鱉雄性四倍體純系的高效育成方法
【專(zhuān)利摘要】本發(fā)明公開(kāi)了一種鱉雄性四倍體純系的高效育成方法，包括如下步驟：他莫昔芬喂養(yǎng)料的配備、對(duì)母鱉進(jìn)行投喂他莫昔芬喂養(yǎng)料、熱休克處理、雌激素抑制劑溶液的配制、獲得鱉的雄性四倍體純系。通過(guò)此方法，可獲得100%的鱉的雄性四倍體純系，不僅有效地育成鱉的四倍體，而且提高了四倍體的育成率與出苗率；為生產(chǎn)三倍體不育鱉奠定了堅(jiān)實(shí)的基礎(chǔ)。
【專(zhuān)利說(shuō)明】
鱉雄性四倍體純系的高效育成方法
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明涉及鱉的多倍體繁育方法，具體涉及鱉雄性四倍體純系的高效育成方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 鱉，以中華鱉為優(yōu)，又稱(chēng)團(tuán)魚(yú)、甲魚(yú)等。隸屬爬行綱、龜鱉目、鱉科，常見(jiàn)的為二倍 體，鱉肉味道鮮美，營(yíng)養(yǎng)豐富，有清熱養(yǎng)陰，平肝熄風(fēng)，軟堅(jiān)散結(jié)等作用，二倍體生長(zhǎng)緩慢，養(yǎng) 殖周期達(dá)4-5年。因三倍體的不育特征，使鱉在生長(zhǎng)速度、抗病性、肉質(zhì)等方面表現(xiàn)出更為顯 著的優(yōu)勢(shì)?，F(xiàn)有技術(shù)中，要獲得三倍體不育鱉，最快捷有效的方法是通過(guò)四倍體鱉與二倍體 鱉倍間雜交獲得，那么就需要建立遺傳穩(wěn)定、純度極高的四倍體鱉純系。但在鱉的遺傳育種 中，到目前為止還未見(jiàn)四倍體全雄鱉高效育成的報(bào)道。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0003] 針對(duì)上述現(xiàn)有技術(shù)存在的缺陷，本發(fā)明的目的是提供一種方法穩(wěn)定、種群純度高 達(dá)100%的鱉魚(yú)雄性四倍體純系高效育成方法。
[0004] 為達(dá)到上述目的，本發(fā)明的技術(shù)方案如下： 鱉雄性四倍體純系的高效育成方法，包括如下步驟： (1) 他莫昔芬喂養(yǎng)料的配備:取純度為95%以上的他莫昔芬粉劑，加入到鱉常規(guī)飼養(yǎng)飼 料中，制成喂養(yǎng)料，其中他莫昔芬含量為8~10g/500g飼料，待用； (2) 投喂:在母鱉產(chǎn)蛋前，按常規(guī)飼料投喂方法對(duì)母鱉進(jìn)行投喂他莫昔芬喂養(yǎng)料，每天 三次，早上8:00每100g母鱉投喂15~18g，中午12點(diǎn)每100g母鱉投喂10~15g，下午6:00每 100g母鱉投喂5~IOg，直至產(chǎn)蛋； (3) 熱休克處理:把受精蛋放入溫度為25~32°C、濕度為40~80%的恒溫孵化器中，在一 次卵裂前2~3min，把溫度快速升至39~42°C，保持3~5min;然后溫度降至28~32°C ; (4) 雌激素抑制劑溶液的配制:將氯米芬和睪酮一起溶于80%~90%的乙醇中，再加蒸餾 水配制成雌激素抑制劑溶液，其中雌激素抑制劑溶液中氯米芬的濃度為180~250mg/l，睪 酮的濃度為100~150mg/l; (5) 用步驟(4)所制備的雌激素抑制劑溶液，放入噴霧器中，對(duì)經(jīng)過(guò)步驟(3)處理的受精 蛋進(jìn)行均勻噴霧，用量每100只受精蛋為8~15ml，保持孵化器的溫度28~32°C、濕度40~ 80%，進(jìn)行孵化;從而獲得100%鱉的雄性四倍體純系。
[0005] 本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)：1、本發(fā)明中對(duì)母本進(jìn)行添加他莫昔芬飼料投喂，起到抑制DNA分裂 和促雄性的雙重作用的同時(shí)，將受精蛋第一次卵裂的時(shí)間推遲了 3~5min，并提高所有受精 蛋第一次卵裂的同步程度(可達(dá)99%)，為操作下一步提供時(shí)間保障和奠定染色體加倍基礎(chǔ)； 2、采用熱休克短時(shí)間處理受精蛋，不僅有效減少對(duì)受精蛋的不良影響，提高受精蛋的成活 率;而且進(jìn)一步加強(qiáng)了四倍體的形成機(jī)率;3、雌激素抑制劑溶液噴灑，再一次強(qiáng)化與保證其 雄性的轉(zhuǎn)化率。因而通過(guò)此方法，可獲得100%的鱉的雄性四倍體純系。此方法，不僅有效地 育成鱉的四倍體，而且提高了四倍體的育成率與出苗率;為生產(chǎn)三倍體不育鱉奠定了堅(jiān)實(shí) 的基礎(chǔ)。
【具體實(shí)施方式】
[0006] 現(xiàn)結(jié)合具體實(shí)施例，對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步描述。
