專利名稱：樟芝的固體培養(yǎng)方法,所得固體培養(yǎng)物及其產(chǎn)品與用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及樟芝的培養(yǎng)方法，更具體地說，本發(fā)明涉及樟芝的固體培養(yǎng)方法。另外，本發(fā)明還涉及由所述方法培養(yǎng)所得的樟芝固體培養(yǎng)物及其加工產(chǎn)品與用途。
背景技術(shù)：
樟芝(Zang Zhi)，其學名為Antrodia camphorata，又名樟菇、紅樟菇、紅樟芝、牛樟菇或牛樟芝，為本省特有真菌，僅生長在臺灣的牛樟樹(Cinnamonum kanehirai)的中空心材內(nèi)壁，子實體具強烈的樟樹香氣，其外形為板狀或鐘狀。民間傳說具有安神、怯風行氣、化瘀活血、溫中消積、解毒消腫、及鎮(zhèn)靜止痛之效，為上好的防腐解毒劑，被視為臺灣市場上最昂貴的野生真菌。更甚者，相對于靈芝提高免疫力而抗癌的間接作用，樟芝實為直接抑制或殺死癌細胞的作用機制，同時具有強心、免疫調(diào)節(jié)、抗副交感神經(jīng)作用、抗血清素活性的功效。特定言之，樟芝可治療胃腸疼痛、腹瀉嘔吐、糖尿病、痛風、腎炎、關(guān)節(jié)炎、發(fā)炎、過敏、尿蛋白過高、尿毒癥、肝硬化、肝癌及流行性感冒等。
已有眾多研究單位投入人力與物力，致力于樟芝活性成分的研究，其中行政院國家科學委員會專題研究計劃是利用化學方法、核磁共振光譜分析(NMR)及和已知化合物光譜比較，以建立樟芝有效成分化合物的結(jié)構(gòu)特性，又針對樟芝有效成分進行的研究成果指出，樟芝的水提及甲醇提取物對金黃色葡萄球菌及須瘡小芽癬菌的生長有抑止作用，另外樟芝的甲醇提取物樟菇酸A(zhankuic acid)對p-388鼠的淋巴腫瘤細胞有明顯抑制作用及血小板凝集作用；而樟菇酸B具微弱抗膽堿及抗5-羥色胺(serotonin)的功能。
高曉薇碩士論文針對臺灣靈芝屬新種樟芝的三萜類成分研究指出，樟芝(Ganoderma comphoratum Zang et Su)為1990年發(fā)表的靈芝新種，以丙酮萃取樟芝子實體得到粗萃取物，接著以色譜分析法(LC、PLC)分離與重結(jié)晶方式純化；薄層液相色譜掃描(TLCScanning)和高效液相色譜法(HPLC)鑒定純度。經(jīng)由質(zhì)譜、紅外光譜、紫外光譜、核磁共振光譜儀(H-NMR和C-NMR)進行結(jié)構(gòu)測定。其中3，11-二氧-8，23-二烯-26-酸(3，11-dioxo-8，23-dien-26-oicacid)對于以四氯化碳(CCl4)誘發(fā)急性肝炎的小鼠血清中谷氨酸-丙酮酸轉(zhuǎn)氨酶(GPT)值有下降作用。
由于樟芝現(xiàn)多分布于臺灣臺東海岸山脈闊葉林區(qū)內(nèi)，但根據(jù)林務(wù)局牛樟保育公告，此區(qū)已被劃為自然保護區(qū)，在保育區(qū)外生長的樟芝數(shù)量極少且已被采集殆盡。因此，市場上實已無法取得天然野生樟芝。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的主要目的是提供一種樟芝的固體培養(yǎng)方法，其可以以人工培養(yǎng)方式栽培出具有與天然野生樟芝同等藥理功效的樟芝固體物。
本發(fā)明的另一目的是提供一種樟芝的固體培養(yǎng)物，其是用寄存于臺灣食品工業(yè)發(fā)展研究所，編號CCRC 35398的菌種為來源，該菌種為市售菌種，以固體培養(yǎng)方法培養(yǎng)所得的固體培養(yǎng)物。
本發(fā)明的再一目的是提供本發(fā)明固體培養(yǎng)物的加工產(chǎn)品。
本發(fā)明的又一目的是提供本發(fā)明固體培養(yǎng)物的各種活性用途。


圖1表示根據(jù)本發(fā)明培養(yǎng)方法所栽培樟芝的子實體外形。
圖2表示樟芝成分的高效液相色譜圖(HPLC)分析比較，包括A表示根據(jù)本發(fā)明培養(yǎng)方法所得的樟芝子實體，B表示以其他液體栽培方式所得樟芝，與C代表野生樟芝子實體。
圖3表示以亞鐵離子刺激大鼠腦均質(zhì)液以引發(fā)自由基的脂質(zhì)過氧化反應(yīng)，造成脂質(zhì)過氧化成分(TBARS)增加。根據(jù)本發(fā)明培養(yǎng)方法所栽培樟芝的子實體的三倍與八倍濃縮液隨其濃度提高，而增強抑制過氧化反應(yīng)。以抑制過氧化反應(yīng)百分比表示(n＝3)。
圖4代表不同濃縮倍數(shù)的樟芝對四氯化碳造成肝功能生化值谷氨酸-丙酮酸轉(zhuǎn)氨酶(GPT)酶活性變化的影響。#代表正常組與傷害組間具統(tǒng)計意義的差異(P＜0.01)；*代表喂食組與傷害組有統(tǒng)計意義的差異(P＜0.01)。數(shù)值以平均值±標準誤差表示。
圖5表示不同濃縮倍數(shù)的樟芝對四氯化碳造成肝功能生化值谷氨酸-草酰乙酸轉(zhuǎn)氨酶(GOT)酶活性變化的影響。#代表正常組與傷害組間具統(tǒng)計意義的差異(P＜0.01)；*代表喂食組與傷害組有統(tǒng)計意義的差異(P＜0.01)。數(shù)值以平均值±標準誤差表示。
圖6代表不同濃縮倍數(shù)的樟芝對四氯化碳造成肝臟組織宏觀變化的影響(A表示正常組、B表示四氯化碳傷害組、C表示喂食樟芝三倍濃縮組及D表示喂食樟芝八倍濃縮組)。
圖7代表不同濃縮倍數(shù)的樟芝對四氯化碳造成肝臟組織變化的影響。小鼠分組喂食不同濃縮倍數(shù)的樟芝五周后，取其肝臟，進行切片及染色，觀察肝臟組織變化(A表示正常組、B表示四氯化碳傷害組、C表示喂食樟芝三倍濃縮組及D表示喂食樟芝八倍濃縮組)。
圖8表示樟芝粉末萃取液對腸癌細胞(COLO 320HSR)生長的影響。
具體實施例方式
本發(fā)明提供一種樟芝的固體培養(yǎng)方法，期以人工方式大量栽培具天然野生樟芝的成分及活性的樟芝子實體。本發(fā)明的樟芝的固體培養(yǎng)方法包含將一樟芝菌種以太空包(PP bag)進行菌絲體培養(yǎng)，接著于空氣中進行子實體栽培。
菌絲體培養(yǎng)階段前，通?？上冉?jīng)過增殖步驟，例如以下列步驟培養(yǎng)制備大量菌種供太空包培養(yǎng)使用，可包含三個步驟(1)自液態(tài)氮保存活化的菌種取一小塊洋菜菌絲塊，移入新鮮培養(yǎng)基中于恒溫下培養(yǎng)，待菌種生長至旺盛；(2)將該菌種接種至殺過菌的纖維物(例如麥粒或木屑)的太空包中，接著于恒溫下培養(yǎng)；(3)待該于太空包中的菌種長滿菌絲時，去除最上面較老的菌絲塊，然后即可大量接種至太空包中。
菌絲體培養(yǎng)階段前的增殖步驟，又或以液體培養(yǎng)發(fā)酵以大量培養(yǎng)菌種，再接種至太空包。發(fā)酵培養(yǎng)液的配方為1-3％果糖、0.01-0.1％硫酸鎂、0.1-1％酵母提取物、0.05-0.5％磷酸二氫鉀。優(yōu)選組成為2％果糖、0.05％硫酸鎂、0.5％酵母提取物及0.1％磷酸二氫鉀。
斜面試管培養(yǎng)后，將大量繁殖好的菌種接種至5升發(fā)酵培養(yǎng)液中，于24-26℃下以240rpm旋轉(zhuǎn)振蕩培養(yǎng)約14天，接著以90rpm往返振蕩培養(yǎng)約14天，又接種至20升液體發(fā)酵液中攪拌培養(yǎng)14天。
此處所指太空包是以塑料袋內(nèi)裝以重量百分比計，10-70％的任何蕈類或植物的莖、梗、果實或木屑等纖維物(優(yōu)選為草本植物的莖、梗、果實或纖維木屑)、10-30％的淀粉源(優(yōu)選為馬鈴薯)，以及5-15％的五谷雜糧類(優(yōu)選為米糠)、1-10％的糖類(優(yōu)選為葡萄糖)、0.5-2％磷酸鹽(優(yōu)選為磷酸二氫鉀)，及0.1-1％硫酸鹽(優(yōu)選為硫酸鎂)。其濕度約為60-90％，優(yōu)選為80％，并調(diào)整其pH值接近中性。
