一種早花忍冬的離體快繁方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于植物組織培養(yǎng)領(lǐng)域，具體設(shè)及一種早花忍冬的離體快繁方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 早花忍冬化onicera praeflorens Batalin)是忍冬科（Caprifoliaceae)忍冬屬 落葉灌木。主要分布于我國東北Ξ省的東南部，俄羅斯(遠東地區(qū)）、朝鮮、日本也有分布。早 花忍冬四月中下旬花先于葉開放，成對生于總花梗上，淡紫色，在早春時節(jié)突顯淡雅別致的 韻味。該樹種枝葉茂盛，開花早，果實成熟早，綠葉襯托著紅果，甚是美觀。能彌補東北地區(qū) 早春時節(jié)的蕭條景象，延長城市的綠化時間，豐富早春時節(jié)綠化景觀，是一種具有開發(fā)價值 的優(yōu)良綠化樹種。
[0003] 忍冬屬植物具有清熱解毒、保肝利膽、抗氧化、提高免疫力等功效。其花蕾和果實 中還含有人體必需的微量元素、氨基酸和其它一些營養(yǎng)成分，具有營養(yǎng)保健價值。今后有待 進一步分析早花忍冬的化學成分及藥理藥效作用，可W考慮作為金銀花的代用資源或開發(fā) 為新的藥用資源，滿足醫(yī)療需求。早花忍冬葉片表面密被絨毛，具有很強的滯塵能力，同時 經(jīng)試驗得出早花忍冬還具有很強的殺菌能力，適宜種植在廠礦、醫(yī)院、街道等場所，能起到 較好的凈化效果。目前，早花忍冬主要采用桿插繁殖，而種子繁殖比較困難，野生資源數(shù)量 少不能滿足實際需要，因此開展其組織培養(yǎng)技術(shù)的研究顯得尤為迫切。
[0004] 早花忍冬具有很高的生態(tài)效益和經(jīng)濟價值，但目前現(xiàn)存野生資源數(shù)量少，因此培 育大量優(yōu)質(zhì)苗木勢在必行。目前早花忍冬主要靠桿插的方法繁殖，但受插穗來源和季節(jié)限 審IJ，生長速度慢。因此，有必要建立一種早花忍冬的離體快繁方法，為其良種快速繁育提供 技術(shù)支撐和保障，從實踐上為園林綠化快速培育苗木解決技術(shù)上的難題。

【發(fā)明內(nèi)容】

[000引本發(fā)明的目的在于提供一種早花忍冬離體快繁方法，通過外植體選擇及消毒、啟 動誘導培養(yǎng)、增殖培養(yǎng)、生根誘導培養(yǎng)、煉苗移栽等過程實現(xiàn)早花忍冬的離體快繁，從而實 現(xiàn)了本發(fā)明的目的。
[0006]本發(fā)明提供一種早花忍冬離體快繁技術(shù)，包括W下步驟： (1) 外植體的消毒及初代培養(yǎng):選擇生長健壯、無病蟲害的當年萌發(fā)的幼嫩枝條為外植 體，先用流水沖洗化，然后加入洗潔精浸泡lOmin，再用2.0%化化0處理20min，無菌水沖洗3 次。將嫩枝修剪成1cm左右?guī)а壳o段接種于啟動誘導培養(yǎng)基上，置于每天光照10~12h，光照 強度約為20001X，培養(yǎng)溫度為23~25°C條件下培養(yǎng)，直至誘導蔽芽萌發(fā)生長； (2) 繼代增殖培養(yǎng):將蔽芽萌發(fā)生長的芽苗轉(zhuǎn)入增殖培養(yǎng)基上進行繼代增殖培養(yǎng)，置于 每天光照12小時，光照強度為20001X，培養(yǎng)溫度為23~25°C條件下培養(yǎng)，直至蔽芽萌發(fā)； (3) 