一種應(yīng)用海洋寡糖提高刺參附著變態(tài)率的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及一種提高海洋水產(chǎn)動(dòng)物幼蟲附著變態(tài)率的方法，具體涉及一種應(yīng)用海 洋寡糖提高刺參幼蟲附著變態(tài)率的方法，屬于水產(chǎn)動(dòng)物養(yǎng)殖和育苗技術(shù)領(lǐng)域。
【背景技術(shù)】
[0002] 隨著人們生活水平的提高，人們對(duì)水產(chǎn)品的需求日益增長，這就要求加快水產(chǎn)養(yǎng) 殖業(yè)的健康發(fā)展，而育苗問題卻是目前水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)中的重要環(huán)節(jié)。刺參作為北方水產(chǎn)養(yǎng)殖 的重要產(chǎn)品，具有很高的營養(yǎng)保健和醫(yī)用價(jià)值。近10余年來，隨著全球海參自然資源日趨 枯竭與國內(nèi)海參消費(fèi)持續(xù)增長，國內(nèi)刺參養(yǎng)殖呈現(xiàn)迅猛發(fā)展的態(tài)勢，這促使了工廠化育苗 技術(shù)的產(chǎn)生、發(fā)展和成熟。刺參幼蟲發(fā)育到一定階段，具有附著變態(tài)的能力，遇到合適的附 著基，完成附著變態(tài)反應(yīng)。在人工刺參育苗生產(chǎn)中，幼蟲在附著變態(tài)階段對(duì)外界環(huán)境因子的 變化比較敏感，容易引起幼蟲大量死亡。幼蟲附著變態(tài)成功與否往往決定著出苗量和育苗 的成敗。因此提高幼蟲的附著變態(tài)率，減少幼苗死亡成為人工育苗中一個(gè)亟待解決的問題。 殼寡糖是源于海洋蝦蟹殼提取的一種氨基寡聚糖，具有抑制腸道有害菌生長、促進(jìn)有益菌 增殖、抗氧化、促進(jìn)吸收等多項(xiàng)生理功能，有望在刺參育苗階段加以應(yīng)用。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0003] 為解決現(xiàn)有技術(shù)的不足，本發(fā)明的目的在于提供一種操作簡單，可有效提高刺參 幼蟲附著變態(tài)率的方法。
[0004] 為實(shí)現(xiàn)上述目標(biāo)，本發(fā)明采用如下的技術(shù)方案：
[0005] -種應(yīng)用海洋寡糖提高刺參幼蟲附著變態(tài)率的方法，包括以下步驟：
[0006] ( -）、準(zhǔn)備殼寡糖培養(yǎng)液：將殼寡糖溶于海水中配成濃度0. 001-1. 0克/升的工 作液，以未添加殼寡糖的海水為對(duì)照，每組至少設(shè)置三個(gè)平行處理；
[0007] (二）、殼寡糖培養(yǎng)液中誘導(dǎo)幼蟲：用200目篩絹取發(fā)育到樽形幼蟲時(shí)期的刺參幼 蟲，放到步驟（一）的培養(yǎng)液中通氧氣培養(yǎng)，誘導(dǎo)培養(yǎng)時(shí)間為8-24小時(shí)；
[0008] (三）、普通海水繼續(xù)培養(yǎng)：將經(jīng)步驟（二）誘導(dǎo)后的刺參幼蟲用200目篩絹撈出， 放到設(shè)置有聚乙烯附著板的海水中繼續(xù)培養(yǎng)；
[0009] (四）觀察計(jì)數(shù)和計(jì)算附著變態(tài)率：經(jīng)殼寡糖培養(yǎng)液誘導(dǎo)和普通海水繼續(xù)培養(yǎng)后， 統(tǒng)計(jì)聚乙烯附著板上刺參幼苗攝食后所留空斑的數(shù)目，附著變態(tài)率=(附著變態(tài)幼蟲數(shù)/ 總幼蟲數(shù)）X100%，附著變態(tài)提高率=試驗(yàn)組幼蟲附著變態(tài)率平均值-對(duì)照組幼蟲附著變 態(tài)率平均值。
