一種鐵皮石斛組培苗生根壯苗的培養(yǎng)基的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及組培技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種鐵皮石斛組培苗生根壯苗的培養(yǎng)基，所述培養(yǎng)基由母液Ⅰ、母液II、母液III、母液Ⅳ、母液V和母液VI混合而成，且各個母液的體積比為5?8:1?2：1?2：1?2：5?8:0.01?0.02；所述母液VI由下列重量份的物質(zhì)組成：惡霉靈10?15mg/L、復(fù)硝酚鈉10?20mg/L、α?萘乙酸鈉10?50mg/L、微囊藻素10?50mg/L、胺鮮酯20?50mg/L。本發(fā)明具有能夠快速促進(jìn)壯苗生根，生根率達(dá)到100％，且壯苗生根后的植株平均根數(shù)達(dá)到25?30條的優(yōu)點(diǎn)，且制備工藝簡單易操作，便于推廣。
【專利說明】一種鐵皮石斛組培苗生根壯苗的培養(yǎng)基 【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及組培技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種鐵皮石斛組培苗生根壯苗的培養(yǎng)基。 【【背景技術(shù)】】
[0002] 鐵皮石斛(Dendrobium officinale)為蘭科石斛屬多年生草本植物，在《道藏》中 被列為"中華九大仙草"之首，具有強(qiáng)陰益精、養(yǎng)胃生津、降三高、提高人體免疫力、抗衰老、 抗腫瘤等功效。因其具有獨(dú)特的功效，鐵皮石斛自古以來一直為廣大養(yǎng)生之士所青睞。野生 鐵皮石斛主要分布在浙江、安徽、貴州、江西、云南等地，鐵皮石斛種子因其獨(dú)特的構(gòu)造，無 法獨(dú)自萌發(fā)，只有在碰到合適的共生菌的情況下才有可能自然萌發(fā)，加之人們對野生資源 的瘋狂采挖，現(xiàn)在野生鐵皮石斛資源已經(jīng)瀕臨滅絕。因藥用需求的不斷發(fā)展，野生石斛資源 瀕于滅絕，建立一種高效的人工栽培生產(chǎn)技術(shù)是當(dāng)前必需解決的重要課題。石斛組織培養(yǎng) 快繁育苗技術(shù)業(yè)已成熟，主要面臨的問題是試管苗出瓶移栽成活率低和生長慢的兩大難 題。目前，盡管對石斛試管苗移栽的苗齡、移栽時間、移栽條件有過研究，但試管苗出瓶移栽 成活率仍然較低且生長緩慢。傳統(tǒng)的鐵皮石斛組織培養(yǎng)中，壯苗生根一般是在基礎(chǔ)培養(yǎng)基 的基礎(chǔ)上通過添加激素如NAA、6-BA等促進(jìn)鐵皮石斛種苗的生長和增值，但是這些傳統(tǒng)的方 法還是無法達(dá)到促進(jìn)栽培苗速生優(yōu)質(zhì)。 【
【發(fā)明內(nèi)容】
】
[0003] 本發(fā)明的發(fā)明目的在于：針對上述存在的問題，提供一種鐵皮石斛組培苗生根壯 苗的培養(yǎng)基，能夠快速促進(jìn)壯苗生根，生根率達(dá)到100%，且壯苗生根后的植株平均根數(shù)達(dá) 到25-30條。
[0004] 為了實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用的技術(shù)方案如下：
[0005] -種鐵皮石斛組培苗生根壯苗的培養(yǎng)基，所述培養(yǎng)基由母液I、母液II、母液III、 母液IV、母液V和母液Vr混合而成，且各個母液的體積比為5-8:1-2 :1-2 :1-2: 5-8 :0.01-〇. 02;所述母液VI由下列重量份的物質(zhì)組成：惡霉靈10-15mg/L、復(fù)硝酚鈉10-20mg/L、a-萘 乙酸鈉10-50mg/L、微囊藻素10-50mg/L、胺鮮酯20-50mg/L。
