重瓣一品紅新品種錦上花的組織培養(yǎng)方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及植物組織培養(yǎng)領(lǐng)域，具體地公開了重瓣一品紅新品種錦上花的組織培養(yǎng)方法O
【背景技術(shù)】
[0002]一品紅(Euphorbia Pulcherrima)別名“猩猩木”、“圣誕花”、“老來嬌”。屬于大戟科大戟屬常綠或半常綠灌木，原產(chǎn)墨西哥及中美洲，現(xiàn)在我國各地廣泛栽培利用。在人們生活水平日益上升的今天，高品質(zhì)的一品紅品種將受到市場日益青睞。
[0003]重瓣一品紅新品種錦上花是歷時(shí)17年對變異種進(jìn)行培育、定型而形成的植物新品種，已獲得國家新品種權(quán)保護(hù)(品種權(quán)號(hào):20110011)。其花形碩大，呈立體雙層皇冠狀的，給人“花上有花”、“錦上添花”的感覺。雖然粵北隆冬寒氣逼人，但一盆盆“錦上花”卻怒張著一簇簇艷紅寬大的花朵，一派喜氣歡騰的模樣，仿佛寒風(fēng)中在綠枝熊熊燃燒的一團(tuán)火焰。“錦上花”新品種已獲得國家花卉新品種權(quán)保護(hù)。這標(biāo)志著在中國使用極其廣泛的“一品紅”花卉系列中，終于有了第一個(gè)具有中國知識(shí)產(chǎn)權(quán)的產(chǎn)品?！板\上花”新品種市場選育成果曾獲市科技進(jìn)步一等獎(jiǎng)，具有廣闊而良好的推廣應(yīng)用前景。
[0004]重瓣一品紅新品種錦上花母本植株極為稀少，而且其枝條較少，引種初期繁殖數(shù)量有限，采用傳統(tǒng)育苗技術(shù)進(jìn)行新品種培育推廣時(shí)間將非常漫長。而利用組織培養(yǎng)技術(shù)進(jìn)行工廠化育苗，不但可快速、大量繁殖，還可保持其優(yōu)良性狀的穩(wěn)定。組培技術(shù)的應(yīng)用和推廣，將大幅度提高該品種繁育數(shù)量，縮短育苗時(shí)間，以滿足市場對該品種的需求。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]為了解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明提供了重瓣一品紅新品種錦上花的組織培養(yǎng)方法。
[0006]本發(fā)明所采用的技術(shù)方案是:
[0007]重瓣一品紅新品種錦上花的組織培養(yǎng)方法，包括(I)外植體處理、(2)愈傷組織誘導(dǎo)、(3)不定芽誘導(dǎo)、(4)不定芽增殖、(5)生根培養(yǎng)、(6)瓶苗外移培養(yǎng)，其特征在于:(2)中使用的培養(yǎng)基為MS+2，4-二氯苯氧乙酸(2，4-D) 2.0mg/L+6-芐氨基嘌呤(6-BA) 0.5mg/L+萘乙酸(NAA)0.3mg/L+蔗糖40g/L+卡拉膠6.5g/L;(3)中使用的培養(yǎng)基為MS+6-芐氨基嘌呤(6-BA) 2mg/L+萘乙酸(NAA) 1.0mg/L+蔗糖40g/L+卡拉膠6.5g/L; (4)中使用的培養(yǎng)基為MS+吲哚丁酸(IBA)0.3mg/L+6-芐氨基嘌呤(6-BA)0.35mg/L+糖40g/L+卡拉膠6.5g/L; (5)中使用的培養(yǎng)基為 1/2MS+吲哚丁酸(IBA)0.6mg/L+萘乙酸(NAA)1.0mg/L+糖40g/L+卡拉膠6.5g/L+活性炭 0.8g/L。
[0008]進(jìn)一步地，所述步驟(I)具體為:a)取母本的頂芽、腋芽或嫩葉，b)洗衣粉水沖洗，
c)用小量的流動(dòng)水沖洗整晚，d)用70%的酒精消毒5-6秒，e)無菌水沖洗5次，f)用0.1 %的升汞消毒8分鐘，g)用無菌水沖洗5-6次，h)用干凈濾紙吸干表面水分。
[0009]進(jìn)一步地，所述步驟(I)中，選擇的外植體為切取3—5cm長帶有腋芽的莖段。
