專利名稱：一種細(xì)胞染色方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種細(xì)胞染色方法。
現(xiàn)有技術(shù)中的細(xì)胞染色方法，操作程序比較復(fù)雜、染色色澤也不夠穩(wěn)定。
本發(fā)明的細(xì)胞染色方法，克服了現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供了一種使用方便、操作簡(jiǎn)單的染色方法。
本發(fā)明的細(xì)胞染色方法，適用于使用自制的染色液進(jìn)行細(xì)胞染色，所述染色液的組成成分和制備方法已另行申請(qǐng)發(fā)明專利，其由A液和B液兩部分組成，A液的組成成分及其配比為硝酸銀(分析純)30—60g，蒸餾水100ml；A液的優(yōu)選配比為硝酸銀(分析純)50g，蒸餾水100ml。B液的組成成分及其配比為明膠1—3g，甲酸200—500微升，蒸餾水100ml；B液的優(yōu)選配比為明膠2g，甲酸250微升，蒸餾水100ml。細(xì)胞染色時(shí)，A液與B液的體積比為1—3∶1在進(jìn)行細(xì)胞染色之前，需要對(duì)細(xì)胞進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)、細(xì)胞分離、制片程序。
1．細(xì)胞培養(yǎng)細(xì)胞可以依常規(guī)方法進(jìn)行培養(yǎng)，T—淋巴細(xì)胞培養(yǎng)也可按如下方法進(jìn)行(1)培養(yǎng)液培養(yǎng)液的組成成分及配制1000克培養(yǎng)液的用量為N—(2—羥乙基)哌嗪—N’—2—乙烷磺酸(Hepes)3—6g
碳酸氫鈉1—3gRPMI 1640培養(yǎng)基(以干粉量計(jì)) 5—10gL—谷氨酰胺(LG) 0．1—0．3g肝素鈉(150u／mg)0．1—0．3g植物血凝素(PHA) 5—20 mg胎牛血清100—300 ml青霉素(80萬(wàn)u／2ml) 0．1—0．5ml鏈霉素(100萬(wàn)u／2ml) 0．1—0．5ml余量用蒸餾水補(bǔ)齊。
該培養(yǎng)液的PH值為6．5—7．5。
(2)依如下方法和步驟進(jìn)行T—淋巴細(xì)胞培養(yǎng)①室溫下將冰凍的上述T—淋巴細(xì)胞培養(yǎng)液解凍；②抽取靜脈血注入盛培養(yǎng)液的容器內(nèi)，立即將兩者混勻，血與培養(yǎng)液的體積比為1∶8—12；③將上述容器置于37℃±0．5℃培養(yǎng)箱中，48—96小時(shí)后即完成細(xì)胞培養(yǎng)。
2．細(xì)胞分離按常規(guī)方法對(duì)上述常規(guī)方法培養(yǎng)的細(xì)胞進(jìn)行細(xì)胞分離，或按下列方法對(duì)依上述T—淋巴細(xì)胞培養(yǎng)方法培養(yǎng)的T—淋巴細(xì)胞進(jìn)行分離(1)吸入上述已培養(yǎng)好的4．5ml細(xì)胞液，在轉(zhuǎn)速為2000轉(zhuǎn)／分條件下離心5分鐘；
(2)棄上清，然后加入低滲液5ml充分混勻，再加固定液0．5ml混勻，在轉(zhuǎn)速為2000轉(zhuǎn)／分條件下離心5分鐘；(3)棄上清，加固定液5ml混勻，在轉(zhuǎn)速為2000轉(zhuǎn)／分條件下離心5分鐘；(4)棄上清，加固定液5ml混勻，在轉(zhuǎn)速為2000轉(zhuǎn)／分條件下離心5分鐘；(5)棄上清，加固定液0．3ml，混勻備用。
上述低滲液為0．43％氯化鈉溶液，固定液為甲醇與冰醋酸按體積比3∶1比例配制的混合溶液。
3．制片依常規(guī)制片方法或下列方法進(jìn)行制片(1)將冷凍載玻片置于水平位；(2)吸取經(jīng)分離的細(xì)胞懸液，在距玻片20cm高度處，向玻片滴加2—3滴；(3)細(xì)胞懸液快干時(shí)，將玻片快速過(guò)火2—3次，室溫涼干。
經(jīng)過(guò)上述的細(xì)胞培養(yǎng)、細(xì)胞分離和制片后，即可進(jìn)行細(xì)胞的染色。
本發(fā)明的細(xì)胞染色方法及其步驟為(1)將上述染色液的A液和B液置于室溫或37℃溫箱中恒溫備用；(2)將三用水箱預(yù)熱至80—90℃后恒溫；(3)將上述完成制片步驟的玻片放在水箱之鋁板上；
(4)向玻片上有細(xì)胞懸液處，先后滴加A液和B液，兩者的體積比為1—3∶1，混勻后將蓋玻片蓋上；(5)待顏色變?yōu)樯罱瘘S色后，將玻片取下；(6)用少量、慢速自來(lái)水沖凈玻片，再用蒸餾水沖一遍，晾干，即完成染色。
本發(fā)明所有操作過(guò)程中，所使用的器皿及其它用具等全部需要消毒滅菌處理，而且所有操作均應(yīng)符合無(wú)菌操作，消毒滅菌方法和無(wú)菌操作方法均屬于本領(lǐng)域的公知技術(shù)。
本發(fā)明的細(xì)胞染色方法，具有使用方便、操作簡(jiǎn)單等優(yōu)點(diǎn)。
下面結(jié)合實(shí)施例進(jìn)一步說(shuō)明本發(fā)明步驟一、取如下配比的染色液，染色液由A液和B液組成A液硝酸銀(分析純)50g，蒸餾水100ml；B液明膠2g，甲酸340微升，蒸餾水100ml。
步驟二、按如下方法進(jìn)行T—淋巴細(xì)胞染色，其步驟為(1)將上述A液和B液置于室溫或37℃溫箱中恒溫備用；(2)將三用水箱預(yù)熱至85℃后恒溫；(3)按上述方法進(jìn)行T—淋巴細(xì)胞的培養(yǎng)、分離、制片；(4)將(3)步制得的玻片放在水箱之鋁板上；(5)向玻片上先后滴加A液4滴、B液2滴，混勻后將蓋玻片蓋上；(6)待顏色變?yōu)樯罱瘘S色后，將玻片取下；(7)用少量、慢速自來(lái)水沖凈玻片，再用蒸餾水沖一遍，晾干即完成染色。
權(quán)利要求
1．一種細(xì)胞染色方法，其特征在于其是通過(guò)如下步驟實(shí)現(xiàn)的(1)將染色液置于室溫或37℃溫箱中恒溫備用；(2)將三用水箱預(yù)熱至80—90℃后恒溫；(3)將經(jīng)過(guò)細(xì)胞培養(yǎng)、細(xì)胞分離、制片的玻片放在水箱之鋁板上；(4)向玻片上滴加染色液，混勻后將蓋玻片蓋上；(5)待顏色變?yōu)樯罱瘘S色后，將玻片取下；(6)用少量、慢速自來(lái)水沖凈玻片，再用蒸餾水沖一遍，晾干。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種細(xì)胞的染色方法,其具有使用方便、操作簡(jiǎn)單等優(yōu)點(diǎn)。
文檔編號(hào)C12Q1/04GK1280193SQ0010966
公開(kāi)日2001年1月17日 申請(qǐng)日期2000年6月21日 優(yōu)先權(quán)日2000年6月21日
發(fā)明者張國(guó)慶 申請(qǐng)人:張國(guó)慶