一種提高千層塔芽孢移栽成活率的方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種提高千層塔芽孢移栽成活率的方法，該方法包括利用千層塔植株外植體獲得千層塔伴生蕨原葉體，將千層塔伴生蕨原葉體轉(zhuǎn)接到青苔基質(zhì)中培養(yǎng)，再利用培養(yǎng)過千層塔伴生蕨的原葉體的青苔基質(zhì)進(jìn)行千層塔芽孢的移栽培養(yǎng)；利用培養(yǎng)過從千層塔中分離出的伴生蕨的青苔來培養(yǎng)千層塔的芽孢，提高了千層塔芽孢的移栽成活率。本發(fā)明獨特易行，為千層塔的人工繁殖提供重要途徑。
【專利說明】
_種提局!千層塔芽孢移栽成活率的方法
技術(shù)領(lǐng)域
[0001]本發(fā)明屬于生物技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及種一種提高千層塔(Huperziaserrata(Thunb.)Trev.)芽孢移栽成活率的方法。
【背景技術(shù)】
[0002]千層塔(Huperziaserrata(Thunb.)Trev.)為石松目(Lycopodiales)石杉科(Lycopodiaceae)石杉屬(Lycopodium L.)多年生草本蕨類植物。具有散瘀消腫、解毒和止痛的功效。1927年我國科技工作者報道了從該植物中分離的石杉堿甲具有橫紋肌松弛作用，之后的大量研究發(fā)現(xiàn)石杉堿甲是一種高效、低毒、可逆和高選擇性的乙酰膽堿酯酶抑制劑?，F(xiàn)在，被石杉堿甲及經(jīng)作為治療阿爾茨海默病(AD,Alzheimer disease)的藥物，同時在美國被用做益智的營養(yǎng)保健品。
[0003]但是，千層塔自然資源嚴(yán)重短缺。千層塔生長緩慢，野生狀態(tài)下千層塔的繁殖主要以孢子繁殖為主，孢子萌發(fā)周期長，萌發(fā)后屬地下生配子體，需6-15年才能成熟。因此極大地限制了千層塔野生資源的再生。目前，石杉堿甲的提取主要依賴于野生資源，提取率僅為
0.006 % -0.1 %。因此，市場對千層塔的需求量極大，迅速導(dǎo)致千層塔的自然資源處于滅絕的邊緣。人們試圖利用組織培養(yǎng)技術(shù)或者扦插的手段進(jìn)行千層塔的快速繁殖，但是都進(jìn)展緩慢。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明的目的在于，提供一種千層塔芽孢移栽成活率的方法，該方法能夠顯著提高千層塔芽孢移栽成活率，為千層塔的人工繁殖提供重要途徑。
[0005]為了實現(xiàn)上述任務(wù)，本發(fā)明采取如下的技術(shù)解決方案:
[0006]—種提高千層塔芽孢移栽成活率的方法，該方法包括利用千層塔外植體獲得千層塔伴生蕨原葉體，將千層塔伴生蕨原葉體轉(zhuǎn)接到青苔基質(zhì)中培養(yǎng)得到千層塔芽孢移栽青苔基質(zhì)，再利用千層塔芽孢移栽青苔基質(zhì)進(jìn)行千層塔芽孢的移栽培養(yǎng)。
[0007]具體的，所述的千層塔外植體包括千層塔葉片或千層塔莖。
[0008]更具體的，所述的青苔基質(zhì)為干青苔飽和吸水后得到的青苔。
[0009]進(jìn)一步的，所述的利用千層塔外植體獲得千層塔伴生蕨原葉體包括:取千層塔外植體滅菌后接種到MS固體培養(yǎng)基上培養(yǎng)直至生長出千層塔伴生蕨原葉體，培養(yǎng)環(huán)境溫度為28 °C，培養(yǎng)環(huán)境光照強(qiáng)度為100Lux，培養(yǎng)光周期為12小時。
