一種早脆王棗的組培快繁方法
【專利摘要】本發(fā)明屬于植物組培技術領域，具體涉及一種早脆王棗的組培快繁方法，包括外植體的建立、啟動培養(yǎng)、繼代培養(yǎng)、生根培養(yǎng)、煉苗和移栽等步驟，本發(fā)明針對早脆王棗這一品種進行研究，于不同階段采用了最適合的培養(yǎng)基組成，繁殖系數(shù)高，生根率高，該方法操作簡便，成本低，能有效、方便的在短時間內獲得大量早脆王棗組培苗，而且所獲得的組培苗成活率高，采用本發(fā)明的早脆王棗的組培快繁方法可以獲得大量整齊一致，遺傳性狀穩(wěn)定的再生植株，試驗結果穩(wěn)定，重復性良好，適合廣西北部山區(qū)大面積區(qū)域種植，特別是喀斯特地貌山區(qū)種植。
【專利說明】
一種早脆王棗的組培快繁方法
技術領域
[0001] 本發(fā)明屬于植物組培技術領域，具體涉及一種早脆王棗的組培快繁方法。
【背景技術】
[0002] 早脆王棗是河北省滄縣金絲小棗良種繁育場1988年在全國紅棗資源普查中發(fā)現(xiàn) 的優(yōu)良單株，并經(jīng)多年試驗培育出的棗樹優(yōu)系。2001年經(jīng)河北省林木品種委員會審定，定名 為"早脆王"。早脆王棗樹體中等，樹勢中強，結果后樹勢變緩;進入結果期早，幼樹定植后 當年可見果，栽后第2年株產(chǎn)可達2.5 kg，栽后第4年株產(chǎn)10 kg左右。早脆王棗具有以下 特點：1、易管理，枝條角度開張，樹體通風透光好，冒條少，修剪量小;2、成形快，二次枝及棗 吊特長，易塑形，空間利用好;3、產(chǎn)量高，5年生樹畝產(chǎn)可達1500千克以上;4、產(chǎn)量穩(wěn)，棗股經(jīng) 濟壽命長，栽培受益年限長;5、抗性好，抗裂果，抗紅蜘蛛等;6、上市早，該品種8月上旬開始 著色，白熟期就能表現(xiàn)其特有風味，即可上市，深受市場歡迎;7、貨架期長，該品種在室溫條 件下存放15天，仍有良好的商品性能；8、營養(yǎng)豐富，富含糖、Vc、礦質營養(yǎng)、環(huán)磷酸腺苷等， 具有養(yǎng)顏、抗癌、軟化血管等多項功能;9、商品性好，鮮棗脆甜爽口，個大而整齊，平均單果 重30.9克。
[0003] 早脆王棗果實卵圓形，平均單果重30.9g，可溶性固形物含量39.6%，果面鮮紅，肉 質酥脆，汁多味甜，鮮食品質極上。早脆王棗憑借著早實、豐產(chǎn)、早熟、個大、品質好，明顯的 抗寒、抗旱、抗鹽堿、耐瘠薄、耐水濕、耐高溫、抗棗銹病、抗紅蜘蛛危害等特性深受廣大棗農(nóng) 和市場歡迎，因此市場上對早脆王棗的需求量也越來越大。目前，在實際栽培中，早脆王棗 大多采用根蘗苗分株、扦插和嫁接等方法進行繁育，利用根孽分苗繁殖，需與嫁接繁殖相結 合，不僅費工費時，成苗率較低，且易侵染各種植物病毒，采取嫁接苗的方式會受到受砧木 資源的限制和受季節(jié)限制，且部分存在后期不親和現(xiàn)象，其砧木還會發(fā)生大量萌蘗，難以控 制。而且采用根蘗苗分株、扦插和嫁接等方法進行繁育繁殖率很低，生長速度慢，弱病苗比 例高，不能進行周年生產(chǎn)，遠遠不能滿足市場的大量需求。因而影響了其大面積的推廣。在 此形勢下，采用棗樹組織培養(yǎng)技術則成了快速培育良種苗木的有效途徑。組織培養(yǎng)(Tissue Culture)是在無菌條件下，分離并在培養(yǎng)基中培養(yǎng)離體植物組織的技術，用組織培養(yǎng)方法 快速繁殖，具有整株的遺傳一致性，生長健壯，根系發(fā)達、移栽成活率高，果品品質好，產(chǎn)量 尚等優(yōu)點。