生根誘導培養(yǎng):將高度約為3cm的生長健壯的無根苗接種到生根培養(yǎng)基上進行生根 誘導，置于每天光照12小時，光照強度為2000~25001X，培養(yǎng)溫度為23~25°C條件下培養(yǎng) 至生根； (4)煉苗移栽：早花忍冬在生根培養(yǎng)基中培養(yǎng)30~35d后，挑選生長健壯、根系發(fā)達的 組培苗，先打開封口膜置于自然光照下煉苗3~5d,然后用清水洗凈根部殘留的培養(yǎng)基， 移栽到已消毒的含有等量珍珠巖和賠石的基質(zhì)中。
[0007]上述步驟（1)所述的啟動培養(yǎng)基為MS + 1 .Omg/L 6-BA(6 -節(jié)氨基腺嚷嶺）+ 0.05mg/L NAA(糞乙酸)+30g/L薦糖Wg/L瓊脂粉或MS+0.5mg/L 6-BA +30g/L薦糖巧g/L瓊 脂粉，pH值為5.8。培養(yǎng)30d，蔽芽萌發(fā)并伸長生長至3.5cm左右。
[000引上述步驟（2)所述的增殖培養(yǎng)基為MS+2.0mg/L 6-BA+0.05~O.lmg/L NAA+30g/L 薦糖Wg/瓊脂粉，pH值為5.8，增殖系數(shù)平均為6.5，繼代周期為40d。
[0009] 上述步驟(3)所述的生根培養(yǎng)基為l/2MS+0.3mg/L IBA+0.3mg/L NAA+15g/L薦糖+ 7g/L瓊脂粉，pH值為5.8。生根培養(yǎng)40d后，平均生根數(shù)量為5，根長約3cm，生根率達100%。
[0010] 上述步驟(4)移栽前將基質(zhì)用0.3%高儘酸鐘溶液淋透消毒，然后再用清水沖淋3~ 5遍。移栽前期覆蓋塑料薄膜保濕并用遮蔭網(wǎng)適當遮陰，每天噴霧2次，每隔5天噴施800倍多 菌靈殺菌溶液，移栽后期逐漸降低濕度，增加光照。移栽15d左右長出新根，移栽成活率達 85% W上。保證溫濕度平衡和光照需求是移栽成功的關(guān)鍵。
[0011] 本發(fā)明的有益效果：1.本發(fā)明為早花忍冬優(yōu)質(zhì)種苗的快速繁殖提供一條有效途 徑，彌補了種子繁殖難的問題。
[0012] 本發(fā)明采用植物組織培養(yǎng)技術(shù)，培養(yǎng)條件可控，重復性強，可周年生產(chǎn)。本發(fā)明通 過誘導蔽芽萌發(fā)的途徑，既保持了母株的優(yōu)良遺傳特性又可在短時間內(nèi)繁育大量苗木。本 發(fā)明具有增殖系數(shù)高、生根時間短、根系發(fā)達、移栽成活率高、生長周期短等特點，大大提高 了早花忍冬的育苗效率，利于工廠化生產(chǎn)。
【具體實施方式】
[0013] 下面通過實施例對本發(fā)明進行具體描述，有必要在此指出的是W下實施例只是用 于對本發(fā)明進行進一步的說明，不能理解為對本發(fā)明保護范圍的限制。
[0014] 實施例1 1.無菌培養(yǎng)體系的建立 5月初剪取早花忍冬當年萌發(fā)的嫩枝，先用流水沖洗化，然后修剪掉葉片，再加入洗潔 精浸泡10 min,用流水沖洗干凈。最后置超凈工作臺上分別采用W下巧巾處理篩選適宜的滅 菌方法。
[001引第1種為0.1 %升隸浸泡5min，無菌水沖洗6次； 第巧巾為0.1 %升隸浸泡7min，無菌水沖洗6次； 第巧巾為2.0 %次氯酸鋼浸泡20min，無菌水沖洗3次。
