專利名稱：用于多樣本檢測的基因芯片的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于基因芯片技術(shù)領(lǐng)域，更具體地涉及一種新的用于多樣本檢測的基因芯片蓋玻片和基因芯片，以及利用這項技術(shù)進(jìn)行多份樣本檢測的方法。本發(fā)明還涉及了含有該新型基因芯片的試劑盒。
背景技術(shù)：
基因芯片是二十世紀(jì)九十年代發(fā)展起來的一項前沿生物技術(shù)。將大量的靶基因片段有序地、高密度地(點與點之間的距離一般小于500微米)排列在玻璃、硅等載體上，稱之為基因芯片?；蛐酒瑥闹谱魃峡煞譃閮纱箢愒缓铣煞?DNAchip)和微矩陣法(DNA mircoarray)，原位合成法由Affymetrix公司的Fodor等發(fā)明，他們將半導(dǎo)體中的光蝕刻技術(shù)運用到DNA合成化學(xué)中，用單核苷酸或其它生物大分子為底物，在玻璃晶片上原位合成寡核苷酸，每次循環(huán)都有特定的核苷酸結(jié)合上去，直到設(shè)定的寡核苷酸長度，每個寡核苷酸片段代表了一種特定的基因，存在于DNA芯片的特定位置上。微矩陣法最早由Stanford大學(xué)的P.Brown等發(fā)明，將PCR等方法得到的cDNA用針點或噴點的方法直接排列到玻片等介質(zhì)上，從而制備成芯片。
基因芯片可以用熒光檢測和計算機軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)的比較和分析，以達(dá)到快速、高效、高通量地分析生物信息的目的。
基因芯片的概念可追溯到Southern印跡雜交技術(shù)，即DNA-DNA之間通過堿基配對機制形成互補鏈。隨后又發(fā)展出Northern印跡雜交和點雜交技術(shù)。這三種技術(shù)都是將核酸樣品固定在濾膜上，樣品容易擴(kuò)散，因此在單位面積上點樣的密度受到限制，無法進(jìn)行大規(guī)模、高通量的DNA雜交。同時，由于濾膜面積較大而需較多探針量，檢測靈敏度較低。為了提高點樣密度和檢測靈敏度，降低探針用量，以玻璃、硅等材料為載體的基因芯片技術(shù)逐步得到了發(fā)展。
美國Affymetrix公司于二十世紀(jì)八十年代末至90年代初，率先開展了這方面的研究。1992年，該公司運用半導(dǎo)體照相平板技術(shù)，在約1平方厘米的玻片上原位合成寡聚核苷酸片段，誕生了世界上第一塊基因芯片。同時，探針的熒光標(biāo)記，激光共聚焦掃描和計算機分析等技術(shù)也隨之發(fā)展。1995年，第一塊以玻璃為載體的基因芯片(微矩陣)在美國Stanford大學(xué)誕生，這標(biāo)志著基因芯片技術(shù)步入了廣泛研究和應(yīng)用的時期。
原位合成寡聚核苷酸芯片具有密集程度高，可合成任意序列的寡聚核苷酸等優(yōu)點，適用于DNA序列測定、SNP分析等。但其缺點是合成寡聚核苷酸長度有限，因而基因特異性差，而且隨長度的增加合成錯誤率隨之增高，作為基因表達(dá)譜研究遠(yuǎn)不如cDNA芯片。cDNA芯片是將微量cDNA片段在玻璃等載體上按矩陣密集排列并固化，也叫微矩陣(Microarray)?；螯c樣密度雖不及原位合成寡聚核苷酸芯片高，但比用傳統(tǒng)載體，如混合纖維素濾膜或尼龍膜的點樣密度要高得多，可達(dá)到每張載玻片4萬個基因。而cDNA芯片最大的優(yōu)點是靶基因檢測特異性非常好，用作表達(dá)譜研究結(jié)果可靠。目前許多國家實驗室和大制藥公司都用此類芯片。
