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      酶處理提取黃芪多糖的制作方法

      文檔序號:532972閱讀:1049來源:國知局
      專利名稱:酶處理提取黃芪多糖的制作方法
      技術(shù)領(lǐng)域
      本發(fā)明涉及一種利用酶處理提取黃芪中多糖的方法。
      背景技術(shù)
      黃芪(Radix Astragali)是豆科植物蒙古黃芪Astragalus membranaceus(Fisch)Bge.Var.mongholicus(Bge)Hsiao.或膜莢黃芪A.membranaceus(Fisch)Bge.的干燥根,屬補(bǔ)益藥。黃芪多糖為黃芪的主要成分之一,有廣泛的藥理作用。
      傳統(tǒng)的黃芪多糖提取方法主要是直接水提或脫脂后水提取,黃芪的藥用部位為根,其中纖維素、半纖維素及木質(zhì)素都較多,提取過程中對有效成分的釋放有較大阻礙作用,因此提取率偏低。超聲波法或微波法等較新的提取方法雖對提高提取率有一定效果,但對設(shè)備要求較高,實(shí)施有一定難度。酸或堿浸提法雖能提高提取率,但酸能破壞多糖的苷鍵而形成較多的單糖和低聚糖,降低黃芪多糖含量。用稀堿提取也會對多糖結(jié)構(gòu)造成破壞。另外,酸、堿浸提后需經(jīng)中和,程序繁瑣。
      中國專利CN 1110717A“酶法提取香菇中多糖蛋白及制造多糖蛋白膠囊的技術(shù)”中提及了復(fù)合酶提取香菇中多糖蛋白的技術(shù);CN1144847A“酶處理提取中藥材中皂甙成分的方法”中提及了酶法提取人參皂甙。但尚未見到酶處理提取黃芪多糖的報道。

      發(fā)明內(nèi)容
      本發(fā)明要解決的技術(shù)問題是提供一種利用酶處理提取黃芪多糖的方法。該方法可提高黃芪多糖提取率,而不破壞黃芪多糖結(jié)構(gòu)。
      本發(fā)明提供了用酶處理黃芪原料,然后提取黃芪多糖的方法。由于黃芪多糖多為α-1,4連接,而結(jié)構(gòu)多糖中β-糖苷鍵較為多見,本發(fā)明所選用的酶不破壞功能性黃芪多糖而能破壞黃芪原料中結(jié)構(gòu)多糖。
      所述酶為下列酶中一種或幾種的組合纖維素酶、半纖維素酶、蛋白酶、果膠酶、糖化酶。
      其中所述酶優(yōu)選是纖維素酶、半纖維素酶、蛋白酶。
      所述蛋白酶優(yōu)選是可水解植物蛋白的酶,如木瓜蛋白酶。
      本發(fā)明的提取工藝包括脫脂、酶處理、浸提、醇沉、干燥和粉碎等步驟,具體操作如下1、脫脂將黃芪原料經(jīng)乙醇等有機(jī)溶劑回流脫脂,過濾,濾渣揮干溶劑后備用。
      2、酶處理將步驟1所得濾渣浸泡于添加了酶制劑的水溶液中0.5~2小時,根據(jù)所選用酶制劑的適宜條件選擇pH值和溫度。
      3、提取加熱上述混合物,過濾,收集濾液,為黃芪多糖提取液。將所得濾渣重復(fù)步驟2~3處理過程。
      4、醇沉合并上述黃芪多糖提取液,加入乙醇調(diào)節(jié),沉淀出黃芪多糖固體。干燥該固體,粉碎,得到黃芪多糖粗品。
      酶處理提取黃芪多糖的過程主要由兩個階段組成。第一階段即上述步驟2的主要作用是酶解細(xì)胞表面結(jié)構(gòu)及胞間連接物,并伴有部分糖類物質(zhì)溶出。第二階段即上述步驟3通過提高溫度后,既具有滅酶作用,同時使可溶于熱水的胞內(nèi)物浸出率增加。
      本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)是提高提取率而不破壞黃芪多糖結(jié)構(gòu),可使多糖的提取率比不采用酶處理技術(shù)提高20~50%以上,還可以提高多糖的含量。
      相比于傳統(tǒng)的酸、堿浸提法及熱水浸提法,酶處理提取多糖具有條件溫和、易除去雜質(zhì)、能保持黃芪多糖活性的優(yōu)點(diǎn)。
      蛋白酶的應(yīng)用不僅可以分解黃芪中的蛋白質(zhì)為肽或氨基酸還可以加速植物組織結(jié)構(gòu)崩解,使其它酶的效力發(fā)揮更好。
      本發(fā)明也適用于所有植物來源多糖類有效成分的提取,同時也可提高其它可溶性物質(zhì)(如皂甙,黃酮等)的提取率。
      具體實(shí)施例方式
      下面結(jié)合實(shí)施例進(jìn)一步說明本發(fā)明,但實(shí)施例僅用于說明并不能限制本實(shí)施例1A脫脂將黃芪粗粉1Kg,加入6升乙醇,回流提取1.5小時,過濾收集濾渣。
      B酶處理將上述濾渣揮干溶劑備用,加2g半纖維素酶(由鏈霉菌-卷須鏈霉菌(Streptomyces cirratus)自制,制備方法見下述)于8升水中,調(diào)pH值到5.5,與濾渣混勻。50~60℃保溫、攪拌2小時。
      C將上述混合物加熱至微沸,提取2小時,過濾,濾液為多糖提取液A。濾渣備用。
