專利名稱：類黃酮濃縮物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種從含有類黃酮苷和/或其復(fù)合物的原料中制備類黃酮苷元濃縮物的方法。更具體地說，本發(fā)明提供了一種使用含水溶劑由植物物質(zhì)生產(chǎn)富集類黃酮苷元的濃縮物的有效方法。
背景技術(shù)：
類黃酮是一類具有包括將其用作治療劑、抗菌劑和抗氧化劑在內(nèi)的廣泛應(yīng)用的植物化學(xué)物質(zhì)。它們能夠治療和/或預(yù)防一定范圍內(nèi)的醫(yī)學(xué)上的病癥和疾病，舉例來說包括諸如心臟病、阿爾茨海默病、癡呆和癌癥這樣的變性疾病。類黃酮的特征和特性充分公開在科學(xué)文獻(xiàn)中。
對‘天然’植物化學(xué)藥物的需求正在逐漸增加且這種需求在世界人口的平均年齡穩(wěn)步增加的同時也將進(jìn)一步增加。此外，占這些人口中年齡較輕的部分為治療或預(yù)防醫(yī)學(xué)上的疾病而正在轉(zhuǎn)向選擇天然藥物。此外，對不含有機溶劑殘余物、特別是那些以工業(yè)化方式合成的殘余物這樣的物質(zhì)和對使用以對環(huán)境影響最低的方式生產(chǎn)的產(chǎn)品存在強烈的需求。整個社會也認(rèn)為使用對環(huán)境影響最低的可生物降解的物質(zhì)和方法具有很高的價值。
類黃酮是一小組植物多酚類、即由15個碳原子基礎(chǔ)骨架組成的二環(huán)或三環(huán)結(jié)構(gòu)。植物類黃酮苷元(即不含連接的糖的類黃酮)以不同結(jié)構(gòu)形式出現(xiàn)。然而，所有結(jié)構(gòu)形式均在其母核上含有15個碳原子且它們按照C6-C3-C6構(gòu)型排列、即通過可以或不可以形成第三個環(huán)的3個碳單位連接的兩個芳香環(huán)。
類黃酮在飲食和藥物中的重要作用正在越來越得到重視。正是紅葡萄酒、綠茶、特級初榨橄欖油、大豆產(chǎn)品、水果和蔬菜、各種傳統(tǒng)的草藥藥茶和藥酒中的類黃酮至少部分導(dǎo)致因消耗它們而產(chǎn)生的有益作用。
價值得到充分確立的一組類黃酮是異黃酮類。異黃酮類具有一定的特征結(jié)構(gòu)并可形成特定的異構(gòu)型類黃酮。異黃酮類的有益作用是廣泛的，包括提示它們是導(dǎo)致東亞區(qū)一定人群中乳腺癌和前列腺(prostrate)癌發(fā)生率降低的傳統(tǒng)東方飲食中的要素。
盡管異黃酮類出現(xiàn)在其它科的植物中，但是它們絕大部分與豆科植物、特別是與豆科的蝶形花亞科極為相關(guān)，所述的蝶形花亞科包括許多眾所周知的諸如三葉草、豆類植物(pulses-beans)、大豆和豌豆這樣的飼料作物和諸如荊豆和金雀花這樣的灌木。
異黃酮類除對人和動物健康有益外，近來已經(jīng)證實它們在動物飼料工業(yè)上的應(yīng)用，其中給予補充了異黃酮類的飼料的豬表現(xiàn)出每日平均體重獲得增加、但攝入的飼料并沒有增加。豬的屠體肌肉的百分比也得到提高且每日估計的肌肉產(chǎn)生量較高。
盡管在一個完美的世界中我們都希望從精細(xì)選擇的食品、膳食和飲料中獲得足夠的這些化合物，但實際上尤其是對城市的勞動者來說，這通常恰恰是不可能的。因此，對可以便利和有效地用作飲食補充劑或治療劑的富含類黃酮的制品存在需要和需求。
用于從種子中生產(chǎn)含類黃酮的濃縮物的現(xiàn)有技術(shù)一般存在下列缺點(i)僅含相對地低水平的類黃酮和(ii)它們導(dǎo)致原料類黃酮丟失并需要復(fù)雜的多步驟的處理以從廢料中回收。
