提高蝦夷扇貝高溫耐受的雜交育種方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種可提高蝦夷扇貝高溫耐受的雜交育種方法，是以蝦夷扇貝雌貝與長(zhǎng)肋日月貝作為親貝，在水溫18~19℃的條件下授精，精子、卵細(xì)胞受精率高，胚胎和幼蟲發(fā)育速度快，發(fā)育到D形幼蟲和稚貝的時(shí)間均顯著縮短，可提供生長(zhǎng)快、抗逆性強(qiáng)的雜交貝苗種，最終獲得的扇貝以及子代雜交扇貝適應(yīng)高溫環(huán)境的能力有所增強(qiáng)，在海水達(dá)到26℃仍沒有出現(xiàn)死亡現(xiàn)象，可擴(kuò)大蝦夷扇貝的養(yǎng)殖范圍。
【專利說(shuō)明】
提高蝦夷扇貝高溫耐受的雜交育種方法
技術(shù)領(lǐng)域
[0001]本發(fā)明涉及海產(chǎn)貝類遺傳育種領(lǐng)域，特別是一種提高蝦夷扇貝高溫耐受的雜交育種方法。
【背景技術(shù)】
[0002]4下夷扇貝(Pai1f1joecie/? jessoe/jsis)個(gè)體大，生長(zhǎng)快，系我國(guó)北方沿海主要養(yǎng)殖經(jīng)濟(jì)貝類。20世紀(jì)80年代，已成功將其自日本引入中國(guó)并實(shí)現(xiàn)人工擴(kuò)繁技術(shù)。但由于蝦夷扇貝原產(chǎn)于日本北海道，其生活水溫不超過(guò)23 °C，如人工養(yǎng)殖水溫達(dá)到23 °C時(shí)就會(huì)發(fā)生大規(guī)模死亡現(xiàn)象，給養(yǎng)殖戶造成了巨大經(jīng)濟(jì)損失，也正因?yàn)榇?，蝦夷扇貝目前只在遼寧大連長(zhǎng)海等沿海養(yǎng)殖。
[0003]長(zhǎng)肋日月貝jO_/et/_ro/3ecZies)隸屬雙殼綱(Bivalvia)、珍珠貝目(Pter1ida)、扇貝科(Pectinidae)、日月貝屬。長(zhǎng)肋日月貝個(gè)體大、生長(zhǎng)快、營(yíng)養(yǎng)豐富、肉味鮮美，其干制品為名貴海珍品“帶子”。該貝雌雄同體，為暖水種，作為我國(guó)傳統(tǒng)經(jīng)濟(jì)貝類，主要分布在海南、廣東沿海等區(qū)域。
[0004]蝦夷扇貝與長(zhǎng)肋日月貝在分類上屬不同屬，不同種，長(zhǎng)期地理隔離使二者在生物學(xué)方面存在顯著差異。迄今為止，還沒有關(guān)于蝦夷扇貝和長(zhǎng)肋日月貝遠(yuǎn)緣雜交育種的相關(guān)報(bào)道。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]本發(fā)明是為了解決現(xiàn)有技術(shù)所存在的上述不足，提出一種提高蝦夷扇貝高溫耐受的雜交育種方法，
本發(fā)明的技術(shù)解決方案是:一種提高蝦夷扇貝高溫耐受的雜交育種方法，其特征是按如下步驟進(jìn)行:
a.選取長(zhǎng)肋日月貝和蝦夷扇貝雌貝作為雜交親貝；
b.人工培育使雜交親貝性腺同時(shí)成熟；
c.催產(chǎn)得到蝦夷扇貝雌貝卵子和長(zhǎng)肋日月貝精子；
d.將卵子和精子進(jìn)行交配，產(chǎn)生受精卵并將受精卵孵化至D形幼蟲；
e.將D形幼蟲培育至稚貝。
[0006]當(dāng)長(zhǎng)肋日月貝生長(zhǎng)海域海水升至24?25°C，選取2齡以上的長(zhǎng)肋日月貝為雜交親貝；當(dāng)蝦夷扇貝生長(zhǎng)海域海水升至2?3°C，選取2齡以上的蝦夷扇貝雌貝為雜交親貝。
