專利名稱：維持或改善粘蛋白合成的方法
本申請是2000年2月4日申請的美國專利申請No.09/498,905的部分繼續(xù)申請。
背景技術(shù)：
本發(fā)明通常涉及維持，改善或增加粘蛋白合成，特別是胃腸道和肺中粘蛋白合成的方法。此外，本發(fā)明還涉及通過給予患者一種營養(yǎng)組合物來維持，改善或增加患者粘蛋白合成的方法，其中所述營養(yǎng)組合物含有治療有效量的蘇氨酸。通過增加粘蛋白的合成，可有效治療各種特征在于粘蛋白水平改變的疾病狀況，如腸道炎癥和細菌感染或其它類似的疾病狀況。
粘蛋白是一種糖蛋白，其是粘彈性凝膠或粘液的主要成分，幾乎覆蓋了胃腸道和肺全部的粘膜表面。它們從肺和胃腸道的表面持續(xù)分泌；例如從杯狀細胞持續(xù)分泌。它們是以由肽核心和低聚糖側(cè)鏈組成的大分子形式存在的。所述低聚糖側(cè)鏈經(jīng)由O-糖苷鍵與肽核心中的絲氨酸和蘇氨酸殘基結(jié)合。所述低聚糖側(cè)鏈構(gòu)成大約90質(zhì)量％的粘蛋白。蘇氨酸構(gòu)成大約22重量％的肽核心。
粘液可保護胃腸道和肺的上皮細胞免受毒素，如酸類物質(zhì)，膽汁，消化酶，和腸道細菌及其毒素的侵害(Neutra，M.R.和Forstner，J.F.；1987；胃腸道的生理學(xué)，第二版，Raven出版社，紐約，第975-1009頁)。因此，粘液可作為主要的局部防御屏障而發(fā)揮作用，其可防止通常存在于胃腸道或肺中的細菌和內(nèi)毒素的侵襲和全身性擴散。因此粘液的健康狀態(tài)對于人的健康狀況來說是非常重要的。
然而，有許多疾病狀況的特征均在于粘液組成的改變。例如，組織化學(xué)研究已經(jīng)充分證實了在患惡性腫瘤，囊性纖維化，慢性的炎性腸道疾病，潰瘍性結(jié)腸炎和克羅恩氏病，及腸道線蟲感染時，粘蛋白會出現(xiàn)異常(Tse，S-L，和Chadee，K；1992；感染和免疫，Vol.60，No4，第1603-1612頁)。且，已知非甾類抗炎藥物可增加酸和胃蛋白酶對粘膜損害的危險。且經(jīng)受炎癥反應(yīng)的患者會減少粘蛋白的產(chǎn)生。這些改變或減少的結(jié)果是各種副作用的產(chǎn)生；包括細菌易位，胃炎，胃糜爛，消化性潰瘍，和病原菌的侵襲。
因此，我們需要一種維持或改善粘蛋白合成的方法。
發(fā)明概述本發(fā)明提供通過給予一種營養(yǎng)組合物或補充物來維持，改善或增加患者粘蛋白合成的方法，其中所述營養(yǎng)組合物或補充物含有治療有效量的蘇氨酸。令人吃驚的是，我們已經(jīng)發(fā)現(xiàn)給予患者治療有效量的蘇氨酸對于各種特征在于粘蛋白水平及粘液狀況改變的疾病狀況的治療通常具有非常有益的作用，及其它類似的有益作用。
在其中一個實施方案中，本發(fā)明包括一種治療特征在于患者粘蛋白水平改變的疾病狀況的方法，其中該方法包括腸內(nèi)給予患者一種營養(yǎng)組合物，其含有一種含氨基酸的蛋白源，其中所述氨基酸至少含5.5重量％的蘇氨酸。
在其中一個實施方案中，本發(fā)明包括一種維持患者粘蛋白合成的方法，其中該方法包括腸內(nèi)給予患者一種營養(yǎng)組合物，其含有一種含氨基酸的蛋白源，其中所述氨基酸至少含5.5重量％的蘇氨酸。
在其中一個實施方案中，本發(fā)明包括一種維持患者粘蛋白合成的方法，其中該方法包括腸內(nèi)給予患者一種營養(yǎng)組合物，其包括一種含治療有效量蘇氨酸的蛋白源，一種碳水化合物源和一種含中鏈甘油三酯和長鏈甘油三酯混合物的脂源。
在其中一個實施方案中，本發(fā)明包括一種治療特征在于患者粘蛋白水平改變的疾病狀況的方法。該方法包括腸內(nèi)給予患者一種營養(yǎng)組合物，其含有一種含氨基酸的蛋白源，其中所述氨基酸至少含7.4重量％的蘇氨酸。
在其中一個實施方案中，本發(fā)明包括一種維持患者粘蛋白合成的方法。該方法包括腸內(nèi)給予患者一種營養(yǎng)組合物，其含有一種含氨基酸的蛋白源，其中所述氨基酸至少含7.4重量％的蘇氨酸。
