一種非選擇性鑒定大豆抗大豆食心蟲(chóng)的室內(nèi)生物測(cè)定方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及一種大豆抗蟲(chóng)能力室內(nèi)鑒定方法，特別涉及一種非選擇性鑒定大豆抗 大豆食心蟲(chóng)的室內(nèi)生物測(cè)定方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 目前大豆抗食心蟲(chóng)室內(nèi)生物測(cè)定主要由東北農(nóng)業(yè)大學(xué)韓嵐嵐等于2011年設(shè)計(jì)的 圓盤(pán)分割法（李婷婷，韓嵐嵐，趙奎軍等."圓盤(pán)分割法在轉(zhuǎn)基因大豆抗蟲(chóng)鑒定上的應(yīng)用" 《作物雜志》2011，4:20-22)。該方法是在昆蟲(chóng)生長(zhǎng)適宜的溫濕度條件下，通過(guò)放置在圓形濾 紙中心的初孵幼蟲(chóng)對(duì)圓盤(pán)外周等距隨機(jī)放置豆莢的趨向和蛀食、死亡情況來(lái)判定抗蟲(chóng)性差 異。圓盤(pán)分割法鑒定大豆對(duì)大豆食心蟲(chóng)抗性能力是一種選擇性實(shí)驗(yàn)，但是大豆食心蟲(chóng)對(duì)寄 主的選擇是發(fā)生在成蟲(chóng)產(chǎn)卵階段，即成蟲(chóng)對(duì)寄主的豆莢進(jìn)行選擇產(chǎn)卵，初孵幼蟲(chóng)直接蛀入 所在豆莢，而不是幼蟲(chóng)對(duì)豆莢進(jìn)行選擇。該方法讓初孵幼蟲(chóng)自主隨機(jī)選擇豆莢，不能滿足每 個(gè)豆莢上都有初孵幼蟲(chóng)。所以豆莢與初孵幼蟲(chóng)接觸的幾率不一致，這樣就增大的鑒定結(jié)果 的誤差。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0003] 本發(fā)明的目的在于克服上述現(xiàn)有技術(shù)中存在的缺點(diǎn)與不足，提供一種非選擇性鑒 定大豆抗大豆食心蟲(chóng)的室內(nèi)生物測(cè)定方法。本方法為了減小大豆抗食心蟲(chóng)室內(nèi)生測(cè)鑒定結(jié) 果的誤差，采用每個(gè)豆莢逐一接種初孵幼蟲(chóng)的非選擇性實(shí)驗(yàn)，保證每個(gè)豆莢上都有初孵幼 蟲(chóng)，讓豆莢與初孵幼蟲(chóng)的接觸幾率保持一致，從而提高鑒定結(jié)果的準(zhǔn)確性。
[0004] 本發(fā)明的目的通過(guò)下述技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)：一種非選擇性鑒定大豆抗大豆食心蟲(chóng)的室 內(nèi)生物測(cè)定方法，包括以下步驟：
[0005] (1)供試?yán)ハx(chóng)準(zhǔn)備：將田間采集的大豆食心蟲(chóng)成蟲(chóng)配對(duì)后放入接有豆莢的成蟲(chóng)產(chǎn) 卵籠中，每個(gè)產(chǎn)卵籠放入40~50對(duì)配對(duì)大豆食心蟲(chóng)成蟲(chóng)，每天更換新鮮豆莢供成蟲(chóng)產(chǎn)卵， 將帶卵的豆莢放入恒溫培養(yǎng)箱中恒溫保濕孵育，待卵孵化每天檢查卵的發(fā)育進(jìn)度，等到卵 粒出現(xiàn)黑頭后，獲得帶黑頭的大豆食心蟲(chóng)卵粒豆莢；
[0006] (2)大豆材料的準(zhǔn)備：在田間采集生長(zhǎng)一致的豆莢，放入自封袋帶回，每個(gè)培養(yǎng)皿 放入10個(gè)豆莢，將豆莢緊密的排列在一起，豆莢的基部用保濕棉球包住，保濕待用，制備獲 得帶有大豆豆莢的培養(yǎng)皿；