[0007]將雜交親貝洗凈消毒后，分別放入不同的培育池中培養(yǎng)，培養(yǎng)密度均為10?15個(gè)/m3水體，早晚各投喂一次金藻和新月菱形藻混合藻及酵母粉與鼠尾藻粉發(fā)酵液，所述混合藻每天投喂量為10?15萬(wàn)個(gè)/ml水體，所述發(fā)酵液添加量為5?8 ppm/m3水體;長(zhǎng)肋日月親貝的培育水溫從24?25°C開始，每天降溫0.5 °C，直至降溫至18±0.5 °C，恒溫培育至性腺成熟，蝦夷扇貝親貝的培育水溫從2?3°C開始，每天升溫0.5 °C，直至升溫至7±0.50C，恒溫培育至性腺成熟。
[0008]將所述性腺成熟的雜交親貝在常溫條件下陰干2h，再流水刺激雜交親貝0.5?Ih，將蝦夷扇貝雌貝放入紫外線照射的12°C海水中，將長(zhǎng)肋日月貝放入紫外線照射的20°C海水中，分別收集蝦夷扇貝所產(chǎn)的卵和長(zhǎng)肋日月貝排出的精子。
[0009]所述收集長(zhǎng)肋日月貝排出的精子是當(dāng)長(zhǎng)肋日月貝親貝排精時(shí)，將排精的長(zhǎng)肋日月貝親貝浸入盛裝有紫外線照射20°C的海水容器中，長(zhǎng)肋日月貝親貝繼續(xù)排精5?10 min,收集精子。
[0010]如向浸有長(zhǎng)肋日月貝的紫外線照射的20°C海水中加氫氧化鈉溶液將海水pH升高至9.0?9.2，可加速長(zhǎng)肋日月貝親貝排精。
[0011]所述收集長(zhǎng)肋日月貝排出的精子是通過(guò)解剖方法獲得長(zhǎng)肋日月貝雄性生殖腺，將獲得的生殖腺通過(guò)600目篩網(wǎng)過(guò)濾到0.2%。氨海水燒杯中，并向燒杯中加入終濃度為0.2?0.5 ppm小牛血清活化，活化20?30 min后收集精子。
[0012]所述d步驟如下:將收集卵子中的海水溫度緩慢升至18?19°C，將收集精子中的海水溫度緩慢減至18?19°C，將長(zhǎng)肋日月貝精子和蝦夷扇貝卵細(xì)胞按10?15:1的比例混合受精，受精前將18?19°(:海水鹽度調(diào)至33.5?34.0，受精過(guò)程中以低功率造浪栗攪動(dòng)水體，使精、卵細(xì)胞分布均勻并最終形成受精卵，將受精卵在孵化池中孵化至D形幼蟲，孵化期間微充氣，每小時(shí)攪水一次。
[0013]所述e步驟如下:將所述D形幼蟲用400目篩網(wǎng)選優(yōu)，移到培育池中充氣培養(yǎng)，培育池中D形幼蟲培育密度為12?15 ind/ml，培育池中海水均經(jīng)三級(jí)沙濾，培育水溫18?19°C，pH為8.02?8.15，鹽度為32.3?33.1，培育池每天早晚各換水一次，每天換水量為80?150%，所述D形幼蟲開口餌料為金藻，每天投喂量為1.5?2.0萬(wàn)個(gè)/ml水體，待D形幼蟲平均殼長(zhǎng)為120 pm時(shí)，開始投喂金藻和新月菱形藻，每天金藻投喂量為2.0?2.5萬(wàn)個(gè)/ml水體，每天菱形藻投喂量為1.5?2.0萬(wàn)個(gè)/ml水體;待D形幼蟲平均殼長(zhǎng)為160 ym時(shí)，在所述投喂餌料的基礎(chǔ)上補(bǔ)投扁藻，扁藻每天投喂量為0.5?1.0萬(wàn)個(gè)/ml水體，直至長(zhǎng)成到稚貝。