在其中一個實施方案中，本發(fā)明包括一種增加粘蛋白合成的方法，其中該方法包括將治療有效量的蘇氨酸加入到飲食中，并將飲食補充給患者。
在其中一個實施方案中，本發(fā)明包括一種增加患者粘蛋白合成的方法，其中該方法包括給予患者一種營養(yǎng)組合物，該營養(yǎng)組合物所含蘇氨酸的量至少為蘇氨酸每日推薦量的30％。
在其中一個實施方案中，本發(fā)明提供一種治療患者腸道炎癥的方法。該方法包括給予治療有效量的蘇氨酸。
在其中一個實施方案中，本發(fā)明提供一種治療患者腸道細菌感染的方法。該方法包括給予治療有效量的蘇氨酸。
在其中一個實施方案中，本發(fā)明提供一種減少由急性腸道炎癥導(dǎo)致的氧化應(yīng)激反應(yīng)的方法。該方法包括給予治療有效量的蘇氨酸。
本發(fā)明的其中一個有益之處在于它提供了一種用于維持，改善或增加患者粘蛋白合成的改進方法。
本發(fā)明的另一個有益之處在于它提供了通過給予患者一種營養(yǎng)組合物來維持，改善或增加患者粘蛋白合成的方法，其中所述營養(yǎng)組合物含有治療有效量的蘇氨酸。
本發(fā)明的另一個有益之處在于它提供了通過增加給予患者的飲食中的食物效率來維持，改善或增加患者粘蛋白合成的方法，其中所述飲食含有治療有效量的蘇氨酸。
本發(fā)明的又一個有益之處在于它提供了用于治療各種疾病狀況的方法。
本發(fā)明的另一個有益之處在于它提供了用于治療腸道炎癥的方法。
本發(fā)明的又一個有益之處在于它提供了用于治療腸道細菌感染的方法。
本發(fā)明的另外一個有益之處在于它提供了通過增加患者粘蛋白的合成，來減少由急性腸道炎癥導(dǎo)致的氧化應(yīng)激反應(yīng)的方法。
本發(fā)明的其它特征和有益之處在目前優(yōu)選實施方案的詳細描述中描述，且其是顯而易見的。
附圖簡述

圖1表示蘇氨酸濃度對粘蛋白分步合成速率的作用。
圖2表示蘇氨酸需求對飲食的食物效率的作用。
圖3表示蘇氨酸需求對粘蛋白分步合成速率的作用。
目前優(yōu)選實施方案的詳細描述本發(fā)明提供通過給予患者一種含治療有效量蘇氨酸的營養(yǎng)組合物來維持，改善或增加粘蛋白合成的方法。本發(fā)明還提供治療各種特征在于粘蛋白水平改變的疾病狀況，如腸道炎癥和細菌感染或其它類似疾病狀況的方法。
本發(fā)明是以腸內(nèi)給予營養(yǎng)組合物對粘蛋白的合成具有有益作用的發(fā)現(xiàn)為基礎(chǔ)的，其中所述營養(yǎng)組合物含有一種富含蘇氨酸的蛋白源。所述蛋白源可以是任何一種適宜的，富含蘇氨酸的氨基酸源。例如，所述蛋白源可以是乳蛋白，蛋清，酪蛋白-糖-巨肽(caseino-glyco-macropeptide)，乳清蛋白，酪蛋白，大豆蛋白，稻米蛋白，豌豆蛋白或燕麥蛋白，或這些蛋白的混合物。且，所述蛋白源可以是完整蛋白，水解蛋白，或其混合物的形式。此外，如果需要，所述蛋白源還可以是游離氨基酸的形式。在其中一個實施方案中，所述蛋白可以是完整蛋白或水解蛋白與游離氨基酸的混合物形式。
在其中一個實施方案中，蘇氨酸至少提供蛋白源中氨基酸重量的5.5％。所述氨基酸還可包括至少6重量％的蘇氨酸，優(yōu)選至少7.4重量％的蘇氨酸。這可通過使用一種天然富含蘇氨酸的蛋白源得到，或通過用蘇氨酸補充其它的蛋白源得到。天然富含蘇氨酸的蛋白源是特別優(yōu)選的，例如甜乳清蛋白或酪蛋白-糖-巨肽。甜乳清蛋白的蘇氨酸含量約為氨基酸重量的7.4％，酪蛋白-糖-巨肽的蘇氨酸含量約為氨基酸重量的14％。
對于對完整蛋白有吸收障礙或不耐受的患者而言，所述蛋白源優(yōu)選以水解蛋白為基礎(chǔ)。在這點上，特別優(yōu)選水解的甜乳清蛋白。使用水解的甜乳清蛋白可提供天然富含蘇氨酸的有益之處，而其又可為對完整蛋白有吸收障礙或不耐受的患者提供營養(yǎng)。
所述蛋白源優(yōu)選提供大約10％-20％的營養(yǎng)組合物能量。例如，所述蛋白源可提供大約15％-18％的營養(yǎng)組合物能量。