本發(fā)明尋求克服現(xiàn)有技術(shù)的缺陷并提供一種與現(xiàn)有技術(shù)方法相比以比較高的水平和產(chǎn)率獲得植物濃縮物中類黃酮的簡單而便利的方法。
本發(fā)明的公開本發(fā)明提供了一種從含有合適的類黃酮苷和/或其復(fù)合物的植物物質(zhì)生產(chǎn)類黃酮苷元濃縮物的方法，該方法包括下列步驟(i)以酶促方式將類黃酮苷或其復(fù)合物轉(zhuǎn)化成類黃酮苷元；和(ii)調(diào)節(jié)pH以使類黃酮苷元變得相對不溶并形成含有它們的濃縮物。
就本發(fā)明的目的而言，術(shù)語“類黃酮”是具有下列一般結(jié)構(gòu)式的任意植物多酚或其二聚體、三聚體或聚合物 用于本發(fā)明目的的特定類黃酮包括查耳酮類(chalcones)；二氫查耳酮類(dihydrochalones)；噢哢類；黃烷酮類；黃酮類；新類黃酮；兒茶素類；黃酮醇類；二氫黃酮醇類；原花色素類；黃烷類；黃烷-3-醇類和雙類黃酮；它們的各種甲氧基化和其它修飾形式，諸如復(fù)合物、諸如?；鶑?fù)合物，而更具體地說，用于本發(fā)明目的的特定類黃酮包括金合歡素、芹菜配基、貝加因、柯因、金圣草黃素、橡精、dihydrobinetin、二氫莰非醇、地奧亭、兒茶酸、表兒茶酸、圣草酚、非瑟酮、黃顏木素、高良姜精、橙皮素、異鼠季亭、莰非醇、藤黃菌素/木犀草素、桑色素、楊梅黃酮、柚配基、木蝴蝶素A、ponciretin、六羥黃酮、五羥黃酮、刺槐亭、黃芩配基、水飛薊素部分、水飛薊素、異水飛薊素、次水飛薊素、黃芩新素II、福桔黃素、沃貢寧；以及異黃酮類，諸如染料木堿、黃豆苷原、7-羥基-4’-甲氧異黃酮、鷹嘴豆素A、baptenin和紅車軸草素，它們具有下列一般結(jié)構(gòu)通式
這些植物物質(zhì)可以改變且優(yōu)選包括含有類黃酮苷和/或其復(fù)合物的植物或植物部位或其制備物。植物物質(zhì)特別包括葉；花瓣；萼片；花；葉柄；枝條；根；莖；種子；豆莢；塊莖；樹皮；形成層；木材；倍子；果實；蔬菜；草藥；細(xì)菌；藻類；蕨類植物；樹汁；樹脂；外皮，諸如葡萄、蘋果、洋蔥和鱷梨的外皮；皮，包括柑桔屬的皮；果實外皮；諸如蘋果的蘋果醬；果酒的果渣；谷物外皮；稻草；干草；來自橄欖、油菜籽或canola的含油種子餅；或其它含油作物的提取物。
優(yōu)選地，植物物質(zhì)是豆科植物種子原料諸如發(fā)芽或萌發(fā)種子，其包括在剛剛出根的預(yù)萌發(fā)階段到還可看到苗芽的階段的發(fā)芽種子。在這方面，已經(jīng)發(fā)現(xiàn)發(fā)芽或萌發(fā)的豆科植物種子可包含有意義的異黃酮水平，因為(i)種子的原始內(nèi)含物；和(ii)發(fā)芽后產(chǎn)生異黃酮。類黃酮的明顯合成一般直到發(fā)芽相對前進(jìn)時才進(jìn)行。在室溫下這常常要到至少第二天后。然而，相對于發(fā)芽后種子的重量的類黃酮水平在一段時間后(在室溫下通常少于10天)達(dá)到穩(wěn)定，且當(dāng)幼苗繼續(xù)發(fā)育成完整的成熟植物時在成長的植物中實際的異黃酮水平相對于其他成分諸如水溶性纖維，下降。