[0004] 棗樹的組織培養(yǎng)研究始于20世紀70年代末，迄今為止，已有20多個品種以不 同類型外植體建立了無菌離體繁殖體系。對于棗樹的組培方法也有相關文獻報道，如：1、 【題名】毛葉棗組培快繁技術研究【作者】續(xù)九如，李春立，孫建設【出處】北京林業(yè)大學學 報，2003,25(3)【摘要】利用組織培養(yǎng)技術對毛葉棗的組培快繁技術進行了研究。證明3、4月 是1年內采集外植體的最佳時期，在此階段對外植體進行培養(yǎng)時，有效萌芽率最高。以MS為 基本培養(yǎng)基篩選出適合毛葉棗組培各階段的適宜激素濃度和配比，分別為：啟動培養(yǎng)基 MS+6-BA 0.8 mg/L+IBA 0.4mg/L;增殖培養(yǎng)基MS+ 6-BA 1.2 mg/L+IBA 0.5mg/L;生根培養(yǎng) 基1/2MS+IBA 3.0mg/L并闡明了繼代次數(shù)與增殖系數(shù)和生根率的關系，提出毛葉棗繼代次 數(shù)以8代左右為宜，8代之后應進行生根培養(yǎng)。2、【題名】酸棗組培快繁研究【作者】代麗，劉 孟軍，王玖瑞，周俊義【出處】河北農(nóng)業(yè)大學學報，2005,28(2)【摘要】：以休眠芽為試材，建 立了酸棗的組培快繁體系。最適啟動培養(yǎng)基為MS+ BALO+ IBAo.iS MS+BAu+NAAo.i，增殖培 養(yǎng)基為MS+BA2.0-3.〇，萌芽率和壯芽率均超過70 %。增殖培養(yǎng)時，下部莖段的出芽率高于上部 莖段，但萌發(fā)壯芽的比率則以上部莖段相對較高。1/2 MS+IBAon.o是酸棗快繁生根培養(yǎng)的 適宜培養(yǎng)基，生根率最高可達92 %。迄今為止，人們在棗樹的組培研究方面已取得了一些成 就，運用組培繁殖棗樹優(yōu)良品種的技術已逐步應用到生產(chǎn)中，但是，棗的組織培養(yǎng)較困難， 成本較高，不同品種間的繁殖條件差異較大，不同品種的棗樹的組培方法也不一樣。
[0005] 目前，在早脆王棗的繁育上，由于采用傳統(tǒng)的扦插和嫁接等方法進行繁育，存在著 繁育繁殖率很低，生長速度慢，遠遠不能滿足市場的大量需求等問題；因此，開發(fā)一種針對 早脆王棗的組培快繁方法進行培養(yǎng)繁殖，能夠促進優(yōu)良遺傳材料的快速繁殖，實現(xiàn)早脆王 棗苗的大量繁殖和快速，是解決市場需求以及保持優(yōu)樹特性等問題的有效方法。

【發(fā)明內容】

[0006] 本發(fā)明的目的是提供一種操作簡便，生產(chǎn)成本低，生根率高、繁殖率高的早脆王棗 的組培快繁方法，采用該方法能有效、方便的在短時間內獲得大量早脆王棗組培苗，而且所 獲得的組培苗成活率高，從而實現(xiàn)早脆王棗苗的大量繁殖和快速推廣，適合廣西北部山區(qū) 大面積區(qū)域種植，特別是喀斯特地貌山區(qū)種植，促進早脆王棗產(chǎn)業(yè)發(fā)展。
[0007] 為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用如下技術方案： 一種早脆王棗的組培快繁方法，包括以下步驟： (1) 外植體的建立:于3月初，剪取16-18cm長、當年生優(yōu)質粗壯的根蘗條，用自來水沖洗 15-20分鐘后，于質量濃度為0.4%洗衣粉溶液中浸泡10-13分鐘后，用毛刷輕輕刷洗，再用自 來水沖洗干凈，然后將洗凈后的根蘗條置于培養(yǎng)室 中水培培養(yǎng)，培養(yǎng)至長出2~3cm的水培芽后，取出根蘗條，用質量濃度為75%的酒精浸 泡32s，無菌水沖洗3-4次，瀝干水分，放到質量濃度為0. l%HgCL2溶液中浸泡消毒9-10分鐘， 