基因芯片最早是由于高通量、大規(guī)模研究基因功能的需求而產(chǎn)生的，但隨著基因芯片技術(shù)的日漸成熟，人們驚喜地發(fā)現(xiàn)基因芯片在傳染性疾病和遺傳病的診斷上有獨特的應(yīng)用前景和巨大的商業(yè)市場。感染性病原體診斷芯片就是將待測病原體的特征基因片段(靶基因)固定于玻片上制成芯片，將從病人血清中抽提出病原體的DNA或RNA經(jīng)擴(kuò)增標(biāo)記螢光后與芯片進(jìn)行雜交，雜交信號由掃描儀掃描，再經(jīng)計算機分析，判斷陰陽性。診斷芯片區(qū)別于其他檢測手段的優(yōu)越性在于(1)檢測樣品為各類致病基因片段，提高了檢測效率；(2)因無需機體免疫反應(yīng)，能及早診斷，且待測樣品用量較少；(3)診斷芯片技術(shù)是DNA雜交技術(shù)和熒光標(biāo)記技術(shù)相結(jié)合的分子診斷方法，有極高的靈敏度、特異性和可靠性；(4)自動化程度高，利于大規(guī)模推廣應(yīng)用。
在疾病診斷方面，已有一些單一疾病基因診斷芯片產(chǎn)品上市，例如美國的Affymetrix公司已利用基因芯片進(jìn)行愛滋病病毒(HIV)的研究工作，并有商業(yè)化的GeneChip HIV PRT診斷芯片上市，用于愛滋病的早期診斷。
利用基因芯片的技術(shù)特征和優(yōu)勢為臨床診斷進(jìn)行服務(wù)已成為當(dāng)今一個重要課題。然而，目前仍缺乏有效的同時進(jìn)行多樣本檢測的基因芯片技術(shù)。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的就是提供了一種適用于多疾病和/或多份樣本檢測的基因芯片，以及用于多樣本檢測的基因芯片的蓋玻片。
本發(fā)明的另一目的是提供含有上述基因芯片的試劑盒及其相關(guān)生產(chǎn)制備技術(shù)。
本發(fā)明的另一目的是提供了利用這種新的基因芯片試劑盒進(jìn)行多份樣本檢測的方法。
在本發(fā)明的第一方面，提供了一種用于多樣本檢測基因芯片的蓋玻片，所述的蓋玻片的一個主平面上具有2-500個凸起的、高度0.01-2mm的獨立反應(yīng)單元區(qū)，所述的反應(yīng)單元區(qū)的表面基本平坦，且反應(yīng)單元區(qū)的位置對應(yīng)于多樣本檢測基因芯片上的樣品檢測區(qū)。
較佳地，所述的蓋玻片是用以下材料制成的玻璃、塑料、硅片。
在本發(fā)明的一個優(yōu)選例中，反應(yīng)單元區(qū)之間被寬度0.5-50mm的隔離區(qū)隔開，較佳地被寬度1-10mm的隔離區(qū)隔開，更佳地被寬度2-5mm的隔離區(qū)隔開。
在一優(yōu)選例中，所述的隔離區(qū)是用疏水材料制成或經(jīng)疏水處理。
在一優(yōu)選例中，所述的反應(yīng)單元區(qū)是透明的，且高度優(yōu)選為0.025-1.5mm，較佳地為0.05-1mm。
在一優(yōu)選例中，所述的反應(yīng)單元區(qū)數(shù)目為4-384個，更佳地為4-192個。
在本發(fā)明的第二方面，提供了一種用于多樣本檢測的基因芯片，它包括芯片基片和本發(fā)明上述的蓋玻片，芯片基片上有2-500個點有探針的樣品檢測區(qū)，且蓋玻片上的獨立反應(yīng)單元區(qū)的位置對應(yīng)于該芯片基片上的樣品檢測區(qū)。
所述芯片基片上的樣品檢測區(qū)數(shù)目通常為2-500個，較佳地為4-384個，更佳地為4-192個。
