一種井岡霉素在制備幾丁質(zhì)代謝相關(guān)蛋白活性抑制劑中的應(yīng)用
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種井岡霉素在制備幾丁質(zhì)代謝相關(guān)蛋白活性抑制劑中的應(yīng)用，井岡霉素能夠?qū)е吕ハx發(fā)生畸形甚至死亡，并導(dǎo)致褐飛虱幾丁質(zhì)的相對含量顯著降低，有效濃度范圍為0.1～10μg/μl，本發(fā)明能夠應(yīng)用于害蟲防治中新型殺蟲劑的開發(fā)。
【專利說明】
一種井岡霉素在制備幾丁質(zhì)代謝相關(guān)蛋白活性抑制劑中的 應(yīng)用 (一)
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明涉及一種海藻糖酶抑制劑對昆蟲幾丁質(zhì)代謝相關(guān)蛋白的調(diào)控作用，特別涉 及Va I i damy C i η對昆蟲幾丁質(zhì)代謝相關(guān)蛋白的調(diào)控作用及其效果評價。 (二)
【背景技術(shù)】
[0002] 我國是世界上農(nóng)作物有害生物發(fā)生最為嚴(yán)重的國家之一。農(nóng)作物生物災(zāi)害發(fā)生頻 繁、為害嚴(yán)重、損失巨大。害蟲一直嚴(yán)重威脅全球農(nóng)作物的安全生產(chǎn)(植物保護(hù)工程建設(shè)規(guī) 劃（2006-2010年），據(jù)報(bào)道全球約有植物重要害蟲6000多種，其中，在我國有發(fā)生的比例達(dá) 到30%，為1800多種。據(jù)估計(jì)，全球每年僅害蟲危害造成的產(chǎn)量損失已達(dá)總產(chǎn)量的18%，經(jīng) 濟(jì)損失達(dá)1000億美元，其中僅每年用于植食性害蟲防治的費(fèi)用就達(dá)75.6億美元。且目前至 少有30種農(nóng)作物害蟲對40種殺蟲劑產(chǎn)生了不同程度的抗藥性，采用傳統(tǒng)的單一農(nóng)藥控制害 蟲的為害將會越來越困難。由此，害蟲防治的指導(dǎo)思想也已從"殺死害蟲"轉(zhuǎn)變?yōu)?調(diào)控害 蟲"。通過調(diào)控害蟲的生長發(fā)育將成為害蟲控制的重要手段，關(guān)鍵在于要找到能夠起調(diào)控作 用的靶標(biāo)基因和開發(fā)出合適的生物農(nóng)藥。
[0003] 海藻糖作為一種應(yīng)激代謝產(chǎn)物，其含量可隨環(huán)境條件的變化而變化，其在各種逆 境條件下能夠起到保護(hù)作用，并且還能作為信號分子調(diào)控了糖酵解過程。海藻糖不但是昆 蟲血淋巴中的重要糖類物質(zhì)，也是昆蟲的"血糖"，廣泛存在于幼蟲、蛹和成蟲階段。海藻糖 不僅可以作為能量物質(zhì)為昆蟲的生長發(fā)育和生命活動提供所需能量，而且在冷凍和干旱等 逆境下可以大量合成，保護(hù)機(jī)體免受環(huán)境脅迫，從而提高昆蟲的生命力和活動能力。
[0004] 海藻糖酶作為昆蟲能量代謝必不可少的一類酶，也是昆蟲體內(nèi)合成幾丁質(zhì)途徑的 第一個酶。研究發(fā)現(xiàn)海藻糖酶的表達(dá)被抑制后，通過調(diào)控昆蟲的內(nèi)部代謝能夠殺死害蟲。由 于海藻糖酶及其基因的重要性，其已經(jīng)成為害蟲控制的重要靶標(biāo)之一，具有實(shí)際農(nóng)藥意義 的有效新型海藻糖酶抑制劑產(chǎn)品正在開發(fā)。各類海藻糖酶抑制劑相繼出現(xiàn)，效果較好的有 井岡霉素(Validamycin)、井岡霉亞基胺A、Trehazolin等，抑制作用主要是通過與海藻糖酶 活性位點(diǎn)上的氨基酸相互結(jié)合形成復(fù)合物，競爭性地抑制海藻糖酶的活性來實(shí)現(xiàn)的。這些 以海藻糖酶作為害蟲控制靶標(biāo)的潛在殺蟲劑的殺蟲機(jī)理以及殺蟲效果的研究對開發(fā)出新 型殺蟲劑具有十分重要的意義。 (三)