然后用無菌水沖洗6-7次，用鑷子夾取清洗好的莖段，放置在滅菌的接種碟上，用滅菌過的 濾紙吸干表面水分，剪取水培芽作為外植體； (2) 啟動培養(yǎng):將水培芽轉入經(jīng)滅菌后的啟動培養(yǎng)基中培養(yǎng)，誘導不定芽的萌發(fā)，培養(yǎng) 條件為溫度25~27 °C，光照強度為2200-25001X，光照時間17-18h/d，在培養(yǎng)室中無菌培 養(yǎng)，新芽萌發(fā)之后，將其轉接到分生培養(yǎng)基中培養(yǎng)，在光照強度為2100-23001X，光照時間 14-16h/d，溫度為25-27°C的條件下，培養(yǎng)38-42天； (3) 繼代培養(yǎng):將植株莖段轉接入經(jīng)消毒后的繼代培養(yǎng)基中培養(yǎng)，在培養(yǎng)溫度為26-28 °C，光強2300~25001x，光照時間為14-15h/d的條件下培養(yǎng)35d; (4) 生根培養(yǎng):在無菌條件下，剪取長2-2.5cm繼代培養(yǎng)得到的帶葉莖段，插入生根培養(yǎng) 基中進行生根培養(yǎng);培養(yǎng)溫度26~28°C，光強2100~22001x，光照時間15-17h/d; (5) 煉苗：當經(jīng)過生根培養(yǎng)后的生根試管苗根長1.5~2.0 cm時，將組培苗進行室內煉 苗，煉苗溫度為:26-27°C，光照強度為3800-55001x，室內瓶煉7-8天后，敞口煉苗5-7天； (6) 移栽:取出試管苗，洗凈根上的培養(yǎng)基，移栽到用質量濃度為0.2%KMn〇4溶液消毒過 的椰糠+田園土+細河沙按照1.5-2:1:3-5的比例做基質的營養(yǎng)杯中，澆足水，保持空氣濕度 為85 % -90%，溫度26~27 °C，避免陽光直射，35-38天后，移出溫室進行全光照煉苗6-7d， 及時澆水，然后移栽大田。
[0008] 所述的早脆王棗的組培快繁方法，步驟（1)中將根蘗條置于培養(yǎng)室中水培培養(yǎng)時 的培養(yǎng)條件為:培養(yǎng)溫度為26-28°C，光照時間17-18h/d，光照強度2500~35001X，每20-24 小時換一次水。
[0009] 所述的早脆王棗的組培快繁方法，步驟(2 )中的啟動培養(yǎng)基的成分為:MS+ N6芐基 腺嘌呤1 · 22-1 · 25mg/L +萘乙酸0 · 21 ~0 · 25mg/L+0 · 7%-1% 白砂糖+2 · 8%-3% 糖蜜+瓊脂6g/L， 培養(yǎng)基pH值為6.1。
[0010] 所述的早脆王棗的組培快繁方法，步驟(2)中的分生培養(yǎng)基的成分為:MS+ N6芐基 腺嘌呤2 · 0-2 · 3mg/L+萘乙酸0 · 42-0 · 45mg/L +維生素 Η 1 · 7-2 · 0mg/L+0 · 7%-1%白砂糖+ 2.8%-3%糖蜜+瓊脂7g/L，培養(yǎng)基pH值為6.0。
[0011] 所述的早脆王棗的組培快繁方法，步驟(3)中繼代培養(yǎng)基的成分為:MS+ N6芐基腺 噪呤 2.2mg/L+萘乙酸0.48mg/L+維生素 C 1.0mg/L+維生素 Η 1.2-1.4mg/L+谷氨酸 1.6mg/L +1%白砂糖+3.5%-4%糖蜜+瓊脂8g/L，培養(yǎng)基pH值為6.0-6.1。
[0012] 所述的早脆王棗的組培快繁方法，步驟(4)中生根培養(yǎng)基的成分為：1/2MS+ NAA 0.45mg/L+ IAA0.17mg/L+IBA 0.75-0.85 mg/L+1%白砂糖+3.5%-4%糖蜜+瓊脂8g/L, pH= 6.〇-6.2〇