在本發(fā)明的第三方面，提供了一種用于多樣本檢測的試劑盒，它含有本發(fā)明上述的多樣本檢測基因芯片。
在一優(yōu)選例中，所述的試劑盒還含有雜交盒、標(biāo)記試劑、預(yù)雜交液、雜交液和說明書。所述的試劑盒用于同時檢測2-500個樣本。


圖1是本發(fā)明的一種用于多樣本檢測的基因芯片的蓋玻片的俯視圖和側(cè)視圖。
圖2是本發(fā)明的一種多人份oligo芯片的檢測結(jié)果圖(放大約4倍)。
圖3是本發(fā)明的一種多人份cDNA芯片的檢測結(jié)果圖(放大約4倍)。
具體實施例方式
本發(fā)明的目的是通過一種新型基因芯片實現(xiàn)的，該基因芯片包括兩部分芯片基片和芯片蓋玻片。
現(xiàn)參見圖1(未按實際尺寸繪制)。圖1示出了本發(fā)明的一種用于多樣本檢測基因芯片的蓋玻片，圖1上方為本發(fā)明蓋玻片的俯視圖，下方為本發(fā)明蓋玻片的俯視圖的側(cè)視圖。該蓋玻片1在一個主平面上具有多個(通常為2-500個，較佳地為4-384個，更佳地為5-100個)凸起的的獨立反應(yīng)單元區(qū)2，所述的反應(yīng)單元區(qū)2的表面基本平坦，且反應(yīng)單元區(qū)2的位置對應(yīng)于多樣本檢測基因芯片上的樣品檢測區(qū)(基因芯片上的樣品檢測區(qū)也就是基因芯片上的探針點樣區(qū))。
反應(yīng)單元區(qū)2的形狀沒有限制，可以為矩形、正方形、圓形、橢圓形或其他任何形狀。反應(yīng)單元區(qū)的的高度沒有特別限制，通常為0.01-2mm，較佳地為0.025-1.5mm，更佳地為0.05-1mm。反應(yīng)單元區(qū)的面積也沒有特別限制，只要能夠覆蓋芯片上的樣品檢測區(qū)即可，以正方形的反應(yīng)單元區(qū)為例，其大小通常約為1×1mm到10×10mm，當(dāng)然也使用面積更大或更小的反應(yīng)單元區(qū)。
反應(yīng)單元區(qū)2可以是透明的，也可以是不透明的。只要雜交產(chǎn)生的信號能夠透過反應(yīng)單元區(qū)并被檢測儀器(如掃描儀)所接收即可。一種優(yōu)選的反應(yīng)單元區(qū)是透明的。
此外，在反應(yīng)單元區(qū)之間為間隔區(qū)3。間隔區(qū)3的寬度沒有特別限制，通常為0.5-100mm。在一優(yōu)選例中，間隔區(qū)3可以用疏水材料來制造，或者經(jīng)過疏水處理。在一優(yōu)選例中，間隔區(qū)是疏水性的，而反應(yīng)單元區(qū)是親水性的。
簡而言之，為了形成獨立反應(yīng)單元和避免交叉污染，蓋玻片表面由兩個部分組成，第一部分為凹陷的隔離區(qū)(相對于反應(yīng)單元區(qū)而言)，第二部分為凸出的反應(yīng)單元區(qū)(相對于隔離區(qū)或蓋玻片的主表面而言)。突出部分是獨立反應(yīng)單元；每一反應(yīng)單元構(gòu)成一個單份檢測系統(tǒng)，可對一個被檢樣本進(jìn)行檢測。
至于芯片基片部分，與普通的基因芯片基片沒有差異，只是由普通的一個點樣區(qū)變成多個點樣區(qū)。在芯片基片上與蓋玻片突出部分對應(yīng)的區(qū)域為點樣區(qū)。芯片基片上各樣品檢測區(qū)所點的核酸探針種類可以相同，也可以不同。較佳地，每個點樣區(qū)的點樣方式宜完全一樣，并用于檢測一個樣本。多個點樣區(qū)各檢測多個樣本。一塊芯片基片加一塊芯片蓋玻片就構(gòu)成了本發(fā)明的新型的多樣本檢測基因芯片，該基因芯片可同時進(jìn)行多疾病、多樣本的檢測。
