一種雌雄單一配對(duì)構(gòu)建縊蟶家系的方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種雌雄單一配對(duì)縊蟶家系的構(gòu)建方法。其特征是首先選擇性腺成熟的健康親貝，然后通過(guò)針刺取性腺的方法進(jìn)行雌雄性別的鑒定，再將上述個(gè)體按照一雌對(duì)一雄的方式單一配好對(duì)之后，放置在60L海水中催產(chǎn)，并結(jié)合的陰干?流水刺激和注射5?羥色胺的方法，促進(jìn)縊蟶排卵產(chǎn)精并完成受精，并將受精發(fā)育良好的家系分別單獨(dú)培育至成貝，即得無(wú)污染的縊蟶家系。本發(fā)明大大提高了家系的構(gòu)建效率和純度。實(shí)現(xiàn)了大規(guī)模的構(gòu)建高純度縊蟶家系，和傳統(tǒng)的構(gòu)建縊蟶家系的方法相比，由原來(lái)的30％提高到了70％左右，而且操作簡(jiǎn)單方便，節(jié)省人力和時(shí)間，并為縊蟶開(kāi)展分子標(biāo)記輔助育種提供了足夠的無(wú)污染的純家系。
【專利說(shuō)明】
一種雌雄單一配對(duì)構(gòu)建縊蟶家系的方法
技術(shù)領(lǐng)域
[0001]本發(fā)明屬于貝類水產(chǎn)養(yǎng)殖的育種技術(shù)，尤其是涉及一種雌雄單一配對(duì)縊蟶家系的構(gòu)建方法。
【背景技術(shù)】
[0002]溢経(SinonovaculaConstrictaLamarck)俗稱経子，屬軟體動(dòng)物門(mén)(Mollusca)，瓣鮑綱(Lamel Iibranchia)竹経科(solenidae)溢経屬(sinonovacula)貝類。溢経為廣溫廣鹽性海產(chǎn)雙殼貝類，具有重要的經(jīng)濟(jì)價(jià)值，是我國(guó)四大養(yǎng)殖貝類之一?？O蟶養(yǎng)殖歷史悠久，過(guò)去主要集中在福建和浙江一帶，隨著縊蟶養(yǎng)殖業(yè)的不斷擴(kuò)展，山東、天津沿海地區(qū)開(kāi)始從福建、浙江等地區(qū)引進(jìn)苗種。由于無(wú)序的養(yǎng)殖以及盲目引種和移養(yǎng)等使縊蟶種質(zhì)資源混淆不清，很容易引發(fā)縊蟶的種質(zhì)退化，因此，應(yīng)該加快開(kāi)展縊蟶新品種的選育，但目前有關(guān)縊蟶的選育工作主要以傳統(tǒng)的選育方法為主，現(xiàn)代化的分子標(biāo)記輔助育種至今鮮有報(bào)道，其主要原因之一就是缺乏無(wú)污染的純縊蟶家系，因此無(wú)法開(kāi)展縊蟶遺傳連鎖圖譜的構(gòu)建，更無(wú)法在此基礎(chǔ)上進(jìn)行QTL定位研究。
[0003]已有專利“一種縊蟶家系的建立和良種選育方法”(申請(qǐng)?zhí)朇N201310503970.9)中縊蟶家系的構(gòu)建采用陰干加流水刺激的方法進(jìn)行大群體集中催產(chǎn)，當(dāng)群體開(kāi)始排精產(chǎn)卵時(shí)，通過(guò)肉眼鑒別的方法將正在排精的雄性縊蟶和正在產(chǎn)卵的雌性縊蟶挑出來(lái)，用淡水沖洗一下后，再將其分別單個(gè)放入盛有海水的燒杯里繼續(xù)讓其排精產(chǎn)卵，分別收集精卵后混合授精構(gòu)建家系；但在縊蟶群體催產(chǎn)時(shí)閉殼不完全，其體壁和外套膜上會(huì)沾有大量其它個(gè)體排出的精卵，用淡水無(wú)法將這些精卵沖洗干凈，造成構(gòu)建的家系不純；同時(shí)由于沖洗時(shí)的流水刺激打斷了縊蟶連續(xù)的排精和產(chǎn)卵活動(dòng)，對(duì)其造成了應(yīng)激反應(yīng)，從而導(dǎo)致后續(xù)產(chǎn)卵的比例大大下降，因此使該方法獲得家系的效率低下，成功率僅為30?40%，自然也無(wú)法有效獲得沒(méi)有任何污染的純縊蟶家系。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明的目的是提供一種雌雄單一配對(duì)構(gòu)建高純度無(wú)污染縊蟶家系的方法，以彌補(bǔ)現(xiàn)有技術(shù)的不足。
[0005]本發(fā)明的另一目的是為分子標(biāo)記輔助育種提供充足的無(wú)污染的縊蟶純家系。