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明目的是提供一種Validamycin對昆蟲幾丁質(zhì)代謝相關(guān)蛋白的調(diào)控作用， \%11(^1117〇;[11使昆蟲幾丁質(zhì)合成酶以及幾丁質(zhì)酶在1]11?嫩水平的表達(dá)下降，導(dǎo)致昆蟲發(fā)生畸 形甚至死亡，并導(dǎo)致昆蟲幾丁質(zhì)相對含量顯著降低。
[0006] 本發(fā)明采用的技術(shù)方案是：
[0007] 本發(fā)明提供一種井閃霉素在制備幾丁質(zhì)代謝相關(guān)蛋白活性抑制劑中的應(yīng)用。
[0008] 進(jìn)一步，所述幾丁質(zhì)代謝相關(guān)蛋白為幾丁質(zhì)合成酶或幾丁質(zhì)酶。
[0009] 進(jìn)一步，所述幾丁質(zhì)合成酶為下列基因之一編碼蛋白：CHSUCHSla或CHSlb。
[0010] 進(jìn)一步，所述幾丁質(zhì)酶為下列基因之一編碼蛋白：Chtl、Cht3、Cht4、Cht5、Cht6、 Cht7或Cht9〇
[0011] 進(jìn)一步，所述抑制劑中井閃霉素有效濃度為O.l-lOyg/yl。
[0012] 進(jìn)一步，所述有效濃度優(yōu)選為5-10ygAU。
[0013]進(jìn)一步，所述幾丁質(zhì)代謝相關(guān)蛋白來自水稻褐飛虱(Nilaparvata lugens)。
[0014]所述的Val idamycin對昆蟲幾丁質(zhì)代謝相關(guān)蛋白的調(diào)控作用的效果評價，所述的 效果評價為:利用超微量顯微注射的方法將濃度為〇. 1、〇. 5、1、5、IOygAU的Val idamycin分 別注射到昆蟲體內(nèi)，于注射后48h觀察其在變態(tài)發(fā)育過程中的形態(tài)變化，然后統(tǒng)計(jì)其死亡率 和畸形率并測定昆蟲幾丁質(zhì)的相對含量，進(jìn)一步，所述的Validamycin對昆蟲幾丁質(zhì)代謝相 關(guān)蛋白的調(diào)控作用的效果評價為:將濃度為0.1、〇. 5、1、5、10yg/yl的Val idamycin注射到褐 飛虱體內(nèi)，于注射后48h觀察其在變態(tài)發(fā)育過程中的形態(tài)變化，然后統(tǒng)計(jì)其死亡率和畸形率 并測定昆蟲體內(nèi)幾丁質(zhì)的相對含量，結(jié)果顯示0.1、〇 . 5、1、5、lOyg/yl的Validamycin注射 48h后褐飛虱出現(xiàn)三種主要的畸形形態(tài)，分別為蛻皮困難、翅型異常以及蛻皮困難且翅型異 常。三種畸形的所占的比例不同，其中蛻皮困難和蛻皮困難且翅型異常所占的畸形百分比 較高。0.1、0.5、1、5、IOygAU的Validamycin注射48h后褐飛虱體內(nèi)幾丁質(zhì)含量均顯著下降。 [0015]本發(fā)明設(shè)置VaI idamyciη的高、中、低三個濃度，采用超微量顯微注射的方法對褐 飛虱進(jìn)行顯微注射，于注射后48h統(tǒng)計(jì)褐飛虱的死亡率(結(jié)果見表1)，根據(jù)高、中、低濃度的 Val idamycin注射48h后褐飛虱的死亡率，獲得Val idamycin的有效濃度范圍為0.1~lOyg/y 1，然后設(shè)置〇. 1、〇.5、1、5、1(^8/^1這5個濃度的\%1丨(^1115^;[11對褐飛虱進(jìn)行顯微注射，于注 射后48h測定昆蟲體內(nèi)海藻糖酶活和幾丁質(zhì)合成酶、幾丁質(zhì)酶及幾丁質(zhì)酶復(fù)合體基因的相 對表達(dá)量。具體方法如下：