[0006] 進(jìn)一步的說明，所述母液I由下列重量份的物質(zhì)組成:硝酸銨800-900mg/L、磷酸二 氫鉀 140-150mg/L、硫酸鎂 170-190mg/L、硝酸鉀 900-1000mg/L、二水合氯化鈣 900-1000mg/ L；
[0007] 所述母液II由下列重量份的物質(zhì)組成:五水合硫酸銅0.040-0.060mg/L、硼酸0.6-0 · 8mg/L、硫酸錳 15 · 5-17 · 5mg/L、硫酸鋅 8-9mg/L、氯化鈷 0· 04-0.06mg/L、碘化鉀 0 · 3-0 · 5mg/L、鉬酸鈉 0 · 2-0 · 35mg/L;
[0008] 所述母液III由下列重量份的物質(zhì)組成：七水合硫酸亞鐵25-29mg/L、乙二胺四乙 酸鈉 35-40mg/L;
[0009] 所述母液IV由下列重量份的物質(zhì)組成:甘氨酸2-5mg/L、肌醇100-115mg/L、鹽酸硫 胺素0 · 3-0 · 55mg/L、鹽酸吡哆素0 · 3-0 · 5mg/L、煙酸0 · 3-0 · 55mg/L;
[0010] 所述母液V由下列重量份的物質(zhì)組成：吲哚丁酸1.2-2mg/L、萘乙酸1.2-2.0g/L、碳 粉0 · 7-lg/L、瓊脂5 · 6-6 · Og/L、香蕉110-125g/L、白砂糖 15-22g/L。
[0011] 進(jìn)一步的說明，所述母液I由下列重量份的物質(zhì)組成:硝酸銨820mg/L、磷酸二氫鉀 146.5mg/L、硫酸鎂 176mg/L、硝酸鉀953mg/L、二水合氯化 鈣965mg/L;
[0012] 所述母液II由下列重量份的物質(zhì)組成：五水合硫酸銅0.048mg/L、硼酸0.65mg/L、 硫酸錳16 · 6mg/L、硫酸鋅8 · 5mg/L、氯化鈷(h 048mg/L、碘化鉀(h 39mg/L、鉬酸鈉 (h 27mg/L;
[0013] 所述母液III由下列重量份的物質(zhì)組成:七水合硫酸亞鐵28.2mg/L、乙二胺四乙酸 鈉36.7mg/L;
[0014] 所述母液IV由下列重量份的物質(zhì)組成:甘氨酸2.3mg/L、肌醇112.5mg/L、鹽酸硫胺 素0 · 47mg/L、鹽酸吡咳素0 · 45mg/L、煙酸0 · 46mg/L;
[0015] 所述母液V由下列重量份的物質(zhì)組成：吲哚丁酸1.95mg/L、萘乙酸1.39g/L、碳粉 0 · 95g/L、瓊脂5 · 85g/L、香蕉121g/L、白砂糖19 · 5g/L。
[0016] 進(jìn)一步的說明，所述母液VI由下列重量份的物質(zhì)組成:惡霉靈12.5mg/L、復(fù)硝酚鈉 18 · 8mg/L、a-萘乙酸鈉 22 · 5mg/L、微囊藻素 20mg/L、胺鮮酯 31 · 8mg/L。
[0017]進(jìn)一步的說明，所述培養(yǎng)基的ρΗ=5·0-6·0。
[0018] 進(jìn)一步的說明，所述培養(yǎng)基的配置是將母液I、母液II、母液III、母液IV、母液V和 母液VI分別按照各自的重量份配置后，按照體積比為5-8:1-2:1-2:1-2:5-8:0.01-0.02混 合，再煮沸調(diào)節(jié)PH，最后進(jìn)行高壓滅菌后即可。
[0019]綜上所述，由于采用了上述技術(shù)方案，本發(fā)明的有益效果是：
