一種獨腳金的組織培養(yǎng)快速繁殖方法
【專利摘要】本發(fā)明提供了一種獨腳金的組織培養(yǎng)快速繁殖方法，主要是通過摘取野生獨腳金的腋芽莖段作為外植體，然后將經(jīng)過滅菌處理的外植體置于誘導(dǎo)培養(yǎng)基上培養(yǎng)至產(chǎn)生不定芽，再將不定芽放入新的誘導(dǎo)培養(yǎng)基上繼代培養(yǎng)以誘導(dǎo)不定芽快速增殖，最后將單株植株放入生根培養(yǎng)基上培養(yǎng)，誘導(dǎo)不定芽生根得到大量繁殖植株。本發(fā)明所公開的獨腳金的組織培養(yǎng)快速繁殖方法能使1個腋芽在2個月內(nèi)產(chǎn)生10?20個新芽，提高了獨腳金的繁殖能力，縮短育苗時間，節(jié)省種植成本,也為獨腳金的工廠化育苗提供了技術(shù)保障。
【專利說明】
一種獨腳金的組織培養(yǎng)快速繁殖方法
技術(shù)領(lǐng)域
[0001]本發(fā)明屬于植物組織培養(yǎng)領(lǐng)域，具體是通過誘導(dǎo)獨腳金的頂芽或腋芽產(chǎn)生不定芽使獨腳金快速繁殖的方法。
【背景技術(shù)】
[0002]獨腳金屬于玄參科獨腳金屬，是一種常用的藥用植物，在治療兒科清肝熱消疳積方面有很大的藥用價值，對肝火旺盛、肝炎、小兒腹瀉、夜盲、厭食癥、抗炎等方面也有一定的藥用價值。獨腳金適于生長在低海拔的荒山草地、田邊、溝谷、耕地等處，它主要分布在我國西南部至東南部各省區(qū)，但各個地區(qū)的野生獨腳金資源稀少，無法滿足現(xiàn)階段的藥用需求，這主要是由于獨腳金的種子微小、發(fā)芽率低、生長緩慢，且獨腳金屬于半寄生植物，對生長環(huán)境要求嚴(yán)格，使得野生獨腳金資源非常稀少。目前，如何進(jìn)一步開發(fā)獨腳金的藥用價值，已引起醫(yī)學(xué)界的高度重視。但是，我們首要解決的是如何提升獨腳金的產(chǎn)量，建立一套獨腳金種苗的組織培養(yǎng)快速繁殖技術(shù)，促進(jìn)獨腳金商品化規(guī)模種植是我們急需解決的問題。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0003]為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明的目的是建立一種獨腳金的種苗組織培養(yǎng)快速繁殖方法，以提高獨腳金的繁殖系數(shù)，使種苗生產(chǎn)滿足藥用生產(chǎn)的需要。
[0004]實現(xiàn)本發(fā)明的目的所采用的技術(shù)方案如下:
[0005]—種獨腳金的組織培養(yǎng)快速繁殖方法，其特征在于，由以下步驟進(jìn)行處理:
[0006]I)采摘獨腳金植株，切段，使每段含有一個腋芽或頂芽；
[0007]2)將步驟I)中含有腋芽或頂芽的切段植株放入0.1%升汞溶液中消毒，再用無菌水清洗三次，每次清洗2_3min;
[0008]3)在超凈工作臺上將步驟2)中含有腋芽或頂芽的切段植株接種到誘導(dǎo)培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng)，培養(yǎng)過程中采用強度為1900-2100LX的人工光照，同時控制培養(yǎng)溫度為25-35°C，至長出不定芽，然后將不定芽轉(zhuǎn)接至與誘導(dǎo)培養(yǎng)基成分相同的新誘導(dǎo)培養(yǎng)基中進(jìn)行多次繼代培養(yǎng)，至不定芽的高度生長至0.8-1.5cm;
[0009]4)將步驟3)中的不定芽單株接種到生根培養(yǎng)基上，培養(yǎng)3-4周，待植株長至2.5-
3.5cm，其人工光照強度和培養(yǎng)溫度與步驟3)相同；
