甜葉菊新品種814011譜星3號及高rm含量甜菊糖苷的制備
【專利摘要】本發(fā)明提供了一種甜葉菊變種植物，所述變種植物為814011譜星3號，其愈傷組織由中國微生物菌種保藏委員會普通微生物中心(CGMCC)保藏，保藏號為CGMCC No.9701。本發(fā)明同時提供了一種高RM含量的甜菊糖苷產(chǎn)品，其中RM/TSG大于0.08，RD/TSG大于0.08。CGMCC No.970120140922
【專利說明】
甜葉菊新品種814011譜星3號及高RM含量甜菊糖苷的制 備
技術領域
[0001] 本發(fā)明涉及一種甜葉菊新品種，所述甜葉菊品種含有高含量的RM，并可由保藏的 愈傷組織連續(xù)培育產(chǎn)生；涉及從該品種的甜葉菊干葉制備高RM含量甜菊糖苷的方法。
【背景技術】
[0002] 甜葉菊（Stevia)，學名為Stevia Rebaudiana Bertoni，是一種多年生菊科草本植 物，原產(chǎn)于南美巴拉圭，其葉片中含有甜菊糖苷，其甜度為蔗糖的150~300倍，是一種高甜 度、低熱能、味質(zhì)好、安全無毒的新型天然甜味劑，可廣泛應用于食品、飲料、醫(yī)藥、日化工業(yè) 等行業(yè)。
[0003] 甜菊糖苷是多組分糖苷混合物，糖苷組分及含量決定混合物的甜度和口感。甜葉 菊中的甜菊糖苷含有13種組分，即甜葉菊苷A(Rebaudi 〇Side A，簡稱RebA或RA)、甜葉菊苷 B (Rebaudioside B，簡稱 RebB 或 RB)，甜葉菊苷 C (Rebaudioside C，簡稱 RebC 或 RC)，甜葉 菊苷 D (Rebaudioside D，簡稱 RebD 或 RD)，甜葉菊苷 E (Rebaudioside E，簡稱 RebE 或 RE)， 甜葉菊苷 F (Rebaudioside F，簡稱 RebF 或 RF)，甜葉菊苷 M (Rebaudioside M，簡稱 RebM 或 RM)，甜葉菊苷N (Rebaudioside N，簡稱 RebN或 RN)，甜葉菊苷 0 (Rebaudioside 0,簡稱 RebO 或 R0)，甜苷 A(Dulcoside A，簡稱 DulA 或 DA)，甜茶苷（Rubusoside，簡稱 Rub 或 RU);甜菊 雙糖苷（Steviolbioside，簡稱Sbio或SB)，甜菊糖（Stevioside，簡稱Stev或ST);這十三 種甜菊糖苷的總和成為總甜菊糖苷（Total Steviol glycosides，TSG);其中RM相對含量 較少，約占總甜菊糖苷（TSG)的0. 2%。但是RM的甜度最高，約為蔗糖的300倍，而且味質(zhì) 最好，最接近于蔗糖的口感，不含任何不良余味，被業(yè)內(nèi)人士譽為"甜菊糖苷中的黃金"，售 價也是其他糖苷的3~5倍，是一種最為理想的天然甜味劑。因此，制取RM含量高的甜菊 糖苷產(chǎn)品具有廣闊的市場前景。
[0004] 由于RM在甜葉菊中含量低，過去，獲得高純度RM的唯一方法是反復重結晶，反復 重結晶的劣勢在于產(chǎn)品得率低，不利于成本控制；另外由于在甜葉菊中含量低，無法大規(guī)模 生產(chǎn)，不能滿足客戶的需求。因此有必要開發(fā)一種高RM含量的甜葉菊新品種，以便降低高 RM含量甜菊糖苷產(chǎn)品生產(chǎn)成本并保持其穩(wěn)定的得率。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明提供了一種甜葉菊變種植物。在一個實施例中，變種植物為814011譜星3 號，其814011譜星3號的愈傷組織由中國微生物菌種保藏委員會普通微生物中心（CGMCC) 保藏，保藏號為CGMCC No. 9701，其所述814011譜星3號的植物及干葉中RM/TSG大于0. 