在進(jìn)行檢測時，蓋玻片朝上，將待測樣本分別點在蓋玻片的反應(yīng)單元區(qū)，對準(zhǔn)芯片的相應(yīng)位置蓋上，進(jìn)行雜交。下凹的間隔區(qū)可以阻斷不同樣本的擴(kuò)散，防止樣本之間的交叉污染。通常，人們認(rèn)為由于DNA分子較小，因而在芯片的雜交反應(yīng)時僅數(shù)毫米的間隔區(qū)是不足以防止DNA分子的擴(kuò)散的。本發(fā)明人出乎意料地發(fā)現(xiàn)，當(dāng)利用具有上述結(jié)構(gòu)的本發(fā)明蓋玻片時，即數(shù)毫米的間隔區(qū)就足以防止在各個樣品檢測區(qū)的雜交反應(yīng)的相互干擾。如果間隔區(qū)經(jīng)疏水處理，則效果更好。這可能是因為DNA分子的擴(kuò)散并不如人們想象的那么嚴(yán)重。也可能是因為各反應(yīng)單元區(qū)與樣品檢測區(qū)之間形成了較為穩(wěn)定的微環(huán)境，從而防止了干擾性DNA分子的進(jìn)入。還可能是因為在反應(yīng)單元區(qū)上待檢測的目的DNA分子占絕對優(yōu)勢，因此即使少量干擾性DNA分子進(jìn)入到樣品檢測區(qū)與反應(yīng)單元區(qū)之間，也基本不會干擾雜交結(jié)果。盡管，在此列出了可能的機理，但本發(fā)明的多樣本檢測基因芯片并不受上述機理的限制。
具體而言，本發(fā)明的多樣本檢測的基因芯片包括芯片基片和上述的蓋玻片，其中芯片基片上有2-500個點有探針的樣品檢測區(qū)(每個樣品檢測區(qū)可點樣若干個(例如1-10000個)探針雜交點)，且蓋玻片上的獨立反應(yīng)單元區(qū)的位置對應(yīng)于該芯片基片上的樣品檢測區(qū)。在所述的一塊芯片上，同時存在多個反應(yīng)單元，各反應(yīng)單元形成獨立的檢測單元(例如包括檢測監(jiān)控系統(tǒng)和疾病診斷系統(tǒng))；每一獨立反應(yīng)單元可進(jìn)行單樣本檢測，反映一個被檢樣本的檢測狀況；一個基因芯片就能夠同時反映若干反應(yīng)單元中多個樣本的檢測狀況，因此一個基因芯片就能進(jìn)行多疾病、多樣本的檢測。
至于本發(fā)明基因芯片基片和蓋玻片的材料，沒有特別限制?？梢允褂媚壳盎蛐酒I(lǐng)域常用的各種材料，例如玻璃、塑料、硅片、陶瓷等。
在本發(fā)明另一方面，提供一種可進(jìn)行多樣本檢測的基因芯片試劑盒，它包括本發(fā)明的多樣本檢測基因芯片。此外，該試劑盒還可所述的試劑盒還含有雜交盒、標(biāo)記試劑、預(yù)雜交液、雜交液和說明書。該試劑盒可用于多疾病、多樣本的檢測。
本發(fā)明的用于多樣本檢測基因芯片的蓋玻片可用常規(guī)技術(shù)進(jìn)行制備。一種常見的方法是以常規(guī)蓋玻片為材料，在其一個主表面上劃定反應(yīng)單元區(qū)，然后對除反應(yīng)單元區(qū)之外的區(qū)域進(jìn)行打磨，形成凹陷的間隔區(qū)。
本發(fā)明所提供的新的可進(jìn)行多樣本檢測的基因芯片或試劑盒有如下優(yōu)點①節(jié)約了耗用基片數(shù)量，節(jié)約成本。
②節(jié)約了雜交液的用量，節(jié)約成本。
③簡化了雜交中蓋蓋玻片的方法，方便了初學(xué)者操作，增加了雜交實驗的成功率。
④多個標(biāo)本同時雜交，提高了雜交條件的一致性，增加了各組雜交數(shù)據(jù)之間的平行性和可對比性。