[0016] 本發(fā)明設(shè)置高、中、低三個濃度的Validamycin，分別為15、2.5和0. lyg/μL，采用顯 微注射的方法將其注射到5齡第一天的活體褐飛虱若蟲體內(nèi)，于注射后48h統(tǒng)計(jì)褐飛虱的死 亡率。高、中、低三個濃度的Validamycin注射后48h褐飛虱的死亡率分別為70%、30%和 10%，根據(jù)這一結(jié)果，獲得Validamycin的有效濃度范圍為0 · 1~IOygAU，并確定0 · 1、0· 5、 1、5、lOyg/yl 這5個有效的Validamycin 濃度。
[0017] 利用超微量顯微注射的方法將濃度為〇 · 1、〇· 5、1、5、IOygAU的Validamycin分別 注射到昆蟲體內(nèi)，于注射后48h測定昆蟲體內(nèi)海藻糖酶活性，并測定幾丁質(zhì)合成酶基因和幾 丁質(zhì)酶及幾丁質(zhì)酶復(fù)合體的相對表達(dá)量。
[0018] 與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的有益效果主要體現(xiàn)在:本發(fā)明提供了井閃霉素在制備 幾丁質(zhì)代謝相關(guān)蛋白活性抑制劑中的應(yīng)用，Val idamycin能夠?qū)е吕ハx發(fā)生畸形甚至死亡， 并導(dǎo)致褐飛虱幾丁質(zhì)的相對含量顯著降低，有效濃度范圍為0.1~ioyg/μL，本發(fā)明能夠應(yīng) 用于害蟲防治中新型殺蟲劑的開發(fā)。 (四）【附圖說明】
[0019] 圖1褐飛虱注射有效濃度的Validamycin 48h后的海藻糖酶酶活性變化:海藻糖酶 包括可溶性海藻糖酶和膜結(jié)合海藻糖酶;*表示P〈〇. 05，差異顯著，**表示P〈0.01，差異極顯 著，下同；
[0020] 圖2褐飛虱注射有效濃度的Validamycin 48h幾丁質(zhì)合成酶的相對表達(dá)情況:CHSl 及其兩個可變剪接體CHSla和CHSlb的相對表達(dá)量；
[0021] 圖3褐飛虱注射有效濃度的Validamycin 48h幾丁質(zhì)酶及幾丁質(zhì)酶復(fù)合體的相對 表達(dá)情況：1〇個幾丁質(zhì)酶及成蟲盤生長因子（Imaginal Disc Growth Factor,IDGF)基因和 β-Ν_乙酰葡糖胺內(nèi)切酶(endoU-acetylglucosaminidase ,ENGase)基因的相對表達(dá)量 (A-L);
[0022]圖4褐飛虱注射有效濃度的Validamycin 48h后的表型:A表示注射48h后褐飛虱的 畸形形態(tài)，B表不注射48h后褐飛虱三種畸形百分比，C表不注射48h后褐飛虱的死亡率和畸 形率；
[0023]圖5褐飛虱注射有效濃度的Validamycin 48h后幾丁質(zhì)的相對含量。 (五)【具體實(shí)施方式】
[0024] 下面具體實(shí)施例對本發(fā)明進(jìn)行進(jìn)一步說明，但本發(fā)明的保護(hù)范圍并不僅限于此：
[0025] 褐飛虱是水稻上的重要害蟲，全世界各地都有分布，該蟲具有繁殖速度快、生命周 期短、內(nèi)稟增長率高、環(huán)境適應(yīng)性強(qiáng)等特點(diǎn)，在外界環(huán)境適宜時極易暴發(fā)成災(zāi)，給水稻生產(chǎn) 造成巨大的損失。在下述實(shí)施例中以褐飛虱為例對本發(fā)明進(jìn)行了詳細(xì)說明。