08， RD/TSG大于0. 08。在另一個實施例中，變種植物通過以AKHL1為父本，EIRETE為母本進行雜 交，得到F1代，并從所述F1代優(yōu)選出性狀優(yōu)良且穩(wěn)定的單株YF001，然后以YF001為父本， PC Star2為母本進行雜交，得到F2代，其中所述F2代表達由權利要求1所描述的814011譜 星3號的所有生理和形態(tài)特征，其814011譜星3號的愈傷組織由中國微生物菌種保藏委員 會普通微生物中心（CGMCC)保藏，保藏號為CGMCC No. 9701。在另一個實施例中，變種植物 或其一部分表達由權利要求1所描述的814011譜星3號所有的生理和形態(tài)特征，其814011 譜星3號的愈傷組織由中國微生物菌種保藏委員會普通微生物中心（CGMCC)保藏，保藏號 為 CGMCC No. 9701。
[0006] 本發(fā)明同時提供了產(chǎn)生甜葉菊變種植物或其一部分的愈傷組織，甜葉菊變種植物 的再生細胞及其再生細胞的組織培養(yǎng)。
[0007] 本發(fā)明同時提供了產(chǎn)生甜葉菊變種植物的方法。在一個實施例中，所述方法包括： 以AKHL1為父本，EIRETE為母本進行雜交，得到F1代，并從所述F1代優(yōu)選出性狀優(yōu)良且穩(wěn) 定的單株YF001，然后以YF001為父本，PC Star2為母本進行雜交，得到F2代，其中所述F2 代表達由權利要求1所描述的814011譜星3號的所有生理和形態(tài)特征，其814011譜星3號 的愈傷組織由中國微生物菌種保藏委員會普通微生物中心（CGMCC)保藏，保藏號為CGMCC No.9701〇
[0008] 本發(fā)明同時提供了 一種高RM含量甜菊糖苷的制備方法。在一個實施例中，所述制 備方法包括：提供用于制備高RM含量甜菊糖苷的原料，其原料為由權利要求1-3所描述的 甜葉菊植物或干葉，其植物及干葉中RM/TSG大于0. 08, RD/TSG大于0. 08 ;粉碎所述原料； 用水或水溶劑提取所述粉碎原料，獲得甜菊糖苷產(chǎn)品，其中RM/TSG大于0. 08, RD/TSG大于 0. 08。在另一個實施例中，所述制備方法包括：提供用于制備高RM含量甜菊糖苷的甜葉菊 植物或干葉，其植物及干葉中RM/TSG大于0. 08, RD/TSG大于0. 08 ;所述甜葉菊植物或干 葉通過愈傷組織再生或扦插由權利要求1-3所描述的甜葉菊植物而得到；粉碎所述甜葉菊 植物或干葉；用水或水溶劑提取所述粉碎甜葉菊植物或干葉，獲得甜菊糖苷產(chǎn)品，其中RM/ TSG 大于 0? 08, RD/TSG 大于 0? 08。
[0009] 本發(fā)明同時提供了一種高RM含量的甜菊糖苷產(chǎn)品，其中RM/TSG大于0. 08，RD/TSG 大于0.08。
[0010] 本發(fā)明同時提供了一種甜葉菊變種植物或其一部分，源自814011譜星3號的任 何一代的后代，其所述814011譜星3號的愈傷組織由中國微生物菌種保藏委員會普通微生 物中心（CGMCC)保藏，保藏號為CGMCC No. 9701。
[0011] 通過如下結合附圖對優(yōu)選實施例的詳細描述，本發(fā)明的目的和優(yōu)點是顯而易見 的。
【附圖說明】
[0012] 本發(fā)明的優(yōu)選實施方案現(xiàn)在將參考附圖進行說明，其中類似的附圖標記表示相同 的元件。
[0013] 圖1、雜交選育甜葉菊植物的示意圖。
【具體實施方式】
[0014] 1、高RM含量甜葉菊品種育種方法
[0015] 技術路線如圖1所示。