[0016]將長約1cm帶芽的莖段接種于MS空白培養(yǎng)基，每種處理接種60瓶，3次重復。培養(yǎng) 30d統(tǒng)計污染率和成活率。污染率(％)=污染的外植體數(shù)/接種的外植體總數(shù)X 100%;成活率 (%)=鮮綠的無菌外植體數(shù)/接種的外植體總數(shù)X 100%。
[0017] 表1不同處理的滅菌效果

2.初代培養(yǎng) WMS培養(yǎng)基為基本培養(yǎng)基，剪取約1cm帶芽的幼嫩莖段接種到W下4種不同培養(yǎng)基，每 種培養(yǎng)基均添加7g/L瓊脂粉，30g/L薦糖，pH值均為5.8。
[0018] 1. MS+0.5mg/L 6-BA 2. MS+l.Omg/L 6-BA 3. MS+l.Omg/L 6-BA+O.05mg/L NAA 4. MS+l.Omg/L 6-BA+O.lmg/L NAA 培養(yǎng)30天后觀察，早花忍冬啟動培養(yǎng)對生長素濃度的要求比較低，只添加細胞分裂素 6-BA就可W誘導蔽芽萌發(fā)生長，細胞分裂素和生長素配合使用誘導分化效果更好，但隨生 長素濃度升高，蔽芽萌發(fā)時間長，生長慢。生長素濃度在〇.〇5mg/L時生長迅速，分化率達 93.3%;當生長素濃度達到O.lmg/L時蔽芽生長緩慢且莖基部形成致密的黃綠色愈傷組織。
[0019] 3.增殖繼代培養(yǎng) 將啟動培養(yǎng)獲得的無菌苗轉(zhuǎn)接到W下巧巾增殖培養(yǎng)基。每種培養(yǎng)基均添加7g/L瓊脂， 30邑/1薦糖，口巧直均為5.8。
[0020] 1. MS+2.0mg/L 6-BA+0.05mg/L NAA 2. MS巧.Omg/L 6-BA+O.Img/L NAA 3. MS+3.0mg/L 6-BA+O.05mg/L NAA 培養(yǎng)40 d后得出：當6-BA濃度為2.0 mg/L時，早花忍冬的蔽芽分化增殖快，但隨NAA濃 度升高蔽芽分化率降低。當6-BA濃度為3.0 mg/L時，外植體基本不分化，甚至干枯而死。NAA 濃度達到0.1 mg/L時，外植體基部即形成致密的綠色的愈傷組織。
[0021 ] 4.生根培養(yǎng) 選擇增殖培養(yǎng)中生長比較健壯的無菌苗，剪取2~3cm無菌苗接種到W下4種培養(yǎng)基中， 每種培養(yǎng)基均添加7g/L瓊脂，15g/L薦糖，pH值均為5.8。
[0022] l.l/2MS+0.5mg/L IBA 2.1/2MS+0.5mg/L NAA 3.1/2MS+0.3mg/L NAA+0.3mg/L IBA 4.1/2MS+0.5mg/L NAA+0.5mg/L IBA 培養(yǎng)40天，觀察并統(tǒng)計不同處理的生根率、生根數(shù)量及長度。
[0023] 植物生長素對早花忍冬生根的影響
煉苗與移栽 挑選生長健壯、根系發(fā)達的組培苗，打開封口膜，先在室內(nèi)散射光條件下培養(yǎng)3 d，然 后用綴子將試管苗從培養(yǎng)瓶中取出，洗凈根部殘留的培養(yǎng)基，移栽到含有等量珍珠巖和 賠石的基質(zhì)中。移栽前將基質(zhì)用0.3%高儘酸鐘溶液淋透消毒，然后用清水沖淋3~5遍。
[0024]移栽后7~lOd覆蓋塑料薄膜保濕并用遮蔭網(wǎng)適當遮陰，每天噴霧2次，隨后逐漸降 低濕度，增加光照。15d左右長出新根，移栽成活率達85 % W上。
【主權(quán)項】
