鴨胚胎骨骼標本制作試劑盒的制作方法
【技術領域】
[0001]本實用新型屬于生物學領域，利用阿利新藍和茜素紅可使骨骼快速染色，梯度和混合比例KOH溶液脫色技術，提供一種鴨胚胎骨骼標本制作試劑盒。
【背景技術】
[0002]家鴨是我國養(yǎng)殖數(shù)量第二的家禽，鴨存欄數(shù)從1990年的3.29億只(占世界總量59.7%)增加到2010年的6.65億只(占世界總量66.5 % )，養(yǎng)鴨業(yè)已成為我國畜牧業(yè)經(jīng)濟收入的重要支柱。
[0003]鴨子是水禽的重要模式生物，骨骼的生長發(fā)育是鴨子生長發(fā)育的重要組成部分。家禽的骨骼在生長發(fā)育過程中不形成骨骺的次級骨化中心，所以無骨骺和骨骺軟骨，骨的加長主要依賴于骨端軟骨的增生和骨化。家禽的骨骼與哺乳動物等差異較大，家禽的骨骼具有強度大而重量輕的特點，含有較多的無機鈣鹽，并且軀干部有些骨已經(jīng)互相愈合。而鴨子的骨骼又與家雞、鵝等存在差異，具有物種特異性。
[0004]傳統(tǒng)的骨骼標本制作方法一般包括:剔肉、去骨髓、腐蝕、漂白、串裝等步驟，制作過程繁瑣，尤其是剔肉和最后的串裝步驟工作量大且需要操作者具有較強的專業(yè)知識和操作技能，否則會造成骨骼的損壞和骨骼安裝的錯誤，制作周期長。另外，傳統(tǒng)的骨骼制作方法主要適用于體型相對較大的動物，并且骨骼發(fā)育基本完成，對于骨骼尚未鈣化及硬化的胚胎則難以完成標本制作工作。
[0005]因此，需要一種簡易的鴨胚胎骨骼標本制作方法及裝置。
【實用新型內容】
[0006]本實用新型的目的是提供一種鴨胚骨骼標本制作試劑盒，該試劑盒用于鴨胚胎骨骼標本制作，操作簡單，周期短，便于觀察。
[0007]本實用新型的目的通過以下技術方案實現(xiàn)的，一種鴨胚骨骼標本制作試劑盒，包括盒體和盒體內的襯墊，所述襯墊的各孔腔內分別設有染色液A、染色液B、梯度KOH脫色液C、混合比例脫色液D ;
[0008]所述染色液A為由0.15g阿利新藍、700ml無水乙醇、50ml冰醋酸，用蒸餾水定容至100ml得到；
[0009]所述染色液B為由0.05g茜素紅、700ml無水乙醇，用蒸餾水定容至100ml得到；
[0010]梯度KOH脫色液C: 2%、1.5%、1%的KOH溶液三種，配制方法分別為:2%的KOH溶液:2g Κ0Η，用蒸餾水定容至100ml ；1.5%的KOH溶液:1.5g Κ0Η，用蒸餾水定容至10ml ；1%的KOH溶液:lg Κ0Η，用蒸餾水定容至10ml ；
[0011]混合比例脫色液D:質量濃度為1% KOH溶液與甘油(丙三醇)分別按照1:4、2:3、3:2,4:1的不同體積比例，配制成500ml的混合比例脫色溶液。
[0012]上述鴨胚胎骨骼標本制作試劑盒使用方法:
[0013]1、骨骼的染色
[0014]I)標本的前期準備
[0015]將孵化的鴨種蛋從孵化器取出，從種蛋中取出胚胎，剝去體表皮膚。從肛門前開一小口從中掏出內臟，體表和腹腔內的脂肪也要去除，處理完畢后要保持材料的形體完整。處理后的鴨胚，整理好姿勢，浸泡在95%酒精中固定，I天以后更換新的固定液，繼續(xù)浸泡2-3天，直至標本脫水硬化。固定后的標本浸泡在丙酮內脫脂2-3天，取出，自來水持續(xù)沖洗8-16小時，至漂浮的標本沉入水底為止。
[0016]2)標本的骨骼染色
[0017]將標本浸泡在染色液A中2-3天，取出，用70%酒精溶液洗去表面殘留的染液，然后將標本置于染色液B中2-3天。