所述營養(yǎng)組合物還可包括一種碳水化合物源。所述碳水化合物源優(yōu)選提供大約35％-65％的營養(yǎng)組合物能量，優(yōu)選40％-60％的營養(yǎng)組合物能量。例如，所述碳水化合物源可提供大約51％的營養(yǎng)組合物能量。多種碳水化合物，包括麥芽糖糊精，玉米淀粉，改性淀粉，或蔗糖，或其混合物均可使用。優(yōu)選所述組合物沒有乳糖。
所述營養(yǎng)組合物還可包括一種脂源。優(yōu)選所述脂源提供大約20％-50％的營養(yǎng)組合物能量；特別是大約25％-40％的營養(yǎng)組合物能量。例如，所述脂源可提供大約33％的營養(yǎng)組合物能量。
所述脂源可包括一種中鏈甘油三酯(MCT)和長鏈甘油三酯(LCT)的混合物。所述脂源優(yōu)選至少含有30重量％-80重量％的中鏈甘油三酯。例如，中鏈甘油三酯可構(gòu)成大約70重量％的脂源。適宜的長鏈甘油三酯源是向日葵油，菜子油，大豆油，乳脂，玉米油和大豆卵磷脂。分餾的椰子油是適宜的中鏈甘油三酯源。
腸內(nèi)組合物的脂質(zhì)分布優(yōu)選多不飽和脂肪酸ω-6(n-6)與ω-3(n-3)的比約為1∶1-10∶1。例如，n-6與n-3脂肪酸的比約為6∶1-9∶1。
優(yōu)選所述營養(yǎng)組合物包括一種完全的維生素和礦物質(zhì)分布。例如，可提供充足的維生素和礦物質(zhì)來補充每1000卡路里營養(yǎng)組合物中，所推薦的每日允許的維生素和礦物質(zhì)量的約75％-250％。
所述營養(yǎng)組合物優(yōu)選具有約800karl/l-1200karl/l的能量；例如約1000karl/l的能量。
所述營養(yǎng)組合物可以是任何一種適宜的形式。例如，所述營養(yǎng)組合物可以是可溶性粉末，液態(tài)的濃縮物，或現(xiàn)成的即飲制劑形式。可選擇地，所述營養(yǎng)組合物可以是固體形式，例如現(xiàn)成的即食棒或早餐谷類食物?，F(xiàn)成的即飲制劑是特別優(yōu)選的。所述組合物可經(jīng)由鼻胃飼管，空腸管，或使患者飲用或食用它來給予患者。其中還可含有各種調(diào)味品，纖維，甜味劑，或其它添加劑。
所述營養(yǎng)組合物可被用作患者的營養(yǎng)支持物，其中所述患者正經(jīng)受，或冒著粘蛋白的產(chǎn)生減少或降低的危險。例如，所述營養(yǎng)組合物可被用作下列患者的營養(yǎng)支持物，其中所述患者正經(jīng)受炎癥反應(yīng)，營養(yǎng)不良，囊性纖維化，惡性腫瘤，慢性的炎性腸道疾病，潰瘍性結(jié)腸炎及克羅恩氏病，經(jīng)受給予非-甾類抗炎藥物的治療，及其它類似的疾病狀況。所述營養(yǎng)組合物還可在全部的非腸道營養(yǎng)療法之后，用于恢復(fù)粘蛋白的產(chǎn)生。
給予患者所需的營養(yǎng)組合物的量取決于患者的狀況，患者的體重，患者的年齡，及所述營養(yǎng)組合物是否是唯一的營養(yǎng)源等因素。然而，所需量可由醫(yī)師很容易地確定。通常，給予足量的營養(yǎng)組合物，從而為患者提供大約1g蛋白-4g蛋白/kg體重/天和大約0.05g-0.4g蘇氨酸/天。例如，可給予成年患者大約1.5g蛋白-2.0g蛋白/kg體重/天和大約0.07g-0.2g蘇氨酸/天。如果所述營養(yǎng)組合物被用作其它食物的補充物，那么每日給予的營養(yǎng)組合物的量可相應(yīng)減少。
所述營養(yǎng)組合物可多次給藥，例如，2-5次，以構(gòu)成每日所需的量，或單次給藥。
在其中一個實施方案中，本發(fā)明包括一種治療特征在于患者粘蛋白水平改變的疾病狀況的方法。該方法包括腸內(nèi)給予患者一種營養(yǎng)組合物，其含有一種含氨基酸的蛋白源，其中所述氨基酸至少含5.5重量％的蘇氨酸。所述氨基酸還可包括至少6.0重量％的蘇氨酸，優(yōu)選至少7.4重量％的蘇氨酸。