[0016] 采用三交育苗方法，分別選擇Eirete、PC Star 2為母本，先以AKH L1為父本進行 一次雜交，再以優(yōu)選單株YF001為父本進行二次雜交，采收種子，育苗，移栽大田種植。以單 株選擇育種方式選擇優(yōu)良單株，經(jīng)過種植觀察其農(nóng)藝性狀和分析檢測糖苷含量，性狀穩(wěn)定 后，再用組織培養(yǎng)法和無性扦插繁殖方式固定其優(yōu)良性狀，經(jīng)示范性種植后，成為新品種。
[0017] A、選育 YF001
[0018] 通過雜交育種的方法進行選育。首先，將母本Eirete和父本AKH L1種植于同一 大棚中，通過蜜蜂封閉式授粉的方法進行雜交，收其母本的種子（F1代）進行播種、育苗、種 植，根據(jù)農(nóng)藝性狀及色譜分析，從F1代中選出性狀優(yōu)良且穩(wěn)定的單株，經(jīng)無性扦插繁殖固 定后的新品系，即YF001號單株。通過父本AKH L1與母本Eirete雜交得到的YF001，其RA、 ST含量明顯下降，而RD、RM的含量明顯增加。
[0019] B、選育 814011 譜星 3 號（814011 PC Star 3)
[0020] 以YF001為父本，PC Star 2為母本，同樣通過蜜蜂封閉式授粉進行雜交和選擇， 收其母本的種子進行播種、育苗、種植，根據(jù)農(nóng)藝性狀及色譜分析，從F2代中選出性狀優(yōu)良 且穩(wěn)定的單株，經(jīng)無性扦插繁殖固定后的新品系，即814011譜星3號（814011 PC Star 3)。 通過父本YF001和母本PC Star 2雜交得到的814011譜星3號（814011 PC Star 3)，其 RM含量又有明顯的增加。
[0021] 對雜交種進行檢測確認的方法為薄層色譜分析和高效液相分析，分析采自所述植 株814011譜星3號（814011 PC Star 3)的干燥葉，證實RM/TSG大于0.08, RD/TSG大于 0.08。然后對選育出的優(yōu)良品種814011譜星3號（814011 PC Star 3)進行擴繁。擴繁主 要采用兩種方法：愈傷組織培養(yǎng)和扦插，其中又以愈傷組織培養(yǎng)為主。
[0022] 甜葉菊新品種814011譜星3號（814011 PC Star 3)的愈傷組織由中國微生物菌 種保藏委員會普通微生物中心（CGMCC)保藏，保藏號為CGMCC No. 9701。本發(fā)明的所涉及的 植物可由814011譜星3號（814011 PC Star 3)品種的保藏愈傷組織再生得到。
[0023] 2、總甜菊糖苷含量為80%的高RM含量甜菊糖苷產(chǎn)品的制備
[0024] (a)預處理：將粉碎的814011譜星3號（814011 PC Star 3)甜葉菊干葉于熱水 中萃取，制成甜菊糖苷萃取液，萃取液經(jīng)過絮凝沉淀和板框壓濾兩道工序后，進入下一道工 序；
[0025] (b) -次吸附及解吸：采用樹脂吸附上述萃取液中甜菊糖苷有效成分，到樹脂出 甜時止；用氫氧化鈉稀溶液、鹽酸稀溶液、純水洗樹脂、至流出液pH值達到7時止；用乙醇 溶液對樹脂進行分柱解吸，得含糖苷量為78~86%的解吸液，解吸液進入下一道工序；
[0026] (c) -次離子交換：解析液依次通過一次離子交換除雜后，蒸發(fā)濃縮，得到含苷量 在82~88 %的濃縮液，濃縮液進入下一道工序；
[0027] (d)二次離子交換：將流出液再通過二次離子交換樹脂進行深度除雜，濃縮得到 含苷量多80%的濃縮液，再除菌過濾，濃縮液進入下一道工序；
[0028] (e)噴霧干燥：將除菌過濾后的濃縮液噴霧干燥，得到RM/TSG大于0? 08, RD/TSG 大于0. 08, TSG彡80 %的甜菊糖苷產(chǎn)品。
[0029] 如需要制備更高純度的產(chǎn)品，則在步驟（C)后按以下步驟進行：