[0007] (3)將步驟（1)獲得的帶黑頭的大豆食心蟲(chóng)卵粒的豆莢莢皮小心剪下，計(jì)數(shù)后用 刀片將帶黑頭的大豆食心蟲(chóng)卵粒的豆莢莢皮切成小片，每個(gè)小片有2粒帶黑頭的卵粒，用 鑷子將小片轉(zhuǎn)移到步驟（2)中帶有大豆豆莢的培養(yǎng)皿內(nèi)，對(duì)培養(yǎng)皿中每個(gè)豆莢接入一片有 2粒帶黑頭的卵粒的莢皮，共計(jì)20粒，放入養(yǎng)蟲(chóng)室中培養(yǎng)，待其孵化后自行蛀莢；
[0008] (4)養(yǎng)蟲(chóng)室培養(yǎng)6~8天后撥開(kāi)豆莢調(diào)查豆莢中存活的大豆食心蟲(chóng)活蟲(chóng)數(shù)，實(shí)現(xiàn)非 選擇性鑒定大豆抗蟲(chóng)性的室內(nèi)生物測(cè)定。
[0009] 步驟（1)中所述的恒溫保濕孵育的溫度為25°C，相對(duì)濕度為80%。
[0010] 步驟（3)中所述的計(jì)數(shù)優(yōu)選為在體視鏡下計(jì)數(shù)。
[0011] 步驟（3)中所述的培養(yǎng)室中培養(yǎng)的條件為溫度為25°C，相對(duì)濕度為80%。
[0012] 本發(fā)明相對(duì)于現(xiàn)有技術(shù)具有如下的優(yōu)點(diǎn)及效果：
[0013] 本發(fā)明的方法減小大豆抗食心蟲(chóng)室內(nèi)生測(cè)鑒定結(jié)果的誤差，采用每個(gè)豆莢逐一接 種初孵幼蟲(chóng)的非選擇性實(shí)驗(yàn)，保證每個(gè)豆莢上都有初孵幼蟲(chóng)，讓豆莢與初孵幼蟲(chóng)的接觸幾 率保持一致，從而提高鑒定結(jié)果的準(zhǔn)確性。
【具體實(shí)施方式】
[0014] 下面結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步詳細(xì)的描述，但本發(fā)明的實(shí)施方式不限于此。
[0015] 實(shí)施例1
[0016] 本發(fā)明提供了一種非選擇性鑒定大豆抗蟲(chóng)性的室內(nèi)生物測(cè)定方法，包括以下步 驟：
[0017] (1)供試?yán)ハx(chóng)準(zhǔn)備：將田間采集的大豆食心蟲(chóng)成蟲(chóng)配對(duì)后放入事先接入豆莢的成 蟲(chóng)產(chǎn)卵籠中，每個(gè)產(chǎn)卵籠放入40對(duì)配對(duì)大豆食心蟲(chóng)成蟲(chóng)，每天更換新鮮豆莢供成蟲(chóng)產(chǎn)卵， 將帶卵的豆莢放入恒溫培養(yǎng)箱中恒溫保濕孵育待卵孵化（溫度25°C，相對(duì)濕度80 % )，每天 檢查卵的發(fā)育進(jìn)度，等到卵粒出現(xiàn)黑頭后取出備用；
[0018] (2)大豆材料的準(zhǔn)備：在田間采集大豆材料生長(zhǎng)一致的豆莢，編號(hào)后放入自封袋 帶回實(shí)驗(yàn)室，1個(gè)壟區(qū)的豆莢放入1個(gè)玻璃培養(yǎng)皿中，每個(gè)培養(yǎng)皿放入10個(gè)豆莢，將豆莢緊 密的排列在一起，豆莢的基部用保濕棉球包住，保濕待用；
