一種轉(zhuǎn)換馬鈴薯脫毒玻璃化苗為正常苗的方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種轉(zhuǎn)換馬鈴薯脫毒玻璃化苗為正常苗的方法，該方法包括以下步驟：(1)將脫毒處理的馬鈴薯幼芽經(jīng)過滅菌處理后，放置于MS固體培養(yǎng)基上，培養(yǎng)，使莖段長超過7cm；(2)配制含有矮壯素的固體培養(yǎng)基；(3)將步驟(1)獲得的馬鈴薯試管苗莖段截取3～5cm放置于步驟(2)獲得的培養(yǎng)基中培養(yǎng)，待莖段增長了5～8cm；(4)取步驟(3)獲得的馬鈴薯試管苗頂端3～5cm，放置于步驟(2)獲得的培養(yǎng)基中培養(yǎng)，得到馬鈴薯試管苗。本發(fā)明的方法，而且可以通過對(duì)矮壯素濃度的控制對(duì)試管苗的長勢(現(xiàn)象)進(jìn)行調(diào)控，以便于擴(kuò)繁時(shí)得到質(zhì)量較好的試管苗從而保證大田種植時(shí)馬鈴薯的成活率。
【專利說明】
一種轉(zhuǎn)換馬鈴薯脫毒玻璃化苗為正常苗的方法
技術(shù)領(lǐng)域
[0001]本發(fā)明屬于植物組織培養(yǎng)領(lǐng)域，特別是涉及一種轉(zhuǎn)換馬鈴薯脫毒玻璃化苗為正常苗的方法?！颈尘凹夹g(shù)】
[0002]馬鈴薯(Solanum tuberosum,Potato)，前科前屬，屬于中國五大主食之一，其營養(yǎng)價(jià)值高、適應(yīng)力強(qiáng)、產(chǎn)量大，是全球第三大重要的糧食作物，僅次于小麥和玉米。近年來，隨著我國農(nóng)業(yè)產(chǎn)業(yè)結(jié)構(gòu)調(diào)整和種薯、商品薯、加工用薯比例大幅度增加，馬鈴薯栽培正在成為種植業(yè)結(jié)構(gòu)調(diào)整和農(nóng)民增收的一項(xiàng)戰(zhàn)略選擇，而馬鈴薯種植逐步走向規(guī)?；?biāo)準(zhǔn)化、區(qū)域化。
[0003]大面積種植馬鈴薯時(shí)常采用無性繁殖對(duì)馬鈴薯種苗進(jìn)行擴(kuò)繁，因?yàn)橹参锝M織過程中可能會(huì)出現(xiàn)一系列問題，導(dǎo)致試管苗在擴(kuò)繁過程中常出現(xiàn)玻璃化現(xiàn)象，玻璃化現(xiàn)象是植物組織培養(yǎng)中特有的一種生理失調(diào)或生理病變。其試管苗的玻璃化引起試管苗的生理狀態(tài)和生理生化的改變。如莖桿細(xì)弱呈半透明狀態(tài)，節(jié)間過長且節(jié)數(shù)少，葉片小且顏色淡，從而導(dǎo)致光合作用不足、生長周期長、移栽成活率低和不易生根等現(xiàn)象。玻璃化苗的產(chǎn)生與多種原因相關(guān)，其中包括外植體材料、培養(yǎng)環(huán)境、培養(yǎng)基的類型等。與正常苗相比，玻璃苗RNA的含量有所降低，但是DNA的含量卻保持不變，這表明玻璃苗的異?；^程不是發(fā)生在DNA復(fù)制過程中，而是發(fā)生在轉(zhuǎn)錄以后。蛋白質(zhì)合成受阻，使分化不能正常啟動(dòng)，細(xì)胞器的分化發(fā)育異常并減少，整個(gè)玻璃化過程中光合作用，呼吸作用和蛋白質(zhì)合成均受影響，使得蛋白質(zhì)含量及酶活性降低，新陳代謝紊亂。玻璃化試管苗的乙烯含量明顯提高，但是乙烯不會(huì)直接使試管苗發(fā)生玻璃化，而過量的乙烯致使葉綠素分解和細(xì)胞畸形，破壞了細(xì)胞的結(jié)構(gòu)，細(xì)胞壁解離，細(xì)胞內(nèi)積累大量纖維素及泡狀物質(zhì)，引起玻璃苗的產(chǎn)生。玻璃化現(xiàn)象嚴(yán)重影響馬鈴薯試管苗的擴(kuò)繁以及后續(xù)的試驗(yàn)，因此亟需一種能改善馬鈴薯試管苗玻璃化現(xiàn)象的方法。
【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明的目的是克服現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種促進(jìn)快速生根且生根數(shù)多的轉(zhuǎn)換馬鈴薯脫毒玻璃化苗為正常苗的方法。