在其中一個實施方案中，本發(fā)明包括通過用治療有效量的蘇氨酸補充患者的飲食來增加患者粘蛋白合成的方法。加入到飲食中的蘇氨酸量至少為0.2mM。優(yōu)選地，蘇氨酸的量約為0.2mM-0.8mM。
所加入蘇氨酸的量是以所推薦的每日劑量或蘇氨酸的需求為基礎(chǔ)的。在其中一個實施方案中，加入到飲食中的蘇氨酸的量至少為每日推薦量的30％，優(yōu)選至少為60％，最優(yōu)選至少為此量的100％。
在其中一個實施方案中，本發(fā)明提供一種通過增加患者飲食中的食物效率來增加粘蛋白合成的方法。如下面實施例4所述，食物效率代表了進食期間，體重增加和食物攝取量之間的比。通過給予患者一種營養(yǎng)組合物可增加食物效率及粘蛋白的合成，其中所述營養(yǎng)組合物含有治療有效量的蘇氨酸。例如，蘇氨酸的量可以前面討論的蘇氨酸的每日推薦量為基礎(chǔ)。
本發(fā)明的其中一個實施方案提供治療特征在于患者粘蛋白水平改變的疾病狀況的方法。像前面所討論的，該疾病狀況可包括各種疾病狀況，如腸道炎癥和細菌感染或其它類似的疾病狀況。在其中一個實施方案中，本發(fā)明提供治療腸道炎癥，腸道細菌感染，減少由急性腸道炎癥導(dǎo)致的氧化應(yīng)激反應(yīng)，及其它類似疾病狀況的方法。像前面所討論的，用于治療疾病狀況的方法包括給予患者治療有效量的蘇氨酸。蘇氨酸可作為營養(yǎng)組合物，補充物或其它類似營養(yǎng)物質(zhì)的一部分來給予。
作為舉例，而不是限制，本發(fā)明的實施例如下實施例1使用24只各重200g的雄性Wistar大鼠。該大鼠可隨時喝到水。將大鼠分為3組，每組8只，每只大鼠均關(guān)在單獨的籠子中。
各組大鼠可隨時吃到對照飲食3天，該對照飲食是以補充了Met的大豆蛋白為基礎(chǔ)的。其后，每天一次給予各組大鼠對照飲食，對照飲食的量足以滿足每只大鼠生長所需的80％的生理需求。此后，以相同的方式給予其中一組(對照組)大鼠試驗的剩余物。然后使剩余組餓3天。在此時間內(nèi)，大鼠可隨時喝到水。
然后一天一次，分別將飲食給予剩余的兩組大鼠，其中該對照飲食的量足以滿足各只大鼠生長所需的80％的生理需求。其中一組(組A)腸內(nèi)給予補充5％纖維素的酸乳清。第二組(組1)腸內(nèi)給予冷凍干燥的，補充5％纖維素的甜乳清(購自Nestle Clinical Nutrition，商標(biāo)為PEPTAMEN)。
飲食的蛋白含量如下對照飲食含19.02g蛋白，腸內(nèi)給予的酸乳清含15.67g蛋白，腸內(nèi)給予的甜乳清含15.63g蛋白。在腸內(nèi)給予甜乳清時，蘇氨酸約提供蛋白重量的7.4％。在腸內(nèi)給予酸乳清時，蘇氨酸提供的蛋白的重量少于5％。
結(jié)果1三天之后，采集每只大鼠的胃腸粘膜。然后如下確定粘膜中蘇氨酸的含量
實施例1的結(jié)果表明，組1饑餓大鼠的粘蛋白中蘇氨酸的含量高于組A的那些，且蘇氨酸含量稍低于對照組那些的標(biāo)準(zhǔn)含量。這表明組1大鼠產(chǎn)生的粘蛋白增加了。
實施例2使用等滲的流質(zhì)飲食。該飲食是從Nestle Clinical Nutrition購買的，商標(biāo)為PEPTAMEN。該飲食含有下列組分
所述飲食具有1000kcal/l的能量密度，其中蛋白提供16％的能量，碳水化合物提供51％的能量，脂質(zhì)提供33％的能量。蘇氨酸提供約7.4重量％的蛋白源。為了進行此研究，征募了10個年齡在20-60歲的不同性別的患者。所有患者均被診斷患有克羅恩氏病，該診斷是通過組織學(xué)，放射學(xué)，或兩者加以證實的。讓所有患者均接受鋇餐檢查，并利用放射學(xué)評估小腸中疾病的位置。所述患者還經(jīng)過了內(nèi)窺鏡評估。用0-3(0＝正常，1＝輕度炎癥，2＝中度炎癥，3＝重度炎癥)給所檢查小腸的各區(qū)域打分。小腸區(qū)域包括，例如，末端回腸，盲腸，降結(jié)腸，橫結(jié)腸，升結(jié)腸，乙狀結(jié)腸和直腸。且，評估是在所檢查小腸區(qū)域中的粘液情況下進行的。并用0-3(0＝正常，3＝重度減少)給各區(qū)域打分。
