專利名稱：苷肽組合物、其制備方法和應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及營養(yǎng)品領(lǐng)域，具體涉及含核苷酸和多肽的營養(yǎng)品及其制備方法和應(yīng)用。
背景技術(shù)：
現(xiàn)代醫(yī)學(xué)認(rèn)為，眾多慢性病是細(xì)胞功能異常、代謝低下導(dǎo)致的一系列功能性障礙。傳統(tǒng)的中西醫(yī)藥大多是不能被機(jī)體徹底分解的化學(xué)物質(zhì)，它們只能調(diào)控一步或幾步生化反應(yīng)，而不能解決一系列生物化學(xué)問題，有些對(duì)肝、腎具有毒副作用或累積損害。因此，需要用全新的觀念來增進(jìn)健康，促進(jìn)慢性病患者的康復(fù)。
近年來，動(dòng)物試驗(yàn)和臨床試驗(yàn)日趨表明，核酸在特定的生理?xiàng)l件下是不可缺少的營養(yǎng)成分，具有如下作用促進(jìn)營養(yǎng)素的利用，利于肝臟再生和受損小腸恢復(fù)功能，抗氧化，抗疲勞，增強(qiáng)機(jī)體免疫力和對(duì)寒暑的抵抗力(佟曉永等，核苷酸營養(yǎng)及其對(duì)免疫的影響，中華預(yù)防醫(yī)學(xué)雜志，1999，33(3)180-181)。大量資料證明，每天從外界攝取1500mg核酸，可預(yù)防疾病，延緩衰老，使機(jī)體處于良好的“自然治愈狀態(tài)”(常敏毅，具有生命力的核酸療法，中國醫(yī)藥報(bào)，1994，113)。但是，單純攝入核酸，因其分子量大而不易被機(jī)體吸收，因此可補(bǔ)充核苷酸作為合成核酸的原料。
細(xì)胞活性多肽是細(xì)胞產(chǎn)生的各種具有生理活性的多肽類物質(zhì)。其中，臨床使用的轉(zhuǎn)移因子是致敏T淋巴細(xì)胞再次遇到抗原后釋放的一種小分子免疫調(diào)節(jié)劑。它可激發(fā)其它非淋巴細(xì)胞發(fā)揮免疫作用(何勤國等，人淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)移因子對(duì)銀屑病患者自然殺傷細(xì)胞活性的影響，皮膚病與性病，199719(3)2-4)，誘導(dǎo)淋巴細(xì)胞釋放干擾素，促進(jìn)機(jī)體抗感染的防御機(jī)能，臨床上除了作為免疫增強(qiáng)劑用于治療免疫缺陷病和自身免疫性疾病，還可應(yīng)用于各種病原體引起的感染性疾病，如治療乙型肝炎和肝硬化(霍保來主編《轉(zhuǎn)移因子與臨床應(yīng)用》，中國科技出版社，第1版，1990278)，小兒反復(fù)呼吸道感染(鄭明平等，鋅、轉(zhuǎn)移因子治療兒童反復(fù)呼吸道感染的臨床和免疫功能研究，現(xiàn)代診斷與治療，1998，9(4)214-215)，腫瘤疾病(樓躍飛等，轉(zhuǎn)移因子與免疫核糖核酸對(duì)LAK細(xì)胞抗腫瘤活性的影響，上海免疫學(xué)雜志，1995，15(1)14-17)等。
核苷酸、細(xì)胞活性多肽是機(jī)體內(nèi)天然存在的化學(xué)物質(zhì)，對(duì)機(jī)體不產(chǎn)生毒性，如果解決了產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)的問題，可望成為新一代的營養(yǎng)保健品。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的一個(gè)目的是提供一種苷肽組合物。
本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供苷肽組合物的制備方法。