[0010]更進(jìn)一步的，千層塔芽孢移栽青苔基質(zhì)的獲得包括:將體積為0.3?0.5cm3的千層塔伴生蕨原葉體轉(zhuǎn)接到青苔基質(zhì)上培養(yǎng)，一周后將青苔基質(zhì)用含有聚乙烯吡咯烷酮的MS培養(yǎng)液填充飽和后繼續(xù)培養(yǎng)，培養(yǎng)環(huán)境濕度為60%?75%，培養(yǎng)環(huán)境溫度25°C，培養(yǎng)環(huán)境光照強(qiáng)度為2000LUX，培養(yǎng)光周期為8小時，繼續(xù)培養(yǎng)三個月后即得千層塔芽孢移栽青苔基質(zhì)。
[0011]具體的，所述的含有聚乙烯吡咯烷酮MS培養(yǎng)液中聚乙烯吡咯烷酮的濃度為50?150mg/Lo
[0012]另外，利用千層塔芽孢移栽青苔基質(zhì)進(jìn)行千層塔芽孢的移栽培養(yǎng)包括:將千層塔芽孢移栽青苔基質(zhì)用抗壞血酸溶液噴施飽和后移栽千層塔芽苞，再用含有吲哚丁酸的MS培養(yǎng)液噴施飽和千層塔芽孢移栽青苔基質(zhì)進(jìn)行千層塔芽孢的培養(yǎng)，培養(yǎng)環(huán)境濕度為60%?75%，培養(yǎng)環(huán)境溫度為25°C，培養(yǎng)光照強(qiáng)度為2000LuX，培養(yǎng)光周期8小時。
[0013]具體的，所述的抗壞血酸溶液的濃度為150?250mg/L。
[0014]更具體的，含有吲哚丁酸的MS培養(yǎng)液中吲哚丁酸濃度為2?4mg/L。
[0015]本發(fā)明的特點是:
[0016]I)利用千層塔植株進(jìn)行千層塔伴生蕨原葉體的培養(yǎng)，千層塔伴生蕨原葉體生長過的青苔基質(zhì)培養(yǎng)芽孢。在自然生境中伴生蕨本身是和千層塔伴生的植物，在長期的生存過程中形成了其共有的促進(jìn)生長的物質(zhì)基礎(chǔ)。本發(fā)明巧妙的利用千層塔伴生蕨原葉體生長過的青苔來栽培千層塔芽孢，芽孢因為利用伴生蕨生長過程中分泌的物質(zhì)而促其生長；
[0017]2)利用聚乙烯吡咯烷酮、抗壞血酸和吲哚乙酸處理青苔，明顯提高了千層塔芽孢的移栽效率；
[0018]3)無論是用千層塔的葉片還是用千層塔的莖培養(yǎng)獲得的伴生蕨的原葉體，對千層塔芽孢的移栽差異不大。最佳的參數(shù)是:聚乙烯吡咯烷酮的濃度為100mg/L，抗壞血酸的濃度為200mg/L，抗壞血酸的濃度為3mg/L。在這樣的條件下，千層塔芽孢的移栽成活率達(dá)到96%。
【附圖說明】
[0019]圖1為本發(fā)明的提高千層塔芽孢移栽成活率的具體操作流程圖；
[0020]以下結(jié)合說明書附圖和【具體實施方式】對本發(fā)明做具體說明。
【具體實施方式】
[0021]芽孢繁殖是石杉科植物常見的繁殖方式，是生長在植株上的一種營養(yǎng)繁殖，國外已有報道芽孢的形成機(jī)理，繁殖作用等。王德立等(2011，安徽農(nóng)業(yè)科學(xué))初步對千層塔的芽孢移栽進(jìn)行了研究，但是繁殖效率不是很高。發(fā)明人在前期研究基礎(chǔ)上，從千層塔外植體中培養(yǎng)出伴生蕨原葉體，再利用生長過伴生蕨原葉體的青苔來培養(yǎng)千層塔的芽孢，這樣芽孢移栽的成活率顯著提高。