[0018]3)標本的骨骼脫色
[0019]將染色后的標本置于梯度KOH脫色液C中，浸泡順序與時間分別為:2%的KOH溶液，12小時；1.5%的KOH溶液，24小時；1%的KOH溶液，3天。直至肌肉顏色變淺，成透明凍狀，骨組織變?yōu)樯钏{色，部分長骨中段顯示紅色，且骨骼系統(tǒng)充分顯現(xiàn)出來。
[0020]將標本從KOH溶液中小心取出，置于混合比例KOH溶液D中，每次浸泡時間為2天，浸泡順序為1:4、2:3、3:2、4:1，以標本沉入溶液底部為準。
[0021]將制好的鴨胚胎骨骼標本轉入純甘油中，用廣口瓶密封保存。
[0022]與現(xiàn)有技術相比，本實用新型具有以下有益效果:
[0023]第一，本實用新型由染色液A、染色液B、梯度KOH脫色液C、混合比例KOH脫色液D組成。該試劑盒操作簡單，成本低廉，周期較短，可以便利的觀察鴨胚胎時期的骨骼發(fā)育情況，為研宄鴨胚生長發(fā)育提供便利；
[0024]第二，本實用新型通過反復摸索和驗證，采用適宜的pH值，染色時間，適宜濃度與比例的KOH脫色液，可以在保持標本外形完整的情況下顯示出體內骨骼部分，從而顯示出鴨胚胎發(fā)育過程中的骨骼發(fā)育情況，便于觀察，操作簡單，周期較短，普通科技人員均可以制作，為研宄和教學等提供便利；
[0025]第三，本實用新型利用在pH范圍為5-7時，阿利新藍用于動物骨骼中軟骨的染色，茜素紅用于骨骼中硬骨的染色，梯度KOH溶液和混合比例KOH溶液用于脫色，制作的鴨胚胎標本骨骼顯示清晰，無損傷變形等。本實用新型設計合理、使用簡單方便，周期較短且便于觀察，為研宄和教學提供便利。
【附圖說明】
[0026]圖1為本實用新型鴨胚胎骨骼標本制作試劑盒的結構示意圖；
[0027]圖中:I一盒體、2—襯墊、3—染色液A、4一染色液B、5—梯度KOH脫色液C、6—混合比例脫色液D。
【具體實施方式】
[0028]結合實施例和附圖作進一步說明本實用新型。應理解，這些實施例僅用于說明目的，而不用于限制本實用新型范圍。
[0029]如圖1所示，一種鴨胚骨骼標本制作試劑盒，由盒體1、盒體內的襯墊2、染色液A3、染色液B 4、梯度KOH脫色液C 5和混合比例KOH脫色液D 6組成。
[0030]襯墊2的各孔腔內分別置入染色液A、染色液B、梯度KOH脫色液C、混合比例KOH
脫色液D。
[0031]其中各個組成部分的詳細信息如下:
[0032]染色液A:0.15g阿利新藍(Alcian Blue 8GX)，700ml無水乙醇，50ml冰醋酸，用蒸餾水定容至1000ml。
[0033]染色液B:0.05g茜素紅(Alizarin Red S)，700ml無水乙醇，用蒸飽水定容至100ml0
[0034]梯度KOH脫色液C: 2%、1.5%、1%的KOH溶液三種，配制方法分別為:2%的KOH溶液:2g Κ0Η，用蒸餾水定容至100ml ；1.5%的KOH溶液:1.5g Κ0Η，用蒸餾水定容至10ml ；1%的KOH溶液:lg Κ0Η，用蒸餾水定容至100ml。
[0035]混合比例脫色液D: 1% KOH溶液與甘油(丙三醇)分別按照1:4、2:3、3:2、4:1的不同體積比例，配制成500ml的混合比例脫色溶液。
[0036]運用本試劑盒對孵化14、21天的鴨胚進行骨骼標本制作。
[0037]將孵化的鴨胚胎取出，剝去體表皮膚。從肛門前開一小口從中掏出內臟，體表和腹腔內的脂肪也要去除，處理完畢后要保持材料的形體完整。