[0010] 上述的提高刺參幼苗附著率的方法，其特征在于，在步驟（一）中，殼寡糖聚合度 在2~30之間，脫乙酰度在90%以上，平均分子量在300~6000Da之間。
[0011] 上述的提高刺參幼苗附著率的方法，其特征在于，在步驟（二）中，幼蟲培養(yǎng)密度 為150-300個(gè)/L，殼寡糖誘導(dǎo)刺參幼苗培養(yǎng)時(shí)間為8-24小時(shí)。
[0012] 上述的提高刺參幼苗附著率的方法，其特征在于，在步驟（三）中，幼蟲的培養(yǎng)密 度為150-300個(gè)/L，每升海水中至少放置表面積至少為0. 2平方米的（優(yōu)選0. 2-0. 5)聚乙 烯附著板。
[0013] 上述的提高刺參幼苗附著率的方法，其特征在于：在步驟（三）中，餌料為鼠尾藻、 海洋紅酵母、角毛藻和無菌底泥中的一種一種或二種以上。
[0014] 本發(fā)明的有益之處在于：殼寡糖屬于海洋蝦蟹殼來源的動(dòng)物寡糖，使用安全無毒， 整個(gè)誘導(dǎo)處理過程操作簡便，易于實(shí)現(xiàn)，提高刺參苗種的出苗率，減少刺參幼苗在附著變態(tài) 中的死亡，有效增加了刺參育苗的經(jīng)濟(jì)效益。
【具體實(shí)施方式】
[0015] 下面對(duì)本發(fā)明的實(shí)施例作詳細(xì)說明，本實(shí)施例在以本發(fā)明技術(shù)方案為前提下進(jìn)行 實(shí)施，給出了詳細(xì)的實(shí)施方案和具體的操作過程，但本發(fā)明的保護(hù)范圍不限于下述的實(shí)施 例。
[0016] 實(shí)施例1-4
[0017] -、準(zhǔn)備培養(yǎng)液：將殼寡糖溶于海水中得到工作液，工作液的濃度依次為0. 001克 /升、0. 01克/升、0. 1克/升、1. 0克/升，然后取1升工作液放置于2升燒杯中，每個(gè)濃度 設(shè)置三個(gè)平行處理；同時(shí)，以未添加殼寡糖的海水為對(duì)照組，取1升海水放置于2升燒杯中， 設(shè)置三個(gè)平行處理。
[0018] 二、培養(yǎng)液中誘導(dǎo)幼蟲：用200目篩絹取發(fā)育到樽形幼蟲時(shí)期的刺參幼蟲，放到步 驟一中的培養(yǎng)液中充氧培養(yǎng)，每個(gè)燒杯中放置300個(gè)幼蟲，誘導(dǎo)時(shí)間為8小時(shí)。
[0019] 三、普通海水繼續(xù)培養(yǎng)：將經(jīng)步驟二誘導(dǎo)后的幼蟲用200目篩絹撈出，放到設(shè)置有 兩片聚乙烯附著板的1升普通海水中繼續(xù)培養(yǎng)，幼蟲的培養(yǎng)密度為300個(gè)/升，餌料為鼠尾 藻、海洋紅酵母、角毛藻和無菌底泥。
[0020] 四、觀察計(jì)數(shù)：刺參幼蟲經(jīng)普通海水培養(yǎng)40小時(shí)后觀察計(jì)數(shù)，統(tǒng)計(jì)聚乙烯附著板 上刺參幼蟲攝食后所留空斑的數(shù)目。附著變態(tài)率=(附著變態(tài)幼蟲數(shù)/總幼蟲數(shù)）X100%， 附著變態(tài)提高率=試驗(yàn)組幼蟲附著變態(tài)率平均值-對(duì)照組幼蟲附著變態(tài)率平均值。
[0021] 不同濃度的殼寡糖誘導(dǎo)幼蟲8小時(shí)，對(duì)刺參樽形幼蟲附著變態(tài)率提高見表1。
[0022] 表1不同濃度殼寡糖誘導(dǎo)8小時(shí)對(duì)刺參附著變態(tài)率的影響
[0023]
[0025] 實(shí)施例5-8