      D將步驟C所得濾渣加水6升,微沸提取1小時,過濾,濾液為多糖提取液B。
      E合并步驟C和步驟D得到的多糖提取液A和B,減壓濃縮,加乙醇調(diào)節(jié)醇濃度為60~70%,放置過夜,將沉淀干燥,粉碎得黃芪多糖粗品109g,分光光度法測定多糖含量(苯酚-硫酸法)為26%。與不使用酶處理的對照組相比得率提高36%,含量提高40%。
      上述半纖維素酶的制備方法如下1)培養(yǎng)基成分及含量平面和斜面培養(yǎng)基玉米芯木聚糖1.4% 蛋白胨0.1% 酵母提取物0.1%KH2PO4 0.1% MgSO4·H2O 0.05% 瓊脂1.2% pH 5.7液體發(fā)酵培養(yǎng)基玉米芯木聚糖1.0%~2.0% 蛋白胨1.4% 酵母提取物.03%KH2PO4 1% MgSO4·H2O 0.05%2)制備過程將鏈霉菌菌株從保存培養(yǎng)基即斜面培養(yǎng)基上接種到平面培養(yǎng)基上,在30℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)5天,挑選生長態(tài)勢較好的菌株1~2環(huán)接種到液體發(fā)酵培養(yǎng)基中。液體發(fā)酵培養(yǎng)條件是在250ml的三角瓶中裝入50ml的液體培養(yǎng)基,以140轉(zhuǎn)/分的速度,30℃的空氣恒溫?fù)u床。在空氣恒溫?fù)u床中培養(yǎng)5天后,將發(fā)酵酶液用冷凍離心機(jī)以8000轉(zhuǎn)/分離心10分鐘,收集上清夜;將上清夜在冰水浴中透析12小時,每4小時換一次水;然后收集透析袋內(nèi)液體便得到粗酶液。
      實(shí)施例2A脫脂將黃芪粗粉1Kg,加入4升乙醇,回流提取1小時,過濾收集濾渣。
      B酶處理將上述濾渣揮干溶劑備用,加2g木瓜蛋白酶(Papain酶學(xué)編號EC 3.4.22.2)于8升水中,調(diào)pH值到6.7,與濾渣混勻。60~70℃保溫、攪拌1小時。
      C將上述混合物加熱至微沸,提取1.5小時,過濾,濾液為多糖提取液A。濾渣備用。
      D將步驟C所得濾渣加水4升,加市售纖維素酶(來自黑曲霉)和半纖維素酶(由鏈霉菌-卷須鏈霉菌(Streptomyces cirratus)制備,方法同實(shí)施例1)各0.5g,調(diào)pH值到5.5,50~60℃保溫、攪拌1小時。微沸提取1小時,過濾,濾液為多糖提取液B。
      E、合并步驟C和步驟D得到的多糖提取液A和B,減壓濃縮,加乙醇調(diào)節(jié)醇濃度為70~80%,放置過夜,將沉淀干燥,粉碎得黃芪多糖粗品113g,分光光度法測定多糖含量(苯酚-硫酸法)為28%。與不使用酶處理的對照組相比得率提高43%,含量提高49%。
      權(quán)利要求
      1.一種利用酶處理提取黃芪多糖的方法,包括脫脂、酶處理、浸提、醇沉、干燥和粉碎步驟,具體操作如下1)脫脂將黃芪原料經(jīng)乙醇等有機(jī)溶劑回流脫脂,過濾,濾渣揮干溶劑后備用;2)酶處理將步驟1所得濾渣浸泡于添加了酶制劑的水溶液中0.5~2小時;3)提取加熱上述混合物,過濾,收集濾液,為黃芪多糖提取液;將所得濾渣重復(fù)步驟2~3處理過程;4)醇沉合并上述黃芪多糖提取液,加入乙醇調(diào)節(jié),沉淀出黃芪多糖固體;干燥該固體,粉碎,得到黃芪多糖粗品。
      2.權(quán)利要求1所述的提取黃芪多糖的方法,其中所述酶為下列酶中一種或幾種的組合纖維素酶、半纖維素酶、蛋白酶、果膠酶、糖化酶。
      3.權(quán)利要求1或2所述的提取黃芪多糖的方法,其中所述酶優(yōu)選是纖維素酶、半纖維素酶、蛋白酶。
      4.權(quán)利要求1或2所述的提取黃芪多糖的方法,其中所述蛋白酶優(yōu)選是可水解植物蛋白的酶,如木瓜蛋白酶。
      全文摘要
      本發(fā)明涉及一種利用酶處理提取黃芪多糖的方法。本發(fā)明選用的酶是纖維素酶、半纖維素酶、蛋白酶、果膠酶、糖化酶中的一種或幾種,可提高黃芪多糖提取率,而不破壞黃芪多糖結(jié)構(gòu)。本發(fā)明的提取工藝包括脫脂、酶處理、浸提、醇沉、干燥和粉碎等步驟,其優(yōu)點(diǎn)是提高提取率而不破壞黃芪多糖結(jié)構(gòu),還可以提高多糖的含量;酶處理提取多糖的方法條件溫和,能保持黃芪多糖天然產(chǎn)物的構(gòu)象,保持有效成份的活性,還易除去雜質(zhì)。
      文檔編號C12P19/04GK1510143SQ02158188
      公開日2004年7月7日 申請日期2002年12月24日 優(yōu)先權(quán)日2002年12月24日
      發(fā)明者閻巧娟, 韓魯佳, 汪正強(qiáng), 劉向陽, 劉依 申請人:中國農(nóng)業(yè)大學(xué)
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