[0010]進(jìn)一步地，所述步驟(6)具體為:在生根培養(yǎng)基上培養(yǎng)二十天后，根部長出根后就把瓶苗在溫室內(nèi)煉苗一星期，然后逐漸開瓶煉苗1-2天，即可將苗的根部培養(yǎng)基充分洗凈后，用800-1000倍的多菌靈溶液浸泡1-2分鐘，移栽至滅菌的土壤中，栽植后澆透水，濕度保持在93-97 %。
[0011]進(jìn)一步地，所述步驟(6)中移栽后的幼苗的培養(yǎng)溫度小于28攝氏度。
[0012]進(jìn)一步地，所述步驟(6)中移栽后的幼苗的培養(yǎng)溫度為25-26攝氏度。
[0013]進(jìn)一步地，所述步驟(6)瓶苗外移培養(yǎng)成活后，每半個(gè)月施腐熟的花生麩水肥一次。
[0014]本發(fā)明的有益效果為:“錦上花”是重瓣一品紅的上等品種，迄今為止還沒人通過組培技術(shù)來繁殖。與國內(nèi)一品紅重瓣品種組培技術(shù)相比，本發(fā)明的一品紅新品種“錦上花”組培技術(shù)在生根方面有很大優(yōu)勢，我們的生根率達(dá)到88%，而據(jù)國內(nèi)有關(guān)機(jī)構(gòu)報(bào)道其生根率僅為65%左右。因此，與國內(nèi)一品紅組培技術(shù)相比，本發(fā)明的一品紅新品種“錦上花”組培技術(shù)達(dá)到了國內(nèi)領(lǐng)先水平。
[0015]重瓣一品紅新品種“錦上花”是一個(gè)相當(dāng)高品質(zhì)的品種，利用組織培養(yǎng)的方法是目前生物技術(shù)上最先進(jìn)的方法，是在短期內(nèi)能大量生產(chǎn)苗株的方法，其經(jīng)濟(jì)效益是相當(dāng)可觀的，值得我們大力推廣。
[0016]為了更好地理解和實(shí)施，下面詳細(xì)說明本發(fā)明。
【具體實(shí)施方式】
[0017]【實(shí)施例1】主要技術(shù)措施和特點(diǎn)
[0018]1、外植體的處理
[0019]—品紅新品種“錦上花”組織培養(yǎng)快速繁殖的外植體以嫩葉(具有主葉脈)或頂芽、側(cè)芽、腋芽為好。當(dāng)時(shí)把“錦上花”母本拿過來是正值韶關(guān)最冷的2月，因此把母體放在溫室養(yǎng)了2個(gè)月，同時(shí)在取才的前10天進(jìn)行了控水。在下午的時(shí)候，剪取了母本的頂芽、腋芽還有嫩葉。首先用洗衣粉水沖洗干凈，然后放在水龍頭下以最小量的水下間斷沖洗一個(gè)晚上，第二天早上進(jìn)行處理后接于培養(yǎng)基上。在接種前，用70%的酒精消毒5-6秒，用無菌水沖洗5次，再用0.1 %的升汞消毒8分鐘，用無菌水沖洗5-6次。最后用干凈濾紙吸干外植體表面水分，接到誘導(dǎo)愈傷組織的培養(yǎng)基上。
[0020]2、愈傷組織的誘導(dǎo)
[0021]把處理好的外植體，接于愈傷組織的誘導(dǎo)培養(yǎng)基上。我們設(shè)置了兩個(gè)配方的培養(yǎng)進(jìn)行對比，
[0022]①M(fèi)S+2-4D2.0mg/L+6BA0.5mg/L+NAA0.3mg/L+鹿糖 40g/L+卡拉膠 6.5g/L
[0023]②MS+6BA0.8mg/L+鹿糖 40g/L+卡拉膠 6.5g/L
[0024]PH值都為5.8，都在25 °C條件下培養(yǎng)25-30天。
[0025]通過對比實(shí)驗(yàn)，結(jié)果表明:采用MS+2-4D2.0mg/L+6BA0.5mg/L+NAA0.3mg/L+蔗糖40g/L+卡拉膠6.5g/L培養(yǎng)基，植體切口處長出許多愈傷組織，利用莖段誘導(dǎo)率達(dá)到90%，是一種適宜的錦上花愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基。
[0026]3、不定芽的誘導(dǎo)