將PEPTAMEN產(chǎn)品作為唯一的營養(yǎng)源給予研究中的每位患者8周。營養(yǎng)組合物的給予是在營養(yǎng)學(xué)家的監(jiān)督下進行的，并根據(jù)患者需要，通過口服或鼻胃飼管給予。營養(yǎng)組合物的攝取是根據(jù)耐受性，口感和體重的增加來調(diào)節(jié)的。8周之后，每位患者均再次經(jīng)過內(nèi)窺鏡評估，并給其炎癥和粘液值打分。
結(jié)果2通常，如實施例2所討論的那樣，在給予患者營養(yǎng)組合物后，所有患者的內(nèi)窺鏡評估和粘液狀況均改善了。因此，在大多數(shù)情況下，所述治療可有效緩解克羅恩氏病。
實施例3(體外)蘇氨酸的補充對粘蛋白合成速率的影響是在體外的HT29-MTX細胞(人結(jié)腸癌細胞)中分析的。HT29-MTX細胞在標(biāo)準(zhǔn)的Dulbecco修飾極限必需培養(yǎng)基(DMEM)中生長，該培養(yǎng)基中補充了10％(v/v)熱-滅活胎牛血清(Life Technologies)，并含25mM葡萄糖，1％非-必需氨基酸(Life Technologies)，2mM谷氨酰胺(AJINOMOTO CO)，85mg/L青霉素-鏈霉素，50mg/L慶大霉素，和1.5mg/L兩性霉素B(LifeTechnologies)。細胞是37℃時，在含10％CO2∶90％空氣的大氣中培養(yǎng)的。試驗是在通道10-20之間的T75cm2的培養(yǎng)瓶中進行的。當(dāng)所有細胞均顯示分泌粘蛋白的表型時，在融合后的時期內(nèi)(接種后21天)進行研究。
對于該試驗來說，細胞是在標(biāo)準(zhǔn)的DMEM中生長的，直到融合(接種后7天)。在接種后的第7-21天，測試DMEM中各種不同濃度的蘇氨酸，即，0.2mM，0.4mM，0.8mM和1.6mM。在第20天時，將L-(3-3H)蘇氨酸(30microCi/Flask)加入到10mL新鮮的培養(yǎng)基中。在隨后的24小時，測定摻入放射性示蹤劑的新合成的粘蛋白。
在代謝性標(biāo)記24小時后，除去細胞的培養(yǎng)基。用10ml 1×PBS將細胞洗兩次，并用橡膠刮器回收細胞。在低設(shè)置(6.000rpm，30秒，4℃)的條件下，用polytron在pH7.50的0.05M Tris/HCl緩沖液中均化細胞。除去各勻漿的等份試樣，測量被看作前體池的細胞內(nèi)游離蘇氨酸的比放射性。在部分酶促消化非-高度糖基化的，受保護的蛋白后，通過尺寸排阻色譜法從細胞勻漿純化粘蛋白。用6M HCl(24小時，100℃)水解純化的粘蛋白，并通過HPLC測定它們的氨基酸組成。UV檢測器的輸出口與放射性檢測器(Radiomatic 500TR，Packard)相連，從而測量摻入到粘蛋白中的3H-蘇氨酸。粘蛋白的分步合成速率(FSR)是以％/天(％/d)計算和表示的(FSR＝(束縛蘇氨酸的粘蛋白的比放射性/細胞內(nèi)游離蘇氨酸的比放射性)*100)。
結(jié)果3實施例3的結(jié)果在圖1中表示，其證實了蘇氨酸濃度對粘蛋白分步合成速率(“粘蛋白FSR”)的作用。在HT29-MTX細胞培養(yǎng)基中，在改變蘇氨酸濃度(mM)的條件下，測定了粘蛋白的FSR，其也在圖1中表示。所述數(shù)據(jù)的值是平均值±SEM(n＝6)，字母不同的數(shù)值具有顯著性差異(p＜0.05)。
隨著蘇氨酸的濃度從0.2mM(26.4±1.4％)增加到0.8mM(37.3±1.4％)，粘蛋白的FSR顯著增加，并在蘇氨酸濃度達到約0.8mM時，達到一個比較高的穩(wěn)定水平。當(dāng)細胞的數(shù)量和生存能力不受干擾時，在不限制細胞培養(yǎng)基中的蘇氨酸的條件下，可觀察到粘蛋白的FSR通常隨著培養(yǎng)基中蘇氨酸水平的提高而增加。