[0010]5)將步驟4)中的植株煉苗處理一段時間，然后移栽至人工大棚，其中人工大棚的土壤是由泥炭土和園土混合而成的土壤。
[0011]優(yōu)選地，所述步驟2)中含有腋芽或頂芽的切段植株放入0.1%升汞溶液中的消毒時間為8-1 Omin。
[0012]優(yōu)選地，所述步驟3)中的誘導(dǎo)培養(yǎng)基是由以下成分組成:ILMS培養(yǎng)基中添加有3mg 6-84和0.111^ IBA，然后用NaOH調(diào)節(jié)誘導(dǎo)培養(yǎng)基的pH為5.5-6.2。
[0013]優(yōu)選地，所述步驟4)中的生根培養(yǎng)基是由以下成分組成:ILMS培養(yǎng)基中添加有0.1mg NAA和0.5mg IBA，然后用NaOH調(diào)節(jié)誘導(dǎo)培養(yǎng)基的pH為5.5-6.2。
[0014]優(yōu)選地，所述步驟5)中植株煉苗處理天數(shù)為5-7天。
[00?5] 優(yōu)選地，所述步驟5)中泥炭土和園土的質(zhì)量比為(2-4):1。
[0016]本發(fā)明的有益技術(shù)效果是:
[0017]本發(fā)明通過在特定的培養(yǎng)基上培育含有腋芽的野生獨腳金植物的莖段，建立了一套使獨腳金組織快速繁殖方法，提高了獨腳金的繁殖能力，縮短育苗時間，節(jié)省種植成本，也為獨腳金的工廠化育苗提供了技術(shù)保障。該組織培養(yǎng)快速繁殖方法能使I個腋芽在2個月內(nèi)產(chǎn)生10-20個新芽，極大提高了獨腳金種苗繁殖能力，為工業(yè)化育苗和獨腳金產(chǎn)業(yè)化發(fā)展的提供了有力的保障。且該方法能夠全年生產(chǎn)種苗，有助于獨腳金植物規(guī)模化種植，也為商業(yè)化種植提供保障。同時，對野生獨腳金的種子資源進(jìn)行收集和保存，有助于人們進(jìn)一步研究野生獨腳金的潛在藥用價值。
【附圖說明】
[0018]圖1為本發(fā)明實施例一中腋芽外植體在誘導(dǎo)培養(yǎng)基中的培養(yǎng)圖。
[0019]圖2為本發(fā)明實施例一中不定芽在誘導(dǎo)培養(yǎng)基中的增殖圖。
[0020]圖3為本發(fā)明實施例一中不定芽在生根培養(yǎng)基中的培養(yǎng)圖。
[0021]圖4為本發(fā)明實施例二中頂芽外植體在誘導(dǎo)培養(yǎng)基中的培養(yǎng)圖。
[0022]圖5為本發(fā)明實施例二中不定芽在誘導(dǎo)培養(yǎng)基中的增殖圖。
[0023]圖6為本發(fā)明實施例二不定芽在生根培養(yǎng)基中的培養(yǎng)圖。
[0024]圖7為本發(fā)明實施例二中植株的煉苗狀態(tài)圖。
【具體實施方式】
[0025]下面，結(jié)合附圖以及【具體實施方式】，對本發(fā)明做進(jìn)一步描述:
[0026]實施例一
[0027]一種獨腳金的組織培養(yǎng)快速繁殖方法，其特征在于，由以下步驟進(jìn)行處理:
[0028]I)采摘野生獨腳金植株，切段，使每段含有一個腋芽；
[0029]2)將步驟I)中含有腋芽的切段植株放入0.1%升汞溶液中消毒8-10min，再用無菌水清洗三次，每次清洗2_3min;
[0030]3)在超凈工作臺上將步驟2)中含有腋芽的切段植株接種到誘導(dǎo)培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng)，其中誘導(dǎo)培養(yǎng)基是由以下成分組成:IL MS培養(yǎng)基中添加有3mg 6-8六和0.111^ IBA，然后用NaOH調(diào)節(jié)誘導(dǎo)培養(yǎng)基的pH為5.5-6.2，在人工光照強度為1900-2100LX，溫度為25-35°C下進(jìn)行培養(yǎng)，直至長出不定芽，然后將不定芽轉(zhuǎn)接至與誘導(dǎo)培養(yǎng)基成分相同的新誘導(dǎo)培養(yǎng)基中進(jìn)行多次繼代培養(yǎng)，至不定芽高度生長至0.8-1.5cm;