[0022]結(jié)合圖1，本發(fā)明的提高千層塔外植體表面滅菌效率的方法，按以下步驟操作:
[0023]步驟一，千層塔伴生蕨原葉體的獲得:
[0024]取千層塔的葉片或者莖，用常規(guī)植物外植體滅菌法進(jìn)行表面滅菌，然后接種到MS固體培養(yǎng)基上，放置到培養(yǎng)室中的培養(yǎng)，培養(yǎng)條件為:溫度為280C，光照強(qiáng)度為lOOOLux，光周期12小時。培養(yǎng)2個月后，從千層塔外植體邊緣長出伴生蕨的原葉體。
[0025]步驟二，用于培養(yǎng)千層塔芽孢的青苔基質(zhì)的獲得:
[0026]待原葉體長至體積為0.3?0.5cm3時，將其轉(zhuǎn)接到青苔基質(zhì)中。一周以后用含有50?150mg//L聚乙烯吡咯烷酮的MS培養(yǎng)液噴撒飽和基質(zhì)后，再放置到培養(yǎng)室培養(yǎng)。培養(yǎng)條件為:濕度為60 %?75 %，溫度25 0C，光照強(qiáng)度為2000LUX、光周期8小時。培養(yǎng)過程中，用自來水澆灌，以保證青苔濕潤。培養(yǎng)30天后的青苔可用于千層塔芽孢的移栽。
[0027]步驟三，千層塔芽孢的移栽:
[0028]將培養(yǎng)有伴生蕨原葉體的青苔基質(zhì)用150?250mg/L抗壞血酸溶液噴灑潤濕飽和，將千層塔的芽孢移栽于其中，再用含有2?4mg//L吲哚丁酸的MS培養(yǎng)液噴撒飽和基質(zhì)，然后放置于培養(yǎng)室培養(yǎng)。培養(yǎng)條件為:濕度為60%?75%，溫度為25°C，光照強(qiáng)度為2000Lux、光周期8小時。培養(yǎng)過程中，用自來水澆灌，以保證青苔濕潤。60天后統(tǒng)計已成活芽孢的數(shù)量，并計算移栽成活率。
[0029]MS培養(yǎng)基組成:I.65g/L的NH4NO3、I.9g/L的ΚΝ03、0.17g/L的KH2POl0.37g/L的MgS047H20、0.44g/l的CaCl22H20、0.83mg/L的K1、6.2mg/L的H3B03、22.3mg/L的MnS044H20、8.6mg/L的ZnS047H20、0.25mg/L的Na2Mo042H20、0.025mg/L的CuC125H20、0.025mg/L的C0CI26H2O、37.3mg/L 的 Na2EDTA、27.8mg/L 的 FeS047H20。
[0030]這里的各成分是按照每升液體計算的，MS是組織培養(yǎng)中比較常規(guī)的培養(yǎng)基，如果是固體MS培養(yǎng)基，在上述成分中添加瓊脂粉;如果是MS培養(yǎng)液即按照上述成分進(jìn)行配制，含有聚乙烯吡咯烷酮MS培養(yǎng)液即在原有的MS培養(yǎng)液中加入聚乙烯吡咯烷酮即得，含有吲哚丁酸的MS培養(yǎng)液即在原有的MS培養(yǎng)液中加入吲哚丁酸即得。
[0031 ]青苔基質(zhì)為市面上購買的干燥青苔，經(jīng)過自來水充分吸水飽和后得到的青苔，與平常養(yǎng)花使用的青苔基質(zhì)相同。
[0032]移栽成活率是指:經(jīng)過千層塔芽孢移栽青苔基質(zhì)培養(yǎng)60天后，已經(jīng)生根的芽孢數(shù)量占總芽孢數(shù)的百分比。
[0033]千層塔外植體的常規(guī)表面滅菌包括:先用自來水沖洗千層塔外植體表面的臟污，然后在超凈工作臺上用體積分?jǐn)?shù)為70%的酒精表面滅菌30?60s，再用體積分?jǐn)?shù)為0.1%的氯化汞溶液滅菌8分鐘，最后用無菌水沖洗3?5次即完成千層塔外植體的表面滅菌
