一種脫毒馬鈴薯試管苗的繼代培養(yǎng)方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于組織培養(yǎng)領(lǐng)域，具體設(shè)及一種脫毒馬鈴馨試管苗的繼代培養(yǎng)方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 中國是世界第一大人口國，糧食問題非常突出，馬鈴馨（SonalmuutbeosrunlL.) 是僅次于水稻、小麥、玉米的第四大糧食作物，也是糧、菜、飼料和工業(yè)原料兼用的經(jīng)濟(jì)作 物，由于它高產(chǎn)穩(wěn)產(chǎn)、適應(yīng)性廣、營養(yǎng)成分全等特點(diǎn)，且自身具有很高的營養(yǎng)價(jià)值和藥用價(jià) 值被廣泛栽培。
[0003] 馬鈴馨是冷涼作物，適合生長的區(qū)域比較廣，在馬鈴馨栽培過程中，容易出現(xiàn)葉片 皺縮卷曲，葉色濃淡不均，莖桿矮小細(xì)弱，塊莖變形龜裂，產(chǎn)量逐年下降等"退化"現(xiàn)象，采用 現(xiàn)代生物技術(shù)將種馨內(nèi)的病毒去掉，恢復(fù)馬鈴馨品種本身的生理功能和生產(chǎn)特性，才能防 止馬鈴馨的"退化"。
[0004] 在進(jìn)行馬鈴馨脫毒培養(yǎng)過程中，尤其是在夏季，因?yàn)楦邷馗邼竦沫h(huán)境極易感病死 亡，同時(shí)，溫度過高，植株的蒸騰作用加強(qiáng)，易失水造成死亡，從而影響脫毒苗的培養(yǎng)效率， 一般脫毒苗在培養(yǎng)室進(jìn)行培養(yǎng)，為了滿足脫毒苗對光照的需求，往往會對脫毒苗進(jìn)行補(bǔ)光， 即在培養(yǎng)室增加日光燈進(jìn)行補(bǔ)光，馬鈴馨適宜生長的溫度在23-25°C，超過28°C則會影響 繼代培養(yǎng)苗的生長，通過補(bǔ)充日光燈的照射，尤其是在夏季使得培養(yǎng)室的溫度達(dá)到3(TC左 右，有時(shí)甚至可達(dá)到32°CW上，而單單通過空調(diào)等外部降溫設(shè)備都無法將溫度降到脫毒苗 生長適宜的溫度范圍內(nèi)，對脫毒苗的生長受到抑制，進(jìn)而影響栽培苗的質(zhì)量。 陽0化]綜上所述，如何控制脫毒苗在培養(yǎng)室的環(huán)境溫度，降低生產(chǎn)投入，減少脫毒苗的培 養(yǎng)時(shí)間，成為本行業(yè)迫待解決而未解決的技術(shù)問題。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 本發(fā)明的目的是為了降低夏季在培養(yǎng)脫毒馬鈴馨試管苗的過程中，由于提供光照 而造成的培養(yǎng)室溫度過高，導(dǎo)致脫毒馬鈴馨繼代培養(yǎng)苗的生長受到抑制。
[0007] 本發(fā)明的技術(shù)方案是運(yùn)樣實(shí)現(xiàn)的：一種脫毒馬鈴馨試管苗的繼代培養(yǎng)方法，包 括品種選擇、培養(yǎng)基的配制、滅菌、接種、繼代培養(yǎng)過程，所述脫毒馬鈴馨試管苗在夏季的 繼代培養(yǎng)過程中，通過調(diào)節(jié)日間和夜間的日光燈的開關(guān)時(shí)間，控制培養(yǎng)室室內(nèi)溫度平衡， 日間培養(yǎng)室的溫度保持在23-25°C，夜間培養(yǎng)室的溫度保持在16-17°c;所述日光燈每天 18:00-19:00開啟，次日早晨8:00-9:00關(guān)閉。
[0008] 優(yōu)選的，所述脫毒馬鈴馨試管苗在繼代培養(yǎng)過程中的光照時(shí)間為14-15個(gè)小時(shí)/ 天。
[0009] 更優(yōu)選的，所述脫毒馬鈴馨試管苗的繼代培養(yǎng)周期為24-28天。
[0010] 優(yōu)選的，所述脫毒馬鈴馨試管苗的繼代培養(yǎng)過程中的光照強(qiáng)度為3000-50(K)Lx。
[0011] 優(yōu)選的，所述脫毒馬鈴馨試管苗的培養(yǎng)基為MS培養(yǎng)基。 陽〇1引更優(yōu)選的，所述MS培養(yǎng)基中添加0. 2mg/L的NAA。
[0013] 相對于現(xiàn)有技術(shù)，本發(fā)明具有如下優(yōu)點(diǎn)，繼代培養(yǎng)方法可W降低由于為培養(yǎng)苗提 供光照造成培養(yǎng)室溫度過高，導(dǎo)致繼代培養(yǎng)苗的生長受到抑制，造成燒苗、死苗的現(xiàn)象，通 過培養(yǎng)室溫度變化調(diào)整日光燈的開關(guān)時(shí)間，可極大節(jié)省電力能源的消耗，且培養(yǎng)方法比傳 統(tǒng)方法可節(jié)約6-21天的培養(yǎng)時(shí)間。