用于本發(fā)明目的的植物包括含有足夠水平的類黃酮苷和/或其復(fù)合物的任意植物，不過，特別優(yōu)選的植物是豆科植物，諸如大豆(例如大豆屬)，不包括未發(fā)芽的大豆種子；羽扇豆(例如羽扇豆屬，諸如白羽扇豆(L.albus)，L.angutifolius L luteus和L mutabilis)；鷹嘴豆(例如鷹嘴豆屬，諸如鷹嘴豆)；木豆(木豆屬)；白草香木犀(例如白草香木樨)；紫花苜?；蜍俎?例如紫苜蓿)；車軸草屬的種類。烹飪用云扁豆(菜豆屬和Lunatus)或烹調(diào)用豌豆(豌豆屬)也用作本發(fā)明的植物物質(zhì)。本領(lǐng)域技術(shù)人員不用過度的試驗和實驗將能夠識別和獲得用于本發(fā)明的其他天然植物物質(zhì)?？梢岳斫獾氖莵碜圆煌参锏奈镔|(zhì)的組合可以構(gòu)成用于本發(fā)明的植物物質(zhì)。
優(yōu)選地，用作本發(fā)明的植物物質(zhì)源的植物產(chǎn)生低水平的，甚至更優(yōu)選地非常低或不含，能破壞糖苷酶或苷元的內(nèi)生酶類。在這方面，很多植物產(chǎn)生能夠戲劇性地降低產(chǎn)率的多酚氧化酶或酪氨酸酶。可采用其他手段包括物理方法諸如加熱或化學(xué)藥品(例如焦亞硫酸鈉)以減少植物物質(zhì)中不必要的酶的效應(yīng)，不過，這些處理的時間選擇必須是使糖苷酶轉(zhuǎn)化成苷元的酶在轉(zhuǎn)化足夠的糖苷酶之前不是未活化的。
含在植物物質(zhì)中的類黃酮通常是以水溶性糖連接的苷的形式，并因此在常規(guī)產(chǎn)生提取物諸如蛋白質(zhì)濃縮物情況下抵抗?jié)饪s。然而，使用在細(xì)胞內(nèi)，但固定在獨立的細(xì)胞腔隙的內(nèi)生酶可以使所述類黃酮苷轉(zhuǎn)化成苷元。
因而，優(yōu)選使用含在植物物質(zhì)中的內(nèi)生酶實現(xiàn)酶轉(zhuǎn)化。當(dāng)使用內(nèi)生酶時，通過任何使細(xì)胞結(jié)構(gòu)破壞以允許該內(nèi)生酶來與苷底物接觸的方法，可使它們與苷開始接觸。
因而，本發(fā)明還提供了一種從含有合適的類黃酮苷和/或其復(fù)合物的植物物質(zhì)生產(chǎn)富集類黃酮濃縮物的方法，該方法包括下列步驟(i)使所述植物物質(zhì)的細(xì)胞結(jié)構(gòu)破壞以實現(xiàn)將類黃酮苷或其復(fù)合物酶轉(zhuǎn)化成類黃酮苷元；(ii)調(diào)節(jié)pH以使類黃酮苷元變得相對不溶并形成含有它們的濃縮物。
破壞細(xì)胞結(jié)構(gòu)的處理方法包括使細(xì)胞破碎的處理方法且是可變和對本領(lǐng)域技術(shù)人員而言是顯而易見的。它們包括諸如研磨、壓碎、搗擊或滾壓、冷凍和融化這樣的處理方法；諸如半纖維素酶或纖維素酶這樣的酶處理方法；超聲處理方法；干燥法；接觸紫外線；使用包括擠壓和密封分批施壓在內(nèi)的減壓或升壓的處理方法；微生物消化或青貯；接觸氧化性和其它化學(xué)藥品；洗滌劑處理或上述方法的任意組合。
可以理解的是天然原料本身的結(jié)構(gòu)能限制細(xì)胞破壞的程度，從而當(dāng)待處理的原料有較高的纖維內(nèi)容物或較厚的細(xì)胞壁，或較小的細(xì)胞尺寸等的時候，需要更強有利的方法。
另外可以理解的是在進(jìn)一步加工前應(yīng)將破壞方法中使用的防礙其它處理步驟的任何成分從反應(yīng)混合物中除去。
還發(fā)現(xiàn)，當(dāng)使用相同的破壞細(xì)胞的方法時，一段冷藏時期(約5℃)后的苗芽使保留在所生產(chǎn)的濃縮物中的異黃酮水平降低，這可能是由于寒冷導(dǎo)致的細(xì)胞膜變化，此變化使它們對破壞更加抵抗并因此限制酶與在所述植物細(xì)胞中保持在不同部分或膜約束細(xì)胞器中的類黃酮苷的混合。
