一種雜交蓮瓣蘭根狀莖直接誘導(dǎo)成苗方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及植物離體培養(yǎng)技術(shù)領(lǐng)域，具體地說是蓮瓣蘭植物種子無菌萌發(fā)形成根狀莖后再一次性培育成苗的方法，特別是一種雜交蓮瓣蘭根狀莖直接誘導(dǎo)成苗方法。
【背景技術(shù)】
[0002]藥草和滇荷都是蘭屬蓮瓣蘭植物的優(yōu)秀品種，二者植株健碩，花朵幽香，觀賞價(jià)值高，是重要的蘭花優(yōu)良種質(zhì)資源。兩個(gè)蘭花品種多產(chǎn)于云南西北部及四川南部以及與此兩地毗鄰地區(qū)，是良好的盆栽花材料和雜交親本。
[0003]蘭花種子很小，內(nèi)含一些發(fā)育不完全的球形胚，無胚乳，自然狀態(tài)下很難萌發(fā)，需與蘭菌共生或無菌條件培養(yǎng)才能獲得成功。蘭屬(Cmbidium)植物種子的萌發(fā)，已有人作過研究，但以上蘭屬植物的雜交、無菌萌發(fā)及根狀莖誘導(dǎo)成苗未見報(bào)道。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明的目的在于提供一種雜交蓮瓣蘭根狀莖直接誘導(dǎo)成苗方法，克服了蘭花傳統(tǒng)繁殖方法帶來的種種弊端，有利于擴(kuò)大蘭花的繁殖系數(shù)，能在短期內(nèi)生產(chǎn)出數(shù)量巨大的試管種苗，有效滿足蘭花產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)的巨大需求。
[0005]為實(shí)現(xiàn)上述技術(shù)目的，達(dá)到上述技術(shù)效果，本發(fā)明公開了一種雜交蓮瓣蘭根狀莖直接誘導(dǎo)成苗方法，誘導(dǎo)成苗方法包括了以下步驟:
[0006]材料來源篩選:藥草及滇荷蘭株均為野生植株，在資源圃內(nèi)培育至果實(shí)達(dá)九成熟，果皮略顯黃色時(shí)摘取；
[0007]外植體處理:將上述九成熟果實(shí)用75%酒精消毒30-60秒，轉(zhuǎn)入0.1%升汞表面消毒8-12分鐘，無菌水沖洗3-4次，無菌室取出種子并用紗布包好種子后，以無菌水潤洗5次，然后用0.lmol/L KOH溶液預(yù)處理8-10分鐘，用無菌水沖洗3次，用20%次氯酸鈉消毒15-20分鐘，無菌水沖洗5次后，接種到改良的MS固體培養(yǎng)基；
[0008]種子培養(yǎng):在整個(gè)培養(yǎng)過程中，種子無菌萌發(fā)采用暗箱培養(yǎng)，培養(yǎng)至種子萌發(fā)為圓球莖成根狀莖時(shí)培養(yǎng)采用光照培養(yǎng)，培養(yǎng)條件為:溫度25 ±2°C，光照1800-2500勒克斯(lx)，每天光照12-15小時(shí)，待種子萌發(fā)并長出根狀莖后轉(zhuǎn)接到另一個(gè)培養(yǎng)瓶，進(jìn)行成苗誘導(dǎo)培養(yǎng)；
[0009]成苗誘導(dǎo)培養(yǎng):使用含有0.5-5.0mg/L的細(xì)胞分裂素6-BA和0.2-2.0mg/L的生長素NAA的改良MS固體誘導(dǎo)培養(yǎng)基培養(yǎng)，培養(yǎng)條件為:溫度25土2°C，光照1800-2500勒克斯(Ix)，每天光照12-15小時(shí)，2—5個(gè)月后長出芽和新根，形成健壯植株。
[0010]優(yōu)選的，外植體處理中改良的MS固體培養(yǎng)基為，含有1.0-5.0mg/L的細(xì)胞分裂素6-BA和1.0-2.0mg/L的生長素NAA的改良MS固體培養(yǎng)基，其中培養(yǎng)基pH 5.6，瓊脂4.0-6.5g/L。
[0011]優(yōu)選的，成苗誘導(dǎo)培養(yǎng)中改良MS固體誘導(dǎo)培養(yǎng)基中還包括有土豆泥50g/L和蛋白粉0.2g/L。
[0012]本發(fā)明具有以下有益效果:
[0013]1.本發(fā)明通過嚴(yán)格選種、優(yōu)化培育，克服了傳統(tǒng)蘭花繁育主要以分株繁殖為主，而分株繁殖系數(shù)低，每年老苗與新生苗的比例只為1:1?3左右，很難進(jìn)行規(guī)模化生產(chǎn)的問題，采用了組織培養(yǎng)的方法有利于擴(kuò)大蘭花的繁殖系數(shù)，能在短期內(nèi)生產(chǎn)出數(shù)量巨大的試管種苗，有效滿足蘭花產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)的巨大需求。
