一種霍山石斛莖段快速繁殖方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種霍山石斛莖段快速繁殖方法，屬于植株培育技術(shù)領(lǐng)域。
【背景技術(shù)】
[0002]霍山石斛俗稱(chēng)米斛，是蘭科石斛屬的草本植物，中國(guó)國(guó)家地理標(biāo)志產(chǎn)品，主產(chǎn)于大別山區(qū)的安徽省霍山縣，大多生長(zhǎng)在云霧繚繞的懸崖峭壁崖石縫隙間和參天古樹(shù)上，生于山地林中樹(shù)干上和山谷巖石上?；羯绞艽蠓忍岣呷梭w內(nèi)SOD (延緩衰老的主要物質(zhì))水平，對(duì)經(jīng)常熬夜、用腦、煙酒過(guò)度，體虛乏力的人群，經(jīng)常飲用非常適宜?；羯绞忻髂孔饔茫材苷{(diào)和陰陽(yáng)、壯陽(yáng)補(bǔ)腎、養(yǎng)顏駐容，從而達(dá)到保健益壽的功效。
[0003]霍山石斛的生長(zhǎng)條件極為苛刻，屬于國(guó)家瀕臨滅絕的珍稀名貴中藥材，是國(guó)家野生藥材二級(jí)保護(hù)品種。在野生狀態(tài)下，霍山石斛繁殖速率低、生長(zhǎng)緩慢，加之掠奪性采挖，使其野生資源日益減少，遠(yuǎn)遠(yuǎn)不能滿足國(guó)內(nèi)外市場(chǎng)經(jīng)濟(jì)發(fā)展和臨床醫(yī)學(xué)的需要。石斛種苗價(jià)格昂貴，導(dǎo)致栽培成本高，經(jīng)濟(jì)效益低，這些問(wèn)題長(zhǎng)期困擾著石斛種植戶。霍山石斛的莖段是霍山石斛的體細(xì)胞胚，具有和植株同樣的物質(zhì)代謝和形態(tài)發(fā)育潛能，可用來(lái)代替原藥材生產(chǎn)相關(guān)的活性物質(zhì)。因此，研究高效、實(shí)惠的霍山石斛莖段的快速繁殖技術(shù)至關(guān)重要，這一舉措可實(shí)現(xiàn)霍山石斛的規(guī)?；a(chǎn)、緩解野生資源緊張的局面、滿足藥材市場(chǎng)的需求具有重要意義。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明的目的在于:提供一種既能保持母體的優(yōu)良性狀、又能實(shí)現(xiàn)快速繁殖的霍山石斛莖段快速繁殖方法。
[0005]為了實(shí)現(xiàn)上述發(fā)明目的，本發(fā)明提供如下技術(shù)方案:
[0006]一種霍山石斛莖段快速繁殖方法，包括以下步驟:
[0007](I)外植體的準(zhǔn)備
[0008]將外植體用流水沖洗干凈，然后在無(wú)菌操作臺(tái)上用75%的酒精浸泡外植體30秒，再用0.1%升汞溶液滅菌8?15分鐘，然后用無(wú)菌水沖洗3?5次，取無(wú)菌濾紙吸去外植體表面的水分，在無(wú)菌條件下，切成至少帶一個(gè)莖節(jié)的莖段；
[0009](2)誘導(dǎo)培養(yǎng)
[00?0]將莖段接種于無(wú)菌的誘導(dǎo)培養(yǎng)基中，誘導(dǎo)培養(yǎng)基配方為:N6 + 2.5mg/L 6_BA+
0.75%瓊脂+3 %蔗糖+8 %椰汁+0.4 %活性炭，pH值為5.4?5.9;培養(yǎng)條件為溫度25°C、光照時(shí)間12小時(shí)/天、光強(qiáng)度1200?1800Lux，培養(yǎng)30?35天后，莖段上長(zhǎng)出小芽；
[0011](3)增殖培養(yǎng)
[0012]將新芽轉(zhuǎn)接到芽增殖培養(yǎng)基中，芽增殖培養(yǎng)基的配方為:N6+2.5mg/L6-BA+1.5%瓊脂+4 %蔗糖+10 %椰汁，pH值為5.4?5.8;培養(yǎng)條件為溫度25°C、光照時(shí)間12小時(shí)/天、光強(qiáng)度1200?1800LUX，培養(yǎng)30?40天后，形成原球莖;將原球莖轉(zhuǎn)接于原球莖增殖培養(yǎng)基中，原球莖增殖培養(yǎng)基的配方為:N6+1.5mg/L 6-BA+l.2mg/L NAA+1.5%瓊脂+4%蔗糖+5%香蕉汁+0.2 %蛋白胨+10 %椰汁+0.1 %活性炭，培養(yǎng)條件為溫度25°C、光照時(shí)間12小時(shí)/天、光強(qiáng)度1200?1800Lux，培養(yǎng)30?40天后，形成無(wú)根小苗；
[0013](4)生根壯苗培養(yǎng)