[0019] (3)試驗(yàn)處理：將步驟⑴獲得的帶黑頭的大豆食心蟲(chóng)卵粒的豆莢莢皮小心剪下， 計(jì)數(shù)后用刀片將帶黑頭的大豆食心蟲(chóng)卵粒的豆莢莢皮切成小片，每個(gè)小片有2粒帶黑頭的 卵粒，用鑷子將小片轉(zhuǎn)移到步驟（2)中帶有大豆豆莢的培養(yǎng)皿內(nèi)，對(duì)培養(yǎng)皿中每個(gè)豆莢接 入一片有2粒帶黑頭的卵粒的莢皮，共計(jì)20粒，放入養(yǎng)蟲(chóng)室中培養(yǎng)，待其孵化后自行蛀莢， 養(yǎng)蟲(chóng)室的培養(yǎng)條件為溫度為25°C，相對(duì)濕度為80% ;
[0020] (4)調(diào)查：養(yǎng)蟲(chóng)室培養(yǎng)6天后撥開(kāi)豆莢調(diào)查豆莢中存活的大豆食心蟲(chóng)活蟲(chóng)數(shù)，實(shí)現(xiàn) 非選擇性鑒定大豆抗蟲(chóng)性的室內(nèi)生物測(cè)定。
[0021] 實(shí)施例2
[0022] 本發(fā)明提供了一種非選擇性鑒定大豆抗蟲(chóng)性的室內(nèi)生物測(cè)定方法，包括以下步 驟：
[0023] (1)供試?yán)ハx(chóng)準(zhǔn)備：將田間采集的大豆食心蟲(chóng)成蟲(chóng)配對(duì)后放入事先接入豆莢的成 蟲(chóng)產(chǎn)卵籠中，每個(gè)產(chǎn)卵籠放入45對(duì)配對(duì)大豆食心蟲(chóng)成蟲(chóng)，每天更換新鮮豆莢供成蟲(chóng)產(chǎn)卵， 將帶卵的豆莢放入恒溫培養(yǎng)箱中恒溫保濕孵育待卵孵化（溫度25°C，相對(duì)濕度80 % )，每天 檢查卵的發(fā)育進(jìn)度，等到卵粒出現(xiàn)黑頭后取出備用；
[0024] (2)大豆材料的準(zhǔn)備：在田間采集大豆材料生長(zhǎng)一致的豆莢，編號(hào)后放入自封袋 帶回實(shí)驗(yàn)室，1個(gè)壟區(qū)的豆莢放入1個(gè)玻璃培養(yǎng)皿中，每個(gè)培養(yǎng)皿放入10個(gè)豆莢，將豆莢緊 密的排列在一起，豆莢的基部用保濕棉球包住，保濕待用；
[0025] (3)試驗(yàn)處理：將步驟⑴獲得的帶黑頭的大豆食心蟲(chóng)卵粒的豆莢莢皮小心剪下， 計(jì)數(shù)后用刀片將帶黑頭的大豆食心蟲(chóng)卵粒的豆莢莢皮切成小片，每個(gè)小片有2粒帶黑頭的 卵粒，用鑷子將小片轉(zhuǎn)移到步驟（2)中帶有大豆豆莢的培養(yǎng)皿內(nèi)，對(duì)培養(yǎng)皿中每個(gè)豆莢接 入一片有2粒帶黑頭的卵粒的莢皮，共計(jì)20粒，放入養(yǎng)蟲(chóng)室中培養(yǎng)，待其孵化后自行蛀莢， 養(yǎng)蟲(chóng)室的培養(yǎng)條件為溫度為25°C，相對(duì)濕度為80% ;
[0026] (4)調(diào)查：養(yǎng)蟲(chóng)室培養(yǎng)7天后撥開(kāi)豆莢調(diào)查豆莢中存活的大豆食心蟲(chóng)活蟲(chóng)數(shù)，實(shí)現(xiàn) 非選擇性鑒定大豆抗蟲(chóng)性的室內(nèi)生物測(cè)定。
[0027] 實(shí)施例3
[0028] 本發(fā)明提供了一種非選擇性鑒定大豆抗蟲(chóng)性的室內(nèi)生物測(cè)定方法，包括以下步 驟：
[0029] (1)供試?yán)ハx(chóng)準(zhǔn)備：將田間采集的大豆食心蟲(chóng)成蟲(chóng)配對(duì)后放入事先接入豆莢的成 蟲(chóng)產(chǎn)卵籠中，每個(gè)產(chǎn)卵籠放入50對(duì)配對(duì)大豆食心蟲(chóng)成蟲(chóng)，每天更換新鮮豆莢供成蟲(chóng)產(chǎn)卵， 將帶卵的豆莢放入恒溫培養(yǎng)箱中恒溫保濕孵育待卵孵化（溫度25°C，相對(duì)濕度80 % )，每天 檢查卵的發(fā)育進(jìn)度，等到卵粒出現(xiàn)黑頭后取出備用；