[0014]2.經(jīng)過大量實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證培養(yǎng)參數(shù)及培育步驟，將傳統(tǒng)地生蘭組培中多步誘導(dǎo)生根成苗步驟進(jìn)行優(yōu)化調(diào)整，本發(fā)明從根狀莖一次性誘導(dǎo)成芽和根，成為新生植株，減少了誘導(dǎo)過程和縮短了誘導(dǎo)時(shí)間，顯著降低了生產(chǎn)成本，并公開了相應(yīng)的培育方法及工藝參數(shù)。
【具體實(shí)施方式】
[0015]為了使本發(fā)明的目的、技術(shù)方案及優(yōu)點(diǎn)更加清楚明白，以下結(jié)合實(shí)施例，對(duì)本發(fā)明進(jìn)行進(jìn)一步詳細(xì)說明。
[0016]實(shí)施例1
[0017]本發(fā)明公開了一種雜交蓮瓣蘭根狀莖直接誘導(dǎo)成苗方法，誘導(dǎo)成苗方法包括了以下步驟:
[0018]材料來源篩選:藥草及滇荷蘭株均為野外采得，在資源圃內(nèi)培育至果實(shí)達(dá)九成熟，果皮略顯黃色時(shí)摘取；
[0019]外植體處理:將上述九成熟果實(shí)用75%酒精消毒30秒，轉(zhuǎn)入0.1%升汞表面消毒8分鐘，無菌水沖洗3次，無菌室取出種子并用紗布包好種子后，以無菌水潤洗5次，然后用0.lmol/L KOH溶液預(yù)處理8分鐘，用無菌水沖洗3次，用20%次氯酸鈉消毒15分鐘，無菌水沖洗5次后，接種到改良的MS固體培養(yǎng)基。其中，改良的MS固體培養(yǎng)基為，含有1.0mg/L的細(xì)胞分裂素6-BA和1.0mg/L的生長素NAA的改良MS固體培養(yǎng)基，其中培養(yǎng)基pH 5.6，瓊脂4.0g/L;
[0020]種子培養(yǎng):在整個(gè)培養(yǎng)過程中，種子無菌萌發(fā)采用暗箱培養(yǎng)，培養(yǎng)至種子萌發(fā)為圓球莖成根狀莖時(shí)培養(yǎng)采用光照培養(yǎng)，培養(yǎng)條件為:溫度25±2°C，光照1800勒克斯(lx)，每天光照12小時(shí)，待種子萌發(fā)并長出根狀莖后轉(zhuǎn)接到另一個(gè)培養(yǎng)瓶，進(jìn)行成苗誘導(dǎo)培養(yǎng)；
[0021 ]成苗誘導(dǎo)培養(yǎng):使用含有0.5mg/L的細(xì)胞分裂素6-BA、0.2mg/L的生長素NAA、土豆泥50g//L和蛋白粉0.2g/L的改良MS固體誘導(dǎo)培養(yǎng)基培養(yǎng)，培養(yǎng)條件為:溫度25 ± 2°C，光照1800勒克斯(lx)，每天光照12小時(shí)，2-5個(gè)月后長出芽和新根，形成健壯植株。
[0022]實(shí)施例2
[0023]本發(fā)明公開了一種雜交蓮瓣蘭根狀莖直接誘導(dǎo)成苗方法，誘導(dǎo)成苗方法包括了以下步驟:
[0024]材料來源篩選:藥草及滇荷蘭株均為野外采得，在資源圃內(nèi)培育至果實(shí)達(dá)九成熟，果皮略顯黃色時(shí)摘??；
[0025]外植體處理:將上述九成熟果實(shí)用75%酒精消毒60秒，轉(zhuǎn)入0.1%升汞表面消毒12分鐘，無菌水沖洗4次，無菌室取出種子并用紗布包好種子后，以無菌水潤洗5次，然后用0.lmol/L KOH溶液預(yù)處理10分鐘，用無菌水沖洗3次，用20%次氯酸鈉消毒20分鐘，無菌水沖洗5次后，接種到改良的MS固體培養(yǎng)基。其中，改良的MS固體培養(yǎng)基為，含有5.0mg/!的細(xì)胞分裂素6-BA和2.0mg/L的生長素NAA的改良MS固體培養(yǎng)基，其中培養(yǎng)基pH 5.6，瓊脂6.5g/L；
[0026]種子培養(yǎng):在整個(gè)培養(yǎng)過程中，種子無菌萌發(fā)采用暗箱培養(yǎng)，培養(yǎng)至種子萌發(fā)為圓球莖成根狀莖時(shí)培養(yǎng)采用光照培養(yǎng)，培養(yǎng)條件為:溫度25±2°C，光照2500勒克斯(lx)，每天光照15小時(shí)，待種子萌發(fā)并長出根狀莖后轉(zhuǎn)接到另一個(gè)培養(yǎng)瓶，進(jìn)行成苗誘導(dǎo)培養(yǎng)；
[0027]成苗誘導(dǎo)培養(yǎng):使用含有5.0mg/!的細(xì)胞分裂素6-BA、2.0mg/L的生長素NAA、土豆泥50g//L和蛋白粉0.2g/L的改良MS固體誘導(dǎo)培養(yǎng)基培養(yǎng)，(缺少培養(yǎng)條件)，培養(yǎng)條件為:溫度25土2°C，光照2500勒克斯(Ix)，每天光照15小時(shí)，2_5個(gè)月后長出芽和新根，形成健壯植株。