這些結(jié)果清楚地表明培養(yǎng)基中蘇氨酸的生物可利用率可顯著影響體外粘蛋白的合成速率。因而，無論是何疾病狀況(炎性小腸疾病，感染，克羅恩氏病，或其它類似的疾病狀況)，在消耗粘蛋白時，隨著富含蘇氨酸的炎性蛋白的合成，蘇氨酸的需求增加。因而，補充蘇氨酸可能是一種有效的營養(yǎng)干預(yù)，其可刺激或恢復(fù)粘蛋白的合成速率，從而改善上皮細胞的保護。
實施例4(體內(nèi))食物中蘇氨酸含量對粘蛋白合成速率的作用是在生長大鼠的體內(nèi)分析的。使用了32只雄性的Sprague-Dawley大鼠(90g)。將這些大鼠隨機分為4組，每組8只，每只大鼠均關(guān)在單獨的籠子中。在整個試驗過程中，大鼠可隨時喝到水。
在6天的食物適應(yīng)期后，用它們的試驗飲食喂大鼠(可隨時吃到)3天。試驗飲食是以游離氨基酸(半-合成的飲食，12.5％蛋白)和不同量的蘇氨酸為基礎(chǔ)的A)根據(jù)National Research Council(1995年的修訂版)推薦的，生長大鼠的蘇氨酸需求；B)60％的蘇氨酸需求；C)30％的蘇氨酸需求；D)150％的蘇氨酸需求。給各組大鼠喂試驗飲食14天。組A，B和D是與組C合喂的。
在動物尾部外側(cè)的血管中進行1-13C-纈氨酸的注入給藥，然后殺死大鼠。每只動物均接受了150毫摩爾L-13C-纈氨酸(99％13C)/100g體重的大丸藥。在注射1-13C-纈氨酸后的35-53分鐘之間，通過從腹部主動脈放血麻醉動物之后，殺死它。用載玻片刮，從而獲得腸粘膜樣品，并立即將其冷凍在液氮中。
在低設(shè)置(6.000rpm，30秒，4℃)的條件下，使用polytron在pH7.5的0.05M Tris/HCl緩沖液中輕輕地均化大鼠粘膜樣品。將各樣品勻漿的等份試樣用于測量在細胞內(nèi)池中富集的1-13C-纈氨酸，其中細胞內(nèi)池被看作是13C富集的前體池。此后，如前面體外試驗所述純化粘蛋白。通過質(zhì)譜法測量粘蛋白中富集的1-13C-纈氨酸。
結(jié)果4如圖2所示，評估了蘇氨酸需求及其百分比對飲食食物效率的作用。如實施例4所討論的那樣，所述飲食含有30％，60％，100％和150％的大鼠蘇氨酸需求。所述食物效率是根據(jù)14天中，體重增加(克)與食物攝取量(克)之間的比計算的，并用百分比表示。所述數(shù)據(jù)的值是平均值±SEM(n＝8)。字母不同的數(shù)值具有顯著性差異(p＜0.05)。
如圖2所示，四種飲食的食物效率隨著飲食中蘇氨酸需求的百分比而改變。含30％大鼠蘇氨酸需求(11.8±1.2％)的飲食的食物效率比含60％(17.5±0.5％)，100％(18.8±0.8)和150％(20.6±1.3％)的飲食明顯要低。
如表1(下面)和圖3所示，評估了蘇氨酸需求的百分比對粘蛋白分步合成速率的作用。
表1飲食蘇氨酸需求％ FSR(％/d)平均值±SEM123.5C 30％109.8 101.8±9.480.493.6178.3B 60％123.9 139.8±19.3117.4157.3A 100％146.2 143.5±6.3135.3117.6D 150％159.1 138.5±12.0138.9表1比較了相對于飲食A(100％蘇氨酸需求)，飲食B(60％蘇氨酸需求)，飲食C(30％蘇氨酸需求)，和飲食D(150％蘇氨酸需求)，生長大鼠的空腸中粘蛋白的分步合成速率。圖3是表1的曲線圖。圖3所示的數(shù)據(jù)值是平均值±SEM。
如表1和圖3所示，用含蘇氨酸最少的飲食(30％蘇氨酸需求)喂養(yǎng)的大鼠空腸中粘蛋白的合成速率最低。用對照飲食(100％蘇氨酸需求)喂養(yǎng)的大鼠空腸中粘蛋白的分步合成速率是143％/天，用含30％蘇氨酸需求的飲食喂養(yǎng)的，則降低至101％/天。然而，與在對照飲食中觀察到的相比，用含150％蘇氨酸需求的飲食喂養(yǎng)的粘蛋白合成速率沒有增加。
這些結(jié)果表明，如果飲食中未能包括生長所需的蘇氨酸需求，那么粘蛋白的合成速率降低。因而，飲食中蘇氨酸的含量對大鼠的生長及體內(nèi)粘蛋白的合成均會產(chǎn)生作用。這證實了當(dāng)飲食中缺少蘇氨酸時，生長和粘蛋白的合成均會受到影響。因此，如果飲食不能充分地提供蘇氨酸需求，那么補充蘇氨酸會是一種有效的營養(yǎng)策略，其可增加或恢復(fù)粘蛋白的合成速率，從而確保一種更好的上皮細胞保護。