[0030] (d)二次吸附提純：用二次吸附樹脂三柱串聯(lián)過飽和吸附上述濃縮液除雜，得到 含苷量多95%的甜菊糖苷提純液，提純液進入下一道工序；
[0031] (e)二次離子交換：將提純液通過二次離子交換樹脂進行深度除雜，濃縮得到含 苷量多95%的濃縮液，再經(jīng)過除菌濾膜除菌過濾，濃縮液進入下一道工序；
[0032] (f)噴霧干燥：將除菌過濾后的濃縮液噴霧干燥，得到RM/TSG大于0? 08, RD/TSG 大于0. 08, TSG彡95 %的甜菊糖苷產(chǎn)品。
[0033] 實施例
[0034] 下面結合實施例對本發(fā)明做做進一步詳細描述。
[0035] 實施例1
[0036] 新品系 814011 譜星 3 號（814011PC Star 3)的育種
[0037] 用于雜奪育種的父母本件狀:
[0038] 母本一 Eirete :2010年從巴拉圭引進的甜菊新品種，總甜菊糖苷（TSG)含量高 (大于20% )。株高80cm，葉子成披針狀，葉子邊緣具有明顯鋸齒，顏色為濃綠色，干葉中 Reb A含量為11. 30%，St含量為10. 4%，每株有6~10個分枝。
[0039] 父本一 AKH L1 :2010年從巴拉圭引進的甜菊新品種，Reb A含量高。該品種為晚 熟品種，株高51~70cm，大田種植前期生長慢，中后期生長旺盛，一茬大田生長期為135~ 150天。葉子顏色為淡綠色/黃綠色。畝產(chǎn)干葉200公斤以上。干葉中Reb A含量為11. 5%， St含量為1. 30%。
[0040] 母本二譜星2號（PC Star 2):譜賽科（江西）生物技術有限公司選育的甜菊新 品種，RA含量高。該品種屬于晚熟品種，株高80~120cm，株型直立，生長整齊，莖粗且近地 面氣根發(fā)達，抗性好，葉片大且厚實，一級分枝5~8個，二級分枝少而短，利于脫葉。大田 種植前期生長慢，中后期旺盛。一茬大田生長期125~135天。畝產(chǎn)干葉220~300公斤。 總甜菊糖苷（TSG)含量13%以上，其中Reb A含量10%以上，RM含量0. 21%。
[0041] 父本二YF001 :第一次雜交后代中性狀優(yōu)良且穩(wěn)定的優(yōu)良單株，經(jīng)無性扦插繁殖 固定后的新品系。分枝能力強，抗性一般，干葉產(chǎn)量高。其RA含量高（表1)，且RD含量也 高（表1)。
[0042] 雜奪育種討稈:
[0043] 2011年8月中旬開始，將所選總甜菊糖苷含量高的Eirete (母本）和Reb A糖苷 含量高的AKH L1(父本）移入育種大棚內(nèi)，進行雜交育種。10月初，親本現(xiàn)蕾之前放入蜂 箱，利用蜜蜂進行封閉式授粉雜交；11月中旬開始采收雜交種子，一直采收至12月中旬。 2012年初將所得種子播種于育苗大棚內(nèi)，待其長到3葉1心（約10厘米）時，將種苗移植 至6X8cm的育苗袋中，并放于大棚內(nèi)培養(yǎng)，3月初澆施一次可溶性復合肥500倍液及尿素 1000倍液，3月中旬氣溫回暖后，將種苗移栽至試驗田，并對其進行田間管理等措施。
[0044] 2012年7月份采收植株鮮葉，并進行干燥，采用薄層色譜及高效液相色譜法分析 干葉糖苷含量，選擇RA糖苷含量低且有RD、RM糖苷含量的單株，即YF001。
[0045] YF001及其親本含苷量檢測結果見表1 :
[0046] 表1 :YF001及其親本檢測結果：
[0047]
[0049] ND :Not Detected(未檢出）。
[0050] 然后在2012年8月，以YF001為父本，PC Star 2 (RM含量0? 21 % )為母本，重復 以上雜交育種方法，2013年1月初將所得種子播種在譜賽科公司塑料大棚內(nèi)進行育種，種 子萌發(fā)后，秧苗長至3葉1心時，移植至6 X 8cm的育苗袋中，并放于大棚內(nèi)培養(yǎng)，3月初澆施 一次可溶性復合肥500倍液及尿素1000倍液，3月中旬氣溫回暖后，將種苗移栽至試驗田， 并對其進行田間管理等措施。