[0013] 本發(fā)明的有益效果為： 1、本發(fā)明是一種針對早脆王棗的組培快繁方法，針對早脆王棗品種進行的研究，經(jīng)過 不斷試驗，得到了最適合該棗樹組培快繁所用的各種培養(yǎng)基，本發(fā)明培養(yǎng)基中所用的碳源 為白砂糖（含蔗糖9 5 %以上的結晶體）和糖蜜（糖廠蔗糖生產(chǎn)分離出來的不結晶的含糖液 體），不用常用的昂貴的蔗糖，糖蜜富含營養(yǎng)成分，含有各種單糖、粗蛋白質和礦物質，更容 易被植物利用，采用白砂糖和糖蜜作為碳源不僅大大降低了培養(yǎng)基的成本，而且產(chǎn)生的效 果也很好。
[0014] 2、本發(fā)明的繼代培養(yǎng)基中加入谷氨酸，谷氨酸不僅能提供有機氮源，同時也對植 物體的生長及不定芽，不定胚的分化起促進作用，而且能夠被植物細胞很快吸收;在培養(yǎng)基 中加入的維生素 C和維生素 H，能增強培養(yǎng)基的營養(yǎng)，利于外植體的生長發(fā)育，而且在培養(yǎng) 基中加入的維生素 C還有防止組織褐變的作用。
[0015] 3、本發(fā)明的早脆王棗的組培快繁方法可以解決采用傳統(tǒng)繁育方法存在的繁殖率 很低，生長速度慢等問題，采用本發(fā)明的早脆王棗的組培快繁方法能夠極大地提高早脆王 棗的繁殖速度，降低弱苗、病苗的發(fā)生比例，加速了新品種的快速推廣和開發(fā)利用;采用該 方法對早脆王棗進行進行培養(yǎng)繁殖，能夠促進優(yōu)良遺傳材料的快速繁殖，實現(xiàn)早脆王棗樹 的大量繁殖和快速推廣，解決市場的需求，促進早脆王棗產(chǎn)業(yè)發(fā)展。
[0016] 4、本發(fā)明的早脆王棗的組培快繁方法操作難度低、生產(chǎn)成本低，生根率達到87.5% 以上，生產(chǎn)的組培苗成活率高，易于在大范圍內推廣使用，采用本發(fā)明的早脆王棗的組培快 繁方法可以獲得大量整齊一致，遺傳性狀穩(wěn)定的再生植株，試驗結果穩(wěn)定，重復性良好，可 應用于大規(guī)模商品化育苗，苗木能夠保持優(yōu)樹的優(yōu)良遺傳性狀，適合廣西北部山區(qū)大面積 區(qū)域種植，特別是喀斯特地貌山區(qū)種植。
【具體實施方式】 [0017] 實施例！ 一種早脆王棗的組培快繁方法，包括以下步驟： (1) 外植體的建立:于3月初，剪取16cm長、當年生優(yōu)質粗壯的根蘗條，用自來水沖洗15 分鐘后，于質量濃度為0.4%洗衣粉溶液中浸泡10分鐘后，用毛刷輕輕刷洗，再用自來水沖洗 干凈，然后將洗凈后的根蘗條置于培養(yǎng)室中水培培養(yǎng)， 培養(yǎng)溫度為26-28°C，光照時間17h/d，光照強度35001x，每20小時換一次水，培養(yǎng)至長 出2~3cm的水培芽后，取出根蘗條，用質量濃度為75%的酒精浸泡32s，無菌水沖洗3次，瀝干 水分，放到質量濃度為0. l%HgCL2溶液中浸泡消毒9分鐘，然后用無菌水沖洗6次，用鑷子夾 取清洗好的莖段，放置在滅菌的接種碟上，用滅菌過的濾紙吸干表面水分，剪取水培芽作為 外植體； (2) 啟動培養(yǎng):將水培芽轉入經(jīng)滅菌后的啟動培養(yǎng)基中培養(yǎng)，啟動培養(yǎng)基的成分為:MS+ N6芐基腺嘌呤1 · 22mg/L +萘乙酸0 · 21mg/L+0 · 7%白砂糖+3%糖蜜+瓊脂6g/L，培養(yǎng)基pH值為 6.1;誘導不定芽的萌發(fā)，培養(yǎng)條件為溫度25~27 °C，光照強度為22001x，光照時間18h/ d，在培養(yǎng)室中無菌培養(yǎng)，新芽萌發(fā)之后，將其轉接到分生培養(yǎng)基中培養(yǎng)，分生培養(yǎng)基的成分 為:MS+ N6芐基腺嘌呤2.0mg/L+萘乙酸0.42mg/L +維生素 H 1.7mg/L+0.7%白砂糖+3%糖蜜+ 瓊脂7g/L，培養(yǎng)基pH值為6.0;在光照強度為21001x，光照時間16h/d，溫度為25-27°C的條 件下，培養(yǎng)42天； (3) 繼代培養(yǎng):將植株莖段轉接入經(jīng)消毒后的繼代培養(yǎng)基中培養(yǎng)，繼代培養(yǎng)基的成分 為:MS+ N6芐基腺嘌呤2.2mg/L+萘乙酸0.48mg/L+維生素 C 1.0mg/L+維生素 H 1.2mg/L+谷 氨酸1 · 6mg/L +1%白砂糖+3 · 5%糖蜜+瓊脂8g/L，培養(yǎng)基pH值為6 · 0-6 · 1;在培養(yǎng)溫度為26-28°C，光強23001x，光照時間為15h/d的條件下培養(yǎng)35d; (4) 生根培養(yǎng):在無菌條件下，剪取長2-2.5cm繼代培養(yǎng)得到的帶葉莖段，插入生根培養(yǎng) 基中進行生根培養(yǎng)；生根培養(yǎng)基的成分為：1/2MS+ NAA 0.45mg/L+ IAA0.17mg/L+IBA 0 · 75mg/L+l%白砂糖+3 · 5%糖蜜+瓊脂8g/L，pH=6 · 0-6 · 2;培養(yǎng)溫度 26~28°C，光強21001x， 光照時間17h/d; (5) 煉苗：當經(jīng)過生根培養(yǎng)后的生根試管苗根長1.5~2.0 cm時，將組培苗進行室內煉 苗，煉苗溫度為:26-27°C，光照強度為38001x，室內瓶煉8天后，敞口煉苗7天； (6) 移栽:取出試管苗，洗凈根上的培養(yǎng)基，移栽到用質量濃度為0.2%KMn〇4溶液消毒過 的椰糠+田園土+細河沙按照1.5:1:3的比例做基質的營養(yǎng)杯中，澆足水，保持空氣濕度為 85%-90%，溫度26~27°C，避免陽光直射，35天后，移出溫室進行全光照煉苗6d，及時澆水， 然后移栽大田。
[0018] 實施例2 一種早脆王棗的組培快繁方法，包括以下步驟： (1)外植體的建立:于3月初，剪取17cm長、當年生優(yōu)質粗壯的根蘗條，用自來水沖洗18 分鐘后，于質量濃度為0.4%洗衣粉溶液中浸泡12分鐘后，用毛刷輕輕刷洗，再用自來水沖洗 干凈，然后將洗凈后的根蘗條置于培養(yǎng)室中水培培養(yǎng)， 培養(yǎng)溫度為26-28°C，光照時間18h/d，光照強度31001x，每22小時換一次水，培養(yǎng)至長 出2~3cm的水培芽后，取出根蘗條，用質量濃度為75%的酒精浸泡32s，無菌水沖洗4次，瀝干 水分，放到質量濃度為0. l%HgCL2溶液中浸泡消毒10分鐘，然后用無菌水沖洗7次，用鑷子夾 取清洗好的莖段，放置在滅菌的接種碟上，用滅菌過的濾紙吸干表面水分，剪取水培芽作為 外植體； (2) 啟動培養(yǎng):將水培芽轉入經(jīng)滅菌后的啟動培養(yǎng)基中培養(yǎng)，啟動培養(yǎng)基的成分為:MS+ N6芐基腺嘌呤1.23mg/L +萘乙酸0.22mg/L+0.8%白砂糖+2.9%糖蜜+瓊脂6g/L，培養(yǎng)基pH值 為6.1;誘導不定芽的萌發(fā)，培養(yǎng)條件為溫度25~27 °C，光照強度為23001x，光照時間 18h/d，在培養(yǎng)室中無菌培養(yǎng)，新芽萌發(fā)之后，將其轉接到分生培養(yǎng)基中培養(yǎng)，分生培養(yǎng)基的 