一種大戟的組織培養(yǎng)快速繁殖方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001 ]本發(fā)明設(shè)及一種植物繁殖方法，特別是一種大戟組織培養(yǎng)快速繁殖方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 大戟,為大戟科植物大戟(Euphorbia pekinensis Rupr.)，多年生常綠草本。根圓 柱狀，長(zhǎng)20-30厘米。花期5-8月，果期6-9月。廣布于全國(guó)（除臺(tái)灣、云南、西藏和新疆），北方 尤為普遍。生于山坡、灌叢、路旁、荒地、草叢、林緣和疏林內(nèi)。根入藥，具有較高的藥用價(jià)值， 約100元/公斤，具有逐水通便，消腫散結(jié)，主治水腫，并有通經(jīng)之效，用于治療慢性腎炎，治 療晚期血吸蟲病腹水或其他肝硬變腹水等癥。近年來其資源遭到了嚴(yán)重破壞，且對(duì)生長(zhǎng)環(huán) 境要求苛刻，隨著市場(chǎng)需求量的不斷增加，野生大戟資源溯臨枯竭了，生產(chǎn)上難W實(shí)現(xiàn)大面 積栽培。采用生物技術(shù)組織培養(yǎng)技術(shù)，可W有效快速地提高大戟種苗的繁殖速度和質(zhì)量，實(shí) 現(xiàn)大戟優(yōu)質(zhì)種苗的工廠化育苗，W滿足生產(chǎn)及藥用上的需要。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0003] 本發(fā)明的目的是提供一種大戟組織培養(yǎng)快速繁殖方法，它能夠快速繁殖出大量適 合移栽的優(yōu)良大戟種苗。
[0004] 本發(fā)明通過W下技術(shù)方案達(dá)到上述目的， 一種大戟組織培養(yǎng)快速繁殖方法，包括W下步驟： (1) 外植體的選擇與消毒：取大戟頂芽作為外植體，依次用2%洗潔精水溶液浸泡5~ lOmin、線狀自來水沖洗5~15min、75%乙醇中表面消毒30~45 s、0.1% Hgcl2(添加了2~3滴 吐溫-20)消毒8~lOmin、無菌水沖洗3~5次，最后用消毒濾紙吸去表面水分，得到外植體，其 中無菌水為經(jīng)高壓滅菌的蒸饋水； (2) 頂芽分化獲得叢生芽快速繁殖培養(yǎng):將步驟(1)得到的外植體接種到MS繁殖培養(yǎng)基 中，在培養(yǎng)溫度為23~26°C，光照強(qiáng)度1400~20001UX，光照時(shí)間為10~12小時(shí)/天的條件下培 養(yǎng)30天，側(cè)芽分化后獲得叢生芽;其中MS繁殖培養(yǎng)基中含0. . 4mg/L的KT、1.0~2. Omg/L的 6-BA、1.0~2. Omg/L的NAA、20~30g/L薦糖和3.8~4.8g/L的瓊脂，培養(yǎng)基的抑值為5.8; (3) 叢生芽壯苗培養(yǎng):將步驟(2)中得到的試管苗叢生芽置于MS壯苗培養(yǎng)基中，在培養(yǎng) 溫度23~26°C，光照強(qiáng)度1400~20001UX，光照時(shí)間為10~12小時(shí)/天的條件下培養(yǎng)40天得到健 壯植株。其中MS壯苗培養(yǎng)基中含0.5~1.5mg/L的6-BA、0.2~0.6mg/L的IAA、20~30g/L薦糖和 3.8~4.8g/L的瓊脂，培養(yǎng)基的抑值為5.8; (4) 健壯植株生根培養(yǎng):將步驟(3)中得到的健壯植株置于MS生根培養(yǎng)基中，在培養(yǎng)溫 度23~26°C，光照強(qiáng)度1400~20001UX，光照時(shí)間為10~12小時(shí)/天的條件下培養(yǎng)40天得到帶根 的完整植株。其中MS生根培養(yǎng)基中含0.5~1.5mg/L的IAA、1.0~2.0 mg/L的IBA、25~30g/L薦 糖和3.8~4.8g/L的瓊脂，培養(yǎng)基的抑值為5.8。