[0020] 1.本發(fā)明在傳統(tǒng)的培養(yǎng)基的配方上改進(jìn)，且進(jìn)一步的進(jìn)行研究，添加一些能夠在 鐵皮石斛苗在生根壯苗期間所需的因子，能夠提供生根的良好條件，促進(jìn)苗健康茁壯，經(jīng)過 研究發(fā)現(xiàn)采用本發(fā)明的基礎(chǔ)培養(yǎng)液后添加本發(fā)明的母液母液VI配方，能夠快速促進(jìn)壯苗生 根，生根率達(dá)到100%，且壯苗生根后的植株平均根數(shù)達(dá)到25-30條;其中胺鮮酯能夠高植物 過氧化物酶和硝酸還原酶的活性，促進(jìn)根系的發(fā)育，調(diào)節(jié)體內(nèi)養(yǎng)分的平衡;微囊藻素中富含 有活性氧，植物中低濃度的活性氧作為第二信使能在植物細(xì)胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑中介導(dǎo)多種應(yīng) 答反應(yīng)，但是高濃度的活性氧則引起生物大分子的氧化損傷甚至細(xì)胞死亡，經(jīng)過試驗(yàn)研究 在配方中添加微囊藻素20mg/L且占在整個培養(yǎng)基配方中的0.01-0.02，保證能夠提供給植 物低濃度的活性氧，不會損傷細(xì)胞，起到第二信使的作用，促進(jìn)生長素流向植物系統(tǒng)，使得 根向地性更好，促進(jìn)直根系生長;復(fù)配上的a-萘乙酸鈉，能誘導(dǎo)形成不定根，調(diào)節(jié)生長、促進(jìn) 生根，但是其的滲透力較差，需要借助外力將其帶動流向植物全身;復(fù)硝酚鈉能夠與植物接 觸后能迅速滲透到植物體內(nèi)，促進(jìn)細(xì)胞的原生質(zhì)流動，提高細(xì)胞活力，a-萘乙酸鈉在復(fù)硝酚 鈉的帶動下也能迅速的滲透至植物體內(nèi)；在組培過程中往往會出現(xiàn)黃化現(xiàn)象，一般兩個原 因，細(xì)胞活性不足死亡和病菌感染死亡，惡霉靈的復(fù)配添加能夠有效的抑制病原真菌菌絲 體的正常生長或直接殺死病菌，又能促進(jìn)植物生長;并具有促進(jìn)作物根系生長發(fā)育、生根壯 苗，提且其滲透率極高，兩個小時就能移動到莖部，保證了鐵皮石斛苗在第一時間上擁有健 康的培養(yǎng)環(huán)境，提高鐵皮石斛苗的成活率。
[0021 ] 2.本發(fā)明的設(shè)計思路新穎，制備工藝簡單，易操作，具有極大的推廣意義。 【【具體實(shí)施方式】】
[0022] 實(shí)施例1:
[0023] -種鐵皮石斛組培苗生根壯苗的培養(yǎng)基，由母液I、母液II、母液III、母液IV、母液 V和母液VI按照體積比為5:1:1:1:5:0.01混合，再煮沸調(diào)節(jié)pH = 5.0，最后進(jìn)行高壓滅菌后 即可；
[0024] 母液I由下列重量份的物質(zhì)組成:硝酸銨800-900mg/L、磷酸二氫鉀140-150mg/L、 硫酸鎂 170-190mg/L、硝酸鉀900-1000mg/L、二水合氯化鈣900-1000mg/L;
[0025] 母液II由下列重量份的物質(zhì)組成：五水合硫酸銅0.040-0.060mg/L、硼酸0.6-0 · 8mg/L、硫酸錳 15 · 5-17 · 5mg/L、硫酸鋅 8-9mg/L、氯化鈷 0· 04-0.06mg/L、碘化鉀 0 · 3-0 · 5mg/L、鉬酸鈉 0 · 2-0 · 35mg/L;
[0026] 母液III由下列重量份的物質(zhì)組成：七水合硫酸亞鐵25-29mg/L、乙二胺四乙酸鈉 35_40mg/L;
[0027] 母液IV由下列重量份的物質(zhì)組成:甘氨酸2-5mg/L、肌醇100-115mg/L、鹽酸硫胺素 0 · 3-0 · 55mg/L、鹽酸吡哆素0 · 3-0 · 5mg/L、煙酸0 · 3-0 · 55mg/L;
