一種延長芍藥切花瓶插壽命的方法
【專利摘要】本發(fā)明屬于園藝技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種延長芍藥切花瓶插壽命的方法。該方法是在芍藥花朵處于硬蕾期時，在莖稈第3～4片復(fù)葉處進(jìn)行剪切，迅速將傷口置于水中斜切莖稈基部，留取3片小葉2片復(fù)葉，將剪切好的芍藥切花莖稈置于30～100mg·L?1納米銀溶液中，靜置處理36h，而后瓶插于2％的蔗糖溶液中，瓶口用錫箔紙覆蓋，防止水分蒸發(fā)。本發(fā)明方法操作簡便，易于在生產(chǎn)上推廣應(yīng)用，對環(huán)境無污染，可回收再利用，生產(chǎn)成本較低；并能有效地提高了芍藥切花瓶插的觀賞品質(zhì)。
【專利說明】
_種延長茍藥切花瓶插壽命的方法
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明屬于園藝技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種延長芍藥切花瓶插壽命的方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 芍藥屬于芍藥科芍藥屬宿根草本植物，是中國的傳統(tǒng)名花。作為一種名貴花卉，芍 藥花大色艷、花型端莊、花香襲人，是作為切花的良好材料，近年來在國內(nèi)外較為流行，廣泛 應(yīng)用于婚禮等喜慶場合，市場前景十分廣闊。但由于芍藥花期短暫，自然花期主要集中于4 ~5月，其切花脫離母體后，其自然瓶插壽命僅為7天左右，這造成芍藥切花供應(yīng)期短，顯著 影響了芍藥切花產(chǎn)業(yè)的發(fā)展。因此，找到一種能夠使芍藥切花保鮮、延長其瓶插壽命、增強(qiáng) 觀賞效果的方法至關(guān)重要。
[0003] 芍藥切花采后生理生化會發(fā)生很大變化。首先是水分虧缺，這是影響芍藥切花瓶 插壽命的主要因素之一。保持茍藥切花充足的水分對維持切花正常膨壓與代謝活動都是必 要的，因此，維持花枝水分及水分導(dǎo)度是抑制切花早期衰老、延長瓶插壽命的主要因子。而 通過目前的研究得知，花枝導(dǎo)管堵塞是造成切花貯藏后期花枝吸水力下降的原因之一。其 次是膜脂過氧化，這是影響芍藥切花衰老的又一主要因素。芍藥切花采后的可溶性蛋白質(zhì) 含量持續(xù)下降，超氧化物歧化酶(S0D)、過氧化物酶(P0D)、過氧化氫酶(CAT)等保護(hù)酶活性 下降，是其膜透性增大的重要原因之一。針對以上兩個影響芍藥切花衰老的主要生理生化 變化，目前在生產(chǎn)上主要采用物理和化學(xué)兩種保鮮技術(shù)。物理保鮮技術(shù)主要是采用低溫冷 藏，這種保鮮方法因使用范圍和操作技術(shù)等限制，很難廣泛使用。王榮花等在《殺菌劑和低 溫貯藏對芍藥切花保鮮及其生理變化的影響》一文中指出，4~10°C的預(yù)冷處理6h可以降低 切花的呼吸速率，延長瓶插壽命和1C藏保鮮期；但Waltona等人在《The dynamics of starch and sugar utilisation in cut peony(Paeonia lactiflora Pall.)stems during storage and vase life》中也指出，0°C的8周冷藏使得茍藥切花的瓶插壽命縮短 了近4天。而與物理保鮮技術(shù)相比，前人對化學(xué)保鮮技術(shù)的研究更為深入。魏秀儉等在《苯甲 酸鈉在芍藥切花保鮮中的作用研究》中使用500mg/L的苯甲酸鈉作為保鮮液可以延長瓶插 壽命2天;徐萌等在《不同植物生長調(diào)節(jié)劑對芍藥切花保鮮效果的影響》一文中分別在30g/L 蔗糖+200mg/L 8-羥基喹啉+150mg/L檸檬酸中添加200mg/L多效唑和200mg/L矮壯素作為瓶 插液，芍藥切花的瓶插壽命分別延長3天和2.8天。