[0006]本發(fā)明為了保證構(gòu)建家系的純度和效率，首先必須進(jìn)行縊蟶雌雄性別的鑒別，將鑒定好的雌雄個(gè)體分別置放，并按照一雌對(duì)一雄的方式單一配對(duì)后放入盛有海水的催產(chǎn)用整理箱中，并考慮到提高催產(chǎn)率，采用陰干-流水刺激和注射5-羥色胺的方法;又為了進(jìn)一步提高催產(chǎn)效率，將催產(chǎn)用海水比重調(diào)至l.0llg/cm3，溫度設(shè)為25°C，以進(jìn)一步提高家系的構(gòu)建效率和純度。
[0007]本發(fā)明的方法是，其特征是首先選擇性腺成熟的健康親貝，然后通過(guò)針刺取性腺的方法進(jìn)行雌雄性別的鑒定，再將上述個(gè)體按照一雌對(duì)一雄的方式單一配好對(duì)之后，放置在60L海水中催產(chǎn)，并結(jié)合的陰干-流水刺激和注射5-羥色胺的方法，促進(jìn)縊蟶排卵產(chǎn)精并完成受精，并將受精發(fā)育良好的家系分別單獨(dú)培育至成貝，日常管理中謹(jǐn)防家系間的污染，即獲得到無(wú)污染的縊蟶家系。
[0008]本發(fā)明的具體步驟:
[0009]親貝的選擇:挑選性腺發(fā)育成熟，健康、無(wú)傷殘、活力好，體重大于平均體重15?20 %的親貝，用淡水沖洗干凈；
[0010]鑒別親貝的雌雄，并將雌、雄親貝分開(kāi)放置；
[0011]親貝的陰干和流水催產(chǎn):于傍晚將雌、雄親貝放置在通風(fēng)避光處陰干30?60分鐘，用注射器分別向雌、雄縊蟶親貝的腹足注射0.015?0.02mM的5-羥色胺0.05?0.15ml；然后按照一雄配一雌的方式，將縊蟶單一配對(duì)并放入60L的整理箱的海水中，連續(xù)充氧刺激雌雄縊蟶親貝產(chǎn)卵排精直至受精，并將受精發(fā)育良好的家系分別單獨(dú)培育至成貝，日常管理中防止家系間的污染。
[0012]本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)和積極效果:
[0013](I)和傳統(tǒng)的構(gòu)建縊蟶家系的方法相比，本發(fā)明是在先鑒別縊蟶性別的前提下，采用雌雄單一配對(duì)，再通過(guò)陰干-流水刺激以及注射5-羥色胺的方法，完成縊蟶家系的高效無(wú)污染的人工構(gòu)建，由原來(lái)的30%提高到了70%左右，大大提高了家系的構(gòu)建效率和純度。
[0014](2)本發(fā)明操作簡(jiǎn)單方便，節(jié)省人力和時(shí)間，以實(shí)現(xiàn)大規(guī)模的構(gòu)建高純度縊蟶家系;并為縊蟶開(kāi)展分子標(biāo)記輔助育種提供了無(wú)污染的純家系。
【具體實(shí)施方式】
[0015]實(shí)施例1
[0016](I)在2000個(gè)性腺發(fā)育成熟的縊蟶中，優(yōu)選出活力強(qiáng)、健康無(wú)損傷，體重大于平均體重15?20 %的親貝200個(gè)，作為備選親貝，用淡水沖洗干凈，于上午7:00用Iml塑料注射器抽取縊蟶的性腺組織0.3ml，注入盛有清水的表面皿中，雄性縊蟶的精子在水中成霧狀，雌性縊蟶的卵子呈顆粒狀并在水中迅速散開(kāi)，分別獲得雄性縊蟶96個(gè)和雌性縊蟶104個(gè);將雌、雄親貝分開(kāi)放置成2個(gè)群體養(yǎng)殖于海水中(溫度25°C，比重1.011g/cm3)，并且避免流水刺激，以防流產(chǎn)；
[0017](2)于傍晚17:30將雌、雄親貝群體分開(kāi)放置在通風(fēng)避光處，陰干30?60分鐘，然后按照一雄對(duì)一雌的方式將縊蟶單一配成96對(duì)分別放入到96個(gè)盛有60L海水的整理箱中，考慮到提高催產(chǎn)效率事先將催產(chǎn)用海水的比重調(diào)至1.011g/cm3，水溫控制在25°C，連續(xù)充氧刺激過(guò)夜；
[0018](3)至次日上午6:00將親貝取出，取少許海水通過(guò)顯微鏡檢受精發(fā)育情況，統(tǒng)計(jì)家系構(gòu)建的情況，共成功構(gòu)建家系58個(gè)，構(gòu)建成功率為61.70%，和常規(guī)的方法相比，大大提高了家系的純度以及效率，滿足了縊蟶高密度遺傳連鎖圖譜的構(gòu)建和QTL定位的需求，為縊蟶分子標(biāo)記輔助選育的開(kāi)展提供了的無(wú)污染家系。
[0019]實(shí)施例2