當(dāng)內(nèi)生酶沒有履行適當(dāng)?shù)能障蜍赵霓D(zhuǎn)化時，可能必需加入酶以促進(jìn)轉(zhuǎn)化。
因而，本發(fā)明還提供了一種從含有合適的類黃酮苷和/或其復(fù)合物的植物物質(zhì)生產(chǎn)富集的類黃酮濃縮物的方法，該方法包括下列步驟(i)使所述植物物質(zhì)的細(xì)胞結(jié)構(gòu)破壞并加入另外的外生酶以實現(xiàn)將類黃酮苷或其復(fù)合物酶轉(zhuǎn)化成類黃酮苷元；(ii)調(diào)節(jié)pH以使類黃酮苷元變得相對不溶并形成含有它們的濃縮物。
以不同的酶可實現(xiàn)酶轉(zhuǎn)化，所述酶包括具有水解苷鍵能力的酶，諸如一種或多種來自糖苷酶、β-糖苷酶、β-半乳糖苷酶、β-葡糖苷酸酶、果膠酶、橙皮苷酶、花色素酶、鼠李淀粉酶(rhamnodiastase)、柚(皮)苷酶或高淀粉酶組成的組。
其他的酶包括適合于水解在類黃酮苷復(fù)合物中在葡萄糖(糖)部分和接合部分(例如酰基)之間的鍵的那些酶，諸如異黃酮7-O-苷-6”丙二酸鹽丙二酰酯酶(malonylesterase)或可在合適的植物中發(fā)現(xiàn)等同的酶。
當(dāng)必需時，外生酶可市售獲得或從本領(lǐng)域技術(shù)人員顯而易見的來源獲得，所述來源包括動物，諸如來自豬的肝臟；植物諸如三葉草屬的種類(trifolium spp)、鷹嘴豆屬的種類(Cicer spp)、向日葵屬的種類(Helianthus spp)、草木犀屬的種類、苜蓿屬的種類、茶的種類、李屬的種類(Prunus spp)(例如扁桃、洋李、甜櫻桃、杏)、藥炭鼠李和凍綠(Rhamnus utilis)；霉菌諸如曲霉屬的種類，包括黑色曲霉或米曲酶、紅色糖多孢菌、刺槐和根瘤菌屬的種類；諸如酒明串珠菌、啤酒片球菌和植物乳芽孢桿菌這樣的細(xì)菌或諸如類細(xì)菌種類這樣的腸內(nèi)細(xì)菌；以及酵母，諸如啤酒糖酵母、異常漢遜氏酵母、細(xì)尖克勒克氏酵母和鐵紅假絲酵母(Candida pulcherimma)。
其他的酶包括遺傳工程酶諸如獲自遺傳修飾(遺傳工程)生物體的那些酶。當(dāng)使用工程酶時，它們是外生的酶從而方便加入到反應(yīng)混合物中。另外，應(yīng)用遺傳操作，可以使用否則產(chǎn)生不足量的酶或具有不充分活性的酶的植物物質(zhì)。例如，可將編碼適合的酶的基因插入到植物的基因組，否則該植物將不產(chǎn)生足夠的用于轉(zhuǎn)化的內(nèi)生酶，從而使其適合于用在本發(fā)明中。此外，還可以將遺傳工程用于改進(jìn)酶的特性，諸如其活性。所有這類遺傳工程產(chǎn)物能夠用于本發(fā)明的方法。
可以理解的是多種酶，或同時或順序地，可用于影響轉(zhuǎn)化。當(dāng)所述苷在轉(zhuǎn)化為苷元之前需要轉(zhuǎn)化成中間體時，多種酶可以是特別必需的。不過，當(dāng)不需要用于轉(zhuǎn)化為中間體的時候，也可以使用多種酶。在這方面，取決于所述原料，多種不同的酶比一種酶可實現(xiàn)更好的轉(zhuǎn)化。
本領(lǐng)域技術(shù)人員至少基于對方法和原料的要求能夠確定轉(zhuǎn)化反應(yīng)所需(內(nèi)生或外生的)的酶的性質(zhì)。具體地說，轉(zhuǎn)化成中間體和使用的特定的酶的要求對本領(lǐng)域技術(shù)人員來說是顯而易見的。例如，必須首先用α-鼠李糖苷酶(rhamnosidase)將narangin(一種苷)轉(zhuǎn)化為江戶櫻花苷(中間體苷)，然后通過用β葡糖苷酶水解葡萄糖部分將其轉(zhuǎn)化為其類黃酮苷元形式的naringinin。
