專利名稱：人血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子與顆粒酶b融合蛋白的純化及應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
生物醫(yī)藥基因工程抗血管生成藥物細(xì)胞免疫室機(jī)體抗腫瘤、抗病毒免疫的主要形式。顆粒酶B(granzyme B，GraB)是細(xì)胞毒T淋巴細(xì)胞(CTL)和自然殺傷細(xì)胞(NK)等免疫細(xì)胞發(fā)揮細(xì)胞毒作用的主要效應(yīng)分子，具有誘導(dǎo)靶細(xì)胞凋亡及裂解作用。殺傷細(xì)胞識(shí)別靶細(xì)胞后，釋放其特有的殺傷顆粒，其中含有GraB。GraB在穿孔素的協(xié)助下進(jìn)入靶細(xì)胞內(nèi)，通過多條途徑誘導(dǎo)靶細(xì)胞凋亡。一方面，它激活凋亡蛋白CPP32酶原成為有活性的CASPASE 3，啟動(dòng)一系列蛋白酶級(jí)聯(lián)水解反應(yīng)；另一方面，它直接進(jìn)入細(xì)胞核內(nèi)，激活多聚ADP核糖多聚酶(PARP)，凋亡核酸酶復(fù)合體CAD/ICAD等使細(xì)胞基因組DNA斷裂；此外，它還激活其他的caspase，誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。

發(fā)明內(nèi)容
用基因重組技術(shù)對(duì)血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)2-5外顯子與顆粒酶B(GraB)基因進(jìn)行重組，使VEGF2-5與GraB連接形成融合基因，原核分泌型表達(dá)系統(tǒng)表達(dá)重組VEGF-GraB融合蛋白，金屬親和層析法純化重組蛋白，獲得具有通過VEGF2-5與VEGFR的特異性結(jié)合，引導(dǎo)GraB靶向性地作用于新生血管內(nèi)皮細(xì)胞的基因重組特異性抗血管生成藥物。
重組VEGF-GraB融合蛋白模擬了生理性的細(xì)胞免疫機(jī)制，不必活化免疫細(xì)胞而直接提高機(jī)體的細(xì)胞免疫水平。它直接抑制和破壞新生的血管，只要有VEGFR存在，就能被重組蛋白識(shí)別，作用效率高。通過破壞新生的血管，能在腫瘤組織周邊形成一層隔離帶，抑制腫瘤的生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移。
權(quán)利要求
1.一種抗血管生成新藥，將血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)2-5外顯子與顆粒酶B(GraB)基因進(jìn)行重組融合，用原核或真核細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)表達(dá)重組VEGF-GraB融合蛋白，獲得特異性抗血管生成基因工程藥物。
2.對(duì)血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)2-5外顯子與顆粒酶B(GraB)基因進(jìn)行部分增減后，表達(dá)并純化融合蛋白及其應(yīng)用技術(shù)。
3.讓顆粒酶B(GraB)與其他基因進(jìn)行重組融合，用原核或真核細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)表達(dá)重組融合蛋白的技術(shù)。
4.重組GraB蛋白在其他治療方法的應(yīng)用技術(shù)。
全文摘要
采用基因重組技術(shù)對(duì)血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)
文檔編號(hào)C12N15/63GK1465702SQ0212458
公開日2004年1月7日 申請(qǐng)日期2002年6月21日 優(yōu)先權(quán)日2002年6月21日
發(fā)明者曾位森 申請(qǐng)人:曾位森