[0026] 井閃霉素 （Validamycin ,technical)購自德國Dr .Ehrenstorfer公司。
[0027] 實(shí)施例1 =Validamycin有效濃度的篩選
[0028] 1.實(shí)驗(yàn)材料:褐飛虱(Nilaparvata Iugens)來自本實(shí)驗(yàn)室飼養(yǎng)種群，供試蟲源來 自浙江農(nóng)科院杭州種群。褐飛虱的飼養(yǎng)條件為：溫度25土 TC，光照比16L:8D，相對濕度為 70%。褐飛虱飼養(yǎng)水稻品種為TNl。
[0029] 2.褐飛虱Validamycin的顯微注射：用無菌水配制高、中、低三個不同濃度的井岡 霉素注射液，分別為15μ〖/μ1、2.5μ〖/μ1、0.1μ〖/μ1。注射前首先用標(biāo)準(zhǔn)毛細(xì)管定量每次注射 器栗出的井閃霉素注射液的體積，并通過調(diào)整氮?dú)鈮簛碚{(diào)整井閃霉素注射液的體積使其符 合注射量。將5齡第一天活體褐飛虱用CO 2氣體麻醉后放至注射盤上，使其腹部朝上，注射腹 面口器末端，注射量為IOOnl/頭，注射后將其放至裝有新鮮水稻苗的試管中，于注射后48h 觀察死亡率，結(jié)果見表1所示。
[0030] 表1高、中、低三個濃度梯度Validamycin注射后的死亡率
[0032] 注:數(shù)據(jù)為平均數(shù)土標(biāo)準(zhǔn)差，對照組為無菌水注射組。
[0033] 表1的結(jié)果表明注射15、2.5、0.1以8/^1三個濃度梯度的￥&1丨(1 &11^(^114811后褐飛虱 的死亡率依次為70%、30%和10%，為了便于后續(xù)實(shí)驗(yàn)海藻糖酶活的測定，預(yù)期褐飛虱的死 亡率為1〇%_50%，確定0· 1、0·5、1、5、lOyg/yl這5個Validamycin的注射濃度。
[0034] 實(shí)施例2:褐飛虱注射有效濃度的Validamycin48h后海藻糖酶活性的變化
[0035] 1.根據(jù)實(shí)施例1得到的Validamycin有效濃度的篩選結(jié)果，設(shè)置Validamycin的5個 有效濃度梯度（用無菌水配制），分別為O. I、〇. 5、I、5、10yg/yl，對5齡第一天的活體褐飛虱 若蟲進(jìn)行超微量顯微注射，方法同實(shí)施例1，于注射后48h取材進(jìn)行后續(xù)定量實(shí)驗(yàn)。
[0036] 2.褐飛虱注射有效濃度的Validamycin 48h后海藻糖酶活性的測定：取30頭褐飛 虱，加入1ml PBS冰浴超聲破碎30min; 4°C，1000 g，離心20min;取350μ1上清4°C，20800g，超 離心lh;吸出超離心后的上清用于可溶性海藻糖酶活性和蛋白濃度的測定;沉淀用PBS洗兩 次并用PBS懸浮，該懸浮液用于膜結(jié)合型海藻糖酶活性和蛋白濃度的測定。利用葡萄糖分析 試劑盒(Sigma)進(jìn)行海藻糖酶濃度的測定，利用BCA蛋白濃度測定試劑盒(碧云天)進(jìn)行蛋白 濃度的測定，酶活性單位為mmol glucose/yg protein/minute，結(jié)果如圖1所示。
[0037] 圖1的結(jié)果表明，注射0.1、0.5、I、5、IOygAU這5個濃度的Validamycin48h后褐飛 虱體內(nèi)可溶性海藻糖酶和膜結(jié)合型海藻糖酶的活性均顯著低于對照組(等量無菌水），表明 0.1、0.5、1、5、IOygAil這5個Validamycin注射濃度能有效抑制褐飛虱海藻糖酶活性。
[0038] 實(shí)施例3:褐飛虱注射有效濃度的Validamycin 48h后幾丁質(zhì)合成酶、幾丁質(zhì)酶及 其復(fù)合體基因的相對表達(dá)情況