[0051] 2013年7月份采收植株鮮葉，并進行干燥，采用薄層色譜及高效液相色譜法分析 干葉糖苷含量，選育出RM/TSG大于0. 08, RD/TSG大于0. 08的單株，即814011譜星3號 (814011 PC Star 3)〇
[0052] 814011譜星3號及其親本含苷量檢測結果見表2 :
[0053] 表2 :814011譜星3號（814011 PC Star 3)及其親本含苷量檢測結果
[0056] ND:未檢出。
[0057] 新品系814011譜星3號（814011 PC Star 3)的擴繁及栽培管理：
[0058] 2013年10月至2014年2月，采用愈傷組織培養(yǎng)法將814011譜星3號（814011 PC Star 3)單株擴繁到30000株。2014年2月下旬將組培苗移植至育苗穴盤中進行煉苗；2014 年3月中下旬，將煉好的種苗移栽到大田，并進行相應的田間管理。2014年4月初（移栽 后10天左右）進行查苗補缺工作，2014年4月中下旬（苗高15cm左右）開始進行打頂摘 心，2014年4月中下旬開始進行第一次追肥，追施的肥料為可溶性復合肥和尿素，用量為可 溶性復合肥500倍液，尿素1000倍液，2014年5月份開始進行第二次追肥管理，追施的肥料 為可溶性復合肥和尿素，用量為可溶性復合肥500倍液，尿素1000倍液，后期（6月份）補 施磷酸二氫鉀葉面肥。2014年7月初開始進行收獲，收割采用人工采收，打谷機脫葉方式， 然后進行曬干，并裝袋保存。
[0059] 分析采自所述植株的干燥葉，通過高效液相色譜測定其成分。
[0060] 814011 PC Star 3與相似品種（PC Star)中甜菊糖苷含量、各組分占總甜菊糖苷 比例以及性狀的比較見表3、表4以及表5。
[0061] 表3 :814011 PC Star 3與相似品種（PC Star)中甜菊糖苷含量比較（％ wt/wt， 干基）
[0063] ND-未檢出。
[0064] 表4 :814011 PC Star 3與相似品種（PC Star)中各組分占總甜菊糖苷比例比較 (% )

[0067] ND-未檢出。
[0068] 表5 :814011 PC Star 3與相似品種（PC Star)性狀比較
[0070] 實施例2
[0071] 高RM含量甜菊糖苷產(chǎn)品的制備
[0072] (a)預處理：將甜葉菊葉子與50°C軟水按重量比1:15混合，制成甜菊糖苷提取液， 經(jīng)過絮凝沉淀和板框壓濾兩道工序，板框過濾后的濾液進入下一道工序；
[0073] (b) -次吸附及解吸：用一次吸附樹脂吸附上述萃取液中甜菊糖苷有效成分，用 氫氧化鈉溶液、鹽酸溶液處理吸附了甜菊糖苷有效成分的樹脂，純水淋洗樹脂，至流出液PH 值達7時止，再用乙醇溶液進行解吸，得到含苷量84. 5 %的解吸液，解吸液去醇進入下一道 工序；
[0074] (c) -次離子交換：去醇解吸液依次通過一次離子交換除雜，蒸發(fā)濃縮得到含苷 量為85. 3 %的一次濃縮液，濃縮液進入下一道工序；
[0075] (d)二次離子交換：將濃縮液通過二次離子交換樹脂進行深度除雜，經(jīng)過濃縮得 到含苷量為85. 4%的二次離子交換液（兩次離子交換處理，含量增加0. 9%?)，再進行除 菌濾芯除菌過濾，無菌液進入下一道工序；
[0076] (e)噴霧干燥：將無菌液進行噴霧干燥，得到RM/TSG大于0? 08, RD/TSG大于0? 08 的甜菊糖苷產(chǎn)品，含苷量為85. 4%。經(jīng)高效液相色譜分析測定其成分：
