一種雜交烏鱧精子保存液及其應(yīng)用
【專利摘要】本發(fā)明提供了一種雜交烏鱧精子保存液，以水為溶劑，每1L保存液中含有以下組分：7.5~8.5g的氯化鈉、0.4~0.5g氯化鉀、0.1~0.15g氯化鈣、0.2~0.6g碳酸氫鈉、8~15g葡萄糖，余量為水。本發(fā)明提供的雜交烏鱧精子保存液來源簡單，操作簡便易行，保存采用常規(guī)的低溫即可，經(jīng)過保存液保存的精子激活后，保存壽命長，激活率高，精子活力好，為雜交烏鱧的精子保存和生產(chǎn)繁殖提供了保證，具備較好的應(yīng)用前景。
【專利說明】
[0001] 一種雜交烏鱧精子保存液及其應(yīng)用
技術(shù)領(lǐng)域
[0002] 本發(fā)明屬于魚類養(yǎng)殖技術(shù)領(lǐng)域，更具體地，涉及一種雜交烏鱧精子保存液及其應(yīng) 用。
【背景技術(shù)】
[0003] 雜交烏鱧在分類學(xué)上屬于鱸形目、鱧亞目、鱧科、鱧屬，廣東俗稱生魚，是淡水兇猛 肉食性魚類。雜交烏鱧味道鮮美、營養(yǎng)豐富，廣受市場歡迎。近年來，市場上主要養(yǎng)殖的品種 是烏鱧(d)與同屬的斑鱧（罕）雜交產(chǎn)生的雜交鱧。烏鱧、斑鱧均是分批產(chǎn)卵魚類，在雜交鱧 繁殖過程中，經(jīng)常面臨雌、雄魚性成熟不同步或者雌性成熟度不足的現(xiàn)象。為了避免精子浪 費(fèi)，對精子進(jìn)行低溫保存，十分必要。一般來說，用液氮進(jìn)行超低溫保存，精子保存時(shí)間更 長、活力更強(qiáng)。但是對于大多數(shù)水產(chǎn)種苗企業(yè)來說，獲得與貯存液氮不太方便，而且精子超 低溫保存時(shí)對冷凍、復(fù)蘇程序與相關(guān)參數(shù)等方面技術(shù)要求較高，不易掌握。相對而言，常規(guī) 低溫(4°C)保存只需要普通冰箱，在生產(chǎn)實(shí)踐上更具有操作意義。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明的目的在于根據(jù)現(xiàn)有魚類精子保存技術(shù)中的不足，提供了一種雜交烏鱧精 子保存液。
[0005] 本發(fā)明的另一目的在于提供上述保存液在雜交烏鱧精子保存中的應(yīng)用。
[0006] 根據(jù)本發(fā)明提供的保存液可以較好地解決烏鱧雄魚與本種或同屬雌魚人工繁殖 時(shí)，性腺發(fā)育不同步的問題，以及在生產(chǎn)中面臨的精子快速失活的問題。
[0007] 本發(fā)明上述目的通過以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)： 本發(fā)明提供了一種雜交烏鱧精子保存液，以水為溶劑，每IL保存液中含有以下組分： 7.5~8.5g的氯化鈉、0.4~0.5g氯化鉀、0.1~0.15g氯化|丐、0.2~0.6g碳酸氫鈉、8~15g葡萄 糖，余M為水。
[0008] 優(yōu)選地，IL保存液中含有以下組分:8.2g的氯化鈉、0.47g氯化鉀、0.128g氯化鈣、 〇.4g碳酸氫鈉、IOg葡萄糖，余量為水； 所述保存液的滲透壓為343 mOsm/kg，pH值為7.4。
[0009] 將雜交烏鱧精子和所述保存液按照1:9的配比進(jìn)行稀釋，并置于4°C下保存。保存 96h后精子平均快速運(yùn)動(dòng)時(shí)間為177.4秒，總壽命為206.3秒，激活率為94.7%;保存120h后精 子平均快速運(yùn)動(dòng)時(shí)間為141.2秒，總壽命為158.4秒，激活率為82.5%。
[0010] 與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有以下有益效果： 本發(fā)明提供的雜交烏鱧精子保存液來源簡單，操作簡便易行，保存采用常規(guī)的低溫即 可，經(jīng)過保存液保存的精子激活后，保存壽命長，激活率高，精子活力好，為雜交烏鱧的精子 保存和生產(chǎn)繁殖提供了保證，具備較好的應(yīng)用前景。
【具體實(shí)施方式】
[0011] 以下結(jié)合具體實(shí)施例來進(jìn)一步說明本發(fā)明，但實(shí)施例并不對本發(fā)明做任何形式的 限定。除非特別說明，本發(fā)明采用的試劑、方法和設(shè)備為本技術(shù)領(lǐng)域常規(guī)試劑、方法和設(shè)備。
[0012] 除非特別說明，本發(fā)明所用試劑和材料均為市購。
[0013] 實(shí)施例1: 準(zhǔn)確稱取氯化鈉8.2g、氯化鉀0.47g、氯化鈣0.128g、碳酸氫鈉0.4g、葡萄糖IOg，溶解于 1升蒸餾水中，配制成精子保存液(總滲透壓為343!11〇8111/1^，？田直為7.4)。