[0034]以下結(jié)合具體實例對本發(fā)明做具體說明:
[0035]實施例1:
[0036]將千層塔的芽孢移栽于用自來水充分濕潤的青苔基質(zhì)中，然后放置于培養(yǎng)室培養(yǎng)。培養(yǎng)條件為:濕度大于75%，溫度25°C，光照強(qiáng)度為2000LuX、光周期8小時。培養(yǎng)過程中，用自來水澆灌，以保證青苔濕潤。60天后千層塔芽孢的移栽成活率為32%。
[0037]實施例2:
[0038]將千層塔的芽孢移栽于用含有3mg//L吲哚丁酸的MS培養(yǎng)液噴灑過的青苔基質(zhì)中，然后放置于培養(yǎng)室培養(yǎng)。培養(yǎng)條件為:濕度大于75%，溫度25 °C，光照強(qiáng)度為2000LUX、光周期8小時。培養(yǎng)過程中，用自來水澆灌，以保證青苔濕潤。60天后千層塔芽孢的移栽成活率為46%。
[0039]實施例3:
[0040]步驟一，千層塔中伴生蕨原葉體的獲得:
[0041 ]取千層塔的葉片，用常規(guī)植物外植體滅菌法進(jìn)行表面滅菌，然后將表面滅菌的千層塔葉片接種到MS固體培養(yǎng)基上，放置到培養(yǎng)室中的培養(yǎng)，培養(yǎng)條件為:溫度為28°C，光照強(qiáng)度為lOOOLux，光周期12小時。培養(yǎng)2個月后，從千層塔葉片邊緣長出伴生蕨的原葉體。
[0042]步驟二，用于培養(yǎng)千層塔芽孢的青苔基質(zhì)的獲得:
[0043]待原葉體長至0.5cm3以上，將其轉(zhuǎn)接到青苔基質(zhì)中培養(yǎng)。培養(yǎng)條件為:濕度大于75%，溫度25°C，光照強(qiáng)度為2000LUX、光周期8小時。培養(yǎng)過程中，用自來水澆灌，以保證青苔濕潤。培養(yǎng)30天后的青苔可用于千層塔芽孢的移栽。
[0044]步驟三，千層塔芽孢的移栽:
[0045]將千層塔的芽孢移栽于有千層塔原葉生長的青苔基質(zhì)中，然后放置于培養(yǎng)室培養(yǎng)。培養(yǎng)條件為:濕度大于75%，溫度25°C，光照強(qiáng)度為2000LuX、光周期8小時。培養(yǎng)過程中，用自來水澆灌，以保證青苔濕潤。
[0046]60天后千層塔芽孢的移栽成活率為57 %。
[0047]實施例4:
[0048]步驟一，千層塔中伴生蕨原葉體的獲得:
[0049]取千層塔的葉片，用常規(guī)植物外植體滅菌法進(jìn)行表面滅菌，然后接種到MS固體培養(yǎng)基上，放置到培養(yǎng)室中的培養(yǎng)，培養(yǎng)條件為:溫度為28°C，光照強(qiáng)度為lOOOLux，光周期12小時。培養(yǎng)2個月后，從千層塔葉片邊緣長出伴生蕨的原葉體。
[0050]步驟二，用于培養(yǎng)千層塔芽孢的青苔基質(zhì)的獲得:
[0051 ]待原葉體長至0.5cm3以上，將其轉(zhuǎn)接到青苔基質(zhì)中。一周以后用含有50mg/L聚乙烯吡咯烷酮的MS培養(yǎng)液噴撒一次，再放置到培養(yǎng)室培養(yǎng)。培養(yǎng)條件為:濕度大于75%，溫度25°C，光照強(qiáng)度為2000LUX、光周期8小時。培養(yǎng)過程中，用自來水澆灌，以保證青苔濕潤。培養(yǎng)30天后的青苔可用于千層塔芽孢的移栽。