[0014]本發(fā)明是以蝦夷扇貝雌貝與長(zhǎng)肋日月貝作為親貝，在水溫18?19°C的條件下授精，精子、卵細(xì)胞受精率高，胚胎和幼蟲發(fā)育速度快，發(fā)育到D形幼蟲和稚貝的時(shí)間均顯著縮短，可提供生長(zhǎng)快、抗逆性強(qiáng)的雜交貝苗種，最終獲得的扇貝以及子代雜交扇貝適應(yīng)高溫環(huán)境的能力有所增強(qiáng)，在海水達(dá)到26°C仍沒有出現(xiàn)死亡現(xiàn)象，可擴(kuò)大蝦夷扇貝的養(yǎng)殖范圍。
【具體實(shí)施方式】
[0015]本發(fā)明提高蝦夷扇貝高溫耐受的雜交育種方法，按如下步驟進(jìn)行:
a.選取長(zhǎng)肋日月貝和蝦夷扇貝雌貝作為雜交親貝:
在3月中旬，當(dāng)長(zhǎng)肋日月貝生長(zhǎng)海域海水升至24?25°C，選取2齡以上的長(zhǎng)肋日月貝為雜交親貝；當(dāng)蝦夷扇貝生長(zhǎng)海域海水升至2?3°C，選取2齡以上的蝦夷扇貝雌貝為雜交親貝。
[0016]b.人工培育使雜交親貝性腺同時(shí)成熟:
將雜交親貝洗凈消毒后，分別放入不同的培育池中培養(yǎng)，培養(yǎng)密度均為10?15個(gè)/m3水體，早晚各投喂一次金藻和新月菱形藻混合藻及酵母粉與鼠尾藻粉發(fā)酵液，所述混合藻每天投喂量為10?15萬(wàn)個(gè)/ml水體，所述發(fā)酵液添加量為5?8 ppm/m3水體;長(zhǎng)肋日月親貝的培育水溫從24?25°C開始，每天降溫0.5 °C，直至降溫至18±0.5 °C，恒溫培育至性腺成熟，蝦夷扇貝親貝的培育水溫從2?3°C開始，每天升溫0.5 °C，直至升溫至7±0.5 °C，恒溫培育至性腺成熟。這樣，可保證長(zhǎng)肋日月親貝性腺和蝦夷扇貝親貝性腺同時(shí)成熟。
[0017]c.催產(chǎn)得到蝦夷扇貝雌貝卵子和長(zhǎng)肋日月貝精子:
將所述性腺成熟的雜交親貝在常溫條件下陰干2 h，再流水刺激雜交親貝0.5?I h，將蝦夷扇貝雌貝放入紫外線照射的12°C海水中，將長(zhǎng)肋日月貝放入紫外線照射的20°C海水中，分別收集蝦夷扇貝所產(chǎn)的卵和長(zhǎng)肋日月貝排出的精子，即發(fā)現(xiàn)長(zhǎng)肋日月貝親貝排精時(shí)，立即將排精的長(zhǎng)肋日月貝親貝浸入盛裝有紫外線照射20°C的海水容器中，長(zhǎng)肋日月貝親貝可繼續(xù)排精5?10 min，收集精子。
[0018]如長(zhǎng)肋日月貝親貝排精慢，可向浸有長(zhǎng)肋日月貝的紫外線照射的20°C海水中加氫氧化鈉溶液將海水pH升高至9.0 - 9.2,加速長(zhǎng)肋日月貝親貝排精。
[0019]還可以通過(guò)解剖方法獲得長(zhǎng)肋日月貝雄性生殖腺，將獲得的生殖腺通過(guò)600目篩網(wǎng)過(guò)濾到0.2%。氨海水燒杯中，并向燒杯中加入終濃度為0.2?0.5 ppm小牛血清活化，活化20?30 min后收集精子。
[0020]d.將卵子和精子進(jìn)行交配，產(chǎn)生受精卵并將受精卵孵化至D形幼蟲:
將收集卵子中的海水溫度緩慢升至18?19°C，將收集精子中的海水溫度緩慢減至18?19°C，將長(zhǎng)肋日月貝精子和蝦夷扇貝卵細(xì)胞按10?15:1的比例混合受精，受精前將18?19°(:海水鹽度調(diào)至33.5?34.0，受精過(guò)程中以低功率造浪栗攪動(dòng)水體，使精、卵細(xì)胞分布均勻并最終形成受精卵，將受精卵在孵化池中孵化至D形幼蟲，孵化期間微充氣，每小時(shí)攪水一次。
