一種利用茶樹精油抑制灰葡萄孢菌的方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及生物防治領(lǐng)域中抑制病原菌的方法，尤其涉及一種利用茶樹精油抑制灰葡萄孢菌的方法，包括：一、制備PDA平板，即將融化的PDA培養(yǎng)基冷卻倒板，直至培養(yǎng)基凝固；二、用無菌的打孔器在待測灰葡萄孢菌平板上取菌塊，并放入步驟一中的PDA平板內(nèi)；三、將無菌的濾紙片放在PDA平板蓋子的內(nèi)表面，在濾紙片上加入茶樹精油；四、蓋好所述PDA平板的蓋子并將其封口，將所述PDA平板倒置，放入生化培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，觀察測量菌落直徑并計算抑菌效果；本發(fā)明提供的茶樹精油熏蒸法處理灰葡萄孢菌，以低劑量，達(dá)到對茶樹精油更有效的利用，同時降低果蔬采摘后由病原菌造成的損失；該發(fā)明操作簡單易行、低劑量、高效能，具有良好的應(yīng)用景及市場價值。
【專利說明】
一種利用茶樹精油抑制灰葡萄孢菌的方法
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明涉及生物防治領(lǐng)域中抑制病原菌的方法，尤其涉及一種利用茶樹精油抑制 灰葡萄孢菌的方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 葡萄是一種重要的經(jīng)濟(jì)作物，在農(nóng)業(yè)經(jīng)濟(jì)中占主導(dǎo)地位，中國作為主要葡萄生產(chǎn) 國之一，種植面積和產(chǎn)量的居世界前列。但是，灰葡萄孢菌(Botrytis cinerea)，作為一種 廣寄主性的、能夠引起二百多種已知植物灰霉病的壞死營養(yǎng)型病原真菌，成為葡萄采后主 要的病原微生物，嚴(yán)重的縮短了葡萄采后的貯藏壽命，造成嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失。因此，精油作 為一種天然無公害的抗菌素而被人們廣泛的挖掘和研究。
[0003]植物精油屬于植物體內(nèi)的次生代謝物質(zhì)，是一類可隨水蒸氣蒸餾，具有一定芳香 氣味且能在常溫下?lián)]發(fā)的油狀物質(zhì)的總稱。許多研究表明植物精油具有抑制細(xì)菌、抑制真 菌、抗病毒、殺蟲的作用，而引起了人們極大的興趣。按化學(xué)成分和含量多少可將植物精油 分為四大類:即萜烯類衍生物、芳香族化合物、脂肪族化合物、含氮或含硫類化合物;單萜烯 具有殺菌的作用，其中單萜烯醇具有抗病毒、抗菌的作用。
[0004] 茶樹精油，其主要成分有砲品稀一4 一醇、a-砲品稀、1，8-桉葉素等，它可以被用 于醫(yī)學(xué)、食品和化妝品行業(yè)，它是以一種膜破壞劑的形式發(fā)揮作用，通過破壞膜結(jié)構(gòu)，使霉 菌細(xì)胞內(nèi)物質(zhì)泄漏，刺激細(xì)胞自溶，導(dǎo)致細(xì)胞形態(tài)發(fā)生變化從而有效的抑制灰葡萄孢菌引 起的灰霉病的病害，而由于其組分較強(qiáng)烈的揮發(fā)性，使采用直接接觸和熏蒸法的抑制灰葡 萄孢菌的效果明顯不同。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明的目的是克服現(xiàn)有技術(shù)中利用直接接觸法抑制灰葡萄孢菌中存在的抑制 效果有待提尚的問題。
[0006] 為此，本發(fā)明提供了 一種利用茶樹精油抑制灰葡萄孢菌的方法，用茶樹精油對灰 葡萄孢菌進(jìn)行熏蒸，所述熏蒸是將茶樹精油與灰葡萄孢菌置于同一密閉空間。
[0007] 上述一種利用茶樹精油抑制灰葡萄孢菌的方法，所述用茶樹精油對灰葡萄孢菌進(jìn) 行熏蒸，具體包括如下步驟： 步驟一、制備PDA平板，即將融化的PDA培養(yǎng)基冷卻倒板，直至培養(yǎng)基凝固； 步驟二、用無菌的打孔器在待測灰葡萄孢菌平板上取菌塊，并放入所述步驟一中的PDA 平板內(nèi)； 步驟三、將無菌的濾紙片放在所述PDA平板蓋子的內(nèi)表面，在濾紙片上加入茶樹精油； 步驟四、蓋好所述PDA平板的蓋子并將其封口，將所述PDA平板倒置， 放入生化培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，觀察測量菌落直徑并計算抑菌效果。