應(yīng)當(dāng)理解，對此處所述優(yōu)選實施方案進行的各種改變和變化對于本領(lǐng)域的那些技術(shù)人員來說是顯而易見的。這種改變和變化可在不背離本發(fā)明精神和范圍，且不會減少其有益之處的情況下進行。因此，所有這種改變和變化均可由附加的權(quán)利要求來包括。
權(quán)利要求
1.含氨基酸的蛋白源在制備治療特征在于患者粘蛋白水平改變的疾病狀況的營養(yǎng)組合物中的用途，其中所述氨基酸至少含5.5重量％的蘇氨酸。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用途，其中所述氨基酸至少含6重量％的蘇氨酸。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用途，其中所述蛋白源含有甜乳清蛋白。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的用途，其中所述甜乳清蛋白被水解。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用途，其中所述營養(yǎng)組合物還包括一種脂源和一種碳水化合物源。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的用途，其中所述脂源含有一種中鏈甘油三酯和長鏈甘油三酯的混合物。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的用途，其中所述脂源大約含有30重量％-80重量％的中鏈甘油三酯。
8.含氨基酸的蛋白源在制備維持患者粘蛋白合成的營養(yǎng)組合物中的用途，其中所述氨基酸至少含5.5重量％的蘇氨酸。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的用途，其中所述蛋白源含有甜乳清蛋白。
10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的用途，其中所述甜乳清蛋白被水解。
11.根據(jù)權(quán)利要求8所述的用途，其中所述營養(yǎng)組合物還包括一種脂源和一種碳水化合物源。
12.根據(jù)權(quán)利要求11所述的用途，其中所述脂源含有一種中鏈甘油三酯和長鏈甘油三酯的混合物。
13.根據(jù)權(quán)利要求12所述的用途，其中所述脂源大約含有30重量％-80重量％的中鏈甘油三酯。
14.一種維持患者粘蛋白合成的方法，該方法包括腸內(nèi)給予患者一種營養(yǎng)組合物，其包括一種含治療有效量蘇氨酸的蛋白源，一種碳水化合物源和一種含中鏈甘油三酯和長鏈甘油三酯混合物的脂源。
15.根據(jù)權(quán)利要求14所述的方法，其中所述蛋白源中的氨基酸至少含5.5重量％的蘇氨酸。
16.根據(jù)權(quán)利要求14所述的方法，其中所述蛋白源含有甜乳清蛋白。
17.根據(jù)權(quán)利要求14所述的方法，其中所述甜乳清蛋白被水解。
18根據(jù)權(quán)利要求14所述的方法，其中所述脂源大約含有30重量％-80重量％的中鏈甘油三酯。
19.根據(jù)權(quán)利要求14所述的方法，其中所述蛋白源提供大約10％-20％的營養(yǎng)組合物能量。
20.一種用于治療特征在于患者粘蛋白水平改變的疾病狀況的營養(yǎng)組合物，其含有一種含氨基酸的蛋白源，其中所述氨基酸至少含74重量％的蘇氨酸。
21.根據(jù)權(quán)利要求20所述的組合物，其中所述氨基酸至少含14重量％的蘇氨酸。
22.根據(jù)權(quán)利要求20所述的組合物，其中所述蛋白源含有一種甜乳清蛋白。
23.根據(jù)權(quán)利要求20所述的組合物，其中所述蛋白源含有一種酪蛋白-糖-巨肽。
