卡姆組織培養(yǎng)快速繁育方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種卡姆組織培養(yǎng)快速繁育方法，包括以下步驟：取一年生卡姆帶節(jié)枝條為外植體；對外植體滅菌然后誘導；誘導后得到腋芽進行不定芽增殖；增殖的腋芽培養(yǎng)得到壯苗；壯苗培養(yǎng)生根得到組培苗，即可移栽。本發(fā)明首次實現(xiàn)了卡姆組織培養(yǎng)快速繁育的技術方法，為卡姆組織培養(yǎng)技術開辟了新道路。本發(fā)明的方法簡單方便，易于實行，培育時間短，能夠有效提高卡姆的繁育時間，提高經(jīng)濟效益。本發(fā)明所用到的培養(yǎng)基和試劑配置容易，價格低廉，該方法具有良好的應用前景。
【專利說明】
卡姆組織培養(yǎng)快速繁育方法
技術領域
[0001]本發(fā)明屬于植物繁育技術領域，具體地說，涉及一種卡姆組織培養(yǎng)快速繁育方法。
【背景技術】
[0002]卡姆(Camu camu,Myrciaria dubia)為原產(chǎn)于南美洲秘魯共和國和巴西亞馬遜河流域熱帶雨林的水果。屬桃金娘科擬愛神木屬植物。由于其極高的維生素C含量(每10g鮮重中含1882-2280mg)，是當之無愧的Vc之王。每10g鮮果重中含蛋白質0.4g、碳水化合物5.9g、淀粉 0.44g、可溶性糖 I.26g、膳食纖維 1.1g,脂肪 0.2g、鈣 15.7mg、銅0.2mg、鐵0.53mg、鎂12.4mg、猛2.lmg、鉀83.9mg、鈉11.lmg、鋅0.2mg?？梢?，卡姆果營養(yǎng)豐富，尤其可作為天然的Vc源用于食品和保健品行業(yè)，具廣闊的市場前景。近年受到學界的廣泛關注。
[0003]在我國，卡姆少有報道，近年來有零星引種，未進行規(guī)?；N植。其原因在于卡姆果繁殖難度較大，目前主要采用種子實生繁殖?？吠谳^長，實生苗需6-8年才可試花掛果，故難以在短期內形成較大規(guī)模。由于學界對卡姆重視較晚，因此對其繁育的方法未得到相應的重視。
[0004]植物繁殖的方法較多，如嫁接、扦插、組織培養(yǎng)等。組織培養(yǎng)繁殖是在人工培養(yǎng)基中，使離體組織細胞培養(yǎng)成為完整植株的繁殖方法。果樹的組織培養(yǎng)材料是植株離體材料，稱外植體。用頂端分生組織及其下的第1-2個葉原基切離培養(yǎng)的，稱莖尖培養(yǎng)；以小段成熟枝條進行培養(yǎng)的稱莖段培養(yǎng)；以葉片或葉鞘組織進行培養(yǎng)的，稱葉片培養(yǎng)。利用組織培養(yǎng)方法繁殖果樹植株具有占地面積小，繁殖周期短，全年都能進行繁殖，繁殖系數(shù)高等特點。還可以消除果樹的某些病毒病，適應果樹向品種更新快、矮化密植以及無病毒栽培方向發(fā)展的需要。目前已在多種植物中獲得成功并推廣。
[0005]然而現(xiàn)在僅有卡姆同屬植物組織培養(yǎng)的研究(Litz，1984)，但未有獲得不定芽或完整植株的進一步報道。而卡姆則未見任何關于組織培養(yǎng)方面的報道。這大大限制了卡姆果的引進推廣。

【發(fā)明內容】

[0006]有鑒于此，為了解決卡姆繁育周期較長，現(xiàn)有技術中沒有卡姆組織培養(yǎng)相關技術的問題，本發(fā)明提供了一種卡姆組織培養(yǎng)快速繁育方法。
[0007]為了解決上述技術問題，本發(fā)明公開了一種卡姆組織培養(yǎng)快速繁育方法，包括以下步驟:
[0008](I)取一年生卡姆帶節(jié)枝條為外植體；
[0009](2)外植體滅菌:將所述外植體剪切為1-1.5cm的小成段，每段需帶節(jié)，于每升加入5滴吐溫-20的0.1%氯化汞溶液中振蕩處理3-4min，然后用無菌水清洗3遍；
[0010](3)外植體誘導:將經(jīng)滅菌處理的所述外植體(形態(tài)學下端)插入不定芽誘導培養(yǎng)基中培養(yǎng)；