[0005]本發(fā)明的技術(shù)方案如下:
[0006]—種轉(zhuǎn)換馬鈴薯脫毒玻璃化苗為正常苗的方法，包括以下步驟:
[0007](1)將脫毒處理的馬鈴薯幼芽經(jīng)過滅菌處理后，放置于MS固體培養(yǎng)基上，培養(yǎng)，使莖段長超過7cm;[〇〇〇8] (2)配制含有矮壯素的固體培養(yǎng)基；
[0009](3)將步驟(1)獲得的馬鈴薯試管苗莖段截取3?5cm放置于步驟(2)獲得的培養(yǎng)基中培養(yǎng)，待莖段增長了 5?8cm;
[0010](4)取步驟(3)獲得的馬鈴薯試管苗頂端3?5cm，放置于步驟(2)獲得的培養(yǎng)基中培養(yǎng)，得到馬鈴薯試管苗。
[0011]含有矮壯素的固體培養(yǎng)基用下述方法制成:取4.74g MS培養(yǎng)基，加蒸餾水溶解，調(diào)節(jié)pH= 5 ? 8，加入80?100g瓊脂、30?40g鹿糖和50mg?150mg矮壯素，加蒸餾水至1000ml，滅菌。[0〇12]本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn):
[0013]本發(fā)明的方法，而且可以通過對(duì)矮壯素濃度的控制對(duì)試管苗的長勢(現(xiàn)象)進(jìn)行調(diào)控，以便于擴(kuò)繁時(shí)得到質(zhì)量較好的試管苗從而保證大田種植時(shí)馬鈴薯的成活率?！靖綀D說明】
[0014]圖1為玻璃化試管苗圖。
[0015]圖2為本發(fā)明的方法獲得的試管苗圖。
[0016]圖3為本發(fā)明的方法獲得的試管苗根系仰視圖?！揪唧w實(shí)施方式】
[0017]下面通過具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步的說明。
[0018]實(shí)施例1
[0019]含有矮壯素的固體培養(yǎng)基的制備:
[0020]取4.74g MS培養(yǎng)基(商品化，不含瓊脂和蔗糖)，加蒸餾水溶解，調(diào)節(jié)pH = 5.8，加入 90g瓊脂、35g鹿糖和100mg矮壯素，加蒸餾水至1000ml，滅菌。[〇〇21] 實(shí)施例2
[0022]含有矮壯素的固體培養(yǎng)基的制備:[〇〇23]取4.74g MS培養(yǎng)基(商品化，不含瓊脂和蔗糖)，加蒸餾水溶解，調(diào)節(jié)pH = 5.8，加入 80g瓊脂、40g鹿糖和50mg矮壯素，加蒸餾水至1000ml，滅菌。[〇〇24] 實(shí)施例3
[0025]含有矮壯素的固體培養(yǎng)基的制備:[〇〇26]取4.74g MS培養(yǎng)基(商品化，不含瓊脂和蔗糖)，加蒸餾水溶解，調(diào)節(jié)pH = 5.8，加入 l〇〇g瓊脂、30g鹿糖和150mg矮壯素，加蒸餾水至1000ml，滅菌。[〇〇27] 實(shí)施例4[〇〇28] 一種轉(zhuǎn)換馬鈴薯脫毒玻璃化苗為正常苗的方法，包括以下步驟:[〇〇29](1)將脫毒處理的中農(nóng)303品種(商品化的)馬鈴薯幼芽經(jīng)過滅菌處理后，放置于MS固體培養(yǎng)基上，在24°C，16h/8h光周期，光強(qiáng)為300wii〇l/(m2.S)的培養(yǎng)條件下培養(yǎng)，使莖段長超過7cm;
[0030](2)將步驟(1)獲得的馬鈴薯試管苗莖段截取4cm放置于實(shí)施例2制備的培養(yǎng)基中培養(yǎng)，待莖段增長了 6cm;
[0031](3)取步驟(3)獲得的馬鈴薯試管苗頂端4cm，放置于實(shí)施例2制備的培養(yǎng)基中培養(yǎng)，得到馬鈴薯試管苗。[〇〇32]以相同的品種，以MS固體培養(yǎng)基，在相同的條件及相同的步驟下培養(yǎng)，為對(duì)照組1。 觀察對(duì)照組1得到的試管苗玻璃化嚴(yán)重，呈現(xiàn)半透明玻璃狀，黃化嚴(yán)重且無葉片生長，生長速度慢，生根少。而實(shí)施例4組得到的試管苗無玻璃化現(xiàn)象，出現(xiàn)部分新生葉，莖段有芽，生長速度相對(duì)較快，開始生根。
