于200豪升蒸餾水中。
[0017]第三步，配置500豪升鐵鹽，配置成200倍的濃縮溶液，為母液三。
[0018]稱取:Fe-EDDHA乙二胺鄰二羥基乙酸鐵lg，溶解于500豪升蒸餾水中。
[0019]第四步，配置500豪升鈣鹽，配置成50倍的濃縮溶液，為母液四。
[0020]稱取:CaCl2*2H20 二水合氯化鈣llg，溶解于500豪升蒸餾水中。
[0021]第五步，配置500豪升有機(jī)溶液，配置成200倍的濃縮溶液，為母液五。
[0022]稱取:肌醇10g、煙酸0.lg、維生素B1 0.05g、維生素B6 0.lg、維生素C0.2g溶解于500豪升蒸餾水中。
[0023]母液配好后放4度冰箱保存?zhèn)溆谩?br>[0024]配置培養(yǎng)基時(shí)每一升培養(yǎng)基加母液一 50毫升，母液二 I毫升，母液三5毫升，母液四20毫升，母液五5毫升。具體配制方法為:將每種母液混勻后添加2.5克植物凝膠和15克葡萄糖混勻，定容至一升，分裝到培養(yǎng)基適用容器中備用。
[0025]由于植物凝膠和葡萄糖容易在水中溶解，因此配置培養(yǎng)基時(shí)不需要煮沸，只需要所有組分加到一起攪勻分裝即可，滅菌完成后會(huì)充分溶解，因此，配制培養(yǎng)基省時(shí)省力。
【主權(quán)項(xiàng)】
1.一種草莓組織培養(yǎng)基，其特征在于:每升MS母液中包括(NH4)2SO4硫酸銨640 mg/L、CO(NH2)2 尿素 1000 mg/L ο2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的草莓組織培養(yǎng)基，其特征在于:還包括大量元素，每升MS母液中含有KNO3硝酸鉀1500 mg/L, MgSO 4.7Η20七水合硫酸鎂200 mg/L, KH2PO4磷酸二氫鉀170 mg/Lο3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的草莓組織培養(yǎng)基，其特征在于:還包括微量元素，每升MS母液中含有KI碘化鉀1.1 mg/L, MnSO4.4Η20四水合硫酸錳20 mg/L, ZnSO4*7H20七水合硫酸鋅 10 mg/L、H3BO3硼酸 5 mg/L。4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的草莓組織培養(yǎng)基，其特征在于:還包括鐵鹽，每升MS母液中含有Fe-EDDHA乙二胺鄰二羥基乙酸鐵10 mg/L。5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的草莓組織培養(yǎng)基，其特征在于:還包括鈣鹽，每升MS母液中含有CaCl2CH2O 二水合氯化鈣440 mg/L。6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的草莓組織培養(yǎng)基，其特征在于:還包括有機(jī)物，每升MS母液中含有肌醇100 mg/L、煙酸I mg/L、維生素B10.5 mg/L、維生素B6I mg/L、維生素C2 mg/L。7.如權(quán)利要求1~6任意一項(xiàng)所述的草莓組織培養(yǎng)基的配制方法，其特征在于:分配置大量元素母液、微量元素母液、鐵鹽母液、鈣鹽母液、有機(jī)物母液，每種母液配制成濃縮液，冷藏備用，配置培養(yǎng)基時(shí)每升添加葡萄糖15克，植物凝膠2.5克。
【專利摘要】本發(fā)明公開(kāi)了一種草莓組織培養(yǎng)基，每升MS母液中包括(NH4)2SO4硫酸銨640？mg/L、CO(NH2)2？尿素1000？mg/L。本發(fā)明配方不使用硝酸銨，使用目前容易購(gòu)買到的硫酸銨和尿素來(lái)替代，解決了硝酸銨購(gòu)買難的問(wèn)題；由于使用了硫酸銨，因此硫酸根的濃度增加，因此將傳統(tǒng)MS培養(yǎng)基中的硫酸亞鐵和乙二胺四乙酸二鈉配制的鐵鹽換成Fe-EDDHA？乙二胺鄰二羥基乙酸鐵，試驗(yàn)效果證明植物生長(zhǎng)更好；去掉了MS培養(yǎng)基中的氯化鈷和硫酸銅，因?yàn)檫@兩個(gè)物質(zhì)用量及其少，配制過(guò)程中由于不好稱量，常常需要先配置這兩個(gè)物質(zhì)的濃縮液，在按照一定濃度添加到母液中，費(fèi)時(shí)費(fèi)力，實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)這兩個(gè)物質(zhì)對(duì)植物生長(zhǎng)沒(méi)有影響，因此去掉，簡(jiǎn)化配制流程。
【IPC分類】A01H4/00
【公開(kāi)號(hào)】CN105104208
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201510604258
【發(fā)明人】王媛花, 馮英娜, 史紅林, 王全智
【申請(qǐng)人】江蘇農(nóng)林職業(yè)技術(shù)學(xué)院
【公開(kāi)日】2015年12月2日
【申請(qǐng)日】2015年9月22日