本發(fā)明的再一個(gè)目的是提供苷肽組合物的應(yīng)用。
本發(fā)明所提供的苷肽組合物包含核苷酸和細(xì)胞活性多肽，其比例為1∶99-99∶1。
本發(fā)明的苷肽組合物中，所述核苷酸由微生物(較佳為HB202酵母菌)制得，所述細(xì)胞活性多肽由動(dòng)物臟腑(較佳為脾)制得，細(xì)胞活性多肽較佳為轉(zhuǎn)移因子。根據(jù)需要，本發(fā)明的苷肽組合物中還包含多種必需氨基酸。
本發(fā)明所提供的苷肽組合物的制備方法包括如下步驟(1)核苷酸的制備將選定的微生物菌種經(jīng)液體培養(yǎng)后作發(fā)酵培養(yǎng)，發(fā)酵物用堿抽提后進(jìn)行核酸酶水解；(2)細(xì)胞活性多肽的制備將動(dòng)物臟腑破碎、制成勻漿后用蛋白酶水解，熱處理，上清液經(jīng)過濾、透析后冷凍濃縮；(3)將(1)所得水解液和(2)所得濃縮液混合。
上述步驟(1)中的酶解采用核酸酶，步驟(2)的酶解采用膠蛋白酶。
上述步驟(3)還可以是在將混合液與玉米淀粉均勻混合后干燥，或分別將(1)所得水解液和(2)所得濃縮液干燥后混合。
本發(fā)明還提供苷肽組合物作為營養(yǎng)保健品的應(yīng)用。
本發(fā)明的苷肽組合物能營養(yǎng)和修復(fù)細(xì)胞，促進(jìn)細(xì)胞代謝，清除自由基，有利于各種疾病的預(yù)防和康復(fù)。用本發(fā)明的苷肽組合物制備方法可進(jìn)行產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)，滿足日益增進(jìn)的市場需求。
具體實(shí)施例方式
下面結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步闡述，但這些實(shí)施例絕不是對(duì)本發(fā)明的任何限制。
實(shí)施例1 核苷酸的制備1.培養(yǎng)和分離將法國HB202高效酵母菌種接種于50ml LB培養(yǎng)基，培養(yǎng)3天后作500ml擴(kuò)增培養(yǎng)，再用雪花10萬毫升發(fā)酵罐作大容量發(fā)酵培養(yǎng)，然后將發(fā)酵物離心、真空干燥，得干粉2kg。
2.堿抽提在干粉中加入1％ NaOH 2萬毫升，充分?jǐn)嚢瑁?小時(shí)后用6N HCl調(diào)節(jié)pH至中性。
3.虹吸離心將步驟2中和后的堿抽提液于90℃加熱10分鐘，冷卻后虹吸上清液，剩余物離心(3000轉(zhuǎn)/分)，取上清液，用0.22μm膜過濾。
4.酶解在步驟3的濾液中加入核酸酶水解6小時(shí)，使核酸水解成核苷酸。
5.濃縮冷卻干燥，濃縮，得干粉200g。
實(shí)施例2 轉(zhuǎn)移因子的制備1.原料處理新鮮的小豬脾于-20℃保存，用時(shí)取1kg脾加無菌蒸餾水清洗干凈，切成小塊。
2.細(xì)胞破碎在脾碎塊中加入蒸餾水2000ml，用組織勻漿機(jī)于1000轉(zhuǎn)/分(或球磨機(jī)磨6小時(shí))進(jìn)行細(xì)胞粉碎，鏡檢觀察細(xì)胞粉碎是否完全。
3.水解離心將組織勻漿按10U/ml加膠蛋白酶進(jìn)行水解，6小時(shí)后加6N HCl終止反應(yīng)，反應(yīng)液于90℃加熱攪拌20分鐘，冷卻至室溫后離心。
4.過濾透析取上清液，用濾紙、0.45μm膜、0.22μm膜相繼過濾，裝入10000D透析袋于2倍無菌水中透析24小時(shí)。
5.濃縮過濾透析后，加20％ NaOH調(diào)節(jié)pH至中性，冷凍濃縮10倍。
實(shí)施例3 苷肽組合物的制備將實(shí)施例1所得的核苷酸和實(shí)施例2所得的轉(zhuǎn)移因子按1∶1的比例混合，加入優(yōu)質(zhì)玉米淀粉，混合物經(jīng)超微均質(zhì)化后，于100℃干燥滅菌2小時(shí)。