成分為:MS+ N6芐基腺嘌呤2.1mg/L+萘乙酸0.44mg/L +維生素 H 1.9mg/L+0.9%白砂糖+ 2.9%糖蜜+瓊脂7g/L，培養(yǎng)基pH值為6.0;在光照強度為22001x，光照時間15h/d，溫度為25-27°C的條件下，培養(yǎng)41天； (3) 繼代培養(yǎng):將植株莖段轉接入經(jīng)消毒后的繼代培養(yǎng)基中培養(yǎng)，繼代培養(yǎng)基的成分 為:MS+ N6芐基腺嘌呤2.2mg/L+萘乙酸0.48mg/L+維生素 C 1.0mg/L+維生素 H 1.3mg/L+谷 氨酸1 · 6mg/L +1%白砂糖+3 · 8%糖蜜+瓊脂8g/L，培養(yǎng)基pH值為6 · 0-6 · 1;在培養(yǎng)溫度為26-28°C，光強24001x，光照時間為14h/d的條件下培養(yǎng)35d; (4) 生根培養(yǎng):在無菌條件下，剪取長2-2.5cm繼代培養(yǎng)得到的帶葉莖段，插入生根培養(yǎng) 基中進行生根培養(yǎng)；生根培養(yǎng)基的成分為：1/2MS+ NAA 0.45mg/L+ IAA0.17mg/L+IBA 0 · 80mg/L+l%白砂糖+3 · 7%糖蜜+瓊脂8g/L，pH=6 · 0-6 · 2;培養(yǎng)溫度 26~28°C，光強22001x， 光照時間16h/d; (5) 煉苗：當經(jīng)過生根培養(yǎng)后的生根試管苗根長1.5~2.0 cm時，將組培苗進行室內煉 苗，煉苗溫度為:26-27°C，光照強度為43001x，室內瓶煉7天后，敞口煉苗6天； (6) 移栽:取出試管苗，洗凈根上的培養(yǎng)基，移栽到用質量濃度為0.2%KMn〇4溶液消毒過 的椰糠+田園土+細河沙按照2:1:5的比例做基質的營養(yǎng)杯中，澆足水，保持空氣濕度為 85%-90%，溫度26~27°C，避免陽光直射，36天后，移出溫室進行全光照煉苗6d，及時澆水， 然后移栽大田。
[0019] 實施例3 一種早脆王棗的組培快繁方法，包括以下步驟： (1) 外植體的建立:于3月初，剪取18cm長、當年生優(yōu)質粗壯的根蘗條，用自來水沖洗20 分鐘后，于質量濃度為〇. 4%洗衣粉溶液中浸泡13分鐘后，用毛刷輕輕刷洗，再用自來水沖洗 干凈，然后將洗凈后的根蘗條置于培養(yǎng)室中水培培 養(yǎng)，培養(yǎng)溫度為26-28°C，光照時間18h/d，光照強度25001x，每24小時換一次水，培養(yǎng)至 長出2~3cm的水培芽后，取出根蘗條，用質量濃度為75%的酒精浸泡32s，無菌水沖洗3次，瀝 干水分，放到質量濃度為0.1%HgCL 2溶液中浸泡消毒10分鐘，然后用無菌水沖洗7次，用鑷子 夾取清洗好的莖段，放置在滅菌的接種碟上，用滅菌過的濾紙吸干表面水分，剪取水培芽作 為外植體； (2) 啟動培養(yǎng):將水培芽轉入經(jīng)滅菌后的啟動培養(yǎng)基中培養(yǎng)，啟動培養(yǎng)基的成分為:MS+ N6芐基腺嘌呤1.25mg/L +萘乙酸0.25mg/L+l%白砂糖+2.8%糖蜜+瓊脂6g/L，培養(yǎng)基pH值為 6.1;誘導不定芽的萌發(fā)，培養(yǎng)條件為溫度25~27 °C，光照強度為25001x，光照時間17h/ d，在培養(yǎng)室中無菌培養(yǎng)，新芽萌發(fā)之后，將其轉接到分生培養(yǎng)基中培養(yǎng)，分生培養(yǎng)基的成分 為:MS+ N6芐基腺嘌呤2.3mg/L+萘乙酸0.45mg/L +維生素 H 