[0014] 實(shí)施例2: 準(zhǔn)確稱取氯化鈉8.5g、氯化鉀0.5g、氯化媽0.15g、碳酸氫鈉0.6g、葡萄糖14g，溶解于1 升蒸餾水中，配制成精子保存液(總滲透壓為380m0sm/kg，調(diào)pH值至7.4)。
[0015] 對比例1: 準(zhǔn)確稱取碳酸氫鉀l〇g、磷酸二氫鈉 l〇g、蔗糖42.7g、還原型谷胱甘肽2g、（總滲透壓 為664m0sm/kg，調(diào)pH值至7.4)。溶解于1升蒸餾水中，配制成精子保存液。
[0016] 對比例2: 準(zhǔn)確稱取氯化鈉6.6g、氯化鉀0.15g、氯化|丐0.15g、碳酸氫鈉0.2g、磷酸二氫鈉0. lg，溶 解于1升蒸餾水中，配制成精子保存液。（總滲透壓為242m0sm/kg，調(diào)pH值至7.4)。
[0017] 對比例3: 準(zhǔn)確稱取氯化鈉7.5g、氯化鉀0.2g、氯化鈣0.2g、碳酸氫鈉10.2g，溶解于1升蒸餾水中， 配制成精子保存液。（總滲透壓為272m0sm/kg，調(diào)pH值至7.4)。
[0018] 實(shí)施例3:精子活力測定 將雜交烏鱧精子和保存液按照1:9的配比進(jìn)行稀釋，并置于4°C下保存。精子在4°C下保 存液中保存96小時(shí)后，測定其活力與運(yùn)動(dòng)時(shí)間。
[0019] 實(shí)施例和對比例中精子活力測定：在普通載玻片上滴加0.5ml稀釋后精液，加入 0.5ml水激活，立即在10 X 16倍顯微鏡下觀察其活力。結(jié)果見表1所示：
從衣ιψ結(jié)米w以有m，頭施例ιψκ力的棺卞俅仔y儀對棺卞俅仔雙米瑯壯。
[0020] 同時(shí)我們在保存120h后，繼續(xù)進(jìn)行實(shí)施例1中精子保存液的精子活力測定：保存 120h后精子平均快速運(yùn)動(dòng)時(shí)間為141.2秒，總壽命為158.4秒，激活率為82.5%。
[0021] 實(shí)施例4: 1、將已經(jīng)達(dá)到性成熟的雄性雜交烏鱧體表擦拭干凈，剖開腹部，取出精巢，并小心地用 鑷子將表面脂肪剔除，在潔凈天平上稱重。
[0022] 將精巢置于潔凈的石英研缽中，用剪刀將其剪碎、研磨，分批緩緩加入1~49倍體積 的實(shí)施例1中精子保存液(具體見表2所示），再用80目紗絹過濾至潔凈燒杯中，然后分裝于 離心管，置于4°C冰箱保存?zhèn)溆谩?br>[0023] 2、保存效果評(píng)價(jià) 精子數(shù)目測定:將常規(guī)低溫保存的稀釋精液取出，置于室溫下。取〇. 2ml精液置于生物 計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)框內(nèi)，在40 X 16倍光學(xué)顯微鏡下觀察，選取16個(gè)大框中的8個(gè)記錄其精子數(shù)。經(jīng) 計(jì)算，保存96h后，精子數(shù)目為13.9 X IO9個(gè)/ml，占鮮精的92%;保存120h后，精子數(shù)目為11.9 X IO9個(gè)/ml，占鮮精的79%。
[0024] 同時(shí)，我們還檢測了精子在保存液中不同稀釋比例下12h的活力，結(jié)果見表2: 注:對照組為不添加保存液。
[0025] 結(jié)果顯示:稀釋比例為1:9時(shí)，保存效果最好。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種雜交烏鱧精子保存液，其特征在于，以水為溶劑，每IL保存液中含有以下組分： 7.5~8.5g的氯化鈉、0.4~0.5g氯化鉀、O . 1~0.15g氯化|丐、0.2~0.6g碳酸氫鈉、8~15g葡萄 糖，余M為水。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的雜交烏鱧精子保存液，其特征在于，IL保存液中含有以下組 分:8.2g的氯化鈉、0.47g氯化鉀、0.128g氯化鈣、0.4g碳酸氫鈉、IOg葡萄糖，余量為水； 所述保存液的滲透壓為343 mOsm/kg，pH值為7.4。3. 權(quán)利要求1或2所述的保存液在雜交烏鱧精子保存中的應(yīng)用。4. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的應(yīng)用，其特征在于，將雜交烏鱧精子和保存液按照1:9的配比 進(jìn)行稀釋，并置于4°C下保存。
【文檔編號(hào)】A01N1/02GK105941391SQ201610353178
【公開日】2016年9月21日
【申請日】2016年5月25日
【發(fā)明人】湯保貴, 何飛飛, 陳剛, 張健東
【申請人】廣東海洋大學(xué)