本文中所指菌絲培養(yǎng)階段是指菌種植入太空包約60天之內(nèi)，其中菌絲體生長溫度介于5至32℃間，優(yōu)選為28℃。太空包的濕度優(yōu)選介于60-80％，更優(yōu)選為80％。至于其空氣條件，則優(yōu)選含0.2-1％二氧化碳。
菌絲體培養(yǎng)完成后，進行子實體栽培階段，亦即在約61-90天內(nèi)將太空包去除，使之完全暴露在空氣中。子實體生長期間的日夜溫差須經(jīng)嚴格控制，日間溫度一般介于20至30℃間，優(yōu)選為25℃±1℃；夜間溫度優(yōu)選為11℃±1℃；日夜溫差優(yōu)選為15℃。子實體栽培階段的空氣濕度應(yīng)控制于90-95％之間；另外子實體須于空氣流通下進行培養(yǎng)，其中二氧化碳含量不能超過1％，一般在90-120天內(nèi)即可采收固體培養(yǎng)物。
根據(jù)本發(fā)明，使用寄存于臺灣食品工業(yè)發(fā)展研究所，編號CCRC35398的菌種為來源，該菌種為市售菌種，依固體培養(yǎng)方法得到的固體培養(yǎng)物如圖1所示，類似圓錐形，直徑約為10-30厘米，高度約為15-35厘米而重量約為0.2-0.6公斤。
利用上述培養(yǎng)方法所獲得的樟芝固體物可經(jīng)由任何已知技術(shù)所熟悉的加工處理方式，如利用水提或酒精萃取該固體培養(yǎng)物的活性成分，接著以已知的濃縮法，如真空濃縮或冷凍濃縮制備濃縮制品。
或以干燥方法予以干燥處理，例如噴霧干燥、冷凍干燥等，其中以無加熱的噴霧干燥，可得到完全不受熱影響的干燥粉末。優(yōu)選為冷凍干燥法，于0℃以下的低溫至常溫間，除去該固體物的水分，同時在干燥期間該固體培養(yǎng)物亦不受氧氣的影響而改變其性質(zhì)。
或使噴霧干燥的微粉末粒子或其他干燥法制備的微小粒子，經(jīng)附聚作用(agglomeration)增加粉體的凝集及其粒徑，該附聚物的構(gòu)造為多孔質(zhì)，具備良好的可濕性。
本發(fā)明的樟芝固體培養(yǎng)物、已知液體培養(yǎng)法所得的樟芝及野生樟芝的高效液相色譜(HPLC)圖譜數(shù)據(jù)比較，如圖2。經(jīng)HPLC分析，本發(fā)明固體培養(yǎng)方法所得的子實體具有與天然野生樟芝十分類似的組成，應(yīng)當具有與天然野生樟芝相同的活性及用途，包括安神、怯風行氣、化瘀活血、溫中消積、解毒消腫、及鎮(zhèn)靜止痛之效，以及具有抑制細菌、病毒及腫瘤細胞的能力，及強心、免疫調(diào)節(jié)、抗副交感神經(jīng)作用、抗血清素活性的功效?？捎靡灾委熚改c疼痛、腹瀉嘔吐、糖尿病、痛風、腎炎、關(guān)節(jié)炎、發(fā)炎、過敏、尿蛋白過高、尿毒癥、肝硬化、肝癌及流行性感冒等。甚至具有皮膚再造的能力，又可作為人體皮膚或愈傷的材料，對褥瘡、皮膚外傷可作成貼劑。
根據(jù)本發(fā)明，更進一步具體實證本發(fā)明的固體培養(yǎng)物具有抗自由基及抗脂質(zhì)過氧化能力，保肝功能，以及抑制癌細胞功效。顯然本發(fā)明的固體培養(yǎng)物可作為養(yǎng)生的健康食品之用，或可進一步開發(fā)為各種藥物。
下列實施例用對本發(fā)明作進一步的例示說明，并非用以限制本發(fā)明，本領(lǐng)域技術(shù)人員根據(jù)本發(fā)明說明書的內(nèi)容所完成的修飾及應(yīng)用，皆屬本發(fā)明的范疇。
本文中所指菌絲培養(yǎng)階段是指菌種植入太空包約60天之內(nèi)，其中菌絲體生長溫度介于5至32℃間，優(yōu)選為28℃。太空包的濕度為80％，空氣條件為含0.2-1％二氧化碳。
菌絲體培養(yǎng)完成后，進行子實體栽培階段，即在約61-90天內(nèi)將太空包去除，使之完全暴露在空氣中，子實體生長期間的日夜溫差須經(jīng)嚴格控制，日間溫度一般介于20至30℃間；夜間溫度則為11℃±1℃；日夜溫差維持在15℃。子實體栽培階段的空氣濕度控制于90-95％之間；另外子實體須于空氣流通下進行培養(yǎng)，其中二氧化碳含量不能超過1％。
在90-120天內(nèi)，待圓錐形子實體長成直徑15厘米、高度25厘米時即可采收固體培養(yǎng)物，其重量約為0.4公斤，如圖1。其主要活性成分三萜類的高效液相色譜(HPLC)圖譜分析如圖2A所示，其數(shù)值如下表1所列。
表1 本發(fā)明培養(yǎng)方法所得的樟芝子實體的高效液相色譜圖譜數(shù)據(jù)保留面積 濃度成份編號面積％相對高度高度％濃度 基線碼時間 (UV*秒) 單位名稱1 2.06027958870 9.30181000.2796.93420.0000 PV2 2.54763203872.1028999.303 6.52990.0000 VV3 2.66363332342.1070999.158 6.52890.0000 VV4 2.82313521140 4.4984998.886 6.52710.0000 VV5 3.11739335111.3087328.263 2.14500.0000 VV6 3.41344143121.5352303.141 1.98080.0000 VV7 3.67325198740.8384182.128 1.19010.0000 VV8 3.97320845530.6935144.477 0.94410.0000 VV9 4.36742656581.4192149.456 0.97660.0000 VV10 5.15076011312.5289460.320 3.00790.0000 VV11 5.77316714780.556171.272 0.46570.0000 VP12 6.043441685 0.146954.184 0.35410.0000 VV13 6.36012644810.420762.749 0.41000.0000 VV14 6.59713591490.452256.000 0.38340.0000 VV15 7.26319462830.647556.407 0.36860.0000 VV16 7.660517391 0.172143.061 0.28150.0000 VV17 8.16758622691.9504317.837 2.07690.0000 VV18 8.983932610 0.310329.915 0.19550.0000 VV19 9.99012539310.417234.691 0.22670.0000 VV20 10.343 538013 0.179022.699 0.14960.0000 VV21 10.823 164318 0.054712.337 0.08060.0000 VV22 11.327 12334150.410429.716 0.19420.0000 VV23 12.193 628302 0.209019.258 0.12580.0000 VV24 12.990 12590550.418937.378 0.24420.0000 VP25 14.810 29825810.992380.403 0.52540.0000 PP26 17.313 25219670.839068.342 0.44660.0000 PV27 18.113 627346 0.308719.934 0.13030.0000 VV28 18.990 117338 0.03904.690 0.03060.0000 VV29 19.867 663514 0.220720.198 0.13200.0000 VV30 20.867 29320570.975552.760 0.34480.0000 VV31 22.323 252149 0.08399.636 0.06300.0000 VV32 23.080 31316821.041979.476 0.51930.0000 VV33 23.960 11308320.376231.023 0.20270.0000 VV34 25.857 41358401.376078.025 0.50980.0000 VV35 26.910 10702680.356122.420 