[0027]將愈傷組織轉(zhuǎn)移到不定芽的誘導(dǎo)培養(yǎng)基上，我們也設(shè)置了兩個(gè)培養(yǎng)基配方。①M(fèi)S+6BA2mg/L+NAAl.0mg/L+鹿糖40g/L+卡拉膠6.5g/L，②MS+6BAlmg/L+糖40g/L+卡拉膠6.5g/L，PH值都為5.8，溫度在25°C，光照在2000LX條件下進(jìn)行培養(yǎng)。
[0028]通過對比實(shí)驗(yàn)，結(jié)果表明:以MS+6BA0.35/L+IBA0.3/L+糖40g/L+卡拉膠6.5g/L培養(yǎng)基為最佳。
[0029]4、不定芽的增值
[0030]要想有大量的生根苗，必需把不定芽大量增值。把誘導(dǎo)培養(yǎng)基上形成的叢生芽剪取下來，在無菌狀態(tài)下接種于增值培養(yǎng)基上。增值培養(yǎng)基我們設(shè)置了 3個(gè)配方進(jìn)行了試驗(yàn)。[0031 ]① MS+IBA0.05mg/L+6BA0.05mg/L+糖 40g/L+卡拉膠 6.5g/L，
[0032]②MS+IBA0.3mg/L+6BA0.05mg/L+糖 40g/L+卡拉膠 6.5g/L，
[0033]③MS+IBA0.3mg/L+6BA0.35mg/L+糖 40g/L+卡拉膠 6.5g/L。
[0034]通過對比實(shí)驗(yàn)，結(jié)果表明:以1/2MS+IBA0.6mg/L++NAAl.0mg/L+糖40g/L+卡拉膠
6.5g/L培養(yǎng)基為最佳，生根率達(dá)到88 %。
[0035]5、生根的培養(yǎng)
[0036]有了大量的叢生芽后，就是生根培養(yǎng)了。目的就是要在芽苗莖基部形成粗壯的根系。為此，我們也設(shè)置了兩個(gè)培養(yǎng)基的配方。①1/2MS+IBA0.6mg/L+NAAl.0mg/L+糖40g/L+卡拉膠 6.5g/L+活性炭 0.8g/L，② 1/2MS+NAA1.0mg/L+糖 40g/L+卡拉膠 6.5g/L+活性炭 0.8g/L。
[0037]6、生根瓶苗的外移
[0038]在生根培養(yǎng)基上培養(yǎng)二十天后，根部長出根后就把瓶苗在溫室內(nèi)煉苗一星期，然后逐漸開瓶煉苗1-2天，即可將苗的根部培養(yǎng)基充分洗凈后，用800-1000倍的多菌靈溶液浸泡1-2分鐘，移栽至滅菌的基質(zhì)中，栽植后澆透水，濕度保持在95 %左右，溫度在25°C左右，以后逐漸減少遮陰和噴霧次數(shù)，同時(shí)注意噴藥防治病菌感染并切實(shí)加強(qiáng)肥水管理。培養(yǎng)10-15天長出新根后可移至正常環(huán)境條件下，已適應(yīng)自然光照和溫度、濕度條件，逐漸成為商品苗。由于我們還有一個(gè)推廣應(yīng)用研究，因此把一部分可以上市的成品苗換袋，換袋后注意遮蔭和肥水的管理，一般十天左右薄薄的施一次肥。一品紅“錦上花”需要的光照比較強(qiáng)，在有三個(gè)節(jié)后就可打頂，促其側(cè)芽生長。一般要打幾次頂，在有十四節(jié)后停止打頂，并通過控制光照，使其苞片轉(zhuǎn)色，變紅。“錦上花”花形碩大，非常漂亮，這樣就可以投入到花卉市場銷售了。
[0039]試驗(yàn)結(jié)果表明:誘導(dǎo)愈傷組織利用帶有腋芽的莖段誘導(dǎo)率達(dá)到90%;叢生芽的誘導(dǎo)率達(dá)到95% ;生根的誘導(dǎo)率達(dá)到88%，具有很好的效果。
[0040]本發(fā)明并不局限于上述實(shí)施方式，如果對本發(fā)明的各種改動(dòng)或變形不脫離本發(fā)明的精神和范圍，倘若這些改動(dòng)和變形屬于本發(fā)明的權(quán)利要求和等同技術(shù)范圍之內(nèi)，則本發(fā)明也意圖包含這些改動(dòng)和變形。
【主權(quán)項(xiàng)】