[0039] 1.褐飛虱注射有效濃度的Validamycin 48h后幾丁質(zhì)合成酶基因的相對表達(dá)情況
[0040] 對實(shí)施例2方法注射0.1、0.5、1、5、1(^/^1的￥&11(1&11^(^114811后的褐飛虱分別進(jìn) 行液氮研磨，抽提RNA，取總量Iyg的RNA進(jìn)行cDNA單鏈合成，取反轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物ΙμL用于qRT-PCR 的模板。qRT-PCR反應(yīng)體系為20μ1，具體如下：正、反向引物各ΙμL，cDNA ΙμL，SYBR Premix ExTaq(Takara)IOyl，滅菌超純水補(bǔ)至20μ1，引物序列如下：
[0041 ] CHSlF:5 '-CCGCAAACGATTCCTACAGA-3 '
[0042] CHSIR:5 '-AGGTCCTTGACGCTCATTCC-3 '
[0043] CHSIaF:5 '-TGTTCTTGCTACAACTCAATAAA-3 '
[0044] CHSlaR:5 '-ACACCAATCCGATAGGCTC-3 '
[0045] CHSIbF:5 '-GCTGTCTTTGCTTTCTTCAT-3 '
[0046] CHSlbR:5 '-ACACCAATCCGATAGGCTC-3 '
[0047] 18SF:5 '-CGCTACTACCGATTGAA-3 '
[0048] 18SR:5 '-GGAAACCTTGTTACGACTT-3 '
[0049] 褐飛虱幾丁質(zhì)合成酶基因 CHSl (包括CHSla和CHSlb)以及18S序列為公知序列。具 體的PCR程序?yàn)?94°C預(yù)變性5min，94°C變性15s，60°C退火30s，60°C延伸30s，40個循環(huán)。采 用2^ ΛΛΤ方法和STATISTICA6.0中的ANOVA進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，結(jié)果見圖2所示。
[0050] 2.褐飛虱注射有效濃度的Validamycin48h后幾丁質(zhì)酶及其復(fù)合體基因的相對表 達(dá)情況
[0051 ] 對實(shí)施例2方法注射0.1、0.5、1、5、1(^8/^1的￥&1丨(1 &11^(^114811后的褐飛虱進(jìn)行幾 丁質(zhì)酶及其復(fù)合體的qRT-PCR檢測，方法同上，引物如下：
[0052] ChtlF:5 '-AGGTGGTTAGGGACGAGGAG-3，
[0053] ChtlR:5 '-TGCGCTTGACATAGTTGGACT-3 '
[0054] Cht2F:5 '-GCAGATTTCTGGACAGGGAA-3 '
[0055] Cht2R:5，-TGACGCACAAGCGGGAAG-3 '
[0056] Cht3F:5 '-CTACACCTCTGGCTAAACTCGG-3 '
[0057] Cht3R:5 '-AACTTGTCCTTGCGGCTGAT-3 '
[0058] Cht4F:5 '-TTGAGGAGGTTCACGGGTCT-3 '
[0059] Cht4R:5 '-CCTTACTGGAAACGAGGTTGG-3 '
[0060] Cht5F:5 '-AAAGCGTTCGTGATGAAATAGC-3 '
[0061 ] Cht5R:5 '-GATCCTTTGCCTCAATCCAAT-3 '
[0062] Cht6F:5 '-GCTGGTAAGGAGATGCTATTCG-3 '
[0063] Cht6R:5 '-GTGGTTCTAAGGCTGGCTGTC-3 '