[0005] 采用本發(fā)明所述方法得到的種苗健壯、成活率高，可在短期內(nèi)提供大量適合移栽 的大戟優(yōu)質(zhì)種苗，有效解決了大戟的規(guī)?；鐔栴}。
【具體實(shí)施方式】
[0006] 下面結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明的技術(shù)方案進(jìn)一步說明。
[0007] -種大戟組織培養(yǎng)快速繁殖方法，包括W下步驟： (1)外植體的選擇與消毒：取大戟頂芽作為外植體，依次用2%洗潔精水溶液浸泡5~ lOmin、線狀自來水沖洗5~15min、75%乙醇中表面消毒30~45 s、0.1% Hgcl2(添加了2~3滴 吐溫-20)消毒8~lOmin、無菌水沖洗3~5次，最后用消毒濾紙吸去表面水分，得到外植體，其 中無菌水為經(jīng)高壓滅菌的蒸饋水。
[000引（2)頂芽分化獲得叢生芽快速繁殖培養(yǎng):將步驟(1)得到的外植體接種到MS培養(yǎng)基 中，在培養(yǎng)溫度為23~26°C，光照強(qiáng)度1400~20001UX，光照時(shí)間為10~12小時(shí)/天的條件下培 養(yǎng)30天，側(cè)芽分化后獲得叢生芽。
[0009] 其中 MS繁殖培養(yǎng)基中含0.1 ~0.4mg/L 的 KT、1.0~2. Omg/L 的 6-BA、1.0~2. Omg/L 的 NAA、20~30g/L薦糖和3.8~4.8g/L的瓊脂，培養(yǎng)基的抑值為5.8，觀察發(fā)現(xiàn)，培養(yǎng)基中6-BA和 NAA濃度增加，大戟叢生芽數(shù)均增加;結(jié)果，在培養(yǎng)基中添加0.2mg/L的KT、2. Omg/L的6-BA和 1.5mg/L的NAA叢生芽效果最好。
[0010] 注:芽增殖倍數(shù)=(30天后芽數(shù)一接種時(shí)芽數(shù))/接種時(shí)芽數(shù) (3)叢生芽壯苗培養(yǎng):將步驟(2)中得到的試管苗叢生芽置于MS壯苗培養(yǎng)基中，在培養(yǎng) 溫度23~26°C，光照強(qiáng)度1400~20001UX，光照時(shí)間為10~12小時(shí)/天的條件下培養(yǎng)40天得到健 壯植株。
[0011] 其中MS壯苗培養(yǎng)基中含0.5~1.5mg/L的6-BA、0.2~0.6mg/L的IAA、20~30g/L薦糖和 3.8~4.8g/L的瓊脂，培養(yǎng)基的抑值為5.8，觀察發(fā)現(xiàn)，培養(yǎng)基中添加 1.0 mg/L的6-BA和0.6mg/ L的IAA時(shí)壯苗效果最好，株高達(dá)到5.37cm。
[0012] (4)健壯植株生根培養(yǎng):將步驟(3)中得到的健壯植株置于MS生根培養(yǎng)基中，在培 養(yǎng)溫度23~26° C，光照強(qiáng)度1400~20001UX，光照時(shí)間為10~12小時(shí)/天的條件下培養(yǎng)40天得到 帶根的完整植株。
[0013] 其中MS生根培養(yǎng)基中含0.5~1.5mg/L的IAA、1.0~2.0 mg/L的IBA、25~30g/L薦糖和 3.8~4.8g/L的瓊脂，培養(yǎng)基的抑值為5.8，觀察發(fā)現(xiàn)，培養(yǎng)基中IAA濃度增加，組培苗的生根 率也增加;培養(yǎng)基中添加2. Omg/L的IBA和1. Omg/L的IAA生根效果最好，生根率達(dá)93.1%，平 均根長(zhǎng)達(dá)到4.49cm。