【具體實(shí)施方式】
[0014] 下面結(jié)合具體實(shí)例，進(jìn)一步闡述本發(fā)明。運(yùn)些實(shí)例僅用于說明本發(fā)明而不用于限 制本發(fā)明的范圍。 陽〇1引實(shí)施例一
[0016] 選取=組繼代培養(yǎng)苗作為試驗(yàn)，每組選取200個(gè)培養(yǎng)瓶。
[0017] 品種選擇：選擇馬鈴馨品種天興一號為試驗(yàn)品種，天興一號為天津市天興佳業(yè)科 技有限公司自主研發(fā)品種。
[0018] 1)MS培養(yǎng)基的配制：根據(jù)表1的母液配方表進(jìn)行MS培養(yǎng)基母液的配制。
[0019] 大量元素母液、微量元素母液、有機(jī)成分母液的配制方法是：每種母液中的幾種成 分稱量完畢后，分別用少量的純凈水徹底溶解，最后定容到1L。
[0020] 鐵鹽母液的配制方法是：將稱好的化S〇4 ? 7&0和化2-邸TA? 2&0分別放到450血 純凈水中，邊加熱邊不斷攬拌使它們?nèi)芙?，最后定容到比，保存在棟色玻璃瓶中?陽021] 分別量取5mL的微量元素母液、有機(jī)成分母液、鐵鹽母液，50mL的大量元素母液， 并加入5-7g的瓊脂和30g的綿白糖，加入純凈水定容至比，將配制好的MS培養(yǎng)基放在電爐 上加熱至沸騰，邊加熱邊用玻璃棒攬拌，直到液體呈半透明狀，加入0. 2mg/L的NAA-(糞乙 酸），用0.Imol/L的K0H將培養(yǎng)液的抑值調(diào)節(jié)至6. 0-7. 0,稍微冷卻后分裝至培養(yǎng)瓶中，每 個(gè)培養(yǎng)瓶中分裝MS培養(yǎng)基50ml。
[0022] 2)滅菌：將上述培養(yǎng)瓶放入滅菌裝置中進(jìn)行125°C高壓滅菌20分鐘。
[0023] 3)接種：滅菌后讓培養(yǎng)基自然冷卻凝固后，然后將滅菌后的培養(yǎng)基移至接種間在 超凈工作臺上進(jìn)行接種。
[0024] 4)繼代培養(yǎng)：將馬鈴馨的脫毒試管苗用剪刀剪取大小一致的1葉1芽的莖段，接 種到裝有繼代增殖培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中，然后放置于培養(yǎng)室的培養(yǎng)架上進(jìn)行繼代培養(yǎng)，在夏 季培養(yǎng)室的日光燈在每天的18:00-19:00開啟，次日早晨8:00-9:00關(guān)閉，日間利用自然光 照進(jìn)行培養(yǎng)，控制室內(nèi)溫度恒定在23-25°C，光照強(qiáng)度為3500LX，繼代培養(yǎng)時(shí)間為24天，通 過此方法繼代培養(yǎng)后試管苗的株高為6. 29cm，根長為4. 98cm，根條數(shù)為4. 77條，增值倍數(shù) 分別在繼代培養(yǎng)第7天、第14天、第24天分別為2. 1、3. 4、6. 6倍。 陽0巧]表1 :MS培養(yǎng)基母液配方表[0026]
W27] 實(shí)施例二
[0028]選取=組繼代培養(yǎng)苗作為試驗(yàn)，每組選取200個(gè)培養(yǎng)瓶。
[0029] 品種選擇：選擇馬鈴馨品種津引馨八號作為試驗(yàn)品種，津引馨八號的品種來源是 中國農(nóng)科院蔬菜花弁所引進(jìn)經(jīng)定向培育而成，選（弓I)育單位（人）是天津市農(nóng)科院蔬菜 所。
[0030]MS培養(yǎng)基的配制、培養(yǎng)基的滅菌、接種、繼代培養(yǎng)步驟同實(shí)施例一，繼代培養(yǎng)時(shí)間 為25天，通過此方法繼代培養(yǎng)后試管苗的株高為6. 13cm，根長為5. 23cm，根條數(shù)為4. 9條， 增值倍數(shù)分別在繼代培養(yǎng)第7天、第14天、第24天分別為2. 0、3. 5、6. 2倍。 陽0川 對比例
[0032]選取=組繼代培養(yǎng)苗作為試驗(yàn)，每組選取200個(gè)培養(yǎng)瓶。
[003引對比例的品種選擇、MS培養(yǎng)基的配制、滅菌、接種步驟同實(shí)施例一。
[0034] 繼代培養(yǎng)：將接種好的芽外植體的培養(yǎng)瓶放置于培養(yǎng)室的培養(yǎng)架上進(jìn)行培養(yǎng)，在 夏季日光燈設(shè)置在日間8:00-18:00開啟，夜間18:00-次日早晨8:00關(guān)閉，光照強(qiáng)度為 40(K)Lx，繼代培養(yǎng)時(shí)間為30天，通過對比例繼代培養(yǎng)后試管苗的株高為5. 23cm，根長為 3. 28cm，根條數(shù)為3. 3條，增值倍數(shù)分別在繼代培養(yǎng)第7天、第14天、第24天、第30分別為 1.2、1.8、3. 4、5. 9 倍。