[0014]將無(wú)根小苗轉(zhuǎn)接到生根壯苗培養(yǎng)中，生根壯苗培養(yǎng)基的配方為:N6+2.5mg/LNAA+1.5%瓊脂+4%蔗糖+5%香蕉汁+10%土豆汁+0.2%蛋白胨+0.1 %活性炭，培養(yǎng)條件為溫度25°C、光照時(shí)間12小時(shí)/天、光強(qiáng)度1200?1800Lux，培養(yǎng)40?50天后出苗。
[0015]優(yōu)選地，步驟(I)中，選擇品質(zhì)優(yōu)良、生長(zhǎng)健壯、莖節(jié)明顯、無(wú)病蟲(chóng)害的一年生霍山石斛莖段為外植體。
[0016]與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的有益效果是:
[0017]本發(fā)明提供了一種霍山石斛莖段快速繁殖方法，取材容易且不受季節(jié)限制，以芽生芽的莖段培養(yǎng)方式，發(fā)生過(guò)程簡(jiǎn)單，能較好的保持母本的生物學(xué)性狀，從而保證霍山石斛的藥用價(jià)值;本繁殖方法簡(jiǎn)單易行，解決了霍山石斛無(wú)性繁殖中外植體滅菌不充分，原球莖分化慢，繁殖周期長(zhǎng)，生產(chǎn)成本高等技術(shù)難題;本發(fā)明可在實(shí)際生產(chǎn)中進(jìn)行，可為霍山石斛的種植發(fā)展提供保障，具有較好的經(jīng)濟(jì)效益和社會(huì)效益。
【具體實(shí)施方式】
[0018]下面對(duì)本發(fā)明的實(shí)施例作詳細(xì)說(shuō)明，本實(shí)施例在以本發(fā)明技術(shù)方案為前提下進(jìn)行實(shí)施，給出了詳細(xì)的實(shí)施方式和具體的操作過(guò)程，但本發(fā)明的保護(hù)范圍不限于下述的實(shí)施例。
[0019]實(shí)施例1
[0020]—種霍山石斛莖段快速繁殖方法，包括以下步驟:
[0021](I)外植體的準(zhǔn)備
[0022]選擇品質(zhì)優(yōu)良、生長(zhǎng)健壯、莖節(jié)明顯、無(wú)病蟲(chóng)害的一年生霍山石斛莖段為外植體，將外植體用流水沖洗干凈，然后在無(wú)菌操作臺(tái)上用75%的酒精浸泡外植體30秒，再用0.1%升汞溶液滅菌15分鐘，然后用無(wú)菌水沖洗5次，取無(wú)菌濾紙吸去外植體表面的水分，在無(wú)菌條件下，切成至少帶一個(gè)莖節(jié)的莖段；
[0023](2)誘導(dǎo)培養(yǎng)
[0024]將莖段接種于無(wú)菌的誘導(dǎo)培養(yǎng)基中，誘導(dǎo)培養(yǎng)基配方為:N6+ 2.5mg/L 6_BA+
0.75%瓊脂+3 %蔗糖+8 %椰汁+0.4 %活性炭，pH值為5.4?5.9;培養(yǎng)條件為溫度25°C、光照時(shí)間12小時(shí)/天、光強(qiáng)度1200?1800Lux，培養(yǎng)30?35天后，莖段上長(zhǎng)出小芽；
[0025](3)增殖培養(yǎng)
[0026]將新芽轉(zhuǎn)接到芽增殖培養(yǎng)基中，芽增殖培養(yǎng)基的配方為:N6+2.5mg/L6-BA+l.5%瓊脂+4 %蔗糖+10 %椰汁，pH值為5.4?5.8;培養(yǎng)條件為溫度25°C、光照時(shí)間12小時(shí)/天、光強(qiáng)度1200?1800LUX，培養(yǎng)30?40天后，形成原球莖;將原球莖轉(zhuǎn)接于原球莖增殖培養(yǎng)基中，原球莖增殖培養(yǎng)基的配方為:N6+1.5mg/L 6-BA+l.2mg/L NAA+1.5%瓊脂+4%蔗糖+5%香蕉汁+0.2 %蛋白胨+10 %椰汁+0.1 %活性炭，培養(yǎng)條件為溫度25°C、光照時(shí)間12小時(shí)/天、光強(qiáng)度1200?1800Lux，培養(yǎng)30?40天后，形成無(wú)根小苗；
[0027](4)生根壯苗培養(yǎng)
[0028]將無(wú)根小苗轉(zhuǎn)接到生根壯苗培養(yǎng)中，生根壯苗培養(yǎng)基的配方為:N6+2.5mg/LNAA+1.5%瓊脂+4%蔗糖+5%香蕉汁+10%土豆汁+0.2%蛋白胨+0.1 %活性炭，培養(yǎng)條件為溫度25°C、光照時(shí)間12小時(shí)/天、光強(qiáng)度1200?1800Lux，培養(yǎng)40?50天后出苗。