0.14650.0000 VP36 28.940 21276640.707944.217 0.28890.0000 PV37 30.503 15997700 5.3224304.304 1.98850.0000 VV38 33.793 52564451.748892.365 0.60360.0000 PV39 35.573 462920 0.15408.405 0.05490.0000 VV40 37.360 44168301.469579.089 0.51680.0000 VP41 39.193 261669 0.08715.522 0.03610.0000 PV42 41.267 44119461.467873.326 0.47910.0000 VV43 42.667 28212090.938650.936 0.33280.0000 VV44 44.323 36608 0.01221.071 0.00700.0000 VP45 46.630 10087950 3.3562134.950 0.68180.0000 PP46 50.090 333401 0.11094.502 0.02940.0000 PV47 52.383 48966491.429160.376 0.39450.0000 VP48 55.280 124357 0.04142.047 0.01340.0000 PP49 56.593 49869381.4591340.488 2.22490.0000 PV50 56.953 73147542.4336625.513 4.08740.0000 VV51 57.290 45867321.5260463.198 3.02670.0000 VV52 57.800 36995881.2308189.756 1.23990.0000 VV53 58.087 10567240.3516118.120 0.77180.0000 VV54 58.477 24688790.8214134.218 0.87700.0000 VV55 58.690 19822340.6595157.526 1.02330.0000 VV56 58.927 14458160.4810124.837 0.81570.0000 VV57 59.210 31386961.0442171.327 1.11950.0000 VV58 59.520 10987250.365589.794 0.58670.0000 VV59 59.840 14819090.4930102.506 0.66980.0000 VV60 60.093 34066971.1334202.433 1.32280.0000 VV61 60.483 16450840.5473104.449 0.68250.0000 VV62 60.980 10587770 3.5225757.281 4.94840.0000 VV63 61.403 16265630.5412117.086 0.76510.0000 VV64 61.700 856049 0.284879.162 0.51730.0000 VV65 61.907 14982120.498488.354 0.57730.0000 VV66 62.297 73589362.4483538.464 3.51850.0000 VV67 63.713 10076880.335376.731 0.50140.0000 VV68 62.980 9531270.317176.8730.5023 0.0000 VV69 63.187 1992004 0.462749.8940.4567 0.0000 VV70 63.803 7760930.258255.2830.3612 0.0000 VV71 64.203 6164886 2.0510515.260 3.3449 0.0000 VV72 64.537 7618730.253572.3030.4725 0.0000 VV73 64.773 2147592 0.7145124.955 0.0165 0.0000 VV74 65.287 2333203 0.7762110.636 0.7229 0.0000 VV75 65.987 1814540 0.603753.2830.3482 0.0000 VV76 66.617 1221936 0.406556.6840.3704 0.0000 VV77 67.103 1666644 0.554581.1350.5302 0.0000 VV78 67.617 1226534 0.408146.8880.3064 0.0000 VV79 68.340 3797130 1.2633106.221 0.7072 0.0000 VV80 68.910 3980780 1.3244176.942 1.1562 0.0000 VV81 69.637 2559917 0.051776.3590.4990 0.0000 VV82 70.970 4803580.226416.3570.1069 0.0000 VV83 71.683 2646680.088112.5460.0820 0.0000 VV84 72.387 6863490.228314.9020.0974 0.0000 VV85 73.070 5135540.170913.8480.0905 0.0000 VV86 73.730 4197960.13979.953 0.0650 0.0000 VV87 74.950 3577330.119012.6980.0830 0.0000 VV88 75.373 4658040.155015.4740.1011 0.0000 VV89 76.253 3561550.118510.1620.0664 0.0000 VV90 77.137 1333400.04444.645 0.0304 0.0000 VV91 77.850 2729530.090811.8050.0771 0.0000 VV92 78.420 7529480.250530.8240.2014 0.0000 VV93 78.690 8698660.289431.8090.2079 0.0000 VV94 79.653 66206 0.02202.235 0.0146 0.0000 VP95 80.730 79648 0.02652.862 0.0187 0.0000 PP96 81.753 27502 0.00911.070 0.0070 0.0000 PP97 83.147 1866110.06214.143 0.0271 0.0000 PV98 83.923 2937140.09779.081 0.0593 0.0000 VV99 84.520 3610250.12019.061 0.0592 0.0000 VV100 85.820 8204230.275029.1440.1904 0.0000 VV101 86.260 1531752 0.509635.7060.2333 0.0000 VV102 87.803 1945022 0.647151.9780.3396 0.0000 VV103 89.500 2711090.09027.353 0.0480 0.0000 VP104 90.683 26832 0.00890.533 0.0035 0.0000 PP105 92.080 55385 0.01841.398 0.0091 0.0000 PP106 96.443 3758662 1.250552.8670.3455 0.0000 PP107 100.23794086 0.03131.137 0.0074 0.0000 PP108 106.6501435702 0.477741.1070.2686 0.0000 PV109 107.3001158655 0.385555.8950.3652 0.0000 VV110 107.7201487062 0.494771.4350.4868 0.0000 VV111 108.1907090490.235937.2540.2434 0.0000 VV112 