⑤多標(biāo)本同時雜交，節(jié)約了操作時間，簡化了操作過程，更適于芯片在臨床檢測和疾病篩選等方面的實際應(yīng)用。
⑥一次掃描可同時得到多個雜交圖像，節(jié)約了掃描成本。
⑦雜交體系減小，提高樣本檢測靈敏度。
以下將通過實施例對本發(fā)明作進(jìn)一步的闡述，但實施例并不限制本發(fā)明的保護(hù)范圍。有關(guān)的技術(shù)人員完全可以根據(jù)本發(fā)明的構(gòu)思和所公開的技術(shù)方案，進(jìn)行修改和變動，這也在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。
實施例1多人份oligo芯片(以十人份oligo芯片為例)1.十人份oligo芯片的制備蓋玻片的制備。取常規(guī)的25×75毫米的蓋玻片，根據(jù)芯片基片的樣品檢測區(qū)位置，在蓋玻片上面劃定10個5×5mm見方的反應(yīng)單元區(qū)，各反應(yīng)單元區(qū)之間的間隔區(qū)寬度為4毫米。透過打磨法將除反應(yīng)單元區(qū)之外的區(qū)域打磨掉一部分，形成間隔區(qū)。反應(yīng)單元區(qū)高度約0.1毫米。
使用ProSys-5510a點樣儀(Cartesian公司)，以博星公司標(biāo)準(zhǔn)方法(注以下所指的標(biāo)準(zhǔn)方法皆為博星公司目前采用的芯片制備工藝標(biāo)準(zhǔn)方法)制備十人份oligo芯片。其制備方法與一般的oligo芯片制備方法基本相同，特點在于同時在一片芯片上點樣十個相互隔離的相同矩陣。該十人份oligo芯片的每個矩陣中有400個oligo探針，包括G6PD(葡萄糖-6-磷酸脫氫酶)基因缺陷位點探針及其它一些監(jiān)控探針。每個矩陣占據(jù)4.5mm×4.5mm的面積，矩陣與矩陣之間橫豎均相距4.5mm。后處理完畢后，按照本專利所提及的雜交盒要求將一片芯片、一片蓋玻片裝入雜交盒中，備用。
2.樣本擴(kuò)增及熒光標(biāo)記取正常樣本及陽性樣本(已經(jīng)測序驗證)外周血全基因組DNA，分別進(jìn)行以下PCR擴(kuò)增和熒光標(biāo)記在50ul的PCR體系中含1X反應(yīng)液，10mM Tris-HCl(pH8.0-9.0)，10mMKCl，8mM(NH4)2SO4，2.5mM MgCl2；0.4mM dNTP；Taq DNA聚合酶3-5U；基因組DNA50-100ng；Cy3標(biāo)記引物10-50pmol。
上述反應(yīng)體系充分混勻后，置入PCR儀進(jìn)行以下擴(kuò)增程序變性95℃，5-10分鐘；擴(kuò)增95℃，1分鐘；62℃，1分鐘；72℃，1分鐘；共30-35個循環(huán)；延伸72℃，10分鐘。
然后，采用沉淀法去除雜質(zhì)，并進(jìn)行干燥。正常樣本和陽性樣本各做5份。
3.雜交在以上干粉管中加入3.5ul雜交液，充分溶解，95℃變性5分鐘，立即置冰上冷卻。將每一管標(biāo)記產(chǎn)物溶液滴加到對應(yīng)的蓋玻片小矩陣平臺上，小心將芯片正面向著蓋玻片合上，確保每個人份的oligo探針矩陣都與各自所對應(yīng)的蓋玻片小矩陣平臺相合。蓋上雜交盒蓋，小心將整個雜交盒翻轉(zhuǎn)使其正面向下，置48℃雜交箱中雜交4小時。
4.洗片、掃描用標(biāo)準(zhǔn)方法進(jìn)行洗片，晾干后用GenePix Pro 4000B掃描儀(Axon Instrument)進(jìn)行掃描和數(shù)據(jù)處理。