這幾種物質(zhì)雖然可以作為芍藥切花保鮮 劑使用，但其瓶插壽命最多只能延長3天。中國發(fā)明專利(CN104255714 B)公開了一種牡丹、 芍藥鮮切花保鮮液，它是由有益菌液、無水亞硒酸鹽、抗氧化劑、鋅鹽和水構(gòu)成。該發(fā)明能有 效延長牡丹、芍藥鮮切花的觀賞時間，并且具有安全、無毒、無污染的特點，但這種保鮮液成 分存在配置工藝復(fù)雜、成本較高等缺點。姚連芳等人在《采前噴鈣采后貯藏對芍藥月季瓶插 壽命影響》一文中分別于芍藥切花采前一周、3天、2天重復(fù)噴鈣處理3次，可延長其瓶插壽命 2~3天。這一方法處理次數(shù)多、操作繁瑣、需要耗費較多的人力、物力。因此，發(fā)明一種高效、 經(jīng)濟(jì)、安全無毒、無污染、工藝簡單的芍藥切花保鮮劑及其操作方法就顯得尤為必要。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明的目的在于解決芍藥作為切花生產(chǎn)時其瓶插壽命過短的問題，提供一種能 夠顯著延長芍藥切花瓶插壽命的保鮮劑及其操作方法，該保鮮劑經(jīng)濟(jì)、安全無毒、無污染， 操作方法簡便易行，可在生產(chǎn)上大規(guī)模推廣應(yīng)用。
[0005] 本發(fā)明采用的技術(shù)方案是：
[0006] -種延長芍藥切花瓶插壽命的方法，是在芍藥花朵處于硬蕾期時，在莖桿第3~4 片復(fù)葉處進(jìn)行剪切，迅速將傷口置于水中斜切莖桿基部，留取3片小葉2片復(fù)葉將剪切好的 芍藥切花莖桿置于30~100mg · Γ1納米銀溶液中，靜置處理36h，而后瓶插于2%的蔗糖溶液 中，瓶口用錫箱紙覆蓋，防止水分蒸發(fā)。
[0007] 上述方法中，剪切好的芍藥切花的花枝長度為30cm。
[0008] 本發(fā)明中所述的硬蕾期，是本領(lǐng)域技術(shù)人員所熟知的，例如按文獻(xiàn)《芍藥花蕾成熟 及開花的階段劃分與形態(tài)類型》(成仿云、高水平、于曉南，園藝學(xué)報，2009,36(4) :611-613) 劃分。
[0009] 本發(fā)明的方法主要是通過提高S0D、CAT等保護(hù)酶活性的來清除芍藥切花體內(nèi)的自 由基，從而減少MDA、0'H2〇 2等有害物質(zhì)的積累；與此同時，該方法有效抑制了芍藥花莖末端 切口微生物繁衍，減輕莖桿導(dǎo)管的堵塞程度，從而很好地維持了切花體內(nèi)的水分平衡，最終 延長了芍藥切花的瓶插壽命。
[0010]本發(fā)明的有益效果體現(xiàn)在：
[0011] (1)該方法操作簡便，易于在生產(chǎn)上推廣應(yīng)用，對環(huán)境無污染，可回收再利用，生產(chǎn) 成本較低。
[0012] (2)該方法實用效果顯著，不僅能顯著延長芍藥切花的瓶插壽命(可達(dá)4天），還可 以增加花朵的直徑和鮮重，改善植株本身的水分運輸，有效地提高了芍藥切花瓶插的觀賞 品質(zhì)。
[0013] (3)該方法主要是通過提高S0D、CAT等保護(hù)酶活性的來清除芍藥切花體內(nèi)的自由 基，從而減少MDA、0'H2〇2等有害物質(zhì)的積累；與此同時，該方法有效抑制了芍藥花莖末端切 口微生物繁衍，減輕莖桿導(dǎo)管的堵塞程度，從而很好地維持了切花體內(nèi)的水分平衡，最終延 長了芍藥切花的瓶插壽命。
【附圖說明】
[0014] 圖1是納米銀處理對芍藥切花瓶插壽命的影響。
[0015] 圖2是納米銀處理對芍藥切花鮮重、花徑的影響。
[0016]圖3是納米銀處理對芍藥切花生理指標(biāo)的影響。
[0017] 圖4是納米銀處理對芍藥切花保護(hù)酶活性的影響。
[0018] 圖5是Ag+在芍藥切花不同部位的分布。
[0019] 圖6是納米銀處理對芍藥切花吸水量的影響。
[0020] 圖7是芍藥切花底部莖桿掃描電鏡觀察。
[0021] 圖8是分離菌株菌落形態(tài)及分生孢子形態(tài)；1:1號分離物;2: 2號分離物;A:菌落正 面;B:菌落背面;C:分生孢子。