108.4936182540.272238.6270.2524 0.0000 VV113 109.0136314160.210135.0160.2286 0.0000 VV114 109.5071010342 0.336133.6530.2199 0.0000 VV115 109.9004466640.148627.8630.1821 0.0000 VV116 110.1605988990.199333.3600.2180 0.0000 VV117 110.4938406830.279757.2020.3738 0.0000 VV118 111.0232135668 0.7105103.717 0.6777 0.0000 VV119 111.4505477560.182242.1980.2757 0.0000 VV120 111.8331597280 0.531456.8900.3717 0.0000 VV121 112.4739679940.322055.9810.3658 0.0000 VV122 112.6076790500.225959.6140.3895 0.0000 VV123 112.8205369410.178649.9130.3261 0.0000 VV124 113.0679871080.328435.9260.2348 0.0000 VV125 113.8071383823 0.460434.6650.2265 0.0000 VV126 114.5631002529 0.333536.3570.2376 0.0000 VV127 114.9705201990.173124.1360.1577 0.0000 VV128 115.5401143580 0.380528.1190.1837 0.0000 VV129 116.5773382560.112511.2090.0732 0.0000 VV130 117.0171761870.05868.880 0.0580 0.0000 VV131 117.4001693930.05648.586 0.0561 0.0000 VV132 118.1335187400.172611.0140.0720 0.0000 VV133 118.7631344390.04477.091 0.0483 0.0000 VV134 119.2373682780.122510.1270.0662 0.0000 VP135 121.14064584 0.02152.560 0.0167 0.0000 PV136 121.6201850590.06166.282 0.0410 0.0000 VV137 122.62030314 0.01011.935 0.0126 0.0000 VV138 123.0902542380.08468.468 0.0553 0.0000 VV139 124.1101410720.04696.206 0.0406 0.0000 VP140 125.8773784180.12597.976 0.0521 0.0000 PP141 127.97727554 0.00921.016 0.0066 0.0000 PP142 129.8131879150.06259.937 0.0649 0.0000 PP總和30057492615303.400.0000
為比較本發(fā)明樟芝固體物與其他栽培方式所得樟芝的不同，并以液體培養(yǎng)法所得的樟芝及野生樟芝進行HPLC，其圖譜如圖2B及圖2C，其數(shù)據(jù)如表2及表3。由圖譜可見，本發(fā)明培養(yǎng)得到的樟芝子實體具有與野生樟芝相同峰形的圖譜，亦表示本發(fā)明方法培養(yǎng)的子實體應(yīng)當具有與野生樟芝相同的活性及用途。
表2 液體栽培法所得樟芝的高效液相色譜圖譜數(shù)據(jù)保留 面積 濃度成份編號 面積％相對高度 高度％ 濃度 基線碼時間(UV*秒)單位名稱1 1.620262998 1.218438.745 2.2045 0.0000 PV2 1.857829434238.4242 660.68537.5912 0.0000 VV3 2.520541747625.0969 726.39841.3301 0.0000 VV4 2.82016926347.841399.406 5.6559 0.0000 VV5 3.790731157 3.387123.209 1.3205 0.0000 VB6 4.123271974 1.259911.713 0.6664 0.0000 BV7 4.623154068 0.71377.810 0.4444 0.0000 VV8 5.023154230 0.71454.580 0.2606 0.0000 VV9 5.89729822 0.13821.652 0.0940 0.0000 VP10 7.860150572 0.69755.210 0.2964 0.0000 PP11 9.210123419 0.57173.914 0.2227 0.0000 PP12 11.930 130807 0.60603.563 0.2027 0.0000 PV13 12.740 37712 0.17471.232 0.0701 0.0000 VP14 15.103 504463 2.337011.048 0.6286 0.0000 PP15 16.890 143477 0.66473.512 0.1998 0.0000 PP16 19.350 56660 0.26341.827 0.1039 0.0000 PP17 23.510 806678 3.737911.274 0.6415 0.0000 PP18 27.167 92042 0.42641.224 0.0696 0.0000 PP19 30.633 144285 0.66842.243 0.1276 0.0000 PP20 33.747 289568 1.34143.947 0.2245 0.0000 PP21 38.727 250488 1.16043.231 0.1839 0.0000 PP22 41.340 61644 0.28560.771 0.0438 0.0000 PP23 43.727 29928 0.13860.470 0.0267 0.0000 PP24 57.047 112074 0.51929.096 0.5175 0.0000 PV25 57.433 175711 0.814010.275 0.5846 0.0000 VV26 57.907 107598 0.49854.508 0.2565 0.0000 VV27 58.137 25810 0.11962.279 0.1296 0.0000 VP28 61.380 23245 0.10772.024 0.1152 0.0000 PV29 62.743 196612 0.910821.767 1.2385 0.0000 VV30 64.223 30411 0.14092.094 0.1192 0.0000 PV31 64.717 441196 2.043941.620 2.3681 0.0000 VV32 64.997 48524 0.22484.870 0.2771 0.0000 VV33 65.420 40354 0.18693.529 0.2008 0.0000 VV34 65.833 67766 0.31393.823 0.2175 0.0000 VP35 66.950 21298 0.09871.691 0.0962 0.0000 PP36 67.773 32193 0.14911.708 0.0972 0.0000 PP37 79.013 29414 0.13630.920 0.0523 0.0000 PP38 97.297 21884 0.10140.456 0.0260 0.0000 PP39 100.053 38474 0.17820.738 0.0420 0.0000 PP40 104.457 126686 0.58692.358 0.1342 0.0000 PP41 107.010 57252 0.26522.113 0.1202 0.0000 PP42 111.397 35854 0.16614.236 0.2410 0.0000 VV43 111.813 28337 0.13132.512 0.1429 0.0000 VP44 113.790 25408 0.11771.810 0.1030 0.0000 VP45 115.883 43858 0.20323.808 0.2167 0.0000 PV46 119.590 25451 0.11791.656 0.0942 0.0000 PP總和 21586254 1757.553 0.0000