[0052]步驟三，千層塔芽孢的移栽:
[0053]將培養(yǎng)有伴生蕨原葉體的青苔用150mg/L抗壞血酸噴灑潤濕，再將千層塔的芽孢移栽于其中，用含有2mg/L吲哚丁酸的MS培養(yǎng)液噴撒一次，然后放置于培養(yǎng)室培養(yǎng)。培養(yǎng)條件為:濕度大于75%，溫度25°C，光照強(qiáng)度為2000LuX、光周期8小時。培養(yǎng)過程中，用自來水澆灌，以保證青苔濕潤。
[0054]60天后千層塔芽孢的移栽成活率為73%。
[0055]實施例5:
[0056]步驟一:同實施例4。
[0057]步驟二，用于培養(yǎng)千層塔芽孢的青苔基質(zhì)的獲得:
[0058]待原葉體長至0.5cm3以上，將其轉(zhuǎn)接到青苔基質(zhì)中。一周以后用含有10mg/!聚乙烯吡咯烷酮的MS培養(yǎng)液噴撒一次，再放置到培養(yǎng)室培養(yǎng)。培養(yǎng)條件為:濕度大于75%，溫度25°C，光照強(qiáng)度為2000LUX、光周期8小時。培養(yǎng)過程中，用自來水澆灌，以保證青苔濕潤。培養(yǎng)30天后的青苔可用于千層塔芽孢的移栽。
[0059]步驟三，千層塔芽孢的移栽:
[0060]將培養(yǎng)有伴生蕨原葉體的青苔用200mg/L抗壞血酸噴灑潤濕，再將千層塔的芽孢移栽于其中，用含有3mg/L吲哚丁酸的MS培養(yǎng)液噴撒一次，然后放置于培養(yǎng)室培養(yǎng)。培養(yǎng)條件為:濕度大于75%，溫度25°C，光照強(qiáng)度為2000LuX、光周期8小時。培養(yǎng)過程中，用自來水澆灌，以保證青苔濕潤。
[0061]60天后千層塔芽孢的移栽成活率為96%。
[0062]實施例6:
[0063]步驟一:同實施例4。
[0064]步驟二，用于培養(yǎng)千層塔芽孢的青苔基質(zhì)的獲得:
[0065]待原葉體長至0.5cm3以上，將其轉(zhuǎn)接到青苔基質(zhì)中。一周以后用含有10mg/!聚乙烯吡咯烷酮的MS培養(yǎng)液噴撒一次，再放置到培養(yǎng)室培養(yǎng)。培養(yǎng)條件為:濕度大于75%，溫度25°C，光照強(qiáng)度為2000Lux、光周期8小時。培養(yǎng)過程中，用自來水澆灌，以保證青苔濕潤。培養(yǎng)30天后的青苔可用于千層塔芽孢的移栽。
[0066]步驟三，千層塔芽孢的移栽:
[0067]將培養(yǎng)有伴生蕨原葉體的青苔用250mg/L抗壞血酸噴灑潤濕，再將千層塔的芽孢移栽于其中，用含有4mg/Ln引噪丁酸的MS培養(yǎng)液噴撒一次，然后放置于培養(yǎng)室培養(yǎng)。培養(yǎng)條件為:濕度大于75%，溫度25°C，光照強(qiáng)度為2000LuX、光周期8小時。培養(yǎng)過程中，用自來水澆灌，以保證青苔濕潤。
[0068]60天后千層塔芽孢的移栽成活率為80%。
[0069]實施例7:
[0070]步驟一:同實施例4。
[0071]步驟二，用于培養(yǎng)千層塔芽孢的青苔基質(zhì)的獲得:
[0072]待原葉體長至0.5cm3以上，將其轉(zhuǎn)接到青苔基質(zhì)中。一周以后用含有150mg//L聚乙烯吡咯烷酮的MS培養(yǎng)液噴撒一次，再放置到培養(yǎng)室培養(yǎng)。培養(yǎng)條件為:濕度大于75%，溫度25°C，光照強(qiáng)度為2000LUX、光周期8小時。培養(yǎng)過程中，用自來水澆灌，以保證青苔濕潤。培養(yǎng)30天后的青苔可用于千層塔芽孢的移栽。