[0022]圖9是分離菌株P(guān)CR電泳圖；1:1號分離物;2:2號分離物。
[0023]圖10是1號分離菌株序列Blast比對結(jié)果。
[0024]圖11是2號分離菌株序列Blast比對結(jié)果。
【具體實施方式】 [0025] 實施例1
[0026] 以生產(chǎn)上栽培應(yīng)用普遍的芍藥品種'紅艷爭輝'（購于山東菏澤春秋園藝中心）為 試材來開展本研究工作，田間栽植于揚(yáng)州大學(xué)園藝與植物保護(hù)學(xué)院芍藥種質(zhì)資源圃（32° 3〇1，119°254)中：
[0027] 1、納米銀溶液的配制:本發(fā)明所使用的納米銀為上海滬正納米科技有限公司生產(chǎn) (原濃度為l〇〇〇mg · I/1)，使用去離子水將其稀釋成30和100mg · I/1，所有溶液現(xiàn)配現(xiàn)用。
[0028] 2、材料準(zhǔn)備:選取無病蟲害、發(fā)育程度一致、花朵處于硬蕾期(按文獻(xiàn)《芍藥花蕾成 熟及開花的階段劃分與形態(tài)類型》劃分）的芍藥植株，在莖桿第3~4片復(fù)葉處進(jìn)行剪切，迅 速將傷口置于水中斜切莖桿基部，留取3片小葉2片復(fù)葉，花枝長度為30cm。
[0029] 3、處理:將剪切好的芍藥切花莖桿置于30mg · I/1納米銀溶液中，以去離子水為對 照，靜置處理36h，而后分別插于2%的蔗糖溶液中，瓶口用錫箱紙覆蓋，防止水分蒸發(fā)，置于 室內(nèi)正常環(huán)境條件下。
[0030] 4、芍藥切花瓶插壽命觀察及其他指標(biāo)的測定：
[0031] (1)瓶插壽命觀察:從瓶插當(dāng)天開始，每天觀測記錄切花的外觀變化，以花瓣出現(xiàn) 萎蔫脫落為瓶插壽命的終止，記錄瓶插天數(shù)。
[0032] (2)形態(tài)指標(biāo)的測定:在瓶插期間，每天同一時間使用游標(biāo)卡尺(0-150,臺州市新 上量量具有限公司）準(zhǔn)確測量花朵直徑，使用電子天平(T-500,常熟雙杰測試儀器廠)精確 測量花朵鮮重。
[0033] (3)生理指標(biāo)的測定：
[0034] ①相對電導(dǎo)率:取新鮮的樣品，用去離子水洗凈，使用直徑lcm的打孔器打孔；取 〇. 2g放置于戴塞試管，加入20mL去離子水，每個處理重復(fù)3次;25 °C 80khz下超聲15min，測定 電導(dǎo)率值記為R1;室溫靜置30min，煮沸15min，冷卻后測定電導(dǎo)率值記為R2。計算公式:相對 電導(dǎo)率= R1/R2X100%。
[0035] ②可溶性蛋白含量、丙二醛含量、超氧陰離子自由基含量、過氧化氫含量、脯氨酸 含量的測定均參照試劑盒的說明書進(jìn)行(南京建成生物工程研究所）。
[0036] (4)保護(hù)酶活性的測定:超氧化物歧化酶、過氧化氫酶活性的測定均參照試劑盒的 說明書進(jìn)行(南京建成生物工程研究所）。
[0037] (5)離子運輸與水分吸收測定：
[0038]① Ag+含量:采用ICP方法測定芍藥植株中的Ag+含量。在瓶插第2、4、6、8天采取對照 芍藥和納米銀處理植株的底部莖桿2cm、頂部莖桿2cm、花瓣和葉片，置于烘箱中殺青，而后 烘干至恒重。分別稱取莖桿頂部和底部干樣各〇.2g、花瓣和葉片各0.5g，將其放在灰化爐中 (HKKH3000，恒科煤質(zhì)化驗設(shè)備公司），每分鐘升溫15°C，700°C后保持5h直至樣品全部灰化。 取出后冷卻至室溫，用lmL 98%HN〇3溶解灰分，將其轉(zhuǎn)移到10mL容量瓶中，并用超純水稀 釋，使用混合纖維素酯微孔濾膜(孔徑〇.45μπι)過濾，最終使用Optima 7300 DV電感耦合等 離子體光譜儀(美國PerkinElmer)測定茍藥樣品中Ag+含量。