[0028] 母液V由下列重量份的物質(zhì)組成：吲哚丁酸1.2-2mg/L、萘乙酸1.2-2.0g/L、碳粉 0 · 7-lg/L、瓊脂5 · 6-6 · Og/L、香蕉110-125g/L、白砂糖 15-22g/L。
[0029] 母液VI由下列重量份的物質(zhì)組成:惡霉靈10_15mg/L、復(fù)硝酚鈉10-20mg/L、a-萘乙 酸鈉 10-50mg/L、微囊藻素 10-50mg/L、胺鮮酯 20-50mg/L。
[0030] 實(shí)施例2:
[0031 ] -種鐵皮石斛組培苗生根壯苗的培養(yǎng)基，由母液I、母液II、母液III、母液IV、母液 V和母液VI按照體積比為8: 2:2:2:8:0.02混合，再煮沸調(diào)節(jié)pH = 6.0，最后進(jìn)行高壓滅菌后 即可；
[0032] 母液I由下列重量份的物質(zhì)組成:硝酸銨800-900mg/L、磷酸二氫鉀140-150mg/L、 硫酸鎂 170-190mg/L、硝酸鉀900-1000mg/L、二水合氯化鈣900-1000mg/L;
[0033] 母液II由下列重量份的物質(zhì)組成：五水合硫酸銅0.040-0.060mg/L、硼酸0.6-0 · 8mg/L、硫酸錳 15 · 5-17 · 5mg/L、硫酸鋅 8-9mg/L、氯化鈷 0· 04-0.06mg/L、碘化鉀 0 · 3-0 · 5mg/L、鉬酸鈉 0 · 2-0 · 35mg/L;
[0034] 母液III由下列重量份的物質(zhì)組成：七水合硫酸亞鐵25-29mg/L、乙二胺四乙酸鈉 35_40mg/L;
[0035] 母液IV由下列重量份的物質(zhì)組成:甘氨酸2-5mg/L、肌醇100-115mg/L、鹽酸硫胺素 0 · 3-0 · 55mg/L、鹽酸吡哆素0 · 3-0 · 5mg/L、煙酸0 · 3-0 · 55mg/L;
[0036] 母液V由下列重量份的物質(zhì)組成：吲哚丁酸1.2-2mg/L、萘乙酸1.2-2.0g/L、碳粉 0 · 7-lg/L、瓊脂5 · 6-6 · Og/L、香蕉110-125g/L、白砂糖 15-22g/L。
[0037] 母液VI由下列重量份的物質(zhì)組成:惡霉靈10_15mg/L、復(fù)硝酚鈉10-20mg/L、a-萘乙 酸鈉 10-50mg/L、微囊藻素 10-50mg/L、胺鮮酯 20-50mg/L。
[0038] 實(shí)施例3:
[0039] -種鐵皮石斛組培苗生根壯苗的培養(yǎng)基，由母液I、母液II、母液III、母液IV、母液 V和母液VI按照體積比為7:1:2:2:6:0.015混合，再煮沸調(diào)節(jié)pH = 5.8,最后進(jìn)行高壓滅菌后 即可；
[0040] 母液I由下列重量份的物質(zhì)組成:硝酸銨820mg/L、磷酸二氫鉀146.5mg/L、硫酸鎂 176mg/L、硝酸鉀953mg/L、二水合氯化|丐96511^凡；
[0041 ] 母液II由下列重量份的物質(zhì)組成：五水合硫酸銅0.048mg/L、硼酸0.65mg/L、硫酸 錳16 · 6mg/L、硫酸鋅 8 · 5mg/L、氯化鈷 0· 048mg/L、碘化鉀 O · 39mg/L、鉬酸鈉 0· 27mg/L;
[0042] 母液III由下列重量份的物質(zhì)組成：七水合硫酸亞鐵28.2mg/L、乙二胺四乙酸鈉 36.7mg/L；
[0043] 母液IV由下列重量份的物質(zhì)組成：甘氨酸2.3mg/L、肌醇112.5mg/L、鹽酸硫胺素 0 · 47mg/L、鹽酸吡咳素 0 · 45mg/L、煙酸 0 · 46mg/L;
