一種萎縮芽孢桿菌和香菇多糖的殺菌組合物的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種含萎縮芽孢桿菌和香菇多糖的殺菌組合物，所述的殺菌組合物中的有效成分為萎縮芽孢桿菌和香菇多糖，所述的萎縮芽孢桿菌含量為（1～50）億CFU/g，香菇多糖的質(zhì)量百分?jǐn)?shù)為（0.1～1.5）%。本發(fā)明復(fù)配得到殺菌組合物，用于防治煙草青枯病，兼治煙草病毒病，防治效果良好，同時(shí)增強(qiáng)了煙草抗逆性，提高煙草產(chǎn)質(zhì)量，且對(duì)人畜、有益生物、環(huán)境安全。CCTCC NO:M201536420150611
【專利說明】
一種萎縮芽孢桿菌和香菇多糖的殺菌組合物
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明屬于農(nóng)用殺菌劑領(lǐng)域，具體涉及一種萎縮芽孢桿菌和香菇多糖的殺菌組合 物。
【背景技術(shù)】
[0002] 萎縮芽孢桿菌(Bacillus atrophaeus)舊稱枯草芽孢桿菌黑色變種。Smith等人于 1952年發(fā)現(xiàn)了萎縮芽孢桿菌原始菌株一 NRS-1221A，該菌株在含酪氨酸的培養(yǎng)基上能產(chǎn)生 黑色素，根據(jù)這一特性將其歸類到枯草芽孢桿菌黑色變種新種中。1989年，Nakamura提出將 枯草芽孢桿菌黑色變種改名為萎縮芽孢桿菌，以區(qū)別于枯草芽孢桿菌。萎縮芽孢桿菌能產(chǎn) 生孢子抵御不良環(huán)境，抗性強(qiáng)，在80 °C以上是溫度環(huán)境中尚能生存，在農(nóng)業(yè)、工業(yè)、醫(yī)療、衛(wèi) 生領(lǐng)域具有廣闊的應(yīng)用前景。
[0003] 香菇多糖是一種以i3-D(l-3)葡聚糖殘基為主鏈，側(cè)鏈為（1-6)葡聚糖殘基的葡 聚糖，是從香菇子實(shí)體中提取的有效活性成分，對(duì)正常機(jī)體并無(wú)免疫促進(jìn)作用，但能使荷瘤 式或感染后的機(jī)體的免疫應(yīng)答得以提高，目前已廣泛應(yīng)用于醫(yī)藥領(lǐng)域和食品領(lǐng)域。在農(nóng)業(yè) 領(lǐng)域，菇類蛋白多糖已開發(fā)出抗毒劑1號(hào)、抗毒豐等多個(gè)生物農(nóng)藥制劑品種，用于防治番茄 病毒病、水稻條紋葉枯病等多種作物病害，同時(shí)能顯著提高作物抗逆性，增產(chǎn)作用明顯。
[0004] 將萎縮芽孢桿菌和香菇多糖復(fù)合作為殺菌劑，用于防治煙草青枯病，兼治煙草病 毒病，未見報(bào)道。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明采用稀釋平板法從土壤樣本中分離細(xì)菌，利用平板對(duì)峙法，測(cè)定其對(duì)青枯 假單胞菌的抑制活性，獲得具有顯著抑菌效果的細(xì)菌。通過種水平保守基因 gyrB的序列相 似性進(jìn)行鑒定，并命名為YC21。
[0006] 本發(fā)明以萎縮芽孢桿菌菌株YC21為基礎(chǔ)，提供了一種含有效成分萎縮芽孢桿菌 YC21和香菇多糖的新型殺菌組合物，本殺菌組合物對(duì)煙草青枯病具有良好的防治效果，兼 治煙草病毒病，同時(shí)增強(qiáng)了煙草抗逆性，提高煙草產(chǎn)質(zhì)量。
[0007] 本發(fā)明的技術(shù)方案如下：
[0008] 采用篩選獲得的萎縮芽孢桿菌YC21與和香菇多糖復(fù)配得到殺菌組合物，其中萎縮 芽孢桿菌YC21含量為(10~50)億CFU/g，香菇多糖的質(zhì)量百分?jǐn)?shù)為(0.1~1.5) %。
[0009] 所述的殺菌組合物，最優(yōu)選的萎縮芽孢桿菌YC21含量為10億CFU/g，香菇多糖的質(zhì) 量百分?jǐn)?shù)為(0.5~1.2)%。
[0010] 所述的殺菌組合物，其劑型加工為水懸浮劑、可濕性粉劑。采用的農(nóng)用殺菌劑助劑 包括表面活性劑、分散劑、增稠劑、消泡劑、填料等各類助劑，采用的表面活性劑可以為木質(zhì) 素磺酸鈉、蓖麻油聚氧乙烯醚、脂肪醇聚氧乙烯醚、木質(zhì)素磺酸鈣、亞甲基雙萘磺酸鈉中的 一種或多種;采用的增稠劑為黃原膠;采用的消泡劑可為有機(jī)硅消泡劑;所采用的填料可為 白炭黑、高嶺土、凹凸棒土等中的一種或多種。