[0026] -、準(zhǔn)備培養(yǎng)液：將殼寡糖溶于海水中得到工作液，工作液的濃度依次為0. 001克 /升、0. 01克/升、0. 1克/升、1. 0克/升，然后取1升工作液放置于2升燒杯中，每個(gè)濃度 設(shè)置三個(gè)平行處理；同時(shí)，以未添加殼寡糖的海水為對(duì)照組，取1升海水放置于2升燒杯中， 設(shè)置三個(gè)平行處理。
[0027] 二、培養(yǎng)液中誘導(dǎo)幼蟲：用200目篩絹取發(fā)育到樽形幼蟲時(shí)期的刺參幼蟲，放到步 驟一中的培養(yǎng)液中充氧培養(yǎng)，每個(gè)燒杯中放置300個(gè)幼蟲，誘導(dǎo)時(shí)間為16小時(shí)。
[0028] 三、普通海水繼續(xù)培養(yǎng)：將經(jīng)步驟二誘導(dǎo)后的幼蟲用200目篩絹撈出，放到設(shè)置有 兩片聚乙烯附著板的1升普通海水中繼續(xù)培養(yǎng)，幼蟲的培養(yǎng)密度為300個(gè)/升，餌料為鼠尾 藻、海洋紅酵母、角毛藻和無菌底泥。
[0029] 四、觀察計(jì)數(shù)：刺參幼蟲經(jīng)普通海水培養(yǎng)32小時(shí)后觀察計(jì)數(shù)，統(tǒng)計(jì)聚乙烯附著板 上刺參幼蟲攝食后所留空斑的數(shù)目。附著變態(tài)率=(附著變態(tài)幼蟲數(shù)/總幼蟲數(shù)）X100%， 附著變態(tài)提高率=試驗(yàn)組幼蟲附著變態(tài)率平均值-對(duì)照組幼蟲附著變態(tài)率平均值。
[0030] 不同濃度殼寡糖誘導(dǎo)幼蟲16小時(shí)，對(duì)刺參樽形幼蟲附著變態(tài)率提高見表2。
[0031] 表2不同濃度殼寡糖誘導(dǎo)16小時(shí)對(duì)刺參附著變態(tài)率的影響
[0032]
[0033] 實(shí)施例 9-12
[0034] 一、準(zhǔn)備培養(yǎng)液：將殼寡糖溶于海水中得到工作液，工作液的濃度依次為0. 001克 /升、0. 01克/升、0. 1克/升、1. 0克/升，然后取1升工作液放置于2升燒杯中，每個(gè)濃度 設(shè)置三個(gè)平行處理；同時(shí)，以未添加殼寡糖的海水為對(duì)照組，取1升海水放置于2升燒杯中， 設(shè)置三個(gè)平行處理。
[0035] 二、培養(yǎng)液中誘導(dǎo)幼蟲：用200目篩絹取發(fā)育到樽形幼蟲時(shí)期的刺參幼蟲，放到步 驟一中的培養(yǎng)液中充氧培養(yǎng)，每個(gè)燒杯中放置300個(gè)幼蟲，誘導(dǎo)時(shí)間為24小時(shí)。
[0036] 三、普通海水繼續(xù)培養(yǎng)：將經(jīng)步驟二誘導(dǎo)后的幼蟲用200目篩絹撈出，放到設(shè)置有 兩片聚乙烯附著板的1升普通海水中繼續(xù)培養(yǎng)，幼蟲的培養(yǎng)密度為300個(gè)/升，餌料為鼠尾 藻、海洋紅酵母、角毛藻和無菌底泥。
[0037] 四、觀察計(jì)數(shù)：刺參幼蟲經(jīng)普通海水培養(yǎng)24小時(shí)后觀察計(jì)數(shù)，統(tǒng)計(jì)聚乙烯附著板 上刺參幼蟲攝食后所留空斑的數(shù)目。附著變態(tài)率=(附著變態(tài)幼蟲數(shù)/總幼蟲數(shù)）X100%， 附著變態(tài)提高率=試驗(yàn)組幼蟲附著變態(tài)率平均值-對(duì)照組幼蟲附著變態(tài)率平均值。
[0038] 不同濃度殼寡糖誘導(dǎo)幼蟲24小時(shí)，對(duì)刺參樽形幼蟲附著變態(tài)率提高見表3。
[0039] 表3不同濃度殼寡糖誘導(dǎo)24小時(shí)對(duì)刺參附著變態(tài)率的影響
[0040]