[0077] 表6產(chǎn)品高效液相檢測結果
[0079] 實施例3
[0080] 高RM含量甜菊糖苷產(chǎn)品的制備
[0081] (a)預處理：將甜葉菊葉子與70°C軟水按重量比1:20混合，制成甜菊糖苷提取液， 經(jīng)過絮凝沉淀和板框壓濾兩道工序，板框過濾后的濾液進入下一道工序；
[0082] (b) -次吸附及解吸：用一次吸附樹脂吸附上述脫鹽濾液中甜菊糖苷有效成分， 用氫氧化鈉溶液、鹽酸溶液處理吸附了甜菊糖苷有效成分的樹脂，再用乙醇溶液進行解吸， 得到含苷量82. 6 %的解吸液，解吸液去醇進入下一道工序；
[0083] (c) -次離子交換：去醇解吸液依次通過一次離子交換除雜，蒸發(fā)濃縮得到含苷 量為85. 7 %的一次濃縮液，濃縮液進入下一道工序；
[0084] (d)二次吸附提純：用二次大孔吸附樹脂三柱串聯(lián)吸附上述離子交換液除雜，得 到含苷量為96. 5%甜菊糖苷提純液，提純液進入下一道工序；
[0085] (e)二次離子交換：通過二次離子交換樹脂進行深度除雜，經(jīng)過濃縮得到含苷量 為96. 9%的二次離子交換液，再進行除菌濾芯除菌過濾，無菌液進入下一道工序；
[0086] (f)噴霧干燥：將無菌液進行噴霧干燥，得到甜菊糖苷產(chǎn)品。經(jīng)高效液相色譜分 析，產(chǎn)品RM/TSG大于0. 08, RD/TSG大于0. 08,含苷量為97. 07%。
[0087] 表7產(chǎn)品高效液相檢測結果
[0089] 本發(fā)明中所有樣品，在下列條件下，通過高效液相色譜測定其成分。高效液相色譜 檢測：
[0090] -種新的高效液相色譜方法檢測甜菊糖苷。每個樣品需用2種方法綜合檢測。
[0091] 方法 1 是用于分析 RebE、RebD、RebM、RebN、RebO ;方法 2 是用于分析 RebA、Stev、 RebF、RebC、DulA、Rub、RebB、Sbio。
[0092] 所有糖苷的標準品，包括RebE、RebD、RebM、RebN、RebO均購于美國ChromaDex公 司。
[0093] 檢測儀器：配備二元栗、自動進樣器的安捷倫1200高效液相色譜儀，DAD檢測器配 合化學工作站軟件使用。
[0094] 方法1儀器條件：
[0095] 色譜柱：安捷倫 Poroshell 120SB-C18 2. 7 y m, 4. 6x150mm
[0096] 柱溫：40°C
[0097] 流動相 A :10mM 磷酸二氫鈉 pH2.6:乙腈，75% :25% (v/v)
[0098] 流動相 B :水：乙腈，50% : 50% (v/v)
[0099] 流量：〇? 5mL/min
[0100] 進樣量：5yL
[0101] 檢測：UV 210nm
[0102] 運行時間：25分鐘
[0103] 過度時間：10分鐘
[0104] 進樣器溫度：常溫
[0105] 梯度程序，（％，v/v:)
[0106]
[0107] 方法2儀器條件：
[0108] 色譜柱：安捷倫 Poroshell 120SB-C18 2. 7 ym, 4. 6x150mm
[0109] 柱溫：4(TC
[0110] 流動相：10mM 磷酸二氫鈉 pH2. 6:乙腈，68% :32% (v/v)
[0111] 流量：1.0mL/min
[0112] 進樣量：5yL
[0113] 檢測：UV 210nm
[0114] 運行時間：20分鐘
[0115] 進樣器溫度：常溫
【主權項】