[0011] 所述的殺菌組合物用于防治煙草青枯病，兼治煙草病毒病，防治效果良好，同時(shí)增 強(qiáng)了煙草抗逆性，提高煙草產(chǎn)質(zhì)量。
[0012] 所述的萎縮芽抱桿菌(Bacillus atrophaeus)YC21菌株已于2015年6月11日由中 國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心（CCTCC)保藏（保藏單位地址：中國(guó)?武漢?武漢大學(xué)；郵編： 430072;電話：02768754052。），保藏號(hào)為CCTCC N0:M2015364。
[0013] 本發(fā)明通過在煙草根際采集大量土壤樣本，采用稀釋平板法，分離出系列生防菌 株，通過系統(tǒng)的抗菌譜測(cè)定試驗(yàn)，篩選出對(duì)青枯假單胞菌具有顯著拮抗作用的萎縮芽孢桿 菌菌株YC21。將采用篩選獲得的萎縮芽孢桿菌YC21與和香菇多糖復(fù)配得到殺菌組合物，用 于防治煙草青枯病，兼治煙草病毒病，防治效果良好，同時(shí)增強(qiáng)了煙草抗逆性，提高煙草產(chǎn) 質(zhì)量。
[0014] 本發(fā)明提供的殺菌組合物其中有效成分均為生物或生物源農(nóng)藥，能替代化學(xué)農(nóng)藥 用于煙草青枯病和病毒病的防治，本殺菌組合物成本低、防治效果高效且環(huán)保。
【具體實(shí)施方式】：
[0015] 下面結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步說明，但本發(fā)明的實(shí)質(zhì)并不限于下述實(shí)施例。
[0016] 實(shí)施例1
[0017] 10億CFU/g萎縮芽孢桿菌· 0.5%香菇多糖水懸浮劑的制備方法：按質(zhì)量百分比 (萎縮芽孢桿菌除外）。 蔞縮朵孢桿崗 10億CR:/g; 香菇多糖 0.5%; 木質(zhì)素磺酸鈉 4%; 蓖麻油聚氧乙烯醚 4%;
[0018] 脂肪醇聚氧乙烯醚 2% 黃原膠 0. 1%; 有機(jī)硅消泡劑 0. 3%; 水 余量。
[0019] 制備方法:根據(jù)配方，將以上組分(萎縮芽孢桿菌除外)按比例稱量，加入球磨機(jī)球 磨30分鐘，過濾，抽入分散罐高速剪切3分鐘后經(jīng)砂磨機(jī)充分研磨，控制固體組分粒子直徑 在2微米以內(nèi)，研磨結(jié)束后，稱量并引入萎縮芽孢桿菌母液，攪拌均勻，抽入分散罐高速剪切 3分鐘，過濾，即得懸浮劑產(chǎn)品。
[0020] 實(shí)施例2
[0021] 10億CFU/g萎縮芽孢桿菌· 0.8%香菇多糖水懸浮劑的制備方法：按質(zhì)量百分比 (萎縮芽孢桿菌除外）。 萎縮芽孢桿菌 10億CFL7g; 香菇多糖 〇.8%:;: 木質(zhì)素磺酸鈉 4%; 蓖麻油聚氧乙烯醚 4%;:
[0022] 脂肪醇聚氧乙烯醚 2% 黃原膠 0. 1%; 有機(jī)硅消泡劑 α 3%; 水 余量。
[0023] 制備方法，同實(shí)施例1。
[0024] 實(shí)施例3
[0025] 10億CFU/g萎縮芽孢桿菌· 1%香菇多糖水懸浮劑的制備方法:按質(zhì)量百分比（萎 縮芽孢桿菌除外）。 蔞縮穿孢桿崗 10億CFL7g; 香菇多糖 1%; 木質(zhì)素磺酸鈉 4%; 蓖麻油聚氧乙烯醚 4%;
[0026] 脂肪醇聚氧乙烯醚 2%: 黃原膠 4 1%; 有機(jī)硅消泡劑 0,3%; 水 余量。
[0027]制備方法：同實(shí)施例1。
[0028] 實(shí)施例4
[0029] 10億CFU/g萎縮芽孢桿菌· 1.2%香菇多糖水懸浮劑的制備方法：按質(zhì)量百分比 (萎縮芽孢桿菌除外）。 萎縮朵泡桿藺 ?ο億CFiyg; 香菇多糖 1. 2%; 木質(zhì)素磺酸鈉 4%; 蓖麻油聚氧乙烯醚 4%:;
[0030] 脂肪醇聚氧乙烯醚 2%: 黃原膠 11; 有機(jī)硅消泡劑 0.3%; 水 余量。
[0031] 制備方法，同實(shí)施例1。
[0032] 實(shí)施例5
[0033] 10億CFU/g萎縮芽孢桿菌· 1%香菇多糖可濕性粉劑的制備方法:按質(zhì)量百分比。 蔞縮朵孢桿崗 K)億CFl:/g; 香菇多糖 1%;
[0034] 木質(zhì)素磺酸鈣 4%; 亞甲基雙萘磺酸鈉 4% 白炭黑 7%; 高嶺土 余量/2 ;
[0035] 凹凸棒土 余量/2。
[0036] 制備方法:然后按以上組分配方(萎縮芽孢桿菌除外）比例加入混合機(jī)混合均勻后 進(jìn)行氣流粉碎，粉碎完成后充分?jǐn)嚢杈鶆?，將適量萎縮芽孢桿菌發(fā)酵液用氣流粉碎產(chǎn)物進(jìn) 行吸附，干燥，過篩即可得可濕性粉劑產(chǎn)品。