充分轉(zhuǎn)化為苷元所需時間的量根據(jù)植物物質(zhì)、所使用的酶、溫度和全部方法要求必備的條件(即，在所述濃縮物中所需類黃酮的最終水平)而改變。例如，在壓碎的白羽扇豆苗芽中發(fā)現(xiàn)在室溫下轉(zhuǎn)化花費的時間少于16分鐘。優(yōu)選地，類黃酮苷和/或其復(fù)合物的轉(zhuǎn)化是完全的。然而，更可靠和更實際的是一部分所述原料中的類黃酮苷和/或其復(fù)合物沒有轉(zhuǎn)化成為類黃酮苷元。明顯地，轉(zhuǎn)化程度越高，從提取方法中回收的類黃酮苷元將會越多。在任何情況下在本發(fā)明的方法中實現(xiàn)的轉(zhuǎn)化水平將通過操作參數(shù)，包括該方法所需要的輸出量來確定。
當(dāng)植物物質(zhì)是發(fā)芽的苗芽時，在發(fā)芽的苗芽中的類黃酮水平受到種子的種類和質(zhì)量、出芽溫度和時間，以及光的存在和浸泡用水pH的影響。在進(jìn)行本發(fā)明的方法之前，也可將植物物質(zhì)進(jìn)行特殊預(yù)處理以提高苷的水平。例如，可以用銅溶液、茉莉酮類化合物、真菌提取物或糖溶液處理植物物質(zhì)以提高在該原料中的內(nèi)生異黃酮水平。另外，對子葉應(yīng)用物理應(yīng)力諸如切割，也能使植物物質(zhì)諸如種子增加產(chǎn)生異黃酮。
因而，先于產(chǎn)生本方面濃縮物，在進(jìn)一步增加內(nèi)生異黃酮水平之前，優(yōu)選將植物物質(zhì)接觸光諸如日光。
在酶轉(zhuǎn)化成類黃酮苷元前，還可以預(yù)處理植物物質(zhì)以便除去一種或多種糖殘基或其部分。在這方面，可以處理類黃酮苷以便水解某些糖殘基或其部分諸如糖單位，從而產(chǎn)生部分轉(zhuǎn)化的類黃酮苷。在這種選擇中，可以通過使用在類黃酮苷上至少保留一種糖殘基的強酸水解從類黃酮苷上除去一個或多個糖殘基。
可能需要調(diào)節(jié)其它變化因素以便從給出的提取方法且更具體地說是酶轉(zhuǎn)化法中獲得最佳性能?？刂七@些變化因素和產(chǎn)生最佳轉(zhuǎn)化的特定組合條件對本領(lǐng)域技術(shù)人員來說是顯而易見的。這類變化因素包括溫度、含濕量和添加其它溶質(zhì)或酶穩(wěn)定劑。
另外可以理解的是可以將按照本發(fā)明方法生產(chǎn)的提取物進(jìn)行進(jìn)一步處理以便進(jìn)一步提高所關(guān)注的類黃酮的濃度水平。在這方面，可以實施諸如醇浸提這樣的其它純化方案。
一旦產(chǎn)生了類黃酮苷元，就必須防止它發(fā)生聚合或其它不需要的修飾。例如可能需要限制或除去多酚氧化酶的活性以便防止類黃酮苷元的聚合。這一結(jié)果可以通過例如加熱這樣的物理方式或例如二氧化硫、焦亞硫酸鈉、氫氰酸、一氧化碳、蛋白質(zhì)消化酶或酶類這樣的化學(xué)方式和/或通過使用例如通過提供二氧化碳?xì)怏w或氮氣氣氛除氧方法或通過真空抽吸而實現(xiàn)。在后一種手段中，將缺氧維持至通?？梢詫⒍喾友趸富钚猿志孟蛄硪环矫嬷钡綇暮卸喾友趸傅囊后w或固體中分離出類黃酮苷元為止。
調(diào)節(jié)pH以使類黃酮苷元不可溶。優(yōu)選地，將pH調(diào)節(jié)到至少少于將要提取的類黃酮的最低pKa值約2個pH單位。例如，對genestein和鷹嘴豆素A(biochanin A)來說pH5.2或更低。更優(yōu)選地，將所述pH調(diào)節(jié)到約4-4.5諸如4.1或4.2。