[0007] 實(shí)施例一 鱉雄性四倍體純系的高效育成方法，包括如下步驟： (1) 他莫昔芬喂養(yǎng)料的配備:取純度為95%以上的他莫昔芬粉劑，加入到鱉魚(yú)常規(guī)飼養(yǎng) 飼料中，制成喂養(yǎng)料，其中他莫昔芬含量為10g/500g飼料，待用； (2) 投喂:在母鱉產(chǎn)蛋前，按常規(guī)飼料投喂方法對(duì)母本進(jìn)行投喂他莫昔芬喂養(yǎng)料，每天 三次，早上8:00每100g鱉魚(yú)投喂15g喂養(yǎng)料，中午12:00每100g鱉魚(yú)投喂15g喂養(yǎng)料，下午6: 00每100g鱉魚(yú)投喂IOg喂養(yǎng)料，直至產(chǎn)蛋； (3) 熱休克處理:把受精蛋放入溫度為32°C、濕度為80%的恒溫孵化器中，在一次卵裂前 3min，把溫度快速升至42°C，保持3min;然后溫度降至32°C ; (4) 雌激素抑制劑溶液的配制:將氯米芬和睪酮一起溶于90%的乙醇中，再加蒸餾水配 制成雌激素抑制劑溶液，其中雌激素抑制劑溶液中氯米芬的濃度為250mg/l，睪酮的濃度為 150mg/l； (5) 用步驟(4)所制備的雌激素抑制劑溶液，放入噴霧器中，對(duì)經(jīng)過(guò)步驟(3)處理的受精 蛋進(jìn)行均勻噴霧，用量每100只受精蛋為8ml，保持孵化器的溫度32°C、濕度80%，進(jìn)行孵化； 從而獲得1 〇〇%鱉的雄性四倍體純系。
[0008] 實(shí)施例二 鱉雄性四倍體純系的高效育成方法，包括如下步驟： (1) 他莫昔芬喂養(yǎng)料的配備:取純度為95%以上的他莫昔芬粉劑，加入到鱉魚(yú)常規(guī)飼養(yǎng) 飼料中，制成喂養(yǎng)料，其中他莫昔芬含量為8g/500g飼料，待用； (2) 投喂:在母鱉產(chǎn)蛋前，按常規(guī)飼料投喂方法對(duì)母本進(jìn)行投喂他莫昔芬喂養(yǎng)料，每天 三次，早上8:00每100g鱉魚(yú)投喂18g，中午12:00每100g鱉魚(yú)投喂15g喂養(yǎng)料，下午6:00每 100g鱉魚(yú)投喂IOg; (3) 熱休克處理:把受精蛋放入溫度為28°C、濕度為60%的恒溫孵化器中，在一次卵裂前 3min，把溫度快速升至42°C，保持5min;然后溫度降至28°C ; (4) 雌激素抑制劑溶液的配制:將氯米芬和睪酮一起溶于80%的乙醇中，再加蒸餾水配 制成雌激素抑制劑溶液，其中雌激素抑制劑溶液中氯米芬的濃度為230mg/l，睪酮的濃度為 140mg/l； (5) 用步驟(4)所制備的雌激素抑制劑溶液，放入噴霧器中，對(duì)經(jīng)過(guò)步驟(3)處理的受精 蛋進(jìn)行均勻噴霧，用量每100只受精蛋為15ml，保持孵化器的濕度60%、溫度28°C，進(jìn)行孵化； 從而獲得1 〇〇%鱉的雄性四倍體純系。
[0009] 上述兩個(gè)實(shí)施例僅為本發(fā)明的優(yōu)選方案之二，并不能限制本發(fā)明的保護(hù)范圍，任 意與本發(fā)明等同或相似的技術(shù)手段視為本發(fā)明的保護(hù)范圍。以下附上本發(fā)明部分處理方式 及結(jié)果統(tǒng)計(jì)。
[0010] 附:鱉雄性四倍體育成結(jié)果統(tǒng)計(jì)
注:上述結(jié)果是一次卵裂前3min、熱休克保持5min所取得的結(jié)果，其中熱休克時(shí)恒溫孵 化器的溫度為28°C、濕度為60%。
【主權(quán)項(xiàng)】
1.鱉雄性四倍體純系的高效育成方法，包括如下步驟： (1) 他莫昔芬喂養(yǎng)料的配備：取純度為95%以上的他莫昔芬粉劑，加入到鱉常規(guī)飼養(yǎng)飼 料中，制成喂養(yǎng)料，其中他莫昔芬含量為8~10g/500g飼料，待用； (2) 投喂：在母鱉產(chǎn)蛋前，按常規(guī)飼料投喂方法對(duì)母鱉進(jìn)行投喂他莫昔芬喂養(yǎng)料，每天 三次，早上8: OO每100g母鱉投喂15~18g，中午12點(diǎn)每100g母鱉投喂10~15g，下午6: OO每 100g母鱉投喂5~IOg，直至產(chǎn)蛋； (3) 熱休克處理:把受精蛋放入溫度為25~32°C、濕度為40~80%的恒溫孵化器中，在一 次卵裂前2~3min，把溫度快速升至39~42°C，保持3~5min;然后溫度降至28~32°C ; (4) 雌激素抑制劑溶液的配制:將氯米芬和睪酮一起溶于80%~90%的乙醇中，再加蒸餾 水配制成雌激素抑制劑溶液，其中雌激素抑制劑溶液中氯米芬的濃度為180~250mg/l，睪 酮的濃度為100~150mg/l; (5) 用步驟(4)所制備的雌激素抑制劑溶液，放入噴霧器中，對(duì)經(jīng)過(guò)步驟(3)處理的受精 蛋進(jìn)行均勻噴霧，用量每100只受精蛋為8~15ml，保持孵化器的溫度28~32°C、濕度40~ 80%，進(jìn)行孵化;從而獲得100%鱉的雄性四倍體純系。
【文檔編號(hào)】A01K67/027GK105941330SQ201610495560
【公開(kāi)日】2016年9月21日
【申請(qǐng)日】2016年6月30日
【發(fā)明人】楊品紅, 韓慶, 鄒萬(wàn)生
【申請(qǐng)人】湖南文理學(xué)院