表3 野生樟芝的高效液相色譜圖譜數(shù)據(jù)保留 面積濃度成份編號面積％ 相對高度 高度％ 濃度 基線碼時間(UV*秒) 單位名稱1 1.5501332009 0.5787 162.045 1.1488 0.0000 PV2 1.91312708000 5.5210 797.430 5.6535 0.0000 VV3 2.6077990504 3.4715 374.149 2.6526 0.0000 VV4 2.9973336181 1.4494 151.464 1.0738 0.0000 VV5 3.4808279690.3597 90.536 0.6419 0.0000 VV6 3.6872100942 0.9127 89.231 0.6326 0.0000 VV7 4.1101665378 0.7235 80.468 0.5705 0.0000 VV8 4.5909868570.4287 61.543 0.4363 0.0000 VV9 4.8671300649 0.5651 59.445 0.4214 0.0000 VV10 5.3776204090.2695 37.086 0.2629 0.0000 VV11 5.6237125140.3095 37.666 0.2670 0.0000 VV12 6.0206174120.2682 32.787 0.2324 0.0000 VV13 6.3473806780.1654 24.939 0.1768 0.0000 VV14 6.6606223330.2704 24.053 0.1705 0.0000 VV15 7.0605573020.2421 18.364 0.1302 0.0000 VV16 7.7105857650.2545 27.106 0.1922 0.0000 VV17 8.3532762210.1200 10.957 0.0777 0.0000 VV18 8.8673798870.1650 19.904 0.1411 0.0000 VV19 9.3273162840.1374 21.157 0.1500 0.0000 VV20 9.62372843 0.0316 4.9140.0348 0.0000 VV21 10.593 1205810.0524 6.5840.0467 0.0000 PP22 11.260 57846 0.0251 2.2830.0162 0.0000 PV23 11.747 32476 0.0141 2.1990.0156 0.0000 VV24 12.263 2093260.0909 11.437 0.0811 0.0000 VV25 12.837 1313150.0570 6.6030.0468 0.0000 VV26 13.733 2707320.1176 7.4380.0527 0.0000 VP27 15.300 1563800.0679 6.5420.0464 0.0000 PP28 17.513 3467740.1507 10.369 0.0735 0.0000 PV29 18.270 1011777 0.4396 25.904 0.1837 0.0000 VV30 19.863 2983370.1296 7.1750.0509 0.0000 VP31 21.567 2375470.1032 6.7150.0476 0.0000 VV32 22.657 2615550.1136 7.1290.0505 0.0000 VV33 23.960 4198210.1824 8.1650.0579 0.0000 VP34 26.780 1014237 0.4406 20.361 0.1444 0.0000 PP35 29.320 4482109 1.9472 103.960 0.7370 0.0000 PP36 32.017 6999710 3.0410 156.204 1.1074 0.0000 PV37 33.343 3991510.1734 8.7330.0619 0.0000 VP38 35.053 97125 0.0422 2.4280.0172 0.0000 PV39 37.007 3062612 1.3305 46.150 0.3272 0.0000 VP40 39.587 8324840.3617 15.926 0.1129 0.0000 PV41 40.897 2411303 1.0476 30.354 0.2152 0.0000 VP42 43.603 94412 0.0410 2.1020.0149 0.0000 PP43 46.093 9503290.4129 12.948 0.0918 0.0000 PP44 47.820 29686 0.0129 0.6970.0049 0.0000 PP45 51.273 22016 0.0096 0.5050.0036 0.0000 PP46 53.253 3915110.1701 6.5420.0464 0.0000 PP47 55.177 4186790.1819 6.0820.0431 0.0000 PP48 57.243 3988680 1.7329 240.883 1.7078 0.0000 PV49 57.500 4155318 1.8053 345.611 2.4503 0.0000 VV50 57.787 3545656 1.5404 257.829 1.8279 0.0000 VV51 58.010 1206951 0.5244 175.620 1.2451 0.0000 VV52 58.257 2986313 1.2974 222.955 1.5807 0.0000 VV53 58.400 5093407 2.2128 431.601 3.0599 0.0000 VV54 58.673 2540255 1.1036 286.541 2.0315 0.0000 VV55 58.943 5661787 2.4597 471.025 3.3394 0.0000 VV56 59.233 2400643 1.0430 197.347 1.3991 0.0000 VV57 59.543 3531683 1.5343 200.445 1.4211 0.0000 VV58 59.850 2228945 0.9684 164.165 1.1639 0.0000 VV59 60.060 2828869 1.2290 335.781 2.3806 0.0000 VV60 60.410 17547630 7.6235 994.818 7.0529 0.0000 VV61 60.743 13833800 6.0101 994.628 7.0516 0.0000 VV62 60.920 9930270 4.3142 941.167 6.6726 0.0000 VV63 61.343 3601150 1.5645 265.761 1.8842 0.0000 VV64 61.723 6048523 2.6278 525.238 3.7238 0.0000 VV65 62.127 2249845 0.9774 180.527 1.1381 0.0000 VV66 62.357 2849680 1.2380 152.131 1.0786 0.0000 VV67 63.207 11335680 4.9248 886.220 6.2830 0.0000 VV68 63.460 3758168 