[0029]以上所述僅為本發(fā)明的較佳實(shí)施例而已，并不用以限制本發(fā)明，凡在本發(fā)明的精神和原則之內(nèi)所作的任何修改、等同替換和改進(jìn)等，均應(yīng)包含在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。
【主權(quán)項(xiàng)】
1.一種霍山石斛莖段快速繁殖方法，其特征在于，包括以下步驟: (1)外植體的準(zhǔn)備 將外植體用流水沖洗干凈，然后在無(wú)菌操作臺(tái)上用75%的酒精浸泡外植體30秒，再用0.1%升汞溶液滅菌8?15分鐘，然后用無(wú)菌水沖洗3?5次，取無(wú)菌濾紙吸去外植體表面的水分，在無(wú)菌條件下，切成至少帶一個(gè)莖節(jié)的莖段； (2)誘導(dǎo)培養(yǎng) 將莖段接種于無(wú)菌的誘導(dǎo)培養(yǎng)基中，誘導(dǎo)培養(yǎng)基配方為:N6+2.5mg/L 6_BA+0.75%瓊脂+3 %蔗糖+8 %椰汁+0.4 %活性炭，pH值為5.4?5.9;培養(yǎng)條件為溫度25°C、光照時(shí)間12小時(shí)/天、光強(qiáng)度1200?1800Lux，培養(yǎng)30?35天后，莖段上長(zhǎng)出小芽； (3)增殖培養(yǎng) 將新芽轉(zhuǎn)接到芽增殖培養(yǎng)基中，芽增殖培養(yǎng)基的配方為:N6+2.5mg/L 6-BA+l.5%瓊脂+4 %蔗糖+10 %椰汁，pH值為5.4?5.8;培養(yǎng)條件為溫度25°C、光照時(shí)間12小時(shí)/天、光強(qiáng)度1200?1800Lux，培養(yǎng)30?40天后，形成原球莖;將原球莖轉(zhuǎn)接于原球莖增殖培養(yǎng)基中，原球莖增殖培養(yǎng)基的配方為:N6+1.5mg/L 6-BA+1.2mg/L NAA+1.5%瓊脂+4%蔗糖+5%香蕉汁+0.2 %蛋白胨+10 %椰汁+0.1 %活性炭，培養(yǎng)條件為溫度25°C、光照時(shí)間12小時(shí)/天、光強(qiáng)度1200?1800Lux，培養(yǎng)30?40天后，形成無(wú)根小苗； (4)生根壯苗培養(yǎng) 將無(wú)根小苗轉(zhuǎn)接到生根壯苗培養(yǎng)中，生根壯苗培養(yǎng)基的配方為:N6+2.5mg/L NAA+1.5%瓊脂+4%蔗糖+5%香蕉汁+10%土豆汁+0.2%蛋白胨+0.1 %活性炭，培養(yǎng)條件為溫度25°C、光照時(shí)間12小時(shí)/天、光強(qiáng)度1200?1800Lux，培養(yǎng)40?50天后出苗。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的霍山石斛莖段快速繁殖方法，其特征在于，所述步驟(I)中，選擇品質(zhì)優(yōu)良、生長(zhǎng)健壯、莖節(jié)明顯、無(wú)病蟲(chóng)害的一年生霍山石斛莖段為外植體。
【專(zhuān)利摘要】本發(fā)明公開(kāi)了一種霍山石斛莖段快速繁殖方法，屬于植株培育技術(shù)領(lǐng)域。該方法包括以下步驟：外植體的準(zhǔn)備，誘導(dǎo)培養(yǎng)，增殖培養(yǎng)和生根壯苗培養(yǎng)。本發(fā)明取材容易且不受季節(jié)限制，以芽生芽的莖段培養(yǎng)方式，發(fā)生過(guò)程簡(jiǎn)單，能較好的保持母本的生物學(xué)性狀，從而保證霍山石斛的藥用價(jià)值；本繁殖方法簡(jiǎn)單易行，解決了霍山石斛無(wú)性繁殖中外植體滅菌不充分，原球莖分化慢，繁殖周期長(zhǎng)，生產(chǎn)成本高等技術(shù)難題；本發(fā)明可在實(shí)際生產(chǎn)中進(jìn)行，可為霍山石斛的種植發(fā)展提供保障，具有較好的經(jīng)濟(jì)效益和社會(huì)效益。
【IPC分類(lèi)】A01H4/00
【公開(kāi)號(hào)】CN105532457
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201510971810
【發(fā)明人】萬(wàn)繼銀, 萬(wàn)彬
【申請(qǐng)人】安徽省霍山縣農(nóng)伯樂(lè)開(kāi)發(fā)有限公司
【公開(kāi)日】2016年5月4日
【申請(qǐng)日】2015年12月18日