[0039] ②吸水量:瓶插期間，每天同一時間測量瓶子+瓶插液的重量，記為W，則第η天吸水 量為 W(n)-W(n+1)。
[0040] (6)掃描電鏡觀察:取莖桿基部5mm固定在2.5%戊二醛溶液中，3h后用0.1M PBS緩 沖液沖洗3次，每次15min，經(jīng)過50 %、70 %、85 %、95 %、100 %酒精梯度脫水，每次15min，丙 酮和無水乙醇混合液處理15min，C02臨界點干燥，噴金，將其置于掃描電鏡(XL-30ESEM，荷 蘭Phi 1 ips)下觀察莖桿底部堵塞情況。
[0041] (7)病原菌的鑒定：
[0042]①土豆培養(yǎng)基的配制:新鮮去皮馬鈴薯200g、葡萄糖20g、瓊脂20g、蒸餾水1000mL。 將200g馬鈴薯在適量的水中煮沸，紗布過濾，濾液中加20g蔗糖并攪拌使其溶解，將濾液用 蒸餾水補(bǔ)足至l〇〇〇mL，加入20g瓊脂，加熱使瓊脂完全融化后，高溫高壓（121°C、110kPa)滅 菌20min(LDZX-50XBS，上海申安醫(yī)療器械廠），而后用于真菌分離與保存。
[0043] ②病樣采集:將瓶插芍藥花枝的底部莖桿切下，浸沒在0.5%次氯酸鈉溶液中消毒 2min左右，然后用滅菌蒸餾水沖洗2~3次，用滅菌濾紙將組織塊表面的水分吸干，將組織塊 分散放置于土豆培養(yǎng)基中，25°C黑暗條件下培養(yǎng)3天，待長出菌落后立即純化。
[0044] ③病原菌形態(tài)學(xué)特征觀察:將分離純化的菌落塊接種至土豆培養(yǎng)基中，25°C黑暗 條件下培養(yǎng)3天，觀察菌落形態(tài)。待培養(yǎng)基上生長出菌絲后，挑針刮取徒手切片，在顯微鏡下 觀察其孢子形態(tài)，并拍照。
[0045]④病原菌分子生物學(xué)鑒定：gDNA提取參照真菌基因組DNA快速抽提試劑盒說明書 進(jìn)行(上海生工生物工程有限公司）。采用ITS4(28S)和ITS5(18S)引物擴(kuò)增整個ITS區(qū)序列， 包含其兩端的18S rDNA、28S rDNA的部分序列和中間的ITS1、5.8S rDNA、ITS2的完整序列。 引物序列為：ITS4:5'-TCCTCCGCTTATTGATATGC-3'（SEQIDN0·1)，ITS5 :5'-GGAAGGTAAAAGTC AAGG-3'（SEQ ID N0.2)。將PCR產(chǎn)物進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳檢測，并與 DL2000 Marker比對大小，切膠分離回收產(chǎn)物。將純化后的PCR產(chǎn)物送至上海生物工程技術(shù) 服務(wù)有限公司進(jìn)行測序，測得的序列采用NCBI網(wǎng)站在線工具BLAST (http:// WWW.ncbi .nlm.nih.gov/blast/)進(jìn)行比對，根據(jù)比對結(jié)果，判斷菌株的種類。
[0046] PCR反應(yīng)體系：
[0047]
[0048] 反應(yīng)條件：
[0049]
[0050] 5、結(jié)果：
[00511①納米銀處理對芍藥切花瓶插壽命的影響
[0052]芍藥切花在瓶插期間經(jīng)歷了由花蕾到初開、盛開、衰敗的過程，這一過程大約為8 天時間。在使用30mg · Γ1納米銀處理后，芍藥切花不僅提前到達(dá)初開期，而且花朵綻放的時 間更長，衰敗時間比對照推遲了4天（圖1)。而在使用100mg · Γ1，納米銀處理后，茍藥切花的 瓶插壽命也延長了 2天。由此可見，納米銀處理能夠延長芍藥切花的瓶插壽命，但不同濃度 差異顯著，下面將著重針對30mg · Γ1納米銀處理材料進(jìn)行深入研究。
[0053] ②納米銀處理對芍藥切花鮮重、花徑的影響
[0054]圖2為芍藥切花瓶插期間鮮重、花徑的變化情況，兩者均總體上呈現(xiàn)了先上升后下 降的趨勢。而就納米銀處理而言，芍藥切花在瓶插的第1-2天時，兩者的差異并不大，而后差 異逐漸變大，并且NS處理后的切花鮮重、花徑一直高于對照，最大差異達(dá)到6.58g和3.52cm。