[0073]步驟三，千層塔芽孢的移栽:
[0074]將培養(yǎng)有伴生蕨原葉體的青苔用200mg/L抗壞血酸噴灑潤濕，再將千層塔的芽孢移栽于其中，用含有3mg/L吲哚丁酸的MS培養(yǎng)液噴撒一次，然后放置于培養(yǎng)室培養(yǎng)。培養(yǎng)條件為:濕度大于75%，溫度25°C，光照強(qiáng)度為2000LuX、光周期8小時。培養(yǎng)過程中，用自來水澆灌，以保證青苔濕潤。
[0075]60天后千層塔芽孢的移栽成活率為85%。
[0076]實施例8:
[0077]步驟一，千層塔中伴生蕨原葉體的獲得:
[0078]取千層塔的莖，用常規(guī)植物外植體滅菌法進(jìn)行表面滅菌，然后接種到MS固體培養(yǎng)基上，放置到培養(yǎng)室中的培養(yǎng)，培養(yǎng)條件為:溫度為280C，光照強(qiáng)度為lOOOLux，光周期12小時。培養(yǎng)2個月后，從千層塔莖邊緣長出伴生蕨的原葉體。
[0079]步驟二，用于培養(yǎng)千層塔芽孢的青苔基質(zhì)的獲得:
[0080]待原葉體長至0.5cm3以上，將其轉(zhuǎn)接到青苔基質(zhì)中。一周以后用含有50mg/L聚乙烯吡咯烷酮的MS培養(yǎng)液噴撒一次，再放置到培養(yǎng)室培養(yǎng)。培養(yǎng)條件為:濕度大于75%，溫度25°C，光照強(qiáng)度為2000LUX、光周期8小時。培養(yǎng)過程中，用自來水澆灌，以保證青苔濕潤。培養(yǎng)30天后的青苔可用于千層塔芽孢的移栽。
[0081 ]步驟三，千層塔芽孢的移栽:
[0082]將培養(yǎng)有伴生蕨原葉體的青苔用150mg/L抗壞血酸噴灑潤濕，再將千層塔的芽孢移栽于其中，用含有4mg/Ln引噪丁酸的MS培養(yǎng)液噴撒一次，然后放置于培養(yǎng)室培養(yǎng)。培養(yǎng)條件為:濕度大于75%，溫度25°C，光照強(qiáng)度為2000LuX、光周期8小時。培養(yǎng)過程中，用自來水澆灌，以保證青苔濕潤。
[0083]60天后千層塔芽孢的移栽成活率為73%。
[0084]實施例9:
[0085]同實施例5，不同之處是將步驟一中千層塔的葉片換成千層塔的莖。
[0086]千層塔芽孢的移栽成活率為93%。
[0087]實施例10:
[0088]步驟一:同實施例8。
[0089]步驟二，用于培養(yǎng)千層塔芽孢的青苔基質(zhì)的獲得:
[0090]待原葉體長至0.5cm3以上，將其轉(zhuǎn)接到青苔基質(zhì)中。一周以后用含有150mg//L聚乙烯吡咯烷酮的MS培養(yǎng)液噴撒一次，再放置到培養(yǎng)室培養(yǎng)。培養(yǎng)條件為:濕度大于75%，溫度25°C，光照強(qiáng)度為2000LUX、光周期8小時。培養(yǎng)過程中，用自來水澆灌，以保證青苔濕潤。培養(yǎng)30天后的青苔可用于千層塔芽孢的移栽。
[0091]步驟三，千層塔芽孢的移栽:
[0092]將培養(yǎng)有伴生蕨原葉體的青苔用250mg/L抗壞血酸噴灑潤濕，再將千層塔的芽孢移栽于其中，用含有2mg/L吲哚丁酸的MS培養(yǎng)液噴撒一次，然后放置于培養(yǎng)室培養(yǎng)。培養(yǎng)條件為:濕度大于75%，溫度25°C，光照強(qiáng)度為2000LuX、光周期8小時。培養(yǎng)過程中，用自來水澆灌，以保證青苔濕潤。