實(shí)施例4 膠囊劑的制備按常規(guī)方法裝填膠囊，每粒膠囊含100mg核苷酸、100mg轉(zhuǎn)移因子，以及藥學(xué)上可接受的載體。膠囊經(jīng)含量檢測后包裝入庫。
實(shí)施例5 苷肽組合物的檢測一.感官指標(biāo)檢查項(xiàng)目 檢查結(jié)果色澤 白色氣味 無味組織狀態(tài) 粉末雜質(zhì) 無二. 理化指標(biāo)檢查項(xiàng)目 檢查結(jié)果水分 5.80鉛(以Pb計(jì))，mg/kg0.80砷(以As計(jì))，mg/kg0.14汞(以Hg計(jì))，mg/kg0.007pH 6-7核苷酸含量(紫外法) 100mg/kg轉(zhuǎn)移因子含量 100mg/kg三.微生物指標(biāo)檢查項(xiàng)目 檢查結(jié)果菌落總數(shù) ＜10大腸桿菌 ＜30霉菌 ＜10酵母菌 ＜10沙門氏菌 未檢出志賀氏菌 未檢出金黃色葡萄球菌 未檢出乙型溶血性鏈球菌 未檢出四.氨及氨基酸含量(用氨基酸測定儀測定)檢查項(xiàng)目 檢查結(jié)果(mg/kg)天冬氨酸(Asp) 353絲氨酸(Ser)2226脯氨酸(Pro)2065丙氨酸(Ala)3207纈氨酸(Val)2758異亮氨酸(Ile) 1629酪氨酸(Tyr)424組氨酸(His)898氨 607色氨酸(Trp)1680蘇氨酸(Thr)888谷氨酸(Glu)10862甘氨酸(Gly)2579胱氨酸(Cys)1001蛋氨酸(Met)797亮氨酸(Leu)2929苯丙氨酸(Phe) 1889賴氨酸(Lys)2867精氨酸(Arg)2175實(shí)施例6苷肽組合物治療例苷肽組合物膠囊一般的服用量是成人每次2-3粒，每天2-3次。首次最好空腹服用，有失眠、嗜睡、記憶力減退、疲勞綜合癥及腦力勞動(dòng)者以晚飯后服用為佳，糖尿病、消化系統(tǒng)疾病等以早飯前服用為佳。
病例一 華姓90歲老翁，冠心病，24小時(shí)動(dòng)態(tài)心電圖檢測早博達(dá)5900多次，雙束枝傳導(dǎo)阻滯，在穩(wěn)定出院后開始服用苷肽膠囊，第一周每天兩次，每次2粒，第二周每次增加一粒，第三周每次再增加一粒。一個(gè)月后早博消失，胸悶好轉(zhuǎn)，三個(gè)月后血脂正常，半年后糖尿病好轉(zhuǎn)，十個(gè)月后腦血管硬化、頭昏癥狀明顯減輕，一年半后，24小時(shí)動(dòng)態(tài)心電圖為偶見早博。
病例二 上海楊浦區(qū)陳女士，服用苷肽膠囊期間作了三次心血管功能檢查，結(jié)果如下檢查日期 服用苷肽檢查項(xiàng)目異常項(xiàng)目分析判斷結(jié)論2001.11.2服用前 48 30 動(dòng)脈硬化2002.1.23服2個(gè)月 48 22 心血管功能大致正常2002.4.11服5個(gè)月 48 14 心血管功能正?；颊咦栽V頭昏、失眠等自覺癥狀也緩解了。
病例三上海靜安區(qū)華醫(yī)師，因胰腺炎曾三次下病危通知，94年手術(shù)根治，但需終身服藥以防膽汁返流并防止功能、感染。作為醫(yī)師，當(dāng)然知道“凡藥三分毒”，于是堅(jiān)持用自然療法—細(xì)胞代謝療法和反射療法，幾年來根本沒有服藥。服用苷肽一年后，頭發(fā)開始由白變黑，老年斑由深變淺，頸部血管由硬變軟，精力更加充沛。
病例四 上海盧灣區(qū)管藥師，糖尿病患者，其老戰(zhàn)友老沈更是30年的糖尿病患者，二人同時(shí)服用苷肽，管藥師的糖尿病很快穩(wěn)定，血糖在6mmol/L左右，雖然老沈因病史長見效稍慢些，但服用后血糖穩(wěn)定在12mmol/L不再上升，6個(gè)月后血糖穩(wěn)定在10mmol/L，10個(gè)月后又下降到8.5mmol/L，仍繼續(xù)服用。