[0044] 母液V由下列重量份的物質(zhì)組成：吲哚丁酸1.95mg/L、萘乙酸1.39g/L、碳粉0.95g/ L、瓊脂5.85g/L、香蕉 121g/L、白砂糖 19.5g/L。
[0045] 母液VI由下列重量份的物質(zhì)組成:惡霉靈12.5mg/L、復(fù)硝酚鈉18.8mg/L、α-萘乙酸 鈉 22 · 5mg/L，微囊藻素 20mg/L，胺鮮酯31 · 8mg/L。
[0046] 實(shí)施例4:
[0047] 不含母液VI成分，其余與實(shí)施例1相同。
[0048] 實(shí)施例5:
[0049]母液VI由下列重量份的物質(zhì)組成：惡霉靈20mg/L、復(fù)硝酚鈉30mg/L、a-萘乙酸鈉 100mg/L，微囊藻素60mg/L，胺鮮酯60mg/L;其余與實(shí)施例1相同。
[0050] 實(shí)施例6:
[00511 培養(yǎng)基由母液I、母液II、母液III、母液IV、母液V和母液vr混合而成，且各個母液 的體積比為5:1:1:1:5:0.05;其余與實(shí)施例5相同。
[0052]試驗(yàn)例:選擇苗高為3-5cm、葉片數(shù)3-5片的無根鐵皮石斛種苗，棄去黃化和發(fā)育不 良的種苗，無菌條件下接入實(shí)施例1-6制備得到的培養(yǎng)基，每個處理接種10瓶，每瓶10顆，培 養(yǎng)溫度(25±1)°C，光照強(qiáng)度2000-25001X，光照時間12h/cL60d后觀察統(tǒng)計鐵皮石斛苗生根 和生長情況，并記錄生根條數(shù)、根粗、生根率，結(jié)果見表1;
[0053]表1各個實(shí)施例鐵皮石斛苗的生長情況
均根數(shù)和根粗也優(yōu)于其他實(shí)施例，且實(shí)施例3為最佳效果配方。實(shí)施例4中沒有添加母液VI， 其他條件均與本發(fā)明技術(shù)方案相同，其生根率也達(dá)到100%，但是根數(shù)和根粗均比實(shí)施例1-3要低;實(shí)施例5,增加了母液VI中各個成分的含量，但是占整個培養(yǎng)基體積的量與實(shí)施例1 相同，生根率降低了五個百分點(diǎn)，根數(shù)和根粗均急速下降；實(shí)施例6,不僅與實(shí)施例5相同增 加了母液VI中各個成分的含量，且提高占據(jù)整個培養(yǎng)基體積的份數(shù)，不僅沒有起到生根壯 苗的效果，反而嚴(yán)重的影響了鐵皮石斛苗的生長，使得細(xì)胞死亡，鐵皮石斛苗黃化發(fā)育不 良，影響生根率，根數(shù)與根粗與實(shí)施例1-3降低了50%以上。
[0056]上述說明是針對本發(fā)明較佳可行實(shí)施例的詳細(xì)說明，但實(shí)施例并非用以限定本發(fā) 明的專利申請范圍，凡本發(fā)明所提示的技術(shù)精神下所完成的同等變化或修飾變更，均應(yīng)屬 于本發(fā)明所涵蓋專利范圍。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種鐵皮石斛組培苗生根壯苗的培養(yǎng)基，其特征在于:所述培養(yǎng)基由母液I、母液II、 母液III、母液IV、母液V和母液Vr混合而成，且各個母液的體積比為5-8:1-2:1-2:1-2:5-8: 0.01-0.02;所述母液￥1由下列重量份的物質(zhì)組成:惡霉靈10-1511^/1、復(fù)硝酚鈉10-201^/1、 α-萘乙酸鈉10-50mg/L、微囊藻素10-50mg/L、胺鮮酯20-50mg/L。