[0011 ] (4)不定芽增殖:待不定芽誘導培養(yǎng)基中的所述外植體自節(jié)處生發(fā)腋芽后，將所述腋芽切下，接入不定芽增殖培養(yǎng)基中培養(yǎng)；
[0012](5)壯苗:所述腋芽在不定芽增殖培養(yǎng)基中培養(yǎng)20-30天后，轉移至壯苗培養(yǎng)基中培養(yǎng)增殖，得到壯苗；
[0013](6)生根:切取所述壯苗于生根培養(yǎng)基中培養(yǎng)得到組培苗，即可移栽。
[0014]進一步的，所述移栽包括以下步驟:
[0015](I)煉苗:將生根后的組培苗帶瓶移至開放條件下，放置4天后開蓋，加水至培養(yǎng)瓶中淹沒幼苗1/3處以保濕，至7天后完成煉苗；
[0016](2)清洗:煉苗完成后，于流水中沖洗所述組培苗，小心除去組培苗基部的培養(yǎng)基，瞭去表面水分；
[0017](3)消毒滅菌:將清洗并晾干的所述組培苗基部帶根浸入多菌靈800倍液中，15min后取出，晾干表面水分；
[0018](4)定植:將消毒滅菌后的組培苗移栽于混合培養(yǎng)基質中培養(yǎng)；
[0019](5)施肥:定植成活10-14天后，以MS培養(yǎng)基大量元素溶液(含NH4NO3 1650mg/L，KNO3 1900mg/L，CaCl2.2H20 440mg/L,MgSO4.7H20 370mg/L,KH2PO4 170mg/L)稀釋 10倍后噴施葉面；
[0020](6)培養(yǎng)2月后即可移栽至田間。
[0021]進一步的，所述不定芽誘導培養(yǎng)基為含有4.0mg/L 6_芐氨基腺嘌呤和0.2mg//L萘乙酸的1/2MS培養(yǎng)基。
[0022]進一步的，所述不定芽增殖培養(yǎng)基和壯苗培養(yǎng)基配方相同，均為含有0.5mg/L 6_芐氨基腺嘌呤和0.5mg/L萘乙酸的1/2MS培養(yǎng)基。
[0023]進一步的，所述生根培養(yǎng)基為含有2.0mg/L吲哚丁酸的1/2MS培養(yǎng)基。
[0024]進一步的，所述不定芽增殖步驟為，待所述外植體在不定芽誘導培養(yǎng)基中培養(yǎng)30-45天后，自節(jié)處生發(fā)腋芽2-3枝，每枝至l_3cm后，即可將所述腋芽切下，接入不定芽增殖培養(yǎng)基中培養(yǎng)。
[0025]進一步的，所述壯苗步驟中，腋芽轉移至壯苗培養(yǎng)基中培養(yǎng)增殖30-45天。
[0026]進一步的，所述生根步驟中，切取3_5cm的壯苗于生根培養(yǎng)基中培養(yǎng)，10-15天即可見根出現(xiàn)，30天后待根生長至2-3cm即得到組培苗，可以進行移栽。
[0027]進一步的，所述定植步驟中混合培養(yǎng)基為蛭石:腐殖土 = 1:1。
[0028]進一步的，所述定植步驟中培養(yǎng)條件為濕度大于80%、25°C光照條件下培養(yǎng)。
[0029]與現(xiàn)有技術相比，本發(fā)明可以獲得包括以下技術效果:
[0030]I)本發(fā)明首次實現(xiàn)了卡姆組織培養(yǎng)快速繁育的技術方法，為卡姆的繁殖技術開辟了新道路。
[0031]2)本發(fā)明的方法簡單方便，易于實行，培育時間短，能夠有效提高卡姆的繁育時間，提尚經(jīng)濟效益。
[0032]3)本發(fā)明所用到的培養(yǎng)基和試劑配置容易，價格低廉，該方法具有良好的應用前景。
[0033]當然，實施本發(fā)明的任一產(chǎn)品必不一定需要同時達到以上所述的所有技術效果?！揪唧w實施方式】
[0034]以下將配合實施例來詳細說明本發(fā)明的實施方式，藉此對本發(fā)明如何應用技術手段來解決技術問題并達成技術功效的實現(xiàn)過程能充分理解并據(jù)以實施。
[0035]實施例
[0036]—種卡姆組織培養(yǎng)快速繁育方法，包括以下步驟:
[0037](I)取一年生帶節(jié)枝條作為外植體。
[0038](2)外植體滅菌:將外植體剪切為1-1.5cm的小段，每段需帶節(jié)，于每升附加5滴吐溫-20的0.1 %氯化萊溶液中振蕩處理3-4min，無菌水清洗3遍。