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種大戟的組織培養(yǎng)快速繁殖方法，其特征在于:該方法包括以下步驟： (1) 外植體的選擇與消毒：取大戟頂芽作為外植體，依次用2 %洗潔精水溶液浸泡5~ lOmin、線狀自來水沖洗5~15min、75%乙醇中表面消毒30~45 s、0.1% Hgcl2消毒8~lOmin、 無菌水沖洗3~5次，最后用消毒濾紙吸去表面水分，得到外植體； (2) 頂芽分化獲得叢生芽快速繁殖培養(yǎng):將步驟（1)得到的外植體接種到MS繁殖培養(yǎng)基 中，在培養(yǎng)溫度為23~26° C，光照強(qiáng)度1400~20001ux，光照時(shí)間為10~12小時(shí)/天的條件下培 養(yǎng)30天，側(cè)芽分化后獲得叢生芽； (3) 叢生芽壯苗培養(yǎng):將步驟(2)中得到的試管苗叢生芽置于MS壯苗培養(yǎng)基中，在培養(yǎng) 溫度23~26° C，光照強(qiáng)度1400~20001ux，光照時(shí)間為10~12小時(shí)/天的條件下培養(yǎng)40天得到健 壯植株； (4) 健壯植株生根培養(yǎng):將步驟(3)中得到的健壯植株置于MS生根培養(yǎng)基中，在培養(yǎng)溫 度23~26°C，光照強(qiáng)度1400~20001ux，光照時(shí)間為10~12小時(shí)/天的條件下培養(yǎng)40天得到帶根 的完整植株。2. 如權(quán)利要求1所述的大戟的組織培養(yǎng)快速繁殖方法，其特征在于:所述無菌水為經(jīng)高 壓滅菌的蒸餾水。3. 如權(quán)利要求1所述的大戟的組織培養(yǎng)快速繁殖方法，其特征在于:所述MS繁殖培養(yǎng)基 中含0 · 1~0 · 4mg/L的KT、1 · 0~2 · Omg/L的6-BA、1 · 0~2 · Omg/L的NAA、20~30g/L蔗糖和3 · 8~ 4.8g/L的瓊脂，培養(yǎng)基的pH值為5.8。4. 如權(quán)利要求1所述的大戟的組織培養(yǎng)快速繁殖方法，其特征在于:所述MS壯苗培養(yǎng)基 中含0 · 5~1 · 5mg//L的6-BA、0 · 2~0 · 6mg/L的IAA、20~30g/L蔗糖和3 · 8~4 · 8g/L的瓊脂，培養(yǎng)基 的pH值為5.8。5. 如權(quán)利要求1所述的大戟的組織培養(yǎng)快速繁殖方法，其特征在于:所述MS生根培養(yǎng)基 中含0 · 5~1 · 5mg/L的IAA、1 · 0~2 · 0 mg/L的IBA、25~30g/L蔗糖和3 · 8~4 · 8g/L的瓊脂，培養(yǎng)基 的pH值為5.8。
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種大戟的組織培養(yǎng)快速繁殖方法，包括如下步驟：（1）取大戟頂芽作為外植體進(jìn)行消毒；（2）將消毒后的外植體置于MS基本培養(yǎng)基中誘導(dǎo)得到叢生芽；（3）將所述叢生芽置于MS壯苗培養(yǎng)基中進(jìn)行壯苗培養(yǎng)得到健壯植株；（4）將所述健壯植株置于MS生根培養(yǎng)基中培養(yǎng)得到完整的帶根苗。采用本發(fā)明所述方法得到的種苗健壯、成活率高，可在短期內(nèi)提供大量大戟的優(yōu)質(zhì)種苗，有效解決了大戟的規(guī)?；鐔栴}。<b />
【IPC分類】A01H4/00
【公開號(hào)】CN105660412
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201610108413
【發(fā)明人】李翠, 張占江, 呂惠珍, 繆劍華, 韋瑩, 韋坤華, 李林軒, 王一諾, 肖冬
【申請(qǐng)人】廣西壯族自治區(qū)藥用植物園
【公開日】2016年6月15日
【申請(qǐng)日】2016年2月29日