2.0mg/L+l%白砂糖+2.8%糖蜜+ 瓊脂7g/L，培養(yǎng)基pH值為6.0;在光照強度為23001x，光照時間14h/d，溫度為25-27°C的條 件下，培養(yǎng)38天； (3) 繼代培養(yǎng):將植株莖段轉接入經(jīng)消毒后的繼代培養(yǎng)基中培養(yǎng)，繼代培養(yǎng)基的成分 為:MS+ N6芐基腺嘌呤2.2mg/L+萘乙酸0.48mg/L+維生素 C 1.0mg/L+維生素 H 1.4mg/L+谷 氨酸1.61^/1+1%白砂糖+4%糖蜜+瓊脂88/1，培養(yǎng)基?!1值為6.0-6.1;在培養(yǎng)溫度為26-28 °C，光強25001X，光照時間為14h/d的條件下培養(yǎng)35d; (4) 生根培養(yǎng):在無菌條件下，剪取長2-2.5cm繼代培養(yǎng)得到的帶葉莖段，插入生根培養(yǎng) 基中進行生根培養(yǎng);生根培養(yǎng)基的成分為：1/2MS+ NAA 0.45mg/L+ IAA0.17mg/L+IBA 0.85 1^/1+1%白砂糖+4%糖蜜+瓊脂88/1，？!1=6.0-6.2;培養(yǎng)溫度26~28°(：，光強220011，光照時 間15h/d; (5) 煉苗：當經(jīng)過生根培養(yǎng)后的生根試管苗根長1.5~2.0 cm時，將組培苗進行室內煉 苗，煉苗溫度為:26-27°C，光照強度為55001x，室內瓶煉7天后，敞口煉苗5天； (6) 移栽:取出試管苗，洗凈根上的培養(yǎng)基，移栽到用質量濃度為0.2%KMn〇4溶液消毒過 的椰糠+田園土+細河沙按照1.7:1:4的比例做基質的營養(yǎng)杯中，澆足水，保持空氣濕度為 85%-90%，溫度26~27°C，避免陽光直射，38天后，移出溫室進行全光照煉苗6d，及時澆 水，然后移栽大田。
[0020] 以下為采用本發(fā)明早脆王棗的組培快繁方法得到的早脆王棗組培苗的繁育結果： 種植地點：廣西桂林市興安縣(興安縣位于廣西北部，氣候冬天最低零下5度，夏天32 度，丘陵山坡較多，適宜棗樹生長）。
[0021] 由上表可以看出，本發(fā)明早脆王棗的組培快繁方法，繁殖系數(shù)高，生根率達87.5% 以上，營養(yǎng)杯移栽成活率在89.4%以上，大田移栽成活率在91%以上，組培苗移栽后能迅速適 應露天環(huán)境，生長迅速，抗外界不良環(huán)境能力強。采用本發(fā)明的方法對早脆王棗進行繁育， 能有效、方便的在短時間內獲得大量早脆王棗的組培苗，滿足市場需求。
【主權項】
1. 一種早脆王棗的組培快繁方法，其特征在于，包括以下步驟： (1) 外植體的建立:于3月初，剪取16-18cm長、當年生優(yōu)質粗壯的根蘗條，用自來水沖洗 15-20分鐘后，于質量濃度為0.4%洗衣粉溶液中浸泡10-13分鐘后，用毛刷輕輕刷洗，再用自 來水沖洗干凈，然后將洗凈后的根蘗條置于培養(yǎng)室 中水培培養(yǎng)，培養(yǎng)至長出2~3cm的水培芽后，取出根蘗條，用質量濃度為75%的酒精浸 泡32s，無菌水沖洗3-4次，瀝干水分，放到質量濃度為0. l%HgCL2溶液中浸泡消毒9-10分鐘， 然后用無菌水沖洗6-7次，用鑷子夾取清洗好的莖段，放置在滅菌的接種碟上，用滅菌過的 濾紙吸干表面水分，剪取水培芽作為外植體； (2) 啟動培養(yǎng):將水培芽轉入經(jīng)滅菌后的啟動培養(yǎng)基中培養(yǎng)，誘導不定芽的萌發(fā)，培養(yǎng) 條件為溫度25~27°C，光照強度為2200-25001X，光照時間17-18h/d，在培養(yǎng)室中無菌培養(yǎng)， 