[0039](3)外植體誘導:將經(jīng)滅菌處理的所述外植體(形態(tài)學下端)插入不定芽誘導培養(yǎng)基(含有4.0mg/L 6-芐氨基腺嘌呤和0.2mg/L萘乙酸的I/2MS培養(yǎng)基)中培養(yǎng)。
[0040](4)不定芽增殖:待外植體在不定芽誘導培養(yǎng)基中培養(yǎng)30-45天后，自節(jié)處生發(fā)腋芽2-3枝，每枝至l-3cm后，即可將所述腋芽切下，接入不定芽增殖培養(yǎng)基(含有0.5mg/L 6-芐氨基腺嘌呤和0.5mg/L萘乙酸的1/2MS培養(yǎng)基)中培養(yǎng)。
[0041](5)壯苗:所述腋芽在不定芽增殖培養(yǎng)基中培養(yǎng)20-30天后，轉移至壯苗培養(yǎng)基(含有0.5mg/L 6-芐氨基腺嘌呤和0.5mg/L萘乙酸的1/2MS培養(yǎng)基)中培養(yǎng)增殖30-45天，得到壯苗。
[0042](6)生根:切取3-5cm的壯苗于生根培養(yǎng)基(含有2.0mg/LB引噪丁酸的1/2MS培養(yǎng)基)中培養(yǎng)，10-15天即可見根出現(xiàn)，30天后待根生長至2-3cm即得到組培苗，可以進行移栽。
[0043](7)煉苗:將生根后的組培苗帶瓶移至開放條件下，放置4天后開蓋，加水至培養(yǎng)瓶中淹沒幼苗1/3處以保濕，至7天后完成煉苗。
[0044](8)清洗:煉苗完成后，于流水中沖洗所述組培苗，小心除去組培苗基部的培養(yǎng)基，瞭去表面水分。
[0045](9)消毒滅菌:將清洗并晾干的所述組培苗基部帶根浸入多菌靈800倍液中，15min后取出，晾干表面水分。
[0046](10)定植:將消毒滅菌后的組培苗移栽于蛭石:腐殖土=1:1的混合培養(yǎng)基質中，濕度大于80%、25°C光照條件下培養(yǎng)。
[0047](11)施肥:定植成活10-14天后，以MS培養(yǎng)基大量元素溶液(含NH4N031650mg/L，KN031900mg/L，CaCl2.2H20 440mg/L,MgSO4.7H20 370mg/L，KH2P04l70mg/L)稀釋 10倍后噴灑葉面。
[0048](12)培養(yǎng)2月后即可移栽至田間。
[0049]本發(fā)明首次實現(xiàn)了卡姆組織培養(yǎng)快速繁育的技術方法，為卡姆組織培養(yǎng)技術開辟了新道路。本發(fā)明的方法簡單方便，易于實行，培育時間短，能夠有效提高卡姆的繁育時間，提高經(jīng)濟效益。本發(fā)明所用到的培養(yǎng)基和試劑配置容易，價格低廉，該方法具有良好的應用前景。
[0050]如在說明書及權利要求當中使用了某些詞匯來指稱特定成分或方法。本領域技術人員應可理解，不同地區(qū)可能會用不同名詞來稱呼同一個成分。本說明書及權利要求并不以名稱的差異來作為區(qū)分成分的方式。如在通篇說明書及權利要求當中所提及的“包含”為一開放式用語，故應解釋成“包含但不限定于” ο “大致”是指在可接收的誤差范圍內，本領域技術人員能夠在一定誤差范圍內解決所述技術問題，基本達到所述技術效果。說明書后續(xù)描述為實施本發(fā)明的較佳實施方式，然所述描述乃以說明本發(fā)明的一般原則為目的，并非用以限定本發(fā)明的范圍。本發(fā)明的保護范圍當視所附權利要求所界定者為準。
[0051]還需要說明的是，術語“包括”、“包含”或者其任何其他變體意在涵蓋非排他性的包含，從而使得包括一系列要素的商品或者系統(tǒng)不僅包括那些要素，而且還包括沒有明確列出的其他要素，或者是還包括為這種商品或者系統(tǒng)所固有的要素。在沒有更多限制的情況下，由語句“包括一個……”限定的要素，并不排除在包括所述要素的商品或者系統(tǒng)中還存在另外的相同要素。