[0064] Cht7F:5 '-CTACTCTGCCATCCCATTCCT-3 '
[0065] Cht7R:5 '-GTCTGGGTTTCTTCACTTCCTG-3 '
[0066] Cht8F:5 '-GAACAAAGTGCAAACTCAGTCC-3 '
[0067] Cht8R:5 '-CACCTTCTGTGGCTTCTGG-3 '
[0068] Cht9F:5 '-GTGCGGTATTGGTTGAAGAGG-3 '
[0069] Cht9R:5 '-GGTATAACGTGATTCCGAGCC-3 '
[0070] ChtlOF:5-CAAGCCAATACCCAACAAAC-3 '
[0071] ChtlOR:5 '-ACAGCAAATCCATAGAGCACA-3 '
[0072] IDGFF:5，-AAAAGAACGAGGAGGAGGG-3，
[0073] IDGFR:5 '-TTGCTTGAGGATGGGGTAC-3 '
[0074] ENGaseF:5 '-TGTGGCAAGACTTCGTTA-3 '
[0075] ENGaseR:5 '-ATGGGAGGGTTGGGATAG-3 '
[0076] 褐飛虱幾丁質(zhì)酶及幾丁質(zhì)酶復(fù)合體基因Chtl、Cht2、Cht3、Cht4、Cht5、Cht6、Cht7、 Cht8、Cht9、ChtlO、IDGF和ENGase的序列為公知序列。
[0077]結(jié)果如圖3所示。
[0078] 圖2和圖3的結(jié)果顯示，注射0 · I、0 · 5、1、5、IOygAU的Val idamycin48h后褐飛虱體 內(nèi)CHSl及其兩個剪接體CHSla和CHSlb的相對表達(dá)量均顯著低于對照組(等量無菌水），且隨 著Validamycin注射濃度的升高CHSl (包括CHSla和CHSlb)基因的相對表達(dá)量越低。Chtl、 Cht3、Cht4、Cht5、Cht6、Cht7和Cht9這7個基因的相對表達(dá)量均顯著低于對照組，表明 Validamycin能有效的抑制幾丁質(zhì)合成酶及幾丁質(zhì)酶基因的表達(dá)。
[0079] 實(shí)施例4: Validamycin對昆蟲幾丁質(zhì)代謝相關(guān)蛋白的調(diào)控作用的效果評價
[0080] 1.褐飛虱注射有效濃度的Validamycin 48h后的變態(tài)發(fā)育情況
[0081 ] 對實(shí)施例2方法注射0.1、0.5、1、5、IOygAU的Validamycin 48h后褐飛虱進(jìn)行表型 觀察，并統(tǒng)計(jì)其畸形率和死亡率，結(jié)果如圖4所示。
[0082] 2.褐飛虱注射有效濃度的Validamycin 48h后的幾丁質(zhì)相對含量的測定
[0083] 首先將實(shí)施例2方法注射0.1、0·5、1、5、IOygAU的Validamycin 48h后的30頭褐飛 虱用清水沖洗干凈，置于濾紙上，50°C烘箱內(nèi)烘干，約4d;然后將烘干的褐飛虱研磨成粉末， 在電子分析天平上稱重，記為Wl;之后將已知質(zhì)量的褐飛虱粉末倒入消化管中（自制消化 管:取試管一根，配以橡皮塞，在橡皮塞上鉆5mm孔，插上玻璃管，橡皮塞外端的玻璃管上再 接一根橡皮管，長30-50cm，橡皮管的另一端再接一根玻璃管，并將開口的玻璃管通入水槽 內(nèi)，以防止加熱時堿液濺出），向消化管中加入5ml飽和氫氧化鉀，160°C甘油浴15-20min;再 用濾紙過濾殘?jiān)?，然后用緩慢的流水沖洗干凈，將殘?jiān)糜?0°C烘箱中烘lh，在分析天平稱 重，計(jì)為W2;最后結(jié)果計(jì)算，幾丁質(zhì)的相對含量=^χ1.26χ100 (%)(其中！.26-轉(zhuǎn)換 π 1 系數(shù)，轉(zhuǎn)換系數(shù)=乙酰氨基相對分子質(zhì)量/氨基葡萄糖相對分子質(zhì)量）。