[0021]e.將D形幼蟲培育至稚貝:
將所述D形幼蟲用400目篩網(wǎng)選優(yōu)，移到培育池中充氣培養(yǎng)，培育池中D形幼蟲培育密度為12?15 ind/ml，培育池中海水均經(jīng)三級(jí)沙濾，培育水溫18?19°C，pHS8.02?8.15，鹽度為32.3?33.1，培育池每天早晚各換水一次，每天換水量為80?150%，所述D形幼蟲開口餌料為金藻，每天投喂量為1.5?2.0萬(wàn)個(gè)/ml水體，待D形幼蟲平均殼長(zhǎng)為120 μπι時(shí)，開始投喂金藻和新月菱形藻，每天金藻投喂量為2.0?2.5萬(wàn)個(gè)/ml水體，每天菱形藻投喂量為1.5?2.0萬(wàn)個(gè)/ml水體;待D形幼蟲平均殼長(zhǎng)為160 ym時(shí)，在所述投喂餌料的基礎(chǔ)上補(bǔ)投扁藻，扁藻每天投喂量為0.5?1.0萬(wàn)個(gè)/ml水體，直至長(zhǎng)成到稚貝。而普通蝦夷扇貝幼蟲最適生長(zhǎng)發(fā)育溫度為15.0?17.5 °C，水溫到達(dá)19.0 °C存活率明顯降低。
[0022]按照常規(guī)方法對(duì)稚貝進(jìn)行培育，獲得生長(zhǎng)快、個(gè)體大、耐高溫等優(yōu)良性狀的子代雜交扇貝。當(dāng)海水達(dá)到26°C仍沒有出現(xiàn)死亡現(xiàn)象，所得成貝在外觀、性狀等方面接近蝦夷扇貝，可將其擴(kuò)大至山東等沿海水域養(yǎng)殖，擴(kuò)大了蝦夷扇貝的養(yǎng)殖范圍。
【主權(quán)項(xiàng)】
1.一種提高蝦夷扇貝高溫耐受的雜交育種方法，其特征是按如下步驟進(jìn)行: a.選取長(zhǎng)肋日月貝和蝦夷扇貝雌貝作為雜交親貝； b.人工培育使雜交親貝性腺同時(shí)成熟； c.催產(chǎn)得到蝦夷扇貝雌貝卵子和長(zhǎng)肋日月貝精子； d.將卵子和精子進(jìn)行交配，產(chǎn)生受精卵并將受精卵孵化至D形幼蟲； e.將D形幼蟲培育至稚貝。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的提高蝦夷扇貝高溫耐受的雜交育種方法，其特征是所述a步驟如下:當(dāng)長(zhǎng)肋日月貝生長(zhǎng)海域海水升至24?25°C，選取2齡以上的長(zhǎng)肋日月貝為雜交親貝；當(dāng)蝦夷扇貝生長(zhǎng)海域海水升至2?3°C，選取2齡以上的蝦夷扇貝雌貝為雜交親貝。3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的提高蝦夷扇貝高溫耐受的雜交育種方法，其特征是所述b步驟如下:將雜交親貝洗凈消毒后，分別放入不同的培育池中培養(yǎng)，培養(yǎng)密度均為10?15個(gè)/m3水體，早晚各投喂一次金藻和新月菱形藻混合藻及酵母粉與鼠尾藻粉發(fā)酵液，所述混合藻每天投喂量為10?15萬(wàn)個(gè)/ml水體，所述發(fā)酵液添加量為5?8 ppm/m3水體;長(zhǎng)肋日月親貝的培育水溫從24?25°C開始，每天降溫0.5 °C，直至降溫至18±0.5 °C，恒溫培育至性腺成熟，蝦夷扇貝親貝的培育水溫從2?3°C開始，每天升溫0.5 °C，直至升溫至7±0.5 °C，恒溫培育至性腺成熟。