[0038]處理后的鴨胚，整理好姿勢，浸泡在95 %酒精中固定，I天以后更換新的固定液，孵化14天的鴨胚繼續(xù)浸泡2天，21天鴨胚繼續(xù)浸泡3天，直至標本脫水硬化。
[0039]固定后的14天鴨胚標本浸泡在丙酮內脫脂2天，21天鴨胚浸泡在丙酮內脫脂3天。取出脫脂后的鴨胚標本，自來水持續(xù)沖洗8-16小時，至漂浮的標本沉入水底為止。
[0040]將標本浸泡在染色液A中2天，取出，用70%酒精溶液洗去表面殘留的染液，然后將標本置于染色液B中2天。
[0041]將染色后的標本置于梯度KOH脫色液C中，浸泡時間與次序為:2%的KOH溶液中浸泡8-12小時，更換1.5%的KOH溶液浸泡浸泡12-24小時，然后將標本置于1% KOH溶液中繼續(xù)脫色2-3天，直至肌肉顏色變淺，成透明凍狀，骨組織變?yōu)樯钏{色，且骨骼系統(tǒng)充分顯現(xiàn)出來。
[0042]將標本從KOH溶液中小心取出，依次將標本浸泡于1:4、2:3、3:2、4:1的1% KOH溶液與甘油(丙三醇)混合比例脫色液D中，每次浸泡時間為1-2天，以標本沉入溶液底部為準。
[0043]將制好的鴨胚胎骨骼標本轉入純甘油中，用廣口瓶密封保存。制作完成后的鴨胚骨骼標本。
[0044]以上所述，僅是本實用新型的具體實施例，并非對本實用新型的任何限制，應當指出，對于本技術領域的普通技術人員來說，在不脫離本實用新型技術原理的前提下，還可以做出若干改進和潤飾，這些改進和潤飾也應視為本實用新型的保護范圍。
【主權項】
1.一種鴨胚胎骨骼標本制作試劑盒，包括盒體(I)和盒體內的襯墊(2)，其特征是，所述襯墊的各孔腔內分別設有染色液A (3)、染色液B (4)、梯度KOH脫色液C (5)、混合比例脫色液D (6)； 所述染色液A (3)為由0.15g阿利新藍、700 ml無水乙醇、50 ml冰醋酸，用蒸餾水定容至1000 ml得到； 所述染色液B (4)為由0.05g茜素紅、700 ml無水乙醇，用蒸餾水定容至1000 ml得到； 所述梯度KOH脫色液C (5)由分別用2g，1.5g，Ig的KOH用蒸餾水定容至100 ml得到質量濃度分別為2%、1.5%、1%的KOH溶液組成； 所述混合比例脫色液D (6)用質量濃度1% KOH溶液與甘油分別按照1:4、2:3、3:2、4:1的體積比例配制得到，四種梯度溶液的體積均為500ml。
【專利摘要】本實用新型公開了一種鴨胚胎骨骼標本制作試劑盒，屬于生物學領域。鴨胚胎骨骼標本制作試劑盒由盒體、盒體內的襯墊、襯墊的各孔腔內分別置入染色液A、染色液B、梯度KOH脫色液C、混合比例脫色液D。本實用新型根據(jù)在pH范圍為5-7時，利用染料阿利新藍用于動物骨骼中軟骨的染色，茜素紅用于骨骼中硬骨的染色，梯度和混合比例KOH脫色液脫色使骨骼不易離散，效果明顯，骨骼與肌肉顏色區(qū)別較為清楚，方法簡單，在保持標本外形完整的情況下顯示出體內骨骼部分，便于觀察，為研究和教學提供便利。
【IPC分類】A01N1-00
【公開號】CN204579652
【申請?zhí)枴緾N201420754132
【發(fā)明人】李慧芳, 宋遲, 姬改革, 徐文娟, 宋衛(wèi)濤, 單艷菊, 朱文奇, 束婧婷, 朱春紅, 劉宏祥, 陶志云
【申請人】江蘇省家禽科學研究所
【公開日】2015年8月26日
【申請日】2014年12月5日