[0033]實(shí)施例5
[0034]—種改善馬鈴薯試管苗玻璃化的方法，包括以下步驟:[〇〇35](1)將脫毒處理的大西洋品種(商品化的)馬鈴薯幼芽經(jīng)過滅菌處理后，放置于MS固體培養(yǎng)基上，在25°C，16h/8h光周期，光強(qiáng)為300wii〇l/(m2.S)的培養(yǎng)條件下培養(yǎng)，使莖段長超過7cm;
[0036](2)將步驟(1)獲得的馬鈴薯試管苗莖段截取3cm放置于實(shí)施例1制備的培養(yǎng)基中培養(yǎng)，待莖段增長了 5cm;
[0037](3)取步驟(3)獲得的馬鈴薯試管苗頂端3cm，放置于實(shí)施例1制備的培養(yǎng)基中培養(yǎng)，得到馬鈴薯試管苗。[〇〇38]以相同的品種，以MS固體培養(yǎng)基，在相同的條件及相同的步驟下培養(yǎng)，為對(duì)照組2。 觀察對(duì)照組2得到的試管苗玻璃化嚴(yán)重，呈現(xiàn)半透明玻璃狀，黃化嚴(yán)重且無葉片生長，生長速度慢，生根少。而實(shí)施例5組得到的試管苗無玻璃化現(xiàn)象，出現(xiàn)部分新生葉，且葉綠素含量增加，葉的顏色變綠，莖段有芽，生長速度相對(duì)較快，開始生根。
[0039]實(shí)施例6
[0040]—種轉(zhuǎn)換馬鈴薯脫毒玻璃化苗為正常苗的方法，包括以下步驟:
[0041](1)將脫毒處理的早大白品種(商品化的)馬鈴薯幼芽經(jīng)過滅菌處理后，放置于MS 固體培養(yǎng)基上，在26°C，16h/8h光周期，光強(qiáng)為300wii〇l/(m2.S)的培養(yǎng)條件下培養(yǎng)，使莖段長超過7cm;
[0042](2)將步驟(1)獲得的馬鈴薯試管苗莖段截取5cm放置于實(shí)施例3制備的培養(yǎng)基中培養(yǎng)，待莖段增長了 8cm;
[0043](3)取步驟(3)獲得的馬鈴薯試管苗頂端5cm，放置于實(shí)施例3制備的培養(yǎng)基中培養(yǎng)，得到馬鈴薯試管苗。
[0044]以相同的品種，以MS固體培養(yǎng)基，在相同的條件及相同的步驟下培養(yǎng)，為對(duì)照組3。 觀察對(duì)照組3得到的試管苗玻璃化嚴(yán)重，呈現(xiàn)半透明玻璃狀，黃化嚴(yán)重且無葉片生長，生長速度慢，生根少(如圖1)。而實(shí)施例6的方法得到的試管苗無玻璃化現(xiàn)象，莖段呈正常，葉片深綠色(如圖2 )，生根快，生長速率快，后期長勢較好(如圖3)。
[0045]各實(shí)施例所用的MS固體培養(yǎng)基的制備:
[0046]取4.74g MS培養(yǎng)基(商品化，不含瓊脂和蔗糖)，加蒸餾水溶解，調(diào)節(jié)pH = 5.8，加入 l〇g瓊脂和20g鹿糖，加蒸餾水至1000ml，滅菌。
【主權(quán)項(xiàng)】
1.一種轉(zhuǎn)換馬鈴薯脫毒玻璃化苗為正常苗的方法，其特征在于包括以下步驟:(1)將脫毒處理的馬鈴薯幼芽經(jīng)過滅菌處理后，放置于MS固體培養(yǎng)基上，培養(yǎng)，使莖段 長超過7cm;(2)配制含有矮壯素的固體培養(yǎng)基；(3)將步驟(1)獲得的馬鈴薯試管苗莖段截取3?5cm放置于步驟(2)獲得的培養(yǎng)基中培 養(yǎng)，待莖段增長了 5?8cm;(4)取步驟(3)獲得的馬鈴薯試管苗頂端3?5cm，放置于步驟(2)獲得的培養(yǎng)基中培養(yǎng)， 得到馬鈴薯試管苗。2.根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其特征是所述含有矮壯素的固體培養(yǎng)基用下述方法制成:取 4 ? 74g MS培養(yǎng)基，加蒸餾水溶解，調(diào)節(jié)pH = 5 ? 8，加入80?100g瓊脂、30?40g蔗糖和50mg? 150mg矮壯素，加蒸餾水至1000ml，滅菌。
【文檔編號(hào)】A01H4/00GK105993941SQ201610330915
【公開日】2016年10月12日
【申請(qǐng)日】2016年5月18日
【發(fā)明人】季靜, 朱雪瑞, 王罡
【申請(qǐng)人】天津大學(xué)