[0030] (2)大豆材料的準(zhǔn)備：在田間采集大豆材料生長(zhǎng)一致的豆莢，編號(hào)后放入自封袋 帶回實(shí)驗(yàn)室，1個(gè)壟區(qū)的豆莢放入1個(gè)玻璃培養(yǎng)皿中，每個(gè)培養(yǎng)皿放入10個(gè)豆莢，將豆莢緊 密的排列在一起，豆莢的基部用保濕棉球包住，保濕待用；
[0031] (3)試驗(yàn)處理：將步驟⑴獲得的帶黑頭的大豆食心蟲(chóng)卵粒的豆莢莢皮小心剪下， 計(jì)數(shù)后用刀片將帶黑頭的大豆食心蟲(chóng)卵粒的豆莢莢皮切成小片，每個(gè)小片有2粒帶黑頭的 卵粒，用鑷子將小片轉(zhuǎn)移到步驟（2)中帶有大豆豆莢的培養(yǎng)皿內(nèi)，對(duì)培養(yǎng)皿中每個(gè)豆莢接 入一片有2粒帶黑頭的卵粒的莢皮，共計(jì)20粒，放入養(yǎng)蟲(chóng)室中培養(yǎng)，待其孵化后自行蛀莢， 養(yǎng)蟲(chóng)室的培養(yǎng)條件為溫度為25°C，相對(duì)濕度為80% ;
[0032] (4)調(diào)查：養(yǎng)蟲(chóng)室培養(yǎng)8天后撥開(kāi)豆莢調(diào)查豆莢中存活的大豆食心蟲(chóng)活蟲(chóng)數(shù)，實(shí)現(xiàn) 非選擇性鑒定大豆抗蟲(chóng)性的室內(nèi)生物測(cè)定。
[0033] 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與分析：利用DPS軟件的單因素統(tǒng)計(jì)分析功能進(jìn)行Duncan多重比較。
[0034] 以AG系列大豆材料為例，通過(guò)本方法進(jìn)行室內(nèi)抗大豆食心蟲(chóng)鑒定，結(jié)果表明，有 8份材料的抗蟲(chóng)性與受體對(duì)照Willams82相比表現(xiàn)出顯著差異，結(jié)果如表1所示。
[0035] 表1 AG系列材料的抗蟲(chóng)性鑒定
[0036] CN 105123298 A 說(shuō)明書(shū) 4/4 頁(yè)
[0038] 上述實(shí)施例為本發(fā)明較佳的實(shí)施方式，但本發(fā)明的實(shí)施方式并不受上述實(shí)施例的 限制，其他的任何未背離本發(fā)明的精神實(shí)質(zhì)與原理下所作的改變、修飾、替代、組合、簡(jiǎn)化， 均應(yīng)為等效的置換方式，都包含在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種非選擇性鑒定大豆抗大豆食心蟲(chóng)的室內(nèi)生物測(cè)定方法，其特征在于：包括以下 步驟： (1) 供試?yán)ハx(chóng)準(zhǔn)備：將田間采集的大豆食心蟲(chóng)成蟲(chóng)配對(duì)后放入接有豆莢的成蟲(chóng)產(chǎn)卵籠 中，每個(gè)產(chǎn)卵籠放入40~50對(duì)配對(duì)大豆食心蟲(chóng)成蟲(chóng)，每天更換新鮮豆莢供成蟲(chóng)產(chǎn)卵，將帶 卵的豆莢放入恒溫培養(yǎng)箱中恒溫保濕孵育，待卵孵化每天檢查卵的發(fā)育進(jìn)度，等到卵粒出 現(xiàn)黑頭后，獲得帶黑頭的大豆食心蟲(chóng)卵粒豆莢； (2) 大豆材料的準(zhǔn)備：在田間采集生長(zhǎng)一致的豆莢，放入自封袋帶回，每個(gè)培養(yǎng)皿放入 10個(gè)豆莢，將豆莢緊密的排列在一起，豆莢的基部用保濕棉球包住，保濕待用，制備獲得帶 