新芽萌發(fā)之后，將其轉接到分生培養(yǎng)基中培養(yǎng)，在光照強度為2100-23001X，光照時間14-16h/d，溫度為25-27°C的條件下，培養(yǎng)38-42天； (3) 繼代培養(yǎng):將植株莖段轉接入經(jīng)消毒后的繼代培養(yǎng)基中培養(yǎng)，在培養(yǎng)溫度為26-28 °C，光強2300~25001x，光照時間為14-15h/d的條件下培養(yǎng)35d; (4) 生根培養(yǎng):在無菌條件下，剪取長2-2.5cm繼代培養(yǎng)得到的帶葉莖段，插入生根培養(yǎng) 基中進行生根培養(yǎng);培養(yǎng)溫度26~28°C，光強2100~22001x，光照時間15-17h/d; (5) 煉苗：當經(jīng)過生根培養(yǎng)后的生根試管苗根長1.5~2.0 cm時，將組培苗進行室內煉 苗，煉苗溫度為:26-27°C，光照強度為3800-55001x，室內瓶煉7-8天后，敞口煉苗5-7天； (6 )移栽:取出試管苗，洗凈根上的培養(yǎng)基，移栽到用質量濃度為0.2%KMn〇4溶液消毒過 的椰糠+田園土+細河沙按照1.5-2:1:3-5的比例做基質的營養(yǎng)杯中，澆足水，保持空氣濕度 為85 % -90%，溫度26~27 °C，避免陽光直射，35-38天后，移出溫室進行全光照煉苗6-7d， 及時澆水，然后移栽大田。2. 根據(jù)權利要求1所述的早脆王棗的組培快繁方法，其特征在于，所述步驟（1)中將根 蘗條置于培養(yǎng)室中水培培養(yǎng)時的培養(yǎng)條件為:培養(yǎng)溫度為26-28°C，光照時間17-18h/d，光 照強度2500~35001x，每20-24小時換一次水。3. 根據(jù)權利要求1所述的早脆王棗的組培快繁方法，其特征在于，所述步驟(2)中的啟 動培養(yǎng)基的成分為:MS+ N6芐基腺嘌呤1 · 22-1 · 25mg/L +萘乙酸0 · 21~0 · 25mg/L+0 · 7%-1% 白砂糖+2.8%-3%糖蜜+瓊脂6g/L，培養(yǎng)基pH值為6.1。4. 根據(jù)權利要求1所述的早脆王棗的組培快繁方法，其特征在于，所述步驟(2)中的分 生培養(yǎng)基的成分為:MS+ N6芐基腺嘌呤2.0-2.3mg/L+萘乙酸0.42-0.45mg/L+維生素!11.7-2.0mg/L+0.7%-1%白砂糖+2.8%-3%糖蜜+瓊脂7g/L，培養(yǎng)基pH值為6.0。5. 根據(jù)權利要求1所述的早脆王棗的組培快繁方法，其特征在于，所述步驟(3)中繼代 培養(yǎng)基的成分為:MS+ N6芐基腺嘌呤2.2mg/L+萘乙酸0.48mg/L+維生素 C 1.0mg/L+維生素 Η 1.2-1.4mg/L+谷氨酸1.6mg/L +1%白砂糖+3·5%-4%糖蜜+瓊脂8g/L，培養(yǎng)基pH值為6.0-6.1〇6. 根據(jù)權利要求1所述的早脆王棗的組培快繁方法，其特征在于，所述步驟(4)中生根 培養(yǎng)基的成分為：1/2MS+ NAA 0.45mg/L+ IAA0.17mg/L+IBA 0.75-0.85 mg/L+1%白砂糖+ 3 · 5%-4%糖蜜+瓊脂8g/L，pH=6 · 0-6 · 2。
【文檔編號】A01H4/00GK105993945SQ201610348307
【公開日】2016年10月12日
【申請日】2016年5月24日
【發(fā)明人】雷軍強, 韋穎婷, 覃穩(wěn)梅, 李玉秋, 莫曉君, 韋倩梅
【申請人】象州縣科學技術局