[0031]4)將步驟3)中的不定芽單株接種到生根培養(yǎng)基上，其中生根培養(yǎng)基是由以下成分組成:IL MS培養(yǎng)基中添加有0.1mg NAA和0.5mg IBA，然后用NaOH調(diào)節(jié)生根培養(yǎng)基的pH為
5.5-6.2,培養(yǎng)3-4周，至植株高度生長至2.5_3.5cm，其中，該培養(yǎng)過程中的人工光照強度和培養(yǎng)溫度與步驟3)相同；
[0032]5)將步驟4)中的植株煉苗處理5-7天，然后移栽至人工大棚，其中人工大棚的土壤是由泥炭土和園土混合而成的土壤，其中泥炭土和園土的質(zhì)量比為(2-4):1。
[0033]圖1-圖3為本實施例的培育狀態(tài)圖:其中，圖1是以野生獨腳金的腋芽莖段作為外植體，經(jīng)消毒后，在超凈工作臺上將外植體接種到誘導(dǎo)培養(yǎng)基的培育圖；從圖2可見，腋芽莖段在誘導(dǎo)培養(yǎng)基中經(jīng)過多次繼代培養(yǎng)增生了大量不定芽；圖3為不定芽單株在生根培養(yǎng)基上生長出根系，形成了再生植株。
[0034]實施例二
[0035]一種獨腳金的組織培養(yǎng)快速繁殖方法，其特征在于，由以下步驟進(jìn)行處理:
[0036]I)采摘野生獨腳金植株，切段，使每段含有一個頂芽；
[0037]2)將步驟I)中含有頂芽的切段植株放入0.1%升汞溶液中消毒8-10min，再用無菌水清洗三次，每次清洗2_3min;
[0038]3)在超凈工作臺上將步驟2)中含有頂芽的切段植株接種到誘導(dǎo)培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng)，其中誘導(dǎo)培養(yǎng)基是由以下成分組成:IL MS培養(yǎng)基中添加有3mg 6-8六和0.111^ IBA，然后用NaOH調(diào)節(jié)誘導(dǎo)培養(yǎng)基的pH為5.5-6.2，在人工光照強度為1900-2100LX，溫度為25-35°C下進(jìn)行培養(yǎng)，直至長出不定芽，然后將不定芽轉(zhuǎn)接至與誘導(dǎo)培養(yǎng)基成分相同的新誘導(dǎo)培養(yǎng)基中進(jìn)行多次誘導(dǎo)培養(yǎng)，至不定芽高度生長至0.8-1.5cm;
[0039]4)將步驟3)中的不定芽單株接種到生根培養(yǎng)基上，其中生根培養(yǎng)基是由以下成分組成:IL MS培養(yǎng)基中添加有0.1mg NAA和0.5mg IBA，然后用NaOH調(diào)節(jié)誘導(dǎo)培養(yǎng)基的pH為
5.5-6.2,培養(yǎng)3-4周，待植株長至2.5_3.5cm，其中，該培養(yǎng)過程中的人工光照強度和培養(yǎng)溫度與步驟3)相同；
[0040]5)將步驟4)中的植株煉苗處理5-7天，然后移栽至人工大棚，其中人工大棚的土壤是由泥炭土和園土混合而成的土壤，其中泥炭土和園土的質(zhì)量比為(2-4):1。
[0041]如圖4-7為本實施例的培育狀態(tài)圖:圖4是以野生獨腳金的頂芽莖段作為外植體，經(jīng)消毒后，在超凈工作臺上將外植體接種到誘導(dǎo)培養(yǎng)基的培育圖；圖5可知，外植體在誘導(dǎo)培養(yǎng)基中經(jīng)過多次繼代培養(yǎng)增生了大量不定芽；圖6為單株不定芽在生根培養(yǎng)基上生長出根系，形成再生植株；圖7是對再生植株進(jìn)行煉苗處理的過程，使植株定植后能夠迅速適應(yīng)不良環(huán)境條件，縮短緩苗時間，增強植株對低溫、大風(fēng)等的抵抗能力。