[0052]上述說明示出并描述了本發(fā)明的若干優(yōu)選實施例，但如前所述，應當理解本發(fā)明并非局限于本文所披露的形式，不應看作是對其他實施例的排除，而可用于各種其他組合、修改和環(huán)境，并能夠在本文所述發(fā)明構想范圍內，通過上述教導或相關領域的技術或知識進行改動。而本領域人員所進行的改動和變化不脫離本發(fā)明的精神和范圍，則都應在本發(fā)明所附權利要求的保護范圍內。
【主權項】
1.一種卡姆組織培養(yǎng)快速繁育方法，其特征在于，包括以下步驟: (1)取一年生卡姆帶節(jié)枝條為外植體； (2)外植體滅菌:將所述外植體剪切成段，每段帶節(jié)，于每升加入5滴吐溫-20的0.1%氯化汞溶液中振蕩處理，然后用無菌水清洗； (3)外植體誘導:將經(jīng)滅菌處理的所述外植體插入不定芽誘導培養(yǎng)基中培養(yǎng)； (4)不定芽增殖:待不定芽誘導培養(yǎng)基中的所述外植體自節(jié)處生發(fā)腋芽后，將所述腋芽切下，接入不定芽增殖培養(yǎng)基中培養(yǎng)； (5)壯苗:所述腋芽在不定芽增殖培養(yǎng)基中培養(yǎng)20-30天后，轉移至壯苗培養(yǎng)基中培養(yǎng)增殖，得到壯苗； (6)生根:切取所述壯苗于生根培養(yǎng)基中培養(yǎng)得到組培苗，即可移栽。2.如權利要求1所述的卡姆組織培養(yǎng)快速繁育方法，其特征在于，所述移栽包括以下步驟: (1)煉苗:將生根后的組培苗移至開放條件下，放置4天后開蓋，加水至淹沒幼苗1/3處保濕，至7天后完成煉苗； (2)清洗:煉苗完成后，于流水中沖洗所述組培苗，除去組培苗基部的培養(yǎng)基，晾去表面水分； (3)消毒滅菌:將清洗并晾干的所述組培苗基部帶根浸入多菌靈800倍液中，15min后取出，瞭干表面水分； (4)定植:將消毒滅菌后的組培苗移栽于混合培養(yǎng)基中培養(yǎng)； (5)施肥:定植成活10-14天后，MS培養(yǎng)基大量元素溶液稀釋10倍后噴施葉面； (6)培養(yǎng)2月后即可移栽至田間。3.如權利要求2所述的卡姆組織培養(yǎng)快速繁育方法，其特征在于，所述不定芽誘導培養(yǎng)基為含有4.0mg/L 6-芐氨基腺嘌呤和0.2mg/L萘乙酸的1/2MS培養(yǎng)基。4.如權利要求3所述的卡姆組織培養(yǎng)快速繁育方法，其特征在于，所述不定芽增殖培養(yǎng)基和壯苗培養(yǎng)基配方相同，均為含有0.5mg/L 6-芐氨基腺嘌呤和0.5mg/L萘乙酸的1/2MS培養(yǎng)基。5.如權利要求4所述的卡姆組織培養(yǎng)快速繁育方法，其特征在于，所述生根培養(yǎng)基為含有2.0mg/L吲哚丁酸的1/2MS培養(yǎng)基。6.如權利要求5所述的卡姆組織培養(yǎng)快速繁育方法，其特征在于，所述不定芽增殖步驟為，待所述外植體在不定芽誘導培養(yǎng)基中培養(yǎng)30-45天后，自節(jié)處生發(fā)腋芽2-3枝，每枝至1-3cm后，即可將所述腋芽切下，接入不定芽增殖培養(yǎng)基中培養(yǎng)。7.如權利要求6所述的卡姆組織培養(yǎng)快速繁育方法，其特征在于，所述壯苗步驟中，腋芽轉移至壯苗培養(yǎng)基中培養(yǎng)30-45天。8.如權利要求7所述的卡姆組織培養(yǎng)快速繁育方法，其特征在于，所述生根步驟中，切取3-5cm的壯苗于生根培養(yǎng)基中培養(yǎng)30天后，待根生長至2-3cm即得到組培苗，可以進行移Mo9.如權利要求8所述的卡姆組織培養(yǎng)快速繁育方法，其特征在于，所述定植步驟中混合培養(yǎng)基為蛭石:腐殖土 = 1:1。10.如權利要求9所述的卡姆組織培養(yǎng)快速繁育方法，其特征在于，所述定植步驟中培 養(yǎng)條件為濕度大于80%、25°C光照條件下培養(yǎng)。
【文檔編號】A01H4/00GK105993939SQ201610321878
【公開日】2016年10月12日
【申請日】2016年5月16日
【發(fā)明人】郭啟高, 梁國魯, 黨江波, 李曉林, 何橋, 孫海艷, 向素瓊, 吳頔
【申請人】西南大學