[0035] 表1實(shí)施例與對比例的試驗(yàn)效果對比表
[0036]
[0037] 由表1可W看出，溫度對增殖芽的增殖倍數(shù)和試管苗的高度均有較大的影響，實(shí) 施例一中利用日光燈的開關(guān)節(jié)點(diǎn)將溫度控制在23-25C，適宜試管苗的生長，經(jīng)過實(shí)施例一 或二處理后的培養(yǎng)苗的增殖倍數(shù)高，株高較對比例高，繼代培養(yǎng)的增值倍數(shù)也比較高，比對 比例培養(yǎng)周期30-45天相比縮短了 6-21天的培養(yǎng)時(shí)間，大大縮短了生產(chǎn)周期，在單位時(shí)間 內(nèi)增加增殖培養(yǎng)的轉(zhuǎn)接次數(shù)，從而極大提高了生產(chǎn)效率，此外利用自然室溫進(jìn)行脫毒馬鈴 馨繼代培養(yǎng)苗的工廠化生產(chǎn)，可極大節(jié)省電力能源，降低生產(chǎn)成本。
[0038] W上所述僅為本發(fā)明的較佳實(shí)施例而已，并不用W限制本發(fā)明，凡在本發(fā)明的精 神和原則之內(nèi)，所作的任何修改、等同替換、改進(jìn)等，均應(yīng)包含在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種脫毒馬鈴薯試管苗的繼代培養(yǎng)方法，包括品種選擇、培養(yǎng)基的配制、滅菌、接 種、繼代培養(yǎng)過程，其特征在于：所述脫毒馬鈴薯試管苗在夏季的繼代培養(yǎng)過程中，通過調(diào) 節(jié)日間和夜間的日光燈的開關(guān)時(shí)間，控制培養(yǎng)室室內(nèi)溫度平衡，日間培養(yǎng)室的溫度保持在 23-25°C，夜間培養(yǎng)室的溫度保持在16-17°C ;其中所述日光燈每天18:00-19: OO開啟，次日 早晨7:00-8:00關(guān)閉。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種脫毒馬鈴薯試管苗的繼代培養(yǎng)方法，其特征在于：所述 脫毒馬鈴薯試管苗在繼代培養(yǎng)過程中的光照時(shí)間為14-15個(gè)小時(shí)/天。3. 根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的一種脫毒馬鈴薯試管苗的繼代培養(yǎng)方法，其特征在于： 所述脫毒馬鈴薯試管苗的繼代培養(yǎng)周期為24-28天。4. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的一種脫毒馬鈴薯試管苗的繼代培養(yǎng)方法，其特征在于：所述 脫毒馬鈴薯試管苗的繼代培養(yǎng)過程中的光照強(qiáng)度為3000-5000LX。5. 根據(jù)權(quán)利要求4所述的一種脫毒馬鈴薯試管苗的繼代培養(yǎng)方法，其特征在于：所述 脫毒馬鈴薯試管苗的培養(yǎng)基為MS培養(yǎng)基。6. 根據(jù)權(quán)利要求5所述的一種脫毒馬鈴薯試管苗的繼代培養(yǎng)方法，其特征在于：所述 MS培養(yǎng)基中添加0. 2mg/L的NAA。
【專利摘要】本發(fā)明提供了一種脫毒馬鈴薯試管苗的繼代培養(yǎng)方法，包括品種選擇、培養(yǎng)基的配制、滅菌、接種、繼代培養(yǎng)過程，所述脫毒馬鈴薯試管苗繼代培養(yǎng)過程中，夏季通過調(diào)節(jié)日間和夜間的日光燈的開關(guān)時(shí)間，控制培養(yǎng)室室內(nèi)溫度平衡，日間培養(yǎng)室的溫度保持在23-25℃，夜間培養(yǎng)室的溫度保持在16-17℃，所述日光燈每天18:00-19:00開啟，次日早晨7:00-8:00關(guān)閉。本發(fā)明的有益效果是：降低了由于為培養(yǎng)苗提供光照造成培養(yǎng)室溫度過高，導(dǎo)致繼代培養(yǎng)苗的生長受到抑制，造成燒苗、死苗的現(xiàn)象，可節(jié)約電力能源的消耗，比傳統(tǒng)培養(yǎng)方法可節(jié)約6-21天的培養(yǎng)時(shí)間。
【IPC分類】A01H4/00
【公開號】CN105145367
【申請?zhí)枴緾N201510627091
【發(fā)明人】胡小蘭, 劉剛
【申請人】天津市天興佳業(yè)科技有限公司
【公開日】2015年12月16日
【申請日】2015年9月28日