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種鐵皮石斛組培苗生根壯苗的培養(yǎng)基，其特征在于:所述母 液I由下列重量份的物質(zhì)組成:硝酸銨800-900mg/L、磷酸二氫鉀140-150mg/L、硫酸鎂170-190mg/L、硝酸鉀900-1000mg/L、二水合氯化鈣900-1000mg/L; 所述母液Π 由下列重量份的物質(zhì)組成：五水合硫酸銅0.040-0.060mg/L、硼酸0.6-0 · 8mg/L、硫酸錳 15 · 5-17 · 5mg/L、硫酸鋅 8-9mg/L、氯化鈷 0· 04-0.06mg/L、碘化鉀 0 · 3-0 · 5mg/L、鉬酸鈉 0 · 2-0 · 35mg/L; 所述母液III由下列重量份的物質(zhì)組成：七水合硫酸亞鐵25-29mg/L、乙二胺四乙酸鈉 35_40mg/L; 所述母液IV由下列重量份的物質(zhì)組成:甘氨酸2_5mg/L、肌醇100-115mg/L、鹽酸硫胺素 0 · 3-0 · 55mg/L、鹽酸吡哆素0 · 3-0 · 5mg/L、煙酸0 · 3-0 · 55mg/L; 所述母液V由下列重量份的物質(zhì)組成：吲哚丁酸1.2-2mg/L、萘乙酸1.2-2 . Og/L、碳粉 0 · 7-lg/L、瓊脂5 · 6-6 · Og/L、香蕉110-125g/L、白砂糖 15-22g/L。3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種鐵皮石斛組培苗生根壯苗的培養(yǎng)基，其特征在于:所述母 液I由下列重量份的物質(zhì)組成：硝酸銨820mg/L、磷酸二氫鉀146.5mg/L、硫酸鎂176mg/L、硝 酸鉀953mg/L、二水合氯化鈣965mg/L; 所述母液Π 由下列重量份的物質(zhì)組成：五水合硫酸銅0.048mg/L、硼酸0.65mg/L、硫酸 錳16 · 6mg/L、硫酸鋅 8 · 5mg/L、氯化鈷 0· 048mg/L、碘化鉀 0 · 39mg/L、鉬酸鈉 0· 27mg/L; 所述母液III由下列重量份的物質(zhì)組成：七水合硫酸亞鐵28.2mg/L、乙二胺四乙酸鈉 36.7mg/L； 所述母液IV由下列重量份的物質(zhì)組成：甘氨酸2.3mg/L、肌醇112.5mg/L、鹽酸硫胺素 0 · 47mg/L、鹽酸吡咳素 0 · 45mg/L、煙酸 0 · 46mg/L; 所述母液V由下列重量份的物質(zhì)組成：吲哚丁酸1.95mg/L、萘乙酸1.39g/L、碳粉0.95g/ L、瓊脂5.85g/L、香蕉 121g/L、白砂糖 19.5g/L。4. 根據(jù)權(quán)利要求1或2或3所述的一種鐵皮石斛組培苗生根壯苗的培養(yǎng)基，其特征在于： 所述母液VI由下列重量份的物質(zhì)組成：惡霉靈12.5mg/L、復(fù)硝酚鈉18.8mg/L、a-萘乙酸鈉 22.5mg/、微囊藻素 20mg/L、胺鮮酯 31.8mg/L。5. 根據(jù)權(quán)利要求2或3所述的一種鐵皮石斛組培苗生根壯苗的培養(yǎng)基，其特征在于:所 述培養(yǎng)基的PH=5.0-6.0。6. 根據(jù)權(quán)利要求5所述的一種鐵皮石斛組培苗生根壯苗的培養(yǎng)基，其特征在于:所述培 養(yǎng)基的配置是將母液I、母液II、母液III、母液IV、母液V和母液VI分別按照各自的重量份配 置后，按照體積比為5-8:1-2:1-2:1-2:5-8:0.01-0.02混合，再煮沸調(diào)節(jié)pH，最后進(jìn)行高壓 滅菌后即可。
【文檔編號】A01H4/00GK105941144SQ201610271756
【公開日】2016年9月21日
【申請日】2016年4月27日
【發(fā)明人】張小英, 吳長城
【申請人】凌云縣長生仙草生物科技開發(fā)有限公司