[0028]以上所述，僅為本發(fā)明較佳的【具體實(shí)施方式】，但本發(fā)明的保護(hù)范圍并不局限于此，任何熟悉本技術(shù)領(lǐng)域的技術(shù)人員在本發(fā)明揭露的技術(shù)范圍內(nèi)，可輕易想到的變化或替換，都應(yīng)涵蓋在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。
【主權(quán)項(xiàng)】
1.一種雜交蓮瓣蘭根狀莖直接誘導(dǎo)成苗方法，其特征在于，所述的誘導(dǎo)成苗方法包括了以下步驟: 材料來源篩選:藥草及滇荷蘭株均為野生植株，在資源圃內(nèi)培育至果實(shí)達(dá)九成熟，果皮略顯黃色時(shí)摘??； 外植體處理:將上述九成熟果實(shí)用75%酒精消毒30-60秒，轉(zhuǎn)入0.1%升汞表面消毒8-12分鐘，無菌水沖洗3-4次，無菌室取出種子并用紗布包好種子后，以無菌水潤洗5次，然后用0.lmol/L KOH溶液預(yù)處理8-10分鐘，用無菌水沖洗3次，用20%次氯酸鈉消毒15-20分鐘，無菌水沖洗5次后，接種到改良的MS固體培養(yǎng)基； 種子培養(yǎng):在整個(gè)培養(yǎng)過程中，種子無菌萌發(fā)采用暗箱培養(yǎng)，培養(yǎng)至種子萌發(fā)為圓球莖成根狀莖時(shí)培養(yǎng)采用光照培養(yǎng)，培養(yǎng)條件為:溫度25±2°C，光照1800-2500勒克斯(lx)，每天光照12-15小時(shí)，待種子萌發(fā)并長出根狀莖后轉(zhuǎn)接到另一個(gè)培養(yǎng)瓶，進(jìn)行成苗誘導(dǎo)培養(yǎng)； 成苗誘導(dǎo)培養(yǎng):使用含有0.5-5.0mg/L的細(xì)胞分裂素6-BA和0.2-2.0mg/L的生長素NAA的改良MS固體誘導(dǎo)培養(yǎng)基培養(yǎng)，培養(yǎng)條件為:溫度25±2°C，光照1800-2500勒克斯(lx)，每天光照12-15小時(shí)，2—5個(gè)月后長出芽和新根，形成健壯植株。2.如權(quán)利要求1所述的一種雜交蓮瓣蘭根狀莖直接誘導(dǎo)成苗方法，其特征在于:外植體處理中所述的改良的MS固體培養(yǎng)基為，含有1.0-5.0mg/L的細(xì)胞分裂素6-BA和1.0-2.0mg/L的生長素NAA的改良MS固體培養(yǎng)基，其中培養(yǎng)基pH 5.6，瓊脂4.0-6.5g/L。3.如權(quán)利要求1或2所述的一種雜交蓮瓣蘭根狀莖直接誘導(dǎo)成苗方法，其特征在于:成苗誘導(dǎo)培養(yǎng)中所述的改良MS固體誘導(dǎo)培養(yǎng)基中還包括有土豆泥50g/L和蛋白粉0.2g/L。
【專利摘要】本發(fā)明涉及植物離體培養(yǎng)技術(shù)領(lǐng)域，公開了一種雜交蓮瓣蘭根狀莖直接誘導(dǎo)成苗方法，包括了以下步驟：材料來源篩選、外植體處理、種子培養(yǎng)、成苗誘導(dǎo)培養(yǎng)；克服了傳統(tǒng)蘭花繁育主要以分株繁殖為主，而分株繁殖系數(shù)低，很難進(jìn)行規(guī)?；a(chǎn)的問題，采用了組織培養(yǎng)的方法有利擴(kuò)大蘭花的繁殖系數(shù)，能在短期內(nèi)生產(chǎn)出大量試管種苗，滿足蘭花產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)需求；經(jīng)過實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證培養(yǎng)參數(shù)及步驟，將傳統(tǒng)地生蘭組培中多步誘導(dǎo)生根成苗步驟進(jìn)行優(yōu)化，本發(fā)明從根狀莖一次性誘導(dǎo)成芽和根，成為新生植株，減少了誘導(dǎo)過程和縮短了誘導(dǎo)時(shí)間，顯著降低了生產(chǎn)成本，并公開了相應(yīng)的培育方法及工藝參數(shù)。
【IPC分類】A01H4/00
【公開號(hào)】CN105532472
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201610027593
【發(fā)明人】劉忠貴, 徐銳仙, 劉乘里, 李枝林
【申請(qǐng)人】云南野生蘭收藏基地有限公司
【公開日】2016年5月4日
【申請(qǐng)日】2016年1月16日