1. 一種早花忍冬的離體快繁方法，其特征在于包括以下步驟： (1) 外植體的消毒及初代培養(yǎng):選擇生長健壯的無病蟲害的當年萌發(fā)的幼嫩枝條為外 植體，先用流水沖洗lh，然后加入洗潔精浸泡10min，再用2.0%NaCLO處理20min，無菌水 沖洗3次；將嫩枝修剪成lcm左右?guī)а壳o段接種于啟動誘導培養(yǎng)基上，置于每天光照10~ 12h，光照強度約為20001X，培養(yǎng)溫度為23~25°C條件下培養(yǎng)，直至誘導腋芽生長； (2) 繼代增殖培養(yǎng):將腋芽萌發(fā)生長的芽苗轉(zhuǎn)入增殖培養(yǎng)基上進行繼代增殖培養(yǎng)，置于 每天光照12小時，光照強度為20001x，培養(yǎng)溫度為23~25°C條件下培養(yǎng)，直至腋芽萌發(fā)，繼 代周期為40d; (3) 生根誘導培養(yǎng):將高度約為3cm的生長健壯的無根苗接種到生根培養(yǎng)基上進行生根 誘導，置于每天光照12小時，光照強度為2000~25001x，培養(yǎng)溫度為23~25°C條件下培養(yǎng) 至生根； (4)煉苗移栽：早花忍冬在生根培養(yǎng)基中培養(yǎng)30~35d后，挑選生長健壯、根系發(fā)達的 組培苗，先打開封口膜置于自然光照下煉苗3~5d，然后用清水洗凈根部殘留的培養(yǎng)基， 移栽到已消毒的含有等量珍珠巖和蛭石的基質(zhì)中。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種早花忍冬的離體快繁方法，其特征在于步驟（1)所述的初 代培養(yǎng)基為:MS+1 · Omg/L 6-BA+0 · 05mg/L NAA+30g/L蔗糖+7g/L瓊脂粉或MS+0 · 5mg/L6-BA +30g/L蔗糖+7g/L瓊脂粉，pH值為5.8。3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種早花忍冬的離體快繁方法，其特征在于步驟(2)所述的增 殖培養(yǎng)基為13+2.011^/16-84+0.05~0.111^/1嫩4++3(^/1蔗糖+78/1瓊脂粉，？!1值為5.8。4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種早花忍冬的離體快繁方法，其特征在于步驟(3)所述的生 根培養(yǎng)基為l/2MS+0.3mg/L IBA+0.3mg/L NAA +15g/L蔗糖+7g/L瓊脂粉，pH值為5.8。
【專利摘要】本發(fā)明屬于植物組織培養(yǎng)領(lǐng)域，提供了一種早花忍冬的離體快繁方法。本發(fā)明以早花忍冬的幼嫩莖段為外植體，以MS為基本培養(yǎng)基，添加植物生長調(diào)節(jié)劑6-BA、NAA誘導腋芽萌發(fā)生長，再經(jīng)繼代增殖培養(yǎng)、生根誘導及煉苗移栽，可在短時間內(nèi)獲得大量再生植株。本發(fā)明為早花忍冬優(yōu)質(zhì)種苗的快速繁殖提供一條有效途徑，其增殖系數(shù)較高,誘導生根率高，易移栽成活。在很大程度上滿足東北地區(qū)早春園林綠化美化的需求，為進一步綜合開發(fā)利用奠定基礎(chǔ)。
【IPC分類】A01H4/00
【公開號】CN105454046
【申請?zhí)枴緾N201510944485
【發(fā)明人】王歡, 王志, 杜鳳國
【申請人】北華大學
【公開日】2016年4月6日
【申請日】2015年12月17日