[0084] 結(jié)果如圖5所示，0.1、0.5、l、5、10ygAU這5個濃度的Validamycin注射組的褐飛虱 幾丁質(zhì)相對含量分別為16.3%、10.33%、9.50%、8.70%和8.20%，而對照組的褐飛虱幾丁 質(zhì)相對含量為21.36%，0.1、0.5、1、5、IOygAU這5個濃度的Validamycin注射組的褐飛虱幾 丁質(zhì)相對含量均顯著低于對照組。
[0085] 圖4和圖5的結(jié)果表明，Validamycin能夠?qū)е潞诛w虱畸形甚至死亡，畸形率和死亡 率隨著Validamycin濃度的增加而增加，在Validamycin注射濃度為0. lyg/yl時褐飛虱的畸 形率和死亡率最低，分別為13.33%和10%，在Validamycin注射濃度為IOygAU時褐飛虱的 畸形率和死亡率最高，分別為37.78%和56.67%。其次，在Validamycin注射濃度為5yg/yl 時褐飛虱的畸形率和死亡率分別為32.22%和37.63%，與Validamycin注射濃度為IOygAU 時的死亡率相差較大，但畸形率相差不大，表明Validamycin注射濃度為5ygAU和IOygAU 均能導(dǎo)致褐飛虱高畸形率，Validamycin對昆蟲幾丁質(zhì)代謝相關(guān)蛋白的調(diào)控作用的有效濃 度優(yōu)選為5_10yg/yl之間的濃度。褐飛虱注射0.1、0.5、1、5、10yg/yl的Validamycin48h后均 出現(xiàn)三種主要的畸形形態(tài)，分別為蛻皮困難、翅型異常以及蛻皮困難且翅型異常。三種畸形 形態(tài)的表現(xiàn)程度不同，蛻皮困難且翅型異常所占的比例較高，其次為蛻皮困難。此外，注射 0.1、0.5、1、5、1(^8/^1這5個有效濃度的\^11(1&11^(^11還能夠?qū)е潞诛w虱的幾丁質(zhì)相對含量 降低，且隨著Validamycin注射濃度的升高，幾丁質(zhì)的相對含量越低。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種井閃霉素在制備幾丁質(zhì)代謝相關(guān)蛋白活性抑制劑中的應(yīng)用。2. 如權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于所述幾丁質(zhì)代謝相關(guān)蛋白為幾丁質(zhì)合成酶或 幾丁質(zhì)酶。3. 如權(quán)利要求2所述的應(yīng)用，其特征在于所述幾丁質(zhì)合成酶為下列基因之一編碼蛋白： CHSl、CHSla或CHSlb〇4. 如權(quán)利要求2所述的應(yīng)用，其特征在于所述幾丁質(zhì)酶為下列基因之一編碼蛋白： Cht 1、Cht3、Cht4、Cht5、Cht6、Cht7 或 Cht9。5. 如權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于所述抑制劑中井閃霉素有效濃度為0.1-10yg/ μ1〇6. 如權(quán)利要求5所述的應(yīng)用，其特征在于所述有效濃度為5-10ygAU。7. 如權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于所述幾丁質(zhì)代謝相關(guān)蛋白來自水稻褐飛虱。
【文檔編號】A01N43/16GK105961393SQ201610312281
【公開日】2016年9月28日
【申請日】2016年5月11日
【發(fā)明人】唐斌, 楊萌萌, 沈祺達(dá), 王世貴
【申請人】杭州師范大學(xué)