1.重瓣一品紅新品種錦上花的組織培養(yǎng)方法，包括(I)外植體處理、(2)愈傷組織誘導(dǎo)、(3)不定芽誘導(dǎo)、(4)不定芽增殖、(5)生根培養(yǎng)、(6)瓶苗外移培養(yǎng)，其特征在于:(2)中使用的培養(yǎng)基為MS+2，4_二氯苯氧乙酸2.0mg/L+6-芐氨基嘌呤0.5mg/L+萘乙酸0.3mg/L+蔗糖40g/L+卡拉膠6.5g/L; (3)中使用的培養(yǎng)基為MS+6-芐氨基嘌呤2mg/L+萘乙酸1.0mg/L+蔗糖40g/L+卡拉膠6.5g/L; (4)中使用的培養(yǎng)基為MS+吲哚丁酸0.3mg/L+6_芐氨基嘌呤0.35mg/L+糖4(^/1+卡拉膠6.58/1;(5)中使用的培養(yǎng)基為1/215+吲哚丁酸0.61^/1+萘乙酸1.01^/1+糖40g/L+卡拉膠6.5g/L+活性炭0.8g/L02.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述步驟(I)具體為:a)取母本的頂芽、腋芽或嫩葉，b)洗衣粉水沖洗，c)用小量的流動(dòng)水沖洗整晚，d)用70 %的酒精消毒5-6秒，e)無菌水沖洗5次，f)用0.1 %的升汞消毒8分鐘，g)用無菌水沖洗5-6次，h)用干凈濾紙吸干表面水分。3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于，所述步驟(I)中，選擇的外植體為切取3—5cm長帶有腋芽的莖段。4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述步驟(6)具體為:在生根培養(yǎng)基上培養(yǎng)二十天后，根部長出根后就把瓶苗在溫室內(nèi)煉苗一星期，然后逐漸開瓶煉苗1-2天，即可將苗的根部培養(yǎng)基充分洗凈后，用800-1000倍的多菌靈溶液浸泡1-2分鐘，移栽至滅菌的土壤中，栽植后澆透水，濕度保持在93-97 %。5.根據(jù)權(quán)利要求1或4所述的方法，其特征在于，所述步驟(6)中移栽后的幼苗的培養(yǎng)溫度小于28攝氏度。6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的方法，其特征在于，所述步驟(6)中移栽后的幼苗的培養(yǎng)溫度為25-26攝氏度。7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述步驟(6)瓶苗外移培養(yǎng)成活后，每半個(gè)月施腐熟的花生麩水肥一次。
【專利摘要】本發(fā)明公開了重瓣一品紅新品種錦上花的組織培養(yǎng)方法，包括(1)外植體處理、(2)愈傷組織誘導(dǎo)、(3)不定芽誘導(dǎo)、(4)不定芽增殖、(5)生根培養(yǎng)、(6)瓶苗外移培養(yǎng)，其特征在于：(2)中使用的培養(yǎng)基為MS+2,4-二氯苯氧乙酸(2,4-D)2.0mg/L+6-芐氨基嘌呤(6-BA)0.5mg/L+萘乙酸(NAA)0.3mg/L+蔗糖40g/L+卡拉膠6.5g/L；(3)中使用的培養(yǎng)基為MS+6-芐氨基嘌呤(6-BA)2mg/L+萘乙酸(NAA)1.0mg/L+蔗糖40g/L+卡拉膠6.5g/L；(4)中使用的培養(yǎng)基為MS+吲哚丁酸(IBA)0.3mg/L+6-芐氨基嘌呤(6-BA)0.35mg/L+糖40g/L+卡拉膠6.5g/L；(5)中使用的培養(yǎng)基為1/2MS+吲哚丁酸(IBA)0.6mg/L+萘乙酸(NAA)1.0mg/L+糖40g/L+卡拉膠6.5g/L+活性炭0.8g/L。
【IPC分類】A01H4/00
【公開號(hào)】CN105613295
【申請?zhí)枴緾N201610040973
【發(fā)明人】李秋蘭, 黃立軍, 劉介東, 張朝旺, 姚為鋒, 鐘灼坤, 梁韶華, 李小兵, 陳世明
【申請人】韶關(guān)市林業(yè)科學(xué)研究所
【公開日】2016年6月1日
【申請日】2016年1月21日