結(jié)果如圖2所示，各個樣品(正常的、純合的、雜合的樣品)的雜交圖譜與預(yù)計結(jié)果相符，并且各樣品檢測區(qū)無相互干擾現(xiàn)象。
實施例2多人份cDNA芯片(以八人份cDNA芯片為例)1.八人份cDNA芯片的制備蓋玻片的制備。取常規(guī)的25×75毫米的蓋玻片，根據(jù)芯片基片的樣品檢測區(qū)位置，在蓋玻片上面劃定10個5×5mm見方的反應(yīng)單元區(qū)，各反應(yīng)單元區(qū)之間的間隔區(qū)寬度為4毫米。透過打磨法將除反應(yīng)單元區(qū)之外的區(qū)域打磨掉一部分，形成間隔區(qū)。反應(yīng)單元區(qū)高度約0.15毫米。
使用ProSys-5510a點樣儀(Cartesian公司)，以博星公司標(biāo)準(zhǔn)方法(注以下所指的標(biāo)準(zhǔn)方法皆為博星公司目前采用的芯片制備工藝標(biāo)準(zhǔn)方法)制備八人份cDNA芯片。其制備方法與一般的cDNA芯片制備方法基本相同，特點在于同時在一片芯片上點樣八個相互隔離的相同矩陣。該八人份cDNA芯片的每個矩陣中有400個靶cDNA，包括原癌抑癌基因及一部分控制基因。每個矩陣占據(jù)4.5mm×4.5mm的面積，矩陣與矩陣之間橫豎均相距4.5mm。后處理完畢后，按照本專利所提及的雜交盒要求將一片芯片、一片蓋玻片裝入雜交盒中，備用。
2.探針制備取食管癌，胃癌，直腸癌，結(jié)腸癌，膀胱癌，肝癌，胰腺癌，乳腺癌組織各一份及正常組織八份，用標(biāo)準(zhǔn)方法分別抽提RNA并進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄標(biāo)記，癌組織用Cy5標(biāo)記，正常組織用Cy3標(biāo)記。標(biāo)記后產(chǎn)物純化、抽干備用(注，每一份癌組織標(biāo)記產(chǎn)物合一份正常組織標(biāo)記產(chǎn)物混合、在同一eppendorf管中抽干)。
3.預(yù)雜交從雜交盒中取出芯片，95℃變性2min，立即置無水乙醇中放置30sec，取出晾干。同時準(zhǔn)備好40μl的標(biāo)準(zhǔn)方法配制的預(yù)雜交液，95℃變性2min，室溫自然冷卻。在蓋玻片的每個小矩陣平臺上滴加上3.5μl預(yù)雜交液，小心將芯片正面向著蓋玻片合上，確保每個人份的靶cDNA矩陣都與各自所對應(yīng)的蓋玻片小矩陣平臺相合。蓋上雜交盒蓋，小心將整個雜交盒翻轉(zhuǎn)使其正面向下，置42℃雜交箱中6hr左右。
4.雜交預(yù)雜交完畢的芯片從雜交盒中取出，用洗滌液沖洗蓋玻片及芯片，蓋玻片用75％乙醇擦洗后晾干，仍放入雜交盒中，芯片置95℃變性2min，立即置無水乙醇中30sec，取出晾干。同時在每一組癌組織正常組織混合物的干粉管中加入3.5μl雜交液，充分溶解，95℃變性2min，立即置冰上冷卻。將每一管標(biāo)記產(chǎn)物溶液滴加到對應(yīng)的蓋玻片小矩陣平臺上，小心將芯片正面向著蓋玻片合上，確保每個人份的靶cDNA矩陣都與各自所對應(yīng)的蓋玻片小矩陣平臺相合。蓋上雜交盒蓋，小心將整個雜交盒翻轉(zhuǎn)使其正面向下，置42℃雜交箱中過夜。
5.洗片、掃描用標(biāo)準(zhǔn)方法進(jìn)行洗片，晾干后用GenePix Pro 4000B掃描儀(Axon Instrument)進(jìn)行掃描和數(shù)據(jù)處理。
結(jié)果如圖3所示，表明不同組織樣本的表達(dá)存在差異，并且各樣品檢測區(qū)無相互干擾現(xiàn)象。