病例五 寧波俞先生，患乙型肝炎4年，大三陽，血清轉(zhuǎn)氨酶時(shí)好時(shí)壞，雙脅疼痛，全身乏力，精神不振，服用苷肽每天4粒，一周后精神明顯好轉(zhuǎn)，疲勞感消失，三周后雙脅疼痛消失，e抗原消失，肝功能恢復(fù)正常。
以上的實(shí)施例僅僅是舉例說明本發(fā)明苷肽組合物的制備方法和臨床個(gè)例，本領(lǐng)域的技術(shù)人員可以對(duì)苷肽的制備和使用方法作出種種修改和變化，而不背離本發(fā)明的精神和范圍，所附的權(quán)利要求書覆蓋本發(fā)明范圍內(nèi)的所有這些修改。
權(quán)利要求
1.苷肽組合物，包含核苷酸和細(xì)胞活性多肽，其比例為1∶99-99∶1。
2.如權(quán)利要求1所述的苷肽組合物，其中所述核苷酸由微生物制得，所述細(xì)胞活性多肽由動(dòng)物臟腑制得。
3.如權(quán)利要求2所述的苷肽組合物，其中所述核苷酸由HB202酵母菌制得，所述細(xì)胞活性多肽由動(dòng)物脾制得。
4.如權(quán)利要求1所述的苷肽組合物，其中所述細(xì)胞活性多肽為轉(zhuǎn)移因子。
5.如權(quán)利要求1所述的苷肽組合物，其中還包含多種必需氨基酸。
6.如權(quán)利要求1所述苷肽組合物的制備方法，其特征在于包括以下步驟(1)核苷酸的制備將選定的微生物菌種經(jīng)液體培養(yǎng)后作發(fā)酵培養(yǎng)，發(fā)酵物用堿抽提后進(jìn)行核酸酶水解；(2)細(xì)胞活性多肽的制備將動(dòng)物臟腑破碎、制成勻漿后用蛋白酶水解，熱處理，上清液經(jīng)過濾、透析后冷凍濃縮；將(1)所得水解液和(2)所得濃縮液混合。
7.如權(quán)利要求6所述的苷肽組合物的制備方法，其中，步驟(1)的酶解采用核酸酶。
8.如權(quán)利要求6所述的苷肽組合物的制備方法，其中，步驟(2)的酶解采用膠蛋白酶。
9.如權(quán)利要求6所述的苷肽組合物的制備方法，其中，步驟(3)還包括在將混合液與玉米淀粉均勻混合后干燥，或步驟(3)為分別將(1)所得水解液和(2)所得濃縮液干燥后混合。
10.如權(quán)利要求1所述苷肽組合物作為營養(yǎng)保健品的應(yīng)用。
11.如權(quán)利要求10所述苷肽組合物的應(yīng)用，其中所述營養(yǎng)保健品是膠囊劑。
全文摘要
本發(fā)明提供一種苷肽組合物，包含核苷酸和細(xì)胞活性多肽，其比例為1∶99－99∶1。本發(fā)明苷肽組合物的制備方法包括將微生物菌種經(jīng)液體培養(yǎng)后作發(fā)酵培養(yǎng)，發(fā)酵物用堿抽提后進(jìn)行核酸酶水解制成核苷酸；將動(dòng)物臟腑破碎、勻漿后用蛋白酶水解，熱處理，上清液經(jīng)過濾、透析后冷凍濃縮，制成細(xì)胞活性多肽；二者按一定比例混合。本發(fā)明的苷肽組合物能營養(yǎng)和修復(fù)細(xì)胞，促進(jìn)細(xì)胞代謝，清除自由基，有利于各種疾病的預(yù)防和康復(fù)。用本發(fā)明的苷肽組合物制備方法可進(jìn)行產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)，滿足日益增進(jìn)的市場需求。
文檔編號(hào)C12P19/30GK1471847SQ02136360
公開日2004年2月4日 申請(qǐng)日期2002年8月2日 優(yōu)先權(quán)日2002年8月2日
發(fā)明者張 成, 張 成 申請(qǐng)人:上海大成偉業(yè)科技發(fā)展有限公司