可以使用本領(lǐng)域技術(shù)人員顯而易見的許多方式中的任意一種來調(diào)節(jié)pH以使類黃酮苷元不溶，包括添加諸如可以是液體、固體或氣體形式的鹽酸、硫酸、磷酸、硝酸、乳酸、酒石酸、檸檬酸、乙酸或丙酸這樣的酸。改變pH以確保足夠比例的類黃酮苷元不溶。如果需要，可以通過攪拌來進(jìn)行pH調(diào)節(jié)以便確保反應(yīng)物充分混合且絕大部分類黃酮苷元類實際上能夠完全酸化?？梢蕴幚砜扇苄圆糠忠员氵M(jìn)一步使類黃酮苷元更完全地保留在不溶性相中。
在類黃酮苷元充分出現(xiàn)在懸浮液或沉淀中之后，可以除去所述酸性水溶成分，并將廢料干燥以獲得類黃酮富集的濃縮物。通過除去存在的酸性水溶成分諸如糖類、礦物質(zhì)、皂草苷類、氨基酸和肽類實現(xiàn)濃縮。
通過植物物質(zhì)的物理參數(shù)將酸性水溶成分的提取等級控制，并能以很多不同的方法從簡單的浸泡和過濾、利用重力或更有力的提取方法諸如逆流提取使酸性水溶液向下通過保留在篩網(wǎng)上的原料進(jìn)行酸性水溶性成分的提取。其他提取水溶成分的方式和方法對本領(lǐng)域技術(shù)人員是顯而易見的。
干燥瀝濾了的物質(zhì)形成最終的濃縮物可通過很多方法之任何一種來實施，假如它足夠快而能防止微生物性腐敗，且溫度未超出這樣的程度引起不合需要的味道或過分地減少食物的價值和消化性諸如通過加熱損壞了蛋白成分。噴霧干燥是一種可能，不過，其他方法對本領(lǐng)域技術(shù)人員是顯而易見的。
任選地，在轉(zhuǎn)化苷成為苷元后，可將反應(yīng)混合物干燥或不干燥儲藏到方便進(jìn)一步處理時為止。如果發(fā)生所述物質(zhì)含相當(dāng)程度的異黃酮破壞酶諸如多酚氧化酶的情況，首先應(yīng)將這些酶滅活。
將植物物質(zhì)用作原料的一種可能出現(xiàn)的復(fù)雜情況是在濃縮過程中不需要的植物蛋白共沉淀。在這方面，在該方法中為分離類黃酮苷元而控制的各種條件可能不足以使類黃酮苷元與其它植物蛋白分離。這一問題可以通過用于原料或工藝過程中的其它處理步驟來解決以便至少減少與共沉淀相關(guān)的問題。
因此，本發(fā)明可以進(jìn)一步包括一種處理方法，其中對不需要的蛋白質(zhì)進(jìn)行修飾以便它們對本發(fā)明方法中類黃酮苷元的濃度不會過度稀釋。這類處理方法包括那些在酸化步驟后實現(xiàn)可溶性相中不需要蛋白質(zhì)或蛋白質(zhì)物質(zhì)的濃度增加的方法。
所述的處理方法可以改變且包括那些對本領(lǐng)域技術(shù)人員而言屬于顯而易見的方法。本發(fā)明包括的處理方法包括化學(xué)處理例如水解、在酸性pH調(diào)節(jié)前酶處理植物物質(zhì)。另外，將酶轉(zhuǎn)化后的反應(yīng)混合物通過裝填了吸附蛋白質(zhì)但不吸附類黃酮苷的物質(zhì)的柱。
優(yōu)選地，通過使類黃酮苷元在對苷元特別特異的pH不溶，降低最終濃縮物中的非類黃酮蛋白質(zhì)的水平。為此目的，優(yōu)選的pHs是在約1-3之間，甚至更優(yōu)選在約1.5-2.5之間。還發(fā)現(xiàn)使用鹽酸或磷酸來調(diào)節(jié)pH比使用硫酸更優(yōu)選，因為已經(jīng)發(fā)現(xiàn)這些酸增解蛋白質(zhì)更有效。