[0041] 由實(shí)施例1-12的統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)可知，以不同濃度的殼寡糖工作液誘導(dǎo)刺參樽形幼蟲， 幼參的附著變態(tài)率有了不同程度的提高，尤其是濃度為〇. 1克/升的殼寡糖誘導(dǎo)刺參幼蟲 24小時(shí)，對(duì)幼蟲附著變態(tài)率的影響最為明顯，附著變態(tài)率提高了 13.6%。同時(shí)，本發(fā)明采用 的殼寡糖來源于海洋蝦蟹殼，無毒副作用，不會(huì)對(duì)刺參幼蟲產(chǎn)生不良的影響，降低了人工誘 導(dǎo)刺參幼蟲附著變態(tài)的成本，減少刺參幼蟲在附著變態(tài)過程中的死亡，提高刺參幼苗的出 苗率，增加刺參育苗的經(jīng)濟(jì)收益。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種應(yīng)用海洋寡糖提高刺參幼蟲附著變態(tài)率的方法，其特征在于，包括以下步驟： (一） 、準(zhǔn)備殼寡糖培養(yǎng)液：將殼寡糖溶于海水中配成濃度0. 001-1. 0克/升的工作液； (二） 、殼寡糖培養(yǎng)液中誘導(dǎo)幼蟲：取發(fā)育到樽形幼蟲時(shí)期的刺參幼蟲，放到步驟（一） 的培養(yǎng)液中通氧氣培養(yǎng)，誘導(dǎo)培養(yǎng)時(shí)間為8-24小時(shí)； (三） 、普通海水繼續(xù)培養(yǎng)：將經(jīng)步驟（二）誘導(dǎo)后的刺參幼蟲撈出，放到設(shè)置有聚乙烯 附著板的普通海水中繼續(xù)培養(yǎng)。2. 按照權(quán)利要求1所述提高刺參幼苗附著率的方法，其特征在于：在步驟（一）中，殼 寡糖聚合度在2~30之間，脫乙酰度在90%以上，平均分子量在300~6000Da之間。3. 按照權(quán)利要求1所述提高刺參幼苗附著率的方法，其特征在于：在步驟（二）中，幼 蟲培養(yǎng)密度：150-300個(gè)/L。4. 按照權(quán)利要求1所述提高刺參幼苗附著率的方法，其特征在于：在步驟（三）中，幼 蟲的培養(yǎng)密度：150-300個(gè)/L，每升海水中至少放置表面積為0. 2平方米的（優(yōu)選0. 2-0. 5) 聚乙烯附著板。5. 按照權(quán)利要求1所述提高刺參幼苗附著率的方法，其特征在于：在步驟（三）中，餌 料為鼠尾藻、海洋紅酵母、角毛藻和無菌底泥中的一種或二種以上。
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種應(yīng)用海洋寡糖提高刺參幼蟲附著變態(tài)率的方法，其特征在于，包括以下步驟：準(zhǔn)備刺參幼蟲培養(yǎng)液、培養(yǎng)液中誘導(dǎo)刺參幼蟲、普通海水中繼續(xù)培養(yǎng)、觀察計(jì)數(shù)及計(jì)算刺參幼蟲附著變態(tài)率，上述培養(yǎng)液包括：不同濃度的殼寡糖工作液、未添加殼寡糖的對(duì)照海水；上述殼寡糖工作液濃度為0.001-1.0克/升，誘導(dǎo)培養(yǎng)持續(xù)時(shí)間為8-24小時(shí)。本發(fā)明的有益之處在于：殼寡糖屬于海洋蝦蟹殼來源的動(dòng)物寡糖，使用安全無毒，整個(gè)誘導(dǎo)處理過程操作簡便，易于實(shí)現(xiàn)，提高刺參苗種的出苗率，減少刺參幼苗在附著變態(tài)中的死亡，有效增加了刺參育苗的經(jīng)濟(jì)收益。
【IPC分類】A01K61/00
【公開號(hào)】CN105613362
【申請?zhí)枴緾N201410715299
【發(fā)明人】尹恒, 許青松, 程立坤, 李曙光, 王文霞
【申請人】中國科學(xué)院大連化學(xué)物理研究所
【公開日】2016年6月1日
【申請日】2014年12月1日