24.一種維持患者粘蛋白合成的方法，該方法包括腸內(nèi)給予患者一種營養(yǎng)組合物，其含有一種含氨基酸的蛋白源，其中所述氨基酸至少含7.4重量％的蘇氨酸。
25.根據(jù)權(quán)利要求24所述的方法，其中所述氨基酸至少含14重量％的蘇氨酸。
26.根據(jù)權(quán)利要求24所述的方法，其中所述蛋白源含有一種甜乳清蛋白。
27.根據(jù)權(quán)利要求24所述的方法，其中所述蛋白源含有一種酪蛋白-糖-巨肽。
28.一種增加粘蛋白合成的方法，該方法包括將治療有效量的蘇氨酸加入到飲食中，并將飲食補充給患者。
29.根據(jù)權(quán)利要求28所述的方法，其中蘇氨酸的量至少為0.2mM。
30.根據(jù)權(quán)利要求28所述的方法，其中蘇氨酸的量至少為0.8mM。
31.根據(jù)權(quán)利要求22所述的方法，其中蘇氨酸的量約為0.2mM-0.8mM。
32.一種增加患者粘蛋白合成的方法，該方法包括給予患者一種營養(yǎng)組合物，其含有一種含蘇氨酸的蛋白源，其中蘇氨酸的量至少為蘇氨酸每日推薦量的30％。
33.根據(jù)權(quán)利要求32所述的方法，其中蘇氨酸的量至少為蘇氨酸每日推薦量的60％。
34.根據(jù)權(quán)利要求32所述的方法，其中蘇氨酸的量至少為蘇氨酸每日推薦量的100％。
35.治療有效量的蘇氨酸在制備治療患者腸道炎癥的組合物中的用途。
36.根據(jù)權(quán)利要求35所述的用途，其中所述蘇氨酸是以營養(yǎng)補充物的形式提供的。
37.根據(jù)權(quán)利要求36所述的用途，其中所述營養(yǎng)補充物至少含0.2mM蘇氨酸。
38.根據(jù)權(quán)利要求36所述的用途，其中所述營養(yǎng)補充物包括一種含氨基酸的蛋白源，且其中蘇氨酸至少占所述氨基酸重量的5.5％。
39.根據(jù)權(quán)利要求36所述的用途，其中所述營養(yǎng)補充物含有一種甜乳清蛋白。
40.治療有效量的蘇氨酸在制備治療患者腸道細菌感染的營養(yǎng)組合物中的用途。
41.根據(jù)權(quán)利要求40所述的用途，其中所述蘇氨酸是以營養(yǎng)補充物的形式提供的。
42.根據(jù)權(quán)利要求41所述的用途，其中所述營養(yǎng)補充物至少含有0.2mM蘇氨酸。
43.根據(jù)權(quán)利要求41所述的用途，其中所述營養(yǎng)補充物包括一種含氨基酸的蛋白源，且其中蘇氨酸至少占所述氨基酸重量的5.5％。
44.根據(jù)權(quán)利要求41所述的用途，其中所述營養(yǎng)補充物含有一種甜乳清蛋白。
45.治療有效量的蘇氨酸在制備用于減少由急性腸道炎癥導(dǎo)致的氧化應(yīng)激反應(yīng)的組合物中的用途。
46.根據(jù)權(quán)利要求45所述的用途，其中所述蘇氨酸是營養(yǎng)組合物的一部分。
47.根據(jù)權(quán)利要求46所述的用途，其中所述營養(yǎng)組合物至少含有0.2mM蘇氨酸。
48.根據(jù)權(quán)利要求46所述的用途，其中所述營養(yǎng)組合物包括一種含氨基酸的蛋白源，且其中蘇氨酸至少占所述氨基酸重量的5.5％。
49.根據(jù)權(quán)利要求48所述的用途，其中所述營養(yǎng)組合物含有一種甜乳清蛋白。
全文摘要
本發(fā)明提供通過給予營養(yǎng)組合物或補充物來維持，改善或增加粘蛋白合成的方法，其中該營養(yǎng)組合物或補充物含有治療有效量的蘇氨酸。此外，本發(fā)明還提供了用于治療各種特征在于粘蛋白水平改變的疾病狀況，如腸道炎癥和細菌感染或其它類似疾病狀況的方法。
文檔編號A23L1/305GK1434681SQ01807437
公開日2003年8月6日 申請日期2001年1月31日 優(yōu)先權(quán)日2000年2月4日
發(fā)明者O·巴勒夫雷, P·-A·菲諾特, D·布勒伊勒 申請人:雀巢制品公司