[0008] 上述一種利用茶樹精油抑制灰葡萄孢菌的方法，所述步驟二中的待測灰葡萄孢菌 在培養(yǎng)七天后方進(jìn)行取菌塊動作，所述菌塊的直徑為5mm。
[0009]上述一種利用茶樹精油抑制灰葡萄孢菌的方法，所述步驟四中的生化培養(yǎng)箱的溫 度為28 °C，培養(yǎng)時間為7天。
[0010]上述一種利用茶樹精油抑制灰葡萄孢菌的方法，所述步驟一中的融化的PDA培養(yǎng) 基冷卻至45 °C~60 °C倒板。
[0011] 本發(fā)明的有益效果:本發(fā)明提供的這種利用茶樹精油抑制灰葡萄孢菌的方法，茶 樹精油熏蒸法處理灰葡萄孢菌，以低劑量，達(dá)到對茶樹精油更有效的利用，同時降低果蔬采 摘后由病原菌造成的損失;茶樹精油作為一種廣譜高效、抑菌性強(qiáng)、安全無毒、性能穩(wěn)定的 天然抑菌物質(zhì)，自然成為生物防治研究的重要內(nèi)容;該發(fā)明的優(yōu)點在于:操作簡單易行、低 劑量、高效能，具有良好的應(yīng)用前景及市場價值。
[0012] 以下將結(jié)合附圖及實施例對本發(fā)明做進(jìn)一步詳細(xì)說明。
【附圖說明】
[0013] 圖1是本發(fā)明實施例茶樹精油熏蒸法和直接接觸法處理灰葡萄孢菌的精油用量與 抑制率的折線圖。
【具體實施方式】
[0014] 為進(jìn)一步闡述本發(fā)明達(dá)成預(yù)定目的所采取的技術(shù)手段及功效，以下結(jié)合附圖及實 施例對本發(fā)明的【具體實施方式】、工藝流程及其功效，詳細(xì)說明如下。
[0015] 實施例1: 茶樹精油熏蒸對灰葡萄孢菌菌落的抑制：用茶樹精油對灰葡萄孢菌進(jìn)行熏蒸，所述熏 蒸是將茶樹精油與灰葡萄孢菌置于同一密閉空間，所述茶樹精油對灰葡萄孢菌進(jìn)行熏蒸， 具體包括如下步驟： 步驟一、制備兩組PDA平板包括PDA平板A組、PDA平板B組，其中，每組PDA平板均設(shè)有3個 PDA平板，分別為Al、A2、A3和B1、B2、B3，所述PDA平板的制作即將融化的PDA培養(yǎng)基冷卻至50 °C倒板，直至培養(yǎng)基凝固； 步驟二、用無菌的打孔器在培養(yǎng)了 7天的待測灰葡萄孢菌平板上取六塊直徑為5_的菌 塊，分別放入步驟一中的每個PDA平板內(nèi)； 步驟三、將六片無菌的直徑為5mm的濾紙片分別放在步驟一中的每組PDA平板蓋子的內(nèi) 表面;在TOA平板B組的PDA平板的蓋子內(nèi)表面的濾紙片上不加入茶樹精油，使其作為試驗對 照組，在PDA平板A組的三個蓋子的內(nèi)表面的濾紙片上各加入lul的茶樹精油作為試驗組； 步驟四、蓋好兩組PDA平板的蓋子并將其封口，將兩組PDA平板均倒置，放入28°C的生化 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)7天，通過測量PDA平板Al、PDA平板A2、PDA平板A3和PDA平板B1、PDA平板B2、 PDA平板B3中菌落的直徑，利用公式:抑制率=(c-t )/c X 100%，分別計算得出每組對應(yīng)的抑 制率并計算其平均值;其中，c為對照組即PDA平板B組中未加入茶樹精油后經(jīng)過培養(yǎng)測出的 菌落直徑，t為試驗組即PDA平板A組中加入lul的茶樹精油后經(jīng)過培養(yǎng)測出的菌落直徑。
[0016] 實驗結(jié)果：如表格1所示，計算得出用量為lul的茶樹精油時，PDA平板A組中三組 Al、A2、A3中茶樹精油對灰葡萄孢菌的抑制率分別為62.00 %、61.00 %、60.20 %，此時的抑 制率的平均值為61.07 %。
[0017] 實施例2: 不同用量的茶樹精油熏蒸對灰葡萄孢菌菌落的抑制:在實施例1的基礎(chǔ)上，再制備四組 PDA平板即PDA平板C組、PDA平板D組、PDA平板E組、PDA平板F組，同樣地，每組設(shè)有三個TOA平 板;與實施例1不同之處在于，PDA平板C組、PDA平板D組、PDA平板E組、PDA平板F組中每組平 板蓋子的內(nèi)表面的濾紙片上加入的茶樹精油分別為2ul、3ul、4ul、5ul，培養(yǎng)7天后分別與實 施例1中PDA平板B組進(jìn)行對比，并分別計算每一組抑制率和抑制率平均值，實驗結(jié)果如表1 所示：