1.6327 214.761 1.5226 0.0000 VV69 64.087 17403430 7.5609 992.676 7.0377 0.0000 VV70 64.807 6379895 2.7717 332.965 2.3406 0.0000 VV71 65.487 1105522 0.4803 48.756 0.3457 0.0000 VV72 66.060 1061718 0.4613 41.562 0.2947 0.0000 VV73 66.490 1903467 0.8270 65.469 0.4642 0.0000 VV74 67.563 1016818 0.4418 30.915 0.2192 0.0000 VV75 68.387 1511594 0.6567 37.104 0.2631 0.0000 VV76 69.390 10743430 4.6675 526.207 3.7306 0.0000 VV77 70.583 3588330.1559 13.087 0.0928 0.0000 VV78 71.257 2732845 1.1873 127.212 0.9019 0.0000 VV79 72.317 2378620.1033 7.9480.0563 0.0000 VV80 72.730 2452900.1066 6.7840.0481 0.0000 VV81 73.783 87523 0.0380 3.2000.0227 0.0000 VV82 74.250 1270090.0552 4.1360.0293 0.0000 VV83 74.890 86115 0.0374 2.9800.0211 0.0000 VP84 75.973 28738 0.0125 1.1650.0083 0.0000 PP85 77.503 92275 0.0401 1.8980.0135 0.0000 PP86 80.060 5087440.2210 11.408 0.0809 0.0000 PP87 82.200 28158 0.0122 0.8710.0062 0.0000 PP88 84.293 79909 0.0347 1.5340.0109 0.0000 PP89 87.500 1092447 0.4746 24.011 0.1702 0.0000 PV90 87.630 3000460.1304 24.553 0.1741 0.0000 VV91 87.893 3822950.1661 25.603 0.1815 0.0000 VV92 88.107 2245230.0975 21.631 0.1534 0.0000 VV93 88.397 7179830.3119 37.094 0.2630 0.0000 VV94 89.010 5188520.2254 22.242 0.1577 0.0000 VV95 89.237 3070900.1334 21.551 0.1528 0.0000 VV96 89.473 3026350.1315 19.158 0.1358 0.0000 VV97 90.007 4050733 1.7598 326.533 2.3150 0.0000 VV98 91.020 3765890.1636 16.743 0.1187 0.0000 VV99 91.427 1529690.0665 11.423 0.0810 0.0000 VV100 91.643 2053460.0892 11.033 0.0782 0.0000 VV101 92.013 1423330.0818 11.613 0.0823 0.0000 VV102 92.157 2889010.1168 11.479 0.0814 0.0000 VV103 92.633 1249150.0543 8.0730.0572 0.0000 VV104 93.083 9083070.3946 88.376 0.6266 0.0000 VV105 93.690 2109040.0916 15.423 0.1093 0.0000 VV106 94.063 3230590.1404 22.173 0.1572 0.0000 VV107 94.547 63428 0.0276 3.1020.0220 0.0000 VV108 95.123 29222 0.0127 2.0590.0146 0.0000 VP109 95.963 45135 0.0196 2.9670.0210 0.0000 VP110 98.950 58309 0.0253 3.6440.0258 0.0000 VP111 100.27320525 0.0089 0.7130.0051 0.0000 PP112 105.56338299 0.0166 1.8040.0128 0.0000 PP113 112.26355710 0.0242 1.4680.0104 0.0000 PP114 126.41744605 0.0194 0.8610.0061 0.0000 PP總和 23017755614105.030.0000
下述成分分析檢驗及藥理檢驗，說明根據(jù)本發(fā)明培養(yǎng)方法所得樟芝子實體固體物其濃縮產(chǎn)品的成分及功效。經(jīng)分析，主要成分包括三萜類化合物、水溶性多糖及幾丁質(zhì)。
水溶性多糖經(jīng)日本食品分析中心檢測，發(fā)現(xiàn)本發(fā)明培養(yǎng)方法所得樟芝子實醴固體物具高量水溶性多糖，每100克約含有1.2至6.5克的水溶性多糖。
重金屬含量根據(jù)國立清華大學原子科學系微量分析實驗室以原子光譜儀，對根據(jù)本發(fā)明方法所栽培的樟芝固體物進行重金屬分析，結(jié)果顯示如下Na48.7ppm Mn10.9ppm CdNDMg767ppmFe100ppmCrNDAl41.6ppm Zn16.4ppmCa605ppmAsNDK0.560％HgND總抗氧化活性(Total antioxidant activity)根據(jù)本發(fā)明的樟芝固體物的濃縮粉與野生樟芝粉末及靈芝子實體濃縮粉進行比較，檢測每克粉末的含量，其相當于維生素C的毫克數(shù)。來源 每克粉末的含量/相當于維生素C的毫克數(shù)野生樟芝粉末633微克抗壞血酸/克靈芝子實體濃縮粉854微克抗壞血酸/克本發(fā)明樟芝固體物的濃縮粉1180微克抗壞血酸/克該結(jié)果顯示本發(fā)明的樟芝固體物的抗氧化力遠高于靈芝子實體及野生樟芝。
毒性試驗根據(jù)本發(fā)明的樟芝使用小鼠進行急性口服毒性試驗LD50，實驗組小鼠口服一次2000毫克/千克根據(jù)本發(fā)明的樟芝，對照組則給予精制水作為溶媒對照。實驗結(jié)果顯示，實驗組小鼠并未出現(xiàn)異?；蛩劳隼Ｒ虼?，急性口服毒性試驗LD50值為2000毫克/千克以上。
埃姆斯試驗(Ames test)根據(jù)本發(fā)明的樟芝利用平板混合試驗法，來進行埃姆斯試驗(Ames test)。測試菌株包括有鼠傷寒沙門菌TA97、TA98、TA100、TA102及TA1535五株，五個濃度分析，分別為312.5、625、1250、2500及5000微克/平板，同時包括陰性對照組與具菌株專一性的陽性對照組，每組皆做三個重復(fù)。測試結(jié)果顯示陰性對照組引發(fā)的逆突變菌落背景皆落在可接受的范圍內(nèi)；而陽性對照組亦引發(fā)逆突變菌落數(shù)顯著增加。根據(jù)本發(fā)明的樟芝在不論是否含有大鼠肝臟酶(S9)代謝系統(tǒng)的處理下，所有測試濃度均未顯著引起測試株逆突變菌落數(shù)的增加，如表4所示。
表4埃姆斯試驗

抗脂質(zhì)過氧化能力的試驗利用大鼠腦均質(zhì)液的脂質(zhì)過氧化反應(yīng)，以檢測根據(jù)本發(fā)明的樟芝固體培養(yǎng)濃縮液的抗自由基及抗氧化能力。圖3顯示以亞鐵離子刺激大鼠腦均質(zhì)液引發(fā)自由基的脂質(zhì)過氧化反應(yīng)，并造成脂質(zhì)過氧化成分(TBARS)增加，而根據(jù)本發(fā)明的樟芝固體培養(yǎng)物的三倍與八倍濃縮液隨其濃度的增加，其結(jié)果顯示可顯著抑制過氧化反應(yīng)，并具有抗自由基能力。