1. 一種甜葉菊變種植物，其特征在于，所述變種植物為814011譜星3號，其愈傷組織由 中國微生物菌種保藏委員會普通微生物中心（CGMCC)保藏，保藏號為CGMCC No. 9701，其所 述814011譜星3號的植物及干葉中RM/TSG大于0. 08, RD/TSG大于0. 08。2. -種甜葉菊變種植物，其特征在于，所述變種植物通過以AKHL1為父本，EIRETE為母 本進行雜交，得到F1代，并從所述F1代優(yōu)選出性狀優(yōu)良且穩(wěn)定的單株YF001，然后以YF001 為父本，PC Star2為母本進行雜交，得到F2代，其中所述F2代表達由權利要求1所描述的 814011譜星3號的所有生理和形態(tài)特征，其814011譜星3號的愈傷組織由中國微生物菌種 保藏委員會普通微生物中心（CGMCC)保藏，保藏號為CGMCC No. 9701。3. -種甜葉菊變種植物或其一部分，其特征在于，所述變種植物或其一部分表達由權 利要求1所描述的814011譜星3號所有的生理和形態(tài)特征，其814011譜星3號的愈傷組 織由中國微生物菌種保藏委員會普通微生物中心（CGMCC)保藏，保藏號為CGMCC No. 9701。4. 愈傷組織，其特征在于，所述愈傷組織產(chǎn)生由權利要求1、2或3所描述的甜葉菊變種 植物或其一部分。5. 再生細胞，其特征在于，所述再生細胞來自由權利要求1、2或3所描述的甜葉菊變種 植物。6. 再生細胞的組織培養(yǎng)，其特征在于，所述再生細胞根據(jù)權利要求5所描述。7. 產(chǎn)生甜葉菊變種植物的方法，其特征在于，所述方法包括：以AKHL1為父本，EIRETE 為母本進行雜交，得到F1代，并從所述F1代優(yōu)選出性狀優(yōu)良且穩(wěn)定的單株YF001，然后以 YF001為父本，PC Star2為母本進行雜交，得到F2代，其中所述F2代表達由權利要求1所 描述的814011譜星3號的所有生理和形態(tài)特征，其814011譜星3號的愈傷組織由中國微 生物菌種保藏委員會普通微生物中心（CGMCC)保藏，保藏號為CGMCC No. 9701。8. -種高RM含量甜菊糖苷的制備方法，其特征在于，所述制備方法包括：提供用于制 備高RM含量甜菊糖苷的原料，其原料為由權利要求1-3所描述的甜葉菊植物或干葉，其植 物及干葉中RM/TSG大于0. 08, RD/TSG大于0. 08 ; 粉碎所述原料； 用水或水溶劑提取所述粉碎原料，獲得甜菊糖苷產(chǎn)品，其中RM/TSG大于0. 08, RD/TSG 大于0.08。9. 一種高RM含量的甜菊糖苷產(chǎn)品，其特征在于，該產(chǎn)品通過權利要求8的方法獲得，其 中 RM/TSG 大于 0· 08, RD/TSG 大于 0· 08。10. -種高RM含量甜菊糖苷的制備方法，其特征在于，所述制備方法包括：提供用于制 備高RM含量甜菊糖苷的甜葉菊植物或干葉，其植物及干葉中RM/TSG大于0. 08, RD/TSG大 于〇. 08 ;所述甜葉菊植物或干葉通過愈傷組織再生或扦插由權利要求1-3所描述的甜葉菊 植物而得到； 粉碎所述甜葉菊植物或干葉； 用水或水溶劑提取所述粉碎甜葉菊植物或干葉，獲得甜菊糖苷產(chǎn)品，其中RM/TSG大于 0· 08, RD/TSG 大于 0· 08。11. 一種高RM含量的甜菊糖苷產(chǎn)品，其特征在于，該產(chǎn)品通過權利要求10的方法獲得， 其中 RM/TSG 大于 0· 08, RD/TSG 大于 0· 08。12. -種甜葉菊變種植物或其一部分，源自814011譜星3號的任何一代的后代，其所 述814011譜星3號的愈傷組織由中國微生物菌種保藏委員會普通微生物中心（CGMCC)保 藏，保藏號為CGMCC No. 9701。
【文檔編號】C07H15/256GK105850750SQ201510036668
【公開日】2016年8月17日
【申請日】2015年1月23日
【發(fā)明人】奧維迪·瑪珂善, 李善汪, 卜宇成
【申請人】譜賽科美國公司