專利名稱：單唾液酸四己糖神經(jīng)節(jié)苷脂gm1的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及生物技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及單唾液酸四己糖神經(jīng)節(jié)苷脂GM1的制備方法。
GM1是最重要的神經(jīng)節(jié)苷脂之一，在中樞神經(jīng)系統(tǒng)病變的治療中起重要作用。GM1除具有上述神經(jīng)節(jié)苷脂的共同作用外，還可以通過維持中樞神經(jīng)細胞膜上的Na+-K+-ATP酶及Ca2+-Mg2+-ATP酶的活性，起到維持細胞內(nèi)外離子平衡、減輕神經(jīng)細胞水腫、防止細胞內(nèi)Ca2+積聚的作用。因此GM1具有促進神經(jīng)重構(gòu)的作用，即通過促進各種形態(tài)、生物化學(xué)、組織化學(xué)、神經(jīng)生理及行為參數(shù)的改善，最終可以加速神經(jīng)細胞的修復(fù)，最大程度地恢復(fù)原有的神經(jīng)功能。臨床用于中樞神經(jīng)系統(tǒng)(包括大腦和脊髓)的急性創(chuàng)傷或血管性損傷。
神經(jīng)節(jié)苷脂是一混合體，用動物腦組織分離制備的是含GM1的混合體神經(jīng)節(jié)苷脂。傳統(tǒng)的分離GM1方法是用硅膠柱從混合神經(jīng)節(jié)苷脂中分離，操作步驟繁瑣，耗時長，并消耗大量有機溶劑，其中提取的GM1含量僅為腦組織含量的萬分之一，收率低，成本高。
本發(fā)明公開的神經(jīng)節(jié)苷脂GM1的制備方法包括下列步驟1.發(fā)酵菌種制備取凍干管藏菌種，接種于營養(yǎng)瓊脂斜面培養(yǎng)基上，于37℃培養(yǎng)1天，取出于冰箱放置，取少量于營養(yǎng)瓊脂液體培養(yǎng)基中，于37℃±1℃搖瓶培養(yǎng)1天，取出于冰箱中存儲備用。
2.GM1的制備取濃度為0.1％-10％分離GM1后的其它神經(jīng)節(jié)苷脂原料，溶于水中，加入2-5％發(fā)酵菌種，調(diào)pH5-8，于32℃±5℃培養(yǎng)，3-5天后，薄層色譜法檢測即得到發(fā)酵完全的GM1溶液，純度達20％-65％，經(jīng)層析得純品。
本發(fā)明制備GM1的發(fā)酵菌種為短桿菌屬(Brevibacterium sp.)QL-1株，于2000年12月11日由中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心保藏，保藏編號為CGMCC No.0522。
該菌種是從齊魯制藥廠土壤中分離，經(jīng)篩選并誘變后獲得。
本發(fā)明公開的GM1制備方法較現(xiàn)有方法提取率提高100％。該方法操作簡便、成本低廉，為GM1大規(guī)模生產(chǎn)提供了可能。
權(quán)利要求
1.一種單唾液酸四己糖神經(jīng)節(jié)苷脂GM1的制備方法，其特征在于該方法包括下列步驟(1)發(fā)酵菌種制備取凍干管藏菌種，接種于營養(yǎng)瓊脂斜面培養(yǎng)基上，于37℃培養(yǎng)1天，取出于冰箱放置，取少量于營養(yǎng)瓊脂液體培養(yǎng)基中，于37℃±1℃搖瓶培養(yǎng)1天，取出于冰箱中存儲備用。(2)GM1的制備取濃度為0.1％-10％分離GM1后的其它神經(jīng)節(jié)苷脂原料，溶于水中，加入2-5％發(fā)酵菌種，調(diào)PH6-8，于32℃±5℃培養(yǎng)3-5天即得，純度達20％-65％，經(jīng)層析得純品。
2.一種如權(quán)利要求1所述的單唾液酸四己糖神經(jīng)節(jié)苷脂GM1的制備方法，其特征在于其中所用的發(fā)酵菌種為短桿菌屬Q(mào)L-1株。
全文摘要
本發(fā)明涉及單唾液酸四己糖神經(jīng)節(jié)苷脂GM
文檔編號C12P19/44GK1415756SQ0113205
公開日2003年5月7日 申請日期2001年10月30日 優(yōu)先權(quán)日2001年10月30日
發(fā)明者張麗莉, 李紅英 申請人:齊魯制藥廠, 王安民, 張明會