[0037] 實(shí)施例6
[0038] 10億CFU/g萎縮芽孢桿菌· 0.5%香菇多糖可濕性粉劑的制備方法：按質(zhì)量百分 比。 賽縮朵孢桿尚 10億CFL7g; 香菇多糖 0.5%; 木質(zhì)素磺酸鈣 4%;
[0039] 亞甲基雙萘磺酸鈉 4%: 白炭黑 7%; 高嶺土 余量/2 ; 凹凸棒土 余量/2。
[0040] 制備方法，同實(shí)施例5。
[0041] 在田間下測(cè)定制劑對(duì)煙草青枯病和病毒病的防治效果：
[0042]實(shí)驗(yàn)方案如下：
[0043]試驗(yàn)作物煙草，品種為云煙97;小區(qū)面積50m2,4次重復(fù)，隨機(jī)排列，每個(gè)處理間設(shè) 保護(hù)行。
[0044] 供試藥劑、對(duì)照藥劑及用藥量：
[0045] 實(shí)施例1至實(shí)施例6制劑用藥量為1500g/公頃，對(duì)照藥劑10億CFU/g億萎縮芽孢桿 菌(YC21)SC制劑用藥量為3000g/公頃，1%香菇多糖可溶性粉劑制劑用藥量為1500g/公頃， 另設(shè)噴清水的空白對(duì)照。于煙草苗期沾根處理和煙草大田生長(zhǎng)前期整株噴淋處理，每次每 公頃噴施藥液量為900升。施藥器械為WS-16型背負(fù)式手動(dòng)噴霧器。在藥劑處理前進(jìn)行病情 基數(shù)調(diào)查，大田期第二次施藥60天后調(diào)查發(fā)病情況，統(tǒng)計(jì)發(fā)病率并計(jì)算綜合病指及防效。
[0046] 調(diào)查方法、分級(jí)、藥效計(jì)算均執(zhí)行中華人民共和國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)《煙草病蟲害分級(jí)調(diào)查 方法》(GB/T23222-2008)。
[0047]試驗(yàn)結(jié)果：
[0048]表1萎縮芽孢桿菌?香菇多糖組合物二次施藥60天后對(duì)煙草青枯病和病毒病的田 問呔冶謝里
[0050]試驗(yàn)結(jié)果(表1)所示:6個(gè)制劑施例對(duì)煙草青枯病的防效均達(dá)到45%以上，對(duì)煙草 病毒病的防效達(dá)40%以上。實(shí)施例3、實(shí)施例4、實(shí)施例5對(duì)煙草青枯病的防效均達(dá)到55%以 上，對(duì)煙草病毒病的防效達(dá)到50%以上，實(shí)施例1、實(shí)施例2、實(shí)施例6對(duì)煙草青枯病和病毒病 的防效稍差，分別在50 %和45 %以上。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種萎縮芽孢桿菌和香菇多糖的殺菌組合物，其特征在于:所述的殺菌組合物中的 有效成分為萎縮芽孢桿菌和香菇多糖，所述的萎縮芽孢桿菌含量為（1~50)億CFU/g，香菇 多糖的質(zhì)量百分?jǐn)?shù)為(〇. 1~1.5)%。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的萎縮芽孢桿菌和香菇多糖的殺菌組合物，其特征在于:所述的 殺菌組合物中，萎縮芽孢桿菌含量為10億CFU/g，香菇多糖的質(zhì)量百分?jǐn)?shù)為(0.5~1.2)%。3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的萎縮芽孢桿菌和香菇多糖的殺菌組合物，其特征在于:所述的 萎縮芽孢桿菌名稱為YC21，保存號(hào)為CCTCC N0.M2015364。4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的萎縮芽孢桿菌和香菇多糖的殺菌組合物，其特征在于:所述的 殺菌組合物劑型為水懸浮劑或可濕性粉劑。5. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的萎縮芽孢桿菌和香菇多糖的殺菌組合物可用于防治煙草青枯 病，兼治煙草病毒病。
【文檔編號(hào)】A01N43/16GK105941480SQ201610495405
【公開日】2016年9月21日
【申請(qǐng)日】2016年6月27日
【發(fā)明人】周本國(guó), 許大鳳, 潘月敏, 王芳
【申請(qǐng)人】安徽省農(nóng)業(yè)科學(xué)院煙草研究所