[0093]60天后千層塔芽孢的移栽成活率為78%。
【主權(quán)項】
1.一種提高千層塔芽孢移栽成活率的方法，其特征在于，該方法包括利用千層塔外植體獲得千層塔伴生蕨原葉體，將千層塔伴生蕨原葉體轉(zhuǎn)接到青苔基質(zhì)中培養(yǎng)得到千層塔芽孢移栽青苔基質(zhì)，再利用千層塔芽孢移栽青苔基質(zhì)進(jìn)行千層塔芽孢的移栽培養(yǎng)。2.如權(quán)利要求1所述的提高千層塔芽孢移栽成活率的方法，其特征在于，所述的千層塔外植體包括千層塔葉片或千層塔莖。3.如權(quán)利要求1或2所述的提高千層塔芽孢移栽成活率的方法，其特征在于，所述的青笞基質(zhì)為干青笞飽和吸水后得到的青笞。4.如權(quán)利要求1或2所述的提高千層塔芽孢移栽成活率的方法，其特征在于，所述的利用千層塔外植體獲得千層塔伴生蕨原葉體包括:取千層塔外植體滅菌后接種到MS固體培養(yǎng)基上培養(yǎng)直至生長出千層塔伴生蕨原葉體，培養(yǎng)環(huán)境溫度為28°C，培養(yǎng)環(huán)境光照強(qiáng)度為lOOOLux，培養(yǎng)光周期為12小時。5.如權(quán)利要求1或2所述的提高千層塔芽孢移栽成活率的方法，其特征在于，千層塔芽孢移栽青苔基質(zhì)的獲得包括:將體積為0.3?0.5cm3的千層塔伴生蕨原葉體轉(zhuǎn)接到青苔基質(zhì)上培養(yǎng)，一周后將青苔基質(zhì)用含有聚乙烯吡咯烷酮的MS培養(yǎng)液填充飽和后繼續(xù)培養(yǎng)，培養(yǎng)環(huán)境濕度為60%?75%，培養(yǎng)環(huán)境溫度25°C，培養(yǎng)環(huán)境光照強(qiáng)度為2000Lux，培養(yǎng)光周期為8小時，繼續(xù)培養(yǎng)30天后即得千層塔芽孢移栽青苔基質(zhì)。6.如權(quán)利要求5所述的提高千層塔芽孢移栽成活率的方法，其特征在于，所述的含有聚乙烯吡咯烷酮MS培養(yǎng)液中聚乙烯吡咯烷酮的濃度為50?150mg/L。7.如權(quán)利要求1或2所述的提高千層塔芽孢移栽成活率的方法，其特征在于，利用千層塔芽孢移栽青苔基質(zhì)進(jìn)行千層塔芽孢的移栽培養(yǎng)包括:將千層塔芽孢移栽青苔基質(zhì)用抗壞血酸溶液噴施飽和后移栽千層塔芽苞，再用含有吲哚丁酸的MS培養(yǎng)液噴施飽和千層塔芽孢移栽青苔基質(zhì)進(jìn)行千層塔芽孢的培養(yǎng)，培養(yǎng)環(huán)境濕度為60 %?75 %，培養(yǎng)環(huán)境溫度為250C，培養(yǎng)光照強(qiáng)度為2000LUX，培養(yǎng)光周期8小時。8.如權(quán)利要求7所述的提高千層塔芽孢移栽成活率的方法，其特征在于，所述的抗壞血酸溶液的濃度為150?2 50mg/L。9.如權(quán)利要求7所述的提高千層塔芽孢移栽成活率的方法，其特征在于，所述的含有吲哚丁酸的MS培養(yǎng)液中吲哚丁酸濃度為2?4mg/L。
【文檔編號】A01H4/00GK105830918SQ201610186943
【公開日】2016年8月10日
【申請日】2016年3月29日
【發(fā)明人】郭斌, 任巖巖, 何瑋, 傅艷萍, 尉亞輝
【申請人】西北大學(xué)