保肝功能實驗建立以四氯化碳誘導小鼠慢性化學性肝損傷的實驗?zāi)Ｐ?，探討不同濃縮倍數(shù)的樟芝對于小鼠慢性肝損傷的影響。
24只不具疾病的小鼠(ICR品系)分成四組，如表5所示。
表5樟芝試驗劑量與動物組別分布組別 四氯化碳CCl4劑量劑量程度 小鼠只數(shù)A 0(對照組)0(對照組)6B 40％CCl4/橄欖油 0(對照組)6(0.3毫升/100克體重)C 同上 50毫克(三倍)/公斤 6D 同上 50毫克(八倍)/公斤 6對A及B至D組小鼠分別皮下注射橄欖油(0.1毫升/10克體重)及40％四氯化碳CCl4橄欖油(0.1毫升/10克體重)，每周兩次，并對A及B組小鼠以胃管灌予食鹽水，在C與D組則分別口服喂食兩種劑量的根據(jù)本發(fā)明方法所培育的樟芝濃縮樣品，共維持五周。所有小鼠分別于第五周后以眼窩采血方式檢測肝臟相關(guān)功能生化值，隨之處死小鼠，取其肝臟并固定最大右葉肝組織以進行組織病理學觀察，例如肝細胞受損、脂肪變性、壞死及纖維化等變化程度。生化功能測定包括血中谷氨酸-丙酮酸轉(zhuǎn)氨酶(GPT)與谷氨酸-草酰乙酸轉(zhuǎn)氨酶(GOT)酶活性，GPT及GOT檢測原理是根據(jù)國際聯(lián)邦臨床化學的標準方法。
實驗結(jié)果顯示，以四氯化碳慢性肝傷害下的小鼠血漿中GPT及GOT值在實驗五周后明顯升高，其中GPT值約為850單位，此為正常值的20-22倍；而GOT值約為1700單位，此為正常值的40-42倍(圖4、5)。另外，喂食三倍及八倍本發(fā)明的濃縮樟芝明顯抑制因四氯化碳所引起GPT及GOT數(shù)值的升高。特別當GPT及GOT值達到高峰時，使用三倍濃縮劑量可抑制約37％GPT及65％GOT值的升高。如圖6所示，相較于正常小鼠的肝臟組織，以四氯化碳處理六周后的小鼠，其肝臟組織明顯腫大且表面呈灰白粗糙狀；然而喂食不同濃度樟芝濃縮物小鼠的肝臟，未發(fā)現(xiàn)腫大或灰白粗糙的表面。另外，在染色下發(fā)現(xiàn)脂肪顆粒明顯堆積，中心靜脈附近的肝細胞明顯腫大、含鐵代謝物的巨噬細胞與其他發(fā)炎性白血球浸潤在肝細胞間，且部分細胞壞死可見結(jié)節(jié)狀轉(zhuǎn)化(nodulartransformation)。喂食不同濃度樟芝的小鼠的肝臟組織則未發(fā)現(xiàn)上述的病理性變化(見圖7)。此外，表6是例示小鼠肝臟病理組織半定量分析(N表示正常組、D表示四氯化碳傷害組、X3表示喂食樟芝三倍濃縮組及X8表示喂食樟芝八倍濃縮組)，其中應(yīng)當可確認樟芝濃縮物明顯改善病理性的變化。
表6小鼠肝臟病理組織半定量分析肝臟 脂質(zhì) 細胞壞死膽管增 鈣化發(fā)炎 變性 生局部壞死 連接壞死 結(jié)節(jié)狀轉(zhuǎn)化N 0 0 0-10 0 0 0D 2-3 2-3 2 2 0-1 1 0-1X31 1-2 0-11-2 0-1 0-10-1X80-1 0-1 0-11 0 0-10-1癌細胞抑制試驗食品工業(yè)發(fā)展研究所接受委托進行本發(fā)明的樟芝固體培養(yǎng)濃縮液對宮頸癌(HeLa)、胃癌(AGS)、乳腺癌(MCF-7)、肝癌(HepG2)及腸癌(COLO 320HSR)等癌細胞抑制試驗，細胞成長抑制率如表7所示，本發(fā)明的樟芝固體培養(yǎng)濃縮液對腫瘤細胞具強效抑制力(75％-87％)，其中對乳腺癌細胞(MCF-7)的抑制力最強。
表7樟芝固體培養(yǎng)濃縮液抑制腫瘤細胞試驗結(jié)果細胞成長抑制率(％)細胞株種類 平均值(％) ±SDHela83 ±3.1AGS 84 ±2,7HepG2 75 ±2.4MCF-7 87 ±1.4*測試樣品最后濃度為原始樣品濃度的十分之一另外，分別用粉末樣品(10毫克/毫升)五種(New1、New2、New3、New4及New5)與液體樣品十一種(20L、New2、New3、520、521、522、523、524、525、526及527)及其10倍稀釋樣品以微量培養(yǎng)四唑鎓檢測(microculture tetrazolium assay)進行腸癌細胞(COLO320HSR)抑制試驗。其結(jié)果如圖8所示，顯示于最后濃度為1/10原液時具有至少30％抑制力，而以樣品20L的抑制力最強，可高達90％的抑制腸癌細胞能力。
體外染色體結(jié)構(gòu)變異分析又進一步利用根據(jù)本發(fā)明的樟芝進行體外染色體結(jié)構(gòu)變異分析，其方法是以根據(jù)本發(fā)明的樟芝處理中國倉鼠卵巢細胞(Chinesehamster ovary cell)，之后分析分裂中期的細胞，觀察并計算其引發(fā)異常型態(tài)染色體的頻率。該染色體結(jié)構(gòu)變異分析法可用以評估根據(jù)本發(fā)明的樟芝對細胞染色體造成傷害的能力。該分析分別以下述三種處理方式進行，第一種是不加大鼠肝臟活化酶(S9)系統(tǒng)下，以根據(jù)本發(fā)明的樟芝處理3小時；第二種是加入S9，處理細胞3小時；第三種是在不加S9下，連續(xù)處理細胞20小時。其測試濃度與實驗結(jié)果則如表8所示，根據(jù)本發(fā)明的樟芝在三種處理方式下的各測試濃度，均未顯著引發(fā)染色體變異的頻率增加。
表8 體外染色體結(jié)構(gòu)變異分析

動物體內(nèi)小核分析根據(jù)本發(fā)明的樟芝在小鼠網(wǎng)狀紅血球造成小核的情形，藉此判斷根據(jù)本發(fā)明的樟芝在動物體內(nèi)是否具有誘裂(clasiogeniciiy)的能力，并進一步提供根據(jù)本發(fā)明的樟芝對人類是否具有遺傳毒性的風險評估。25只小鼠分成五組進行試驗，其試驗方法與實驗結(jié)果如表9所示。由小鼠的小核分析顯示，根據(jù)本發(fā)明的樟芝對小鼠周邊血液的小核分析結(jié)果為陰性反應(yīng)。
表9 動物體內(nèi)小核分析

基于上述藥理數(shù)據(jù)應(yīng)當可支持根據(jù)本發(fā)明的樟芝固體物不但具有與野生形相似的成分，如多糖及三萜類化合物，及其抗脂質(zhì)過氧化能力、抗自由基或抗氧化等同的功效，另外還發(fā)現(xiàn)根據(jù)本發(fā)明的樟芝固體物具有保肝及抗癌的功效。
權(quán)利要求
1.一種培養(yǎng)固體樟芝的方法，其包括將樟芝菌種以太空包進行菌絲體培養(yǎng)，移除太空包，使之暴露于空氣中進行子實體栽培一段時間至圓錐形子實體形成；其中該太空包中含有10-70％纖維物、10-30％淀粉源、1-10％糖類、5-15％五谷雜糧類、0.5-2％磷酸鹽及0.1-1％硫酸鹽；又其中太空包栽培階段的濕度為60-80％，并調(diào)整其pH值為中性。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中該太空包是由60-70％纖維物、20％淀粉源、10％五谷雜糧類、5％糖類、1％磷酸二氫鉀及0.5％硫酸鎂所組成，其中濕度為80％，并調(diào)整其pH值為中性。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的方法，其中該纖維物為蕈類或植物的莖、梗、果實或木屑。
4.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的方法，其中該淀粉源為馬鈴薯。
5.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的方法，其中該五谷雜糧為米糠。