在使苷元不溶之前，作為替代或附加使用特異性pHs的本發(fā)明的方法還可包括使用水解酶以選擇性地或優(yōu)先地分解雜質(zhì)蛋白質(zhì)的步驟。這一步驟也改善最終濃縮物中的類黃酮水平。
因而，可以用諸如可使不需要的蛋白質(zhì)在酸性介質(zhì)中轉(zhuǎn)化成可溶形式的胃蛋白酶或木瓜蛋白酶這樣的蛋白酶處理由細(xì)胞破裂步驟產(chǎn)生的反應(yīng)混合物。還可以使用大小排阻色譜，包括可以使用凝膠過濾或大小排阻濾膜，這種濾膜帶有足夠小以使類黃酮分子通過而不允許較大的蛋白質(zhì)分子通過的孔。還可以使用其它生物方式，包括用消化或吸附微生物的蛋白質(zhì)發(fā)酵。青貯粉碎的原料也可能有助于該提取方案。
專利申請人還確定可以采用多種方法操控該反應(yīng)混合物中其他成分的水平以便使最終濃縮物中的類黃酮濃度最大化。
濃縮物中的脂質(zhì)水平能夠通過從該反應(yīng)混合物物理分離或通過有機溶劑提取來降低。優(yōu)選地，所使用的溶劑或溶劑混合物應(yīng)該選擇為使興趣類黃酮的共提取作用最小化的溶劑。
優(yōu)選地，脂質(zhì)水平通過利用植物生化行為而降低。在這方面，已經(jīng)發(fā)現(xiàn)在萌芽和發(fā)芽后采用冷卻的步驟降低保留在濃縮物中的脂質(zhì)水平。因而，本發(fā)明還提供一種從含有合適類黃酮苷和/或其復(fù)合物的萌發(fā)的苗芽形式的植物物質(zhì)生產(chǎn)類黃酮苷元濃縮物的方法，包括以下步驟(i)在預(yù)定溫度將萌發(fā)的苗芽冷卻預(yù)定的時間；(ii)將類黃酮苷或其復(fù)合物酶促轉(zhuǎn)化成類黃酮苷元；和(iii)調(diào)節(jié)pH以使可溶性類黃酮苷元變得相對不溶并形成含有它們的濃縮物。
預(yù)定的時間和溫度可根據(jù)植物物質(zhì)的類型、最終濃縮物中所需的濃度而改變。優(yōu)選地，該溫度至少象10℃一樣低，并且更優(yōu)選地至少象6℃一樣低。優(yōu)選地，預(yù)定的時間至少是1-6周。然而，可以理解的是用于特定提取的時間和溫度可通過本領(lǐng)域技術(shù)人員使用常規(guī)的試驗和實驗來確定。
關(guān)于包括飲食纖維的碳水化合物，在某些情況中由于察覺到它們有益于健康可將飲食化合物評價為食物添加成分，在另一些情況中由于生物利用度的原因可以期望它減少，也可以期望它升高類黃酮和可能的蛋白質(zhì)的相對水平，或期望它能更有效除去水溶性成分。通過使用能夠分解碳水化合物的酶制劑可將所述碳水化合物的水平降低。這些酶制劑包括那些含半纖維素酶和纖維素酶的制劑。
優(yōu)選在將苷轉(zhuǎn)化為苷元之后或期間且在調(diào)節(jié)pH步驟之前，將碳水化合物水平進(jìn)行處理。
作為對通過降低濃縮物中不需要蛋白質(zhì)的水平以改善類黃酮水平的一種替代，通過增加濃縮物中的總蛋白質(zhì)含量可增加營養(yǎng)需求。在這方面，根據(jù)所需要的蛋白質(zhì)濃縮物最終用途，可能高總蛋白質(zhì)水平以及高類黃酮水平是可取的。為了使蛋白質(zhì)含量最大化，必須對反應(yīng)混合物中的蛋白酶給予考慮，該蛋白酶可分解代謝蛋白質(zhì)因而減少蛋白質(zhì)的產(chǎn)出率。例如，在白羽扇豆苗芽中存在一種蛋白酶，其pH最大值pH 4.0近似于蛋白質(zhì)不溶性的可能的pH最大值pH 4.0-4.5。
因而，本發(fā)明還可包括使在反應(yīng)混合物中蛋白酶失活的步驟。通過加熱反應(yīng)混合物可使蛋白酶失活，其具有另外的優(yōu)點增加蛋白質(zhì)沉淀并使它們從可溶部分中易于分離。溫度可以改變，優(yōu)選為至少45℃。另外，假如在苷充分轉(zhuǎn)化為苷元之后加入化學(xué)藥品，蛋白酶可通過化學(xué)方法失活。