實施例3: 直接接觸法對灰葡萄孢菌菌落的抑制率:直接接觸法處理灰葡萄孢菌的具體步驟如 下： 選取五組相同的PDA培養(yǎng)基，每組PDA培養(yǎng)基均包括有三個PDA培養(yǎng)基，將融化的五組 PDA培養(yǎng)基冷卻到50°C左右，加入一定體積的茶樹精油分別到五組PDA培養(yǎng)基中充分混合， 直至五組PDA培養(yǎng)基的濃度梯度分別達(dá)到100ul/L、200ul/L、300ul/L、400ul/L、500ul/L，S 后倒入平板，待培養(yǎng)基凝固后，將直徑為5mm菌塊分別放入五組PDA平板的中央，將五組PDA 平板均倒置，放入28°C生化培養(yǎng)箱中培養(yǎng)7天后觀察抑菌效果；同時，以三個相同的培養(yǎng)基 中不添加植物精油的PDA平板為對照，待培養(yǎng)基凝固后，將直徑為5_菌塊放入對照組TOA平 板中央，將對照組的PDA平板倒置放入28°C生化培養(yǎng)箱中培養(yǎng)7天后觀察抑菌效果。通過測 量每組PDA平板中的菌落直徑，利用公式抑制率=(c-t) /c X 100%，計算出每一組的抑制率及 抑制率平均值。
[0018] 實驗結(jié)果：如表格2所示，計算得出濃度梯度為100ul/L、200ul/L、300ul/L、400ul/ L、500ul/L的茶樹精油對灰葡萄孢菌的抑菌率分別為：
實施例4: 直接接觸法與熏蒸法對灰葡萄孢菌菌落的抑制效果的比較:在實施例1、實施例2和實 施例3的基礎(chǔ)上，其所用的TOA培養(yǎng)基的體積均為30ml，利用濃度與體積之間的換算公式可 以算出直接接觸法所用茶樹精油的用量均為熏蒸法茶樹精油用量的3倍，而計算得出的抑 制率卻遠(yuǎn)不如熏蒸法對灰葡萄孢菌菌落的抑制率，由此可以得出：茶樹精油熏蒸法處理灰 葡萄孢菌，以低劑量達(dá)到對茶樹荷精油更有效的利用、對灰葡萄孢菌更有效的抑制，極大地 降低了果蔬采摘后由病原菌造成的損失。
[0019]以上內(nèi)容是結(jié)合具體的優(yōu)選實施方式對本發(fā)明所作的進(jìn)一步詳細(xì)說明，不能認(rèn)定 本發(fā)明的具體實施只局限于這些說明。對于本發(fā)明所屬技術(shù)領(lǐng)域的普通技術(shù)人員來說，在 不脫離本發(fā)明構(gòu)思的前提下，還可以做出若干簡單推演或替換，都應(yīng)當(dāng)視為屬于本發(fā)明的 保護(hù)范圍。
【主權(quán)項】
1. 一種利用茶樹精油抑制灰葡萄孢菌的方法，其特征在于：用茶樹精油對灰葡萄孢菌 進(jìn)行熏蒸，所述熏蒸是將茶樹精油與灰葡萄孢菌置于同一密閉空間。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種利用茶樹精油抑制灰葡萄孢菌的方法，其特征在于:所述 用茶樹精油對灰葡萄孢菌進(jìn)行熏蒸，具體包括如下步驟： 步驟一、制備PDA平板，即將融化的PDA培養(yǎng)基冷卻倒板，直至培養(yǎng)基凝固； 步驟二、用無菌的打孔器在待測灰葡萄孢菌平板上取菌塊，并放入所述步驟一中的TOA 平板內(nèi)； 步驟三、將無菌的濾紙片放在所述PDA平板蓋子的內(nèi)表面，在濾紙片上加入茶樹精油； 步驟四、蓋好所述PDA平板的蓋子并將其封口，將所述TOA平板倒置，放入生化培養(yǎng)箱中 培養(yǎng)，觀察測量菌落直徑并計算抑菌效果。3. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種利用茶樹精油抑制灰葡萄孢菌的方法，其特征在于:所述 步驟二中的待測灰葡萄孢菌在培養(yǎng)七天后方進(jìn)行取菌塊動作，所述菌塊的直徑為5_。4. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種利用茶樹精油抑制灰葡萄孢菌的方法，其特征在于:所述 步驟四中的生化培養(yǎng)箱的溫度為28°C，培養(yǎng)時間為7天。5. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種利用茶樹精油抑制灰葡萄孢菌的方法，其特征在于:所述 步驟一中的融化的PDA培養(yǎng)基冷卻至45 °C~60 °C倒板。
【文檔編號】A01P3/00GK105831172SQ201610291137
【公開日】2016年8月10日
【申請日】2016年5月5日
【發(fā)明人】任雪艷, 宋丹丹, 孔慶軍, 土麗丹, 尹雪峰, 江國山, 翟欣
【申請人】陜西師范大學(xué)