6.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的方法，該太空包是由65％草本植物的莖、梗、果實或木屑、20％馬鈴薯、10％米糠、3.5％葡萄糖、1％磷酸二氫鉀及0.5％硫酸鎂所組成。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，該菌絲體培養(yǎng)的溫度介于5℃至32℃之間。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的方法，其中菌絲體培養(yǎng)的溫度為28℃。
9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中太空包濕度介于60-80％之間。
10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的方法，其中太空包濕度為80％。
11.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中菌絲體培養(yǎng)時的空氣條件為含有0.2-1％的二氧化碳。
12.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其子實體栽培于空氣流通下進行。
13.根據(jù)權(quán)利要求12所述的方法，其子實體栽培期間的日間溫度介于20至30℃之間，而夜間溫度介于8-14℃間。
14.根據(jù)權(quán)利要求13所述的方法，該子實體栽培時的日間溫度為24-26℃，而夜間溫度為10-12℃。
15.根據(jù)權(quán)利要求14所述的方法，其日夜間溫差為15℃。
16.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，子實體培養(yǎng)的空氣濕度介于90-95％之間。
17.根據(jù)權(quán)利要求16所述的方法，其中空氣中二氧化碳含量低于1％。
18.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，菌絲體培養(yǎng)進行50-80天，而子實體培養(yǎng)須20-50天。
19.一種如權(quán)利要求1所述的方法所栽培的樟芝子實體固體物，其特征在于具有與野生形樟芝一致的類三萜成分的生理活性。
20.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其于菌絲體培養(yǎng)階段前包含菌種大量培養(yǎng)步驟，包含(1)自液態(tài)氮保存活化的菌種取一小塊洋菜菌絲塊，移入新鮮培養(yǎng)基中于恒溫下培養(yǎng)；(2)待菌種生長至旺盛時，將該菌種接種至殺過菌的纖維物(例如麥粒或木屑)的太空包中，接著于恒溫下培養(yǎng)；(3)待該于太空包中的菌種長滿菌絲時，去除最上面較老的菌絲塊，然后即可大量接種至太空包中。
21.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其于菌絲體培養(yǎng)階段前包含菌種大量培養(yǎng)步驟，包含以液體培養(yǎng)發(fā)酵以大量培養(yǎng)菌種，斜面試管培養(yǎng)后，將大量繁殖好的菌種接種至5升發(fā)酵培養(yǎng)液中，于24-26℃下以240 rpm旋轉(zhuǎn)振蕩培養(yǎng)約14天，接著以90 rpm往返振蕩培養(yǎng)約14天，又接種至20升液體發(fā)酵液中攪拌培養(yǎng)14天；其中發(fā)酵培養(yǎng)液的配方為1.3％果糖、0.01-0.1％硫酸鎂、0.1-1％酵母提取物、0.05-0.5％磷酸二氫鉀。
22.根據(jù)權(quán)利要求21所述的方法，其中發(fā)酵培養(yǎng)液的配方為2％果糖、0.05％硫酸鎂、0.5％酵母提取物及0.1％磷酸二氫鉀。
23.一種樟芝子實體固體物，其是以食品工業(yè)發(fā)展研究所寄存編號CCRC 35398為菌種來源，該菌種為市售菌種，并如 1所述的方法栽培而得到的樟芝子實體固體物，其特征在于其具有與野生形樟芝一致的類三萜成分的生理活性，且其外形為圓錐狀、直徑為10-20厘米、高度為20-30厘米且重量為0.3-0.5公斤。
24.一種樟芝子實體固體物的產(chǎn)品，其特征在于權(quán)利要求23所述的樟芝子實體固體物經(jīng)粉碎，并以醇或水提取濃縮至粘稠狀，以得濃縮液。
25.根據(jù)權(quán)利要求24所述的產(chǎn)品，其可進一步以干燥處理制成干燥粉末狀。
26.根據(jù)權(quán)利要求25所述的產(chǎn)品，其干燥粉末可經(jīng)水調(diào)濕再行干燥，以得附聚物。
27.根據(jù)權(quán)利要求24所述的產(chǎn)品，其是作為一種食品組合物。
28.根據(jù)權(quán)利要求23所述的樟芝子實體固體物，其具有保肝功能。
29.根據(jù)權(quán)利要求23所述的樟芝子實體固體物，其用于治療或抑制癌細胞生長。
30.根據(jù)權(quán)利要求29所述的樟芝子實體固體物，其中癌細胞是指宮頸癌細胞(HeLa)、胃癌細胞(AGS)、乳腺癌細胞(MCF-7)、肝癌細胞(HepG2)及腸癌細胞(COLO 320HSR)。
31.根據(jù)權(quán)利要求23所述的樟芝子實體固體物，其用于抑制過氧化反應(yīng)。
32.根據(jù)權(quán)利要求23所述的樟芝子實體固體物，其用于抗自由基或抗脂質(zhì)過氧化反應(yīng)。
33.一種具有保肝功能的食品組合物，其包括如權(quán)利要求23所述的樟芝子實體固體物，或其加工產(chǎn)品。
34.一種用于治療或抑制癌細胞生長的食品組合物，其包括如權(quán)利要求23所述的樟芝子實體固體物，或其加工產(chǎn)品。
35.一種用于抑制過氧化反應(yīng)的食品組合物，其包括如權(quán)利要求23所述的樟芝子實體固體物，或其加工產(chǎn)品。
36.一種用于抗自由基或抗脂質(zhì)過氧化反應(yīng)的食品組合物，其包括如權(quán)利要求23所述的樟芝子實體固體物，或其加工產(chǎn)品。
37.一種用于保肝功能的醫(yī)藥組合物，其是自如權(quán)利要求23所述的樟芝子實體固體物，或其加工產(chǎn)品制得。
38.一種用于治療或抑制癌細胞生長的醫(yī)藥組合物，其是自如權(quán)利要求23所述的樟芝子實體固體物，或其加工產(chǎn)品制得。
39.一種用于抑制過氧化反應(yīng)的醫(yī)藥組合物，其是自如權(quán)利要求23所述的樟芝子實體固體物，或其加工產(chǎn)品制得。
40.一種用于抗自由基或抗脂質(zhì)過氧化反應(yīng)的醫(yī)藥組合物，其是自如權(quán)利要求23所述的樟芝子實體固體物，或其加工產(chǎn)品制得。
41.根據(jù)權(quán)利要求23所述的樟芝子實體固體物，其具有與天然野生樟芝相同的功能，包括安神、怯風行氣、化瘀活血、溫中消積、解毒消腫、及鎮(zhèn)靜止痛之效，或可作為防腐解毒劑；及具有抑制細菌、病毒及腫瘤細胞的能力，具強心、免疫調(diào)節(jié)、抗副交感神經(jīng)作用、抗血清素活性的功效；以及可用于治療胃腸疼痛、腹瀉嘔吐、糖尿病、痛風、腎炎、關(guān)節(jié)炎、發(fā)炎、過敏、尿蛋白過高、尿毒癥、肝硬化、肝癌及流行性感冒。
42.根據(jù)權(quán)利要求23所述的樟芝子實體固體物，其具皮膚再造功能，可用以作為人體皮膚或愈傷的材料。
43.根據(jù)權(quán)利要求41所述的樟芝子實體固體物，其可作為治療褥瘡、皮膚外傷的貼劑。
全文摘要
本發(fā)明提供一種樟芝的固體培養(yǎng)方法,該方法包括將樟芝菌種以太空包進行菌絲體培養(yǎng),接著于空氣中進行子實體栽培。本發(fā)明還提供利用該方法培養(yǎng)得到的樟芝固體培養(yǎng)物,其加工產(chǎn)品及其用途。
文檔編號C12N1/14GK1379082SQ0112361
公開日2002年11月13日 申請日期2001年8月10日 優(yōu)先權(quán)日2001年8月10日
發(fā)明者藍明煌, 藍蒼洲, 藍仲良, 藍仲民 申請人:吳麗玉, 藍明煌