[0020](I)在2000個(gè)性腺發(fā)育成熟的縊蟶中，優(yōu)選出活力強(qiáng)、健康無(wú)損傷，體重大于平均體重15?20 %的親貝200個(gè)，作為備選親貝，用淡水沖洗干凈，與上午7:00用Iml塑料注射器抽取縊蟶的性腺組織約0.3ml，注入盛有清水的表面皿中，雄性縊蟶的精子在水中成霧狀，雌性縊蟶的卵子呈顆粒狀并在水中迅速散開(kāi)，分別獲得雄性縊蟶94個(gè)和雌性縊蟶106個(gè);將雌、雄親貝分開(kāi)放置成2個(gè)群體養(yǎng)殖于海水中(溫度25°C，比重1.011g/cm3)，避免混淆和流水刺激，以防止流產(chǎn)；
[0021](2)于傍晚17:30將雌、雄親貝群體分開(kāi)放置在通風(fēng)避光處陰干30?60分鐘，用注射器分別向雌、雄縊蟶親貝的腹足注射0.015?0.02mM的5-羥色胺0.05?0.15ml；然后按照一雄對(duì)一雌的方式將縊蟶單一配成94對(duì)分別放入到96個(gè)盛有60L海水的整理箱中，考慮到提高催產(chǎn)效率事先將催產(chǎn)用海水的比重調(diào)至1.011g/cm3，水溫控制在25°C，連續(xù)充氧刺激過(guò)夜；
[0022](3)至次日上午6:00將親貝取出，取少許海水通過(guò)顯微鏡檢受精發(fā)育情況，統(tǒng)計(jì)家系構(gòu)建的情況，共成功構(gòu)建家系68個(gè)，構(gòu)建成功率為72.34%,和常規(guī)的方法相比，不僅提高了效率更加提高了家系的純度，滿足了縊蟶高密度遺傳連鎖圖譜的構(gòu)建和QTL定位的需求，為縊蟶分子標(biāo)記輔助選育的開(kāi)展提供了優(yōu)質(zhì)的無(wú)污染家系。
【主權(quán)項(xiàng)】
1.一種雌雄單一配對(duì)構(gòu)建縊蟶家系的方法，其特征是首先選擇性腺成熟的健康親貝，然后通過(guò)針刺取性腺的方法進(jìn)行雌雄性別的鑒定，再將上述個(gè)體按照一雌對(duì)一雄的方式單一配好對(duì)之后，放置在60L海水中催產(chǎn)，并結(jié)合常規(guī)的陰干-流水刺激和注射5-羥色胺的方法，促進(jìn)縊蟶排卵產(chǎn)精并完成受精，并將受精發(fā)育良好的家系分別單獨(dú)培育至成貝，即獲得到無(wú)污染的縊蟶家系。2.—種雌雄單一配對(duì)構(gòu)建縊蟶家系的方法，其特征是它包括以下步驟: 1)親貝的選擇:挑選性腺發(fā)育成熟，健康、無(wú)傷殘、活力好，體重大于平均體重15?20%的親貝，用淡水沖洗干凈； 2)鑒別親貝的雌雄，并將雌、雄親貝分開(kāi)放置； 3)親貝的陰干和流水催產(chǎn):于傍晚將雌、雄親貝放置在通風(fēng)避光處陰干30?60分鐘，用注射器分別向雌、雄縊蟶親貝的腹足注射0.015?0.02mM的5-羥色胺0.05?0.15ml;然后按照一雄配一雌的方式，將縊蟶單一配對(duì)并放入60L的整理箱的海水中，連續(xù)充氧刺激雌雄縊蟶親貝產(chǎn)卵排精直至受精，并將受精發(fā)育良好的家系分別單獨(dú)培育至成貝，日常管理中防止家系間的污染。3.如權(quán)利要求1或2所述的一種雌雄單一配對(duì)構(gòu)建縊蟶家系的方法，其特征是上述針刺取性腺鑒別親貝的方法；用Iml塑料注射器抽取縊蟶的性腺組織0.3ml，注入盛有清水的表面皿中，雄性縊蟶的精子在水中成霧狀，雌性縊蟶的卵子呈顆粒狀并在水中迅速散開(kāi);依次鑒別雌、雄親貝，并將其分開(kāi)，避免雌雄混淆。4.如權(quán)利要求1或2所述的一種雌雄單一配對(duì)構(gòu)建縊蟶家系的方法，其特征是上述單一配對(duì)放入的海水的比重為1.011 g/cm3，水溫是25 °C。
【文檔編號(hào)】A01K61/00GK106069957SQ201610624661
【公開(kāi)日】2016年11月9日
【申請(qǐng)日】2016年7月29日 公開(kāi)號(hào)201610624661.0, CN 106069957 A, CN 106069957A, CN 201610624661, CN-A-106069957, CN106069957 A, CN106069957A, CN201610624661, CN201610624661.0
【發(fā)明人】劉博 , 騰爽爽, 邵艷卿, 柴雪良, 肖國(guó)強(qiáng)
【申請(qǐng)人】青島農(nóng)業(yè)大學(xué)