[0042]對于本領(lǐng)域的技術(shù)人員來說，可根據(jù)以上描述的技術(shù)方案以及構(gòu)思，做出其它各種相應(yīng)的改變以及變形，而所有的這些改變以及變形都應(yīng)該屬于本發(fā)明權(quán)利要求的保護(hù)范圍之內(nèi)。
【主權(quán)項】
1.一種獨腳金的組織培養(yǎng)快速繁殖方法，其特征在于，由以下步驟進(jìn)行處理: 1)采摘獨腳金植株，切段，使每段含有一個腋芽或頂芽； 2)將步驟I)中含有腋芽或頂芽的切段植株放入0.1%升汞溶液中消毒，再用無菌水清洗三次，每次清洗2-3min; 3)在超凈工作臺上將步驟2)中含有腋芽或頂芽的切段植株接種到誘導(dǎo)培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng)，培養(yǎng)過程中采用強度為1900-2100LX的人工光照，同時控制培養(yǎng)溫度為25-35°C，至長出不定芽，然后將不定芽轉(zhuǎn)接至與誘導(dǎo)培養(yǎng)基成分相同的新誘導(dǎo)培養(yǎng)基中進(jìn)行多次繼代培養(yǎng)，至不定芽的高度生長至0.8-1.5cm; 4)將步驟3)中的不定芽單株接種到生根培養(yǎng)基上，培養(yǎng)3-4周，待植株長至2.5-3.5cm,其人工光照強度和培養(yǎng)溫度與步驟3)相同； 5)將步驟4)中的植株煉苗處理一段時間，然后移栽至人工大棚，其中人工大棚的土壤是由泥炭土和園土混合而成的土壤。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的獨腳金的組織培養(yǎng)快速繁殖方法，其特征在于，所述步驟2)中含有腋芽或頂芽的切段植株放入0.1 %升汞溶液中的消毒時間為8-1 Omin。3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的獨腳金的組織培養(yǎng)快速繁殖方法，其特征在于，所述步驟3)中的誘導(dǎo)培養(yǎng)基是由以下成分組成:IL MS培養(yǎng)基中添加有3mg 6-8六和0.111^ IBA，然后用NaOH調(diào)節(jié)誘導(dǎo)培養(yǎng)基的pH為5.5-6.2。4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的獨腳金的組織培養(yǎng)快速繁殖方法，其特征在于，所述步驟4)中的生根培養(yǎng)基是由以下成分組成:IL MS培養(yǎng)基中添加有0.1mg NAA和0.5mg IBA，然后用NaOH調(diào)節(jié)誘導(dǎo)培養(yǎng)基的pH為5.5-6.2。5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的獨腳金的組織培養(yǎng)快速繁殖方法，其特征在于，所述步驟5)中植株煉苗處理天數(shù)為5-7天。6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的獨腳金的組織培養(yǎng)快速繁殖方法，其特征在于，所述步驟5)中泥炭土和園土的質(zhì)量比為(2-4):1。
【文檔編號】A01H4/00GK105830926SQ201610232290
【公開日】2016年8月10日
【申請日】2016年4月13日
【發(fā)明人】蔡時可, 王繼華, 羅煥明
【申請人】廣東金作農(nóng)業(yè)科技有限公司