有大豆豆莢的培養(yǎng)皿； (3) 將步驟（1)獲得的帶黑頭的大豆食心蟲(chóng)卵粒的豆莢莢皮小心剪下，計(jì)數(shù)后用刀片將 帶黑頭的大豆食心蟲(chóng)卵粒的豆莢莢皮切成小片，每個(gè)小片有2粒帶黑頭的卵粒，用鑷子將 小片轉(zhuǎn)移到步驟（2)中帶有大豆豆莢的培養(yǎng)皿內(nèi)，對(duì)培養(yǎng)皿中每個(gè)豆莢接入一片有2粒帶 黑頭的卵粒的莢皮，共計(jì)20粒，放入養(yǎng)蟲(chóng)室中培養(yǎng)，待其孵化后自行蛀莢； (4) 養(yǎng)蟲(chóng)室培養(yǎng)6~8天后撥開(kāi)豆莢調(diào)查豆莢中存活的大豆食心蟲(chóng)活蟲(chóng)數(shù)，實(shí)現(xiàn)非選擇 性鑒定大豆抗蟲(chóng)性的室內(nèi)生物測(cè)定。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的非選擇性鑒定大豆抗蟲(chóng)性的室內(nèi)生物測(cè)定方法，其特征在 于：步驟（1)中所述的恒溫保濕孵育的溫度為25°C，相對(duì)濕度為80%。3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的非選擇性鑒定大豆抗蟲(chóng)性的室內(nèi)生物測(cè)定方法，其特征在 于：步驟（3)中所述的計(jì)數(shù)為在體視鏡下計(jì)數(shù)。4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的非選擇性鑒定大豆抗蟲(chóng)性的室內(nèi)生物測(cè)定方法，其特征在 于：步驟（3)中所述的培養(yǎng)室中培養(yǎng)的條件為溫度為25°C，相對(duì)濕度為80%。
【專利摘要】本發(fā)明公開(kāi)了一種非選擇性鑒定大豆抗大豆食心蟲(chóng)的室內(nèi)生物測(cè)定方法，屬于大豆抗蟲(chóng)能力室內(nèi)鑒定方法技術(shù)領(lǐng)域。所述的測(cè)定方法包括以下步驟：將配對(duì)大豆食心蟲(chóng)成蟲(chóng)接入豆莢，放入恒溫振蕩培養(yǎng)箱中恒溫保濕孵育獲得帶黑頭的大豆食心蟲(chóng)卵粒；將培養(yǎng)的帶黑頭的大豆食心蟲(chóng)卵粒的豆莢莢皮切成小片，每個(gè)小片有2粒帶黑頭的卵粒，采用每個(gè)豆莢逐一接種初孵幼蟲(chóng)的非選擇性實(shí)驗(yàn)，養(yǎng)蟲(chóng)室培養(yǎng)第6～8天調(diào)查豆莢中存活的大豆食心蟲(chóng)活蟲(chóng)數(shù)。本發(fā)明的方法減小大豆抗食心蟲(chóng)室內(nèi)生測(cè)鑒定結(jié)果的誤差，采用每個(gè)豆莢逐一接種初孵幼蟲(chóng)的非選擇性實(shí)驗(yàn)，保證每個(gè)豆莢上都有初孵幼蟲(chóng)，讓豆莢與初孵幼蟲(chóng)的接觸幾率保持一致，從而提高鑒定結(jié)果的準(zhǔn)確性。
【IPC分類】A01G7/00, A01K67/033
【公開(kāi)號(hào)】CN105123298
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201510396945
【發(fā)明人】汪洋洲, 郭東全, 杜茜, 李啟云, 錢(qián)雪艷, 張?jiān)圃?
【申請(qǐng)人】吉林省農(nóng)業(yè)科學(xué)院
【公開(kāi)日】2015年12月9日
【申請(qǐng)日】2015年7月8日