實施例3不同規(guī)格多樣本檢測芯片在基本與實施例2相同的方式，進(jìn)行cDNA芯片的制備、探針制備、預(yù)雜交、雜交以及洗片和掃描操作，不同點僅在于改變反應(yīng)單元區(qū)的數(shù)目(4個、20個、50個)、反應(yīng)單元區(qū)的高度(0.1mm、0.5mm、1mm)、隔離區(qū)的寬度(1mm、2mm、5mm)。
結(jié)果表明，這些不同規(guī)格的多樣品檢測芯片同樣可以獲得令人滿意的檢測結(jié)果。
此外應(yīng)理解，在閱讀了本發(fā)明的上述講授內(nèi)容之后，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以對本實用新型作各種改動或修改，這些等價形式同樣落于本申請所附權(quán)利要求書所限定的范圍。
權(quán)利要求
1.一種用于多樣本檢測基因芯片的蓋玻片，其特征在于，所述的蓋玻片的一個主平面上具有2-500個凸起的、高度0.01-2mm的獨立反應(yīng)單元區(qū)，所述的反應(yīng)單元區(qū)的表面基本平坦，且反應(yīng)單元區(qū)的位置對應(yīng)于多樣本檢測基因芯片上的樣品檢測區(qū)。
2.如權(quán)利要求1所述的蓋玻片，其特征在于，所述的蓋玻片是用以下材料制成的玻璃、塑料、硅片。
3.如權(quán)利要求1所述的蓋玻片，其特征在于，反應(yīng)單元區(qū)之間被寬度0.5-50mm的隔離區(qū)隔開。
4.如權(quán)利要求3所述的蓋玻片，其特征在于，所述的隔離區(qū)是用疏水材料制成或經(jīng)疏水處理。
5.如權(quán)利要求1所述的蓋玻片，其特征在于，所述的反應(yīng)單元區(qū)是透明的。
6.如權(quán)利要求1所述的蓋玻片，其特征在于，所述的反應(yīng)單元區(qū)數(shù)目為4-384個。
7.一種用于多樣本檢測的基因芯片，其特征在于，它包括芯片基片和權(quán)利要求1所述的蓋玻片，芯片基片上有2-500個點有探針的樣品檢測區(qū)，且蓋玻片上的獨立反應(yīng)單元區(qū)的位置對應(yīng)于該芯片基片上的樣品檢測區(qū)。
8.一種用于多樣本檢測的試劑盒，其特征在于，它含有權(quán)利要求7所述多樣本檢測基因芯片。
9.如權(quán)利要求8所述的試劑盒，其特征在于，所述的試劑盒還含有雜交盒、標(biāo)記試劑、預(yù)雜交液、雜交液和說明書。
10.如權(quán)利要求8所述的試劑盒，其特征在于，所述的試劑盒用于同時檢測2-500個樣本。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種可用于多樣本檢測的試劑盒，它由多樣本檢測芯片(包括芯片基片和芯片蓋玻片)、雜交盒、標(biāo)記試劑、預(yù)雜交液、雜交液和說明書組成，其中蓋玻片上具有多個凸起的獨立反應(yīng)單元，這些反應(yīng)單元區(qū)的位置對應(yīng)于多樣本檢測基因芯片上的樣品檢測區(qū)，因而可同時實現(xiàn)多個樣本的檢測。本發(fā)明還提供了利用這種試劑盒進(jìn)行多樣本檢測的方法，以及將此方法利用至臨床疾病診斷的應(yīng)用手段。
文檔編號C12Q1/68GK1417348SQ01132159
公開日2003年5月14日 申請日期2001年11月9日 優(yōu)先權(quán)日2001年11月9日
發(fā)明者毛裕民, 謝毅, 李瑤, 裘敏燕, 李榮宇, 吳海, 陳沁 申請人:聯(lián)合基因科技有限公司