[0055] ③納米銀處理芍藥切花生理指標(biāo)的影響
[0056] 由圖3可知，芍藥切花在瓶插期間可溶性蛋白含量也呈現(xiàn)了先增加后減少的趨勢， 只是對照的最高含量出現(xiàn)在第4天，而納米銀處理的最高含量出現(xiàn)在第6天。此外，在瓶插第 2和4天時，納米銀處理切花的可溶性蛋白含量一直低于對照，而后開始急劇增加，顯著高于 對照，在瓶插第6天時差異最大，達(dá)到0.24gprot · L一、
[0057] 相對電導(dǎo)率是反映細(xì)胞膜的通透性、細(xì)胞受損程度的指標(biāo)，通過測量芍藥切花的 相對電導(dǎo)率可以直觀地了解其細(xì)胞膜受損程度。在芍藥切花的整個瓶插期間，納米銀處理 切花和對照的相對電導(dǎo)率均呈現(xiàn)一直上升趨勢，其兩者衰敗期的值分別是花蕾期的1.63倍 和1.29倍。此外，對照切花的相對電導(dǎo)率一直高于納米銀處理，其高出的幅度范圍在6.36% ~18.43%之間。
[0058] MDA含量反映芍藥內(nèi)脂質(zhì)過氧化程度，間接地反映出細(xì)胞損傷程度，通過測量芍藥 切花MDA含量可以直接地了解其膜脂過氧化程度。在芍藥的整個瓶插期間，納米銀處理切花 和對照的MDA含量一直呈現(xiàn)上升趨勢，在瓶插初期，兩者的MDA含量分別為4.00nmol · mg一 iprot和7.18nmol · mgHprot。隨著瓶插時間的增加，花朵衰敗，此時的MDA含量分別達(dá)到了 8.73nmol · mg-brot和8.9nmol · mg-brot。對照切花的MDA含量一直高于納米銀處理，高出 約為3nmol · mg-iproto
[0059]植物體內(nèi)產(chǎn)生超氧陰離子不能被及時清除造成膜脂過氧化，引起切花衰老。NS處 理切花和對照的超氧陰離子含量隨著花的開放進(jìn)程不斷增加，兩者初期的超氧陰離子含量 分別為16U · g-brot和29U · g-brot，衰敗期的含量分別為蕾期的1.95倍和1.55倍。此外， 對照切花的超氧陰離子含量一直NS處理，高出幅度在80 %~95 %之間。
[0060] 在芍藥的整個瓶插期間，納米銀處理切花和對照的h2〇2含量一直呈現(xiàn)上升趨勢，瓶 插初期，納米銀處理切花和對照的H2〇2含量分別為136mmol · g-iprot和141mmol · g-iprot， 衰敗期的含量分別為蕾期的1.95倍和1.55倍。而且對照切花的含量始終高于納米銀處理， 高出幅度約為3%-16%。
[0061] 脯氨酸的積累一定程度上反映了植物水分虧缺程度。圖3顯示的是整個瓶插過程 中納米銀處理切花和對照的游離脯氨酸含量的變化，兩者整體都呈現(xiàn)上升趨勢，初期含量 分別為35.8yg · g-_和45.3yg · g-_，瓶插末期兩者的含量分別為初期的1.11倍和1.76 倍。對照切花的游離脯氨酸含量一直高于納米銀處理，高出量l〇yg · g^FW左右。
[0062] ④納米銀處理對芍藥切花保護(hù)酶活性的影響
[0063]納米銀處理切花和對照切花的S0D活性在瓶插期間的變化趨勢相一致，總體呈現(xiàn) 先上升后下降的趨勢，兩者均在瓶插第4天達(dá)到最大值，分別為44.8U · mgiprot和40.2U · mgiprot，比對照高11.4%，并在整個瓶插期間納米銀處理切花的S0D活性要比對照的高（圖 4)〇
[0064]納米銀處理切花和對照的CAT活性與S0D活性一樣，呈現(xiàn)先上升后下降的趨勢，納 米銀處理切花的最高活性出現(xiàn)在第8天，而對照的最高活性出現(xiàn)在第6天。兩者蕾期的CAT活 性分別為2.12U · mg-^rot和0.62U · mg-^rot，而最高活性分別為蕾期的3.77倍和7.1倍。 納米銀處理切花的CAT活性一直高于對照，高出幅度范圍在1.6~6.0U · mgiprot之間（圖 4)〇