4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的提高蝦夷扇貝高溫耐受的雜交育種方法，其特征是所述c步驟如下:將所述性腺成熟的雜交親貝在常溫條件下陰干2 h，再流水刺激雜交親貝0.5?I h，將蝦夷扇貝雌貝放入紫外線照射的12°C海水中，將長(zhǎng)肋日月貝放入紫外線照射的20°C海水中，分別收集蝦夷扇貝所產(chǎn)的卵和長(zhǎng)肋日月貝排出的精子。5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的提高蝦夷扇貝高溫耐受的雜交育種方法，其特征在于:所述收集長(zhǎng)肋日月貝排出的精子是當(dāng)長(zhǎng)肋日月貝親貝排精時(shí)，將排精的長(zhǎng)肋日月貝親貝浸入盛裝有紫外線照射20°C的海水容器中，長(zhǎng)肋日月貝親貝繼續(xù)排精5?10 min，收集精子。6.根據(jù)權(quán)利要求4所述的提高蝦夷扇貝高溫耐受的雜交育種方法，其特征在于:向浸有長(zhǎng)肋日月貝的紫外線照射的20°C海水中加氫氧化鈉溶液將海水pH升高至9.0?9.2。7.根據(jù)權(quán)利要求4所述的提高蝦夷扇貝高溫耐受的雜交育種方法，其特征在于:所述收集長(zhǎng)肋日月貝排出的精子是通過(guò)解剖方法獲得長(zhǎng)肋日月貝雄性生殖腺，將獲得的生殖腺通過(guò)600目篩網(wǎng)過(guò)濾到0.2%。氨海水燒杯中，并向燒杯中加入終濃度為0.2?0.5 ppm小牛血清活化，活化20?30 min后收集精子。8.根據(jù)權(quán)利要求4、5、6、7所述的提高蝦夷扇貝高溫耐受的雜交育種方法，其特征是所述d步驟如下:將收集卵子中的海水溫度緩慢升至18?19°C，將收集精子中的海水溫度緩慢減至18?19°C，將長(zhǎng)肋日月貝精子和蝦夷扇貝卵細(xì)胞按10?15:1的比例混合受精，受精前將18?19°C海水鹽度調(diào)至33.5?34.0,受精過(guò)程中以低功率造浪栗攪動(dòng)水體，使精、卵細(xì)胞分布均勻并最終形成受精卵，將受精卵在孵化池中孵化至D形幼蟲，孵化期間微充氣，每小時(shí)攪水一次。9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的提高蝦夷扇貝高溫耐受的雜交育種方法，其特征是所述e步驟如下:將所述D形幼蟲用400目篩網(wǎng)選優(yōu)，移到培育池中充氣培養(yǎng)，培育池中D形幼蟲培育密度為12?15 ind/ml，培育池中海水均經(jīng)三級(jí)沙濾，培育水溫18?19°C，pHS8.02?.8.15，鹽度為32.3?33.1，培育池每天早晚各換水一次，每天換水量為80?150%，所述D形幼蟲開口餌料為金藻，每天投喂量為1.5?2.0萬(wàn)個(gè)/ml水體，待D形幼蟲平均殼長(zhǎng)為120 μm時(shí)，開始投喂金藻和新月菱形藻，每天金藻投喂量為2.0?2.5萬(wàn)個(gè)/ml水體，每天菱形藻投喂量為1.5?2.0萬(wàn)個(gè)/ml水體;待D形幼蟲平均殼長(zhǎng)為160 ym時(shí)，在所述投喂餌料的基礎(chǔ)上補(bǔ)投扁藻，扁藻每天投喂量為0.5?1.0萬(wàn)個(gè)/ml水體，直至長(zhǎng)成到稚貝。
【文檔編號(hào)】A01K61/00GK105875453SQ201610274831
【公開日】2016年8月24日
【申請(qǐng)日】2016年4月28日
【發(fā)明人】常亞青, 寧軍號(hào), 張偉杰, 湛垚垚, 宋堅(jiān)
【申請(qǐng)人】大連海洋大學(xué)