專(zhuān)利名稱(chēng)：一種t－淋巴細(xì)胞培養(yǎng)方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種細(xì)胞的培養(yǎng)方法，特別是一種淋巴細(xì)胞的培養(yǎng)方法。
現(xiàn)有技術(shù)中T-淋巴細(xì)胞的培養(yǎng)方法，需要進(jìn)行細(xì)胞分離，操作過(guò)程復(fù)雜。
本發(fā)明的T-淋巴細(xì)胞培養(yǎng)方法克服了現(xiàn)有技術(shù)的不足，操作簡(jiǎn)單，而且用血量少。
本發(fā)明的T-淋巴細(xì)胞培養(yǎng)方法，適用于使用自制的T-淋巴細(xì)胞培養(yǎng)液進(jìn)行的T-淋巴細(xì)胞培養(yǎng)，有關(guān)自制T-淋巴細(xì)胞培養(yǎng)液的組成、配方及其制備方法，已另行申請(qǐng)發(fā)明專(zhuān)利，所述自制T-淋巴細(xì)胞培養(yǎng)液的組成成分及配制1000克培養(yǎng)液的用量為N-(2-羥乙基)哌嗪-N’-2-乙烷磺酸(Hepes)3-6g碳酸氫鈉 1-3gRPMI 1640培養(yǎng)基(以干粉量計(jì)) 5-10gL-谷氨酰胺(LG)0.1-0.3g肝素鈉(150u/mg) 0.1-0.3g植物血凝素(PHA) 5-20mg胎牛血清 100-300ml青霉素(80萬(wàn)u/2ml) 0.1-0.5ml
鏈霉素(100萬(wàn)u/2ml) 0.1-0.5ml余量用蒸餾水補(bǔ)齊。
該培養(yǎng)液的PH值為6.5-7.5。
本發(fā)明的T-淋巴細(xì)胞培養(yǎng)方法及其步驟為(1)取上述冰凍的T-淋巴細(xì)胞培養(yǎng)液，在室溫下解凍；(2)抽取靜脈血注入盛培養(yǎng)液的容器內(nèi)，立即將兩者混勻，血量與培養(yǎng)液的體積比為1∶8-12；(3)將上述容器置于37℃±0.5℃培養(yǎng)箱中，48-96小時(shí)后即完成細(xì)胞培養(yǎng)。
在實(shí)施本發(fā)明的過(guò)程中，所使用的器皿及其它用具均需要消毒滅菌處理，而且所有操作均應(yīng)符合無(wú)菌操作，消毒滅菌方法和無(wú)菌操作方法均屬于本領(lǐng)域的公知技術(shù)。
本發(fā)明的T-淋巴細(xì)胞培養(yǎng)方法與現(xiàn)有技術(shù)相比具有如下優(yōu)點(diǎn)(1)用血量少，僅需要0.4-0.5ml血樣，而現(xiàn)有技術(shù)一般需要5-10毫升；(2)方法簡(jiǎn)便、省時(shí)、易操作、設(shè)備簡(jiǎn)單，而現(xiàn)有技術(shù)中需要用淋巴細(xì)胞分離液做淋巴細(xì)胞分離，而且需要較昂貴的二氧化碳培養(yǎng)箱，操作繁瑣、費(fèi)時(shí)、儀器昂貴。
下面結(jié)合實(shí)施例進(jìn)一步說(shuō)明本發(fā)明步驟一、取組成成分及配制1000克培養(yǎng)液的用量如下的T-淋巴細(xì)胞培養(yǎng)液
Hepes 4.76g碳酸氫鈉 1.6gRPMI 1640培養(yǎng)基 8.32gL-谷氨酰胺(LG)0.3g肝素鈉(150u/mg) 0.1g美國(guó)sigma生產(chǎn)的PHA-P 10mg青霉素(80萬(wàn)u/2ml) 0.35ml鏈霉素(100萬(wàn)u/2ml)0.3ml胎牛血清 200ml余量用蒸餾水補(bǔ)齊。
該培養(yǎng)液的PH值為7.0-7.2。
步驟二、依下列方法及步驟進(jìn)行T-淋巴細(xì)胞的培養(yǎng)(1)室溫下將上述4ml冰凍的淋巴細(xì)胞培養(yǎng)液解凍；(2)抽取靜脈血0.4-0.5ml注入盛培養(yǎng)液的容器內(nèi)，立即將兩者混勻；(3)將上述容器置于37℃±0.5℃培養(yǎng)箱中，72小時(shí)后即完成細(xì)胞培養(yǎng)。
依此方法，T-淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率達(dá)80％以上，而且胞核漲大，核仁分裂。
權(quán)利要求
1.一種T-淋巴細(xì)胞培養(yǎng)方法，其特征在于其是通過(guò)如下步驟實(shí)現(xiàn)的(1)室溫下將冰凍的T-淋巴細(xì)胞培養(yǎng)液解凍；(2)抽取靜脈血注入盛培養(yǎng)液的容器內(nèi)，立即將兩者混勻，血與培養(yǎng)液的體積比為1∶8-12；(3)將上述容器置于37℃±0.5℃培養(yǎng)箱中48-96小時(shí)。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種T－淋巴細(xì)胞培養(yǎng)方法,其不需要進(jìn)行淋巴細(xì)胞的分離,具有用血量少、操作簡(jiǎn)單的特點(diǎn)。
文檔編號(hào)C12N5/0783GK1275618SQ0010966
公開(kāi)日2000年12月6日 申請(qǐng)日期2000年6月21日 優(yōu)先權(quán)日2000年6月21日
發(fā)明者張國(guó)慶 申請(qǐng)人:張國(guó)慶