[0065]⑤納米銀處理對芍藥切花離子運輸與水分吸收的影響
[0066]通過對Ag+在芍藥切花不同部位的分布檢測，結(jié)果顯示，納米銀處理的切花在整個 植株中均能檢測到Ag+的存在，而對照中均未檢測到Ag+或低于檢測線（圖5)。在納米銀處理 的切花不同部位中，底部莖桿的六8 +含量最高(44.26~87.34以8 1^)1)，而后是葉片（1.44 ~6.13yg · g-tW)和頂部莖桿(0.46~1.59yg · g-tW)，花瓣中的Ag+含量最低（0.35~0·82μ g · g^DW)，并且它們的含量均隨著瓶插時間的推移而下降。
[0067]芍藥切花瓶插期間，納米銀處理切花和對照的吸水量總體呈現(xiàn)下降趨勢，瓶插第2 天，兩者的吸水量分別為6.0g和5.2g，瓶插末期，兩者的吸水量分別為蕾期的20 %和67 %， 但納米銀處理切花的吸水量普遍高于對照（圖6)。
[0068]⑥芍藥切花底部莖桿結(jié)構(gòu)觀察
[0069] A:對照瓶插0天;B:納米銀處理瓶插0天;C:對照瓶插8天;D:納米銀處理瓶插8天 [0070]采用掃描電鏡對底部莖桿結(jié)構(gòu)進(jìn)行觀察，無論是NS處理還是對照，兩者的結(jié)構(gòu)完 全一致（圖7)。在瓶插初期，兩者的導(dǎo)管組織結(jié)構(gòu)清晰可見，幾乎觀察不到微生物的存在(圖 7A、B)。而到了瓶插第8天，對照切花底部莖桿被大量微生物代謝物或菌絲所覆蓋(圖7C)，而 NS處理的底部莖桿幾乎觀察不到被微生物代謝物或菌絲所覆蓋的現(xiàn)象(圖7D)。
[0071]⑦芍藥切花瓶插易滋生病原菌種類鑒定
[0072]將瓶插芍藥切花的底部莖桿在土豆培養(yǎng)基平板上培養(yǎng)后，共分離出兩種分離物 (圖8)，1號分離物在平板上菌落初為灰白色，隨后逐漸轉(zhuǎn)變?yōu)榛液谏?，生長迅速，8天左右即 可鋪滿平板。通過顯微鏡對1號分離物的分生孢子進(jìn)行觀察，發(fā)現(xiàn)分生孢子梗單生，直或略 彎，淡褐色，分生孢子倒棍棒形或卵形，具有1-6個縱膈膜，2-8個橫膈膜，隔膜深褐色，推測 其為鏈格孢屬菌(Alternaria sp. )。2號分離物在平板上菌落初為白色，隨后漸漸轉(zhuǎn)變黃白 色，并伴有白色粘液產(chǎn)出，生長迅速，8天左右也可鋪滿平板，通過顯微鏡對2號分離物觀察， 發(fā)現(xiàn)2號分離物沒有分生孢子，推測為莖點霉屬菌(Phoma sp.)。
[0073]通過設(shè)計的ITS4、ITS5特異性引物對分離物進(jìn)行PCR鑒定，產(chǎn)物通過瓊脂糖凝膠電 泳檢測，兩者均獲得約600bp的單一、明亮條帶（圖9)。隨后便將目的條帶回收測序，并將獲 得的序列在NCBI上進(jìn)行Blast比對，結(jié)果顯示，確認(rèn)1號分離物為鏈格孢屬（Alternaria sp.)(圖10)，2號分離物為莖點霉屬(Phoma sp.)(圖11)。
【主權(quán)項】
1. 一種延長芍藥切花瓶插壽命的方法，其特征在于:在芍藥花朵處于硬蕾期時，在莖桿 第3~4片復(fù)葉處進(jìn)行剪切，迅速將傷口置于水中斜切莖桿基部，留取3片小葉2片復(fù)葉，將剪 切好的芍藥切花莖桿置于30~lOOmg · Γ1納米銀溶液中，靜置處理36h，而后瓶插于2%的蔗 糖溶液中，瓶口用錫箱紙覆蓋，防止水分蒸發(fā)。2. 如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，剪切好的芍藥切花的花枝長度為30cm。
【文檔編號】A01G5/00GK106034774SQ201610462413
【公開日】2016年10月26日
【申請日】2016年6月23日
【發(fā)明人】趙大球, 陶俊, 唐文慧, 劉定, 周思雨
【申請人】揚(yáng)州大學(xué)