另外，可通過使用來自具有低內(nèi)生蛋白酶水平栽培品種(cultivars)的植物物質(zhì)，或通過操控生長時間和/或萌發(fā)和出芽實施的溫度限制內(nèi)生蛋白酶的作用。
本發(fā)明還提供凝固劑或其他化合物的用途，它們使蛋白質(zhì)不溶最大化，諸如加入的樹膠和聚合型陰離子例如阿拉伯膠、羧甲基纖維素、聚半乳糖醛酸、藻酸鹽、角叉菜聚糖和六甲基磷酸鹽(hexametaphosphate)；二價陽離子諸如鈣、鎂和鋅。可將這些成分加入以改善從反應(yīng)混合物保留蛋白質(zhì)，并且這能增加作為結(jié)果的濃縮物中蛋白質(zhì)的量。
在本說明書的上下文中，除非另有說明，將術(shù)語“包括”或其變化形式理解為包含所述的整數(shù)或整數(shù)組，但不排除任何其它的整數(shù)或整數(shù)組。
現(xiàn)在將描述本發(fā)明，關(guān)于下列實施例對前述段落無任何限制。
實施例實施例1從發(fā)芽的白羽扇豆生產(chǎn)異黃酮富集的濃縮物將苦白意大利羽扇豆(Lupinus albus)，暫時確定為塔斯馬尼亞生長的Superlupe栽培品種，平均種子重量0.7g，浸泡24小時伴2次1小時的空氣中斷，然后在其后每12小時浸泡約1小時。
將羽扇豆暴露于低強度間接的太陽光下并在約20-25℃室溫進(jìn)行發(fā)芽，小心分離腐爛無法生存的種子并保持低的堆高。在第十二天，當(dāng)伴隨部分子葉幾乎全部張開和首批葉發(fā)生情況下根發(fā)育良好的時候，將苗芽在摻和機中處理。將重191克的56個脫離外殼的苗芽分成2組并且以相同重量的水摻和3分鐘。
從第二次摻和結(jié)束預(yù)留30分鐘后，為酶水解異黃酮苷，將所獲得的泥漿用另外400毫升水進(jìn)一步稀釋，并將其pH調(diào)節(jié)為pH4.2。將如此產(chǎn)生的懸浮液在之后的22分鐘期間時常攪拌。過夜后，將該懸浮液在1號Whitman濾紙上過濾。過濾完成后，將保留的物質(zhì)用新鮮的pH4.2的溶液沖洗數(shù)次(所使用的體積約390毫升)，一個周期超過數(shù)小時。
一天后，將所過濾的物質(zhì)在68℃鼓風(fēng)干燥，獲得伴有3.2g/100g濕度的10.11g物質(zhì)。讓其達(dá)到10％濕度水平獲得10.9g異黃酮富集的具有下列特征的羽扇豆?jié)饪s物。
表1A

用輕的石油溶劑油(light petroleum spirits)(約750毫升，加熱至大約45-50℃)浸泡此濃縮物7小時，濾出0.98g脂質(zhì)和約125mg異黃酮。
在68℃鼓風(fēng)干燥，獲得9.01g物質(zhì)。讓所干燥的物質(zhì)達(dá)到與室內(nèi)濕度均衡使其重量增加到9.67g，每100g下列組成表1B

**41.9g/100g dwb。
每100g種子濃縮物產(chǎn)率-24.7g。
實施例2從發(fā)芽的白羽扇豆生產(chǎn)異黃酮富集的濃縮物，有加熱步驟以便增加蛋白質(zhì)保留。
將苦白意大利羽扇豆(Lupinus albus)，暫時確定為塔斯馬尼亞生長的Superlupe栽培品種，浸泡24小時伴2次1小時的空氣中斷，然后在其后每12小時浸泡約1小時。從無法生存的種子小心分離萌芽種子并確保種子個體有足夠的萌發(fā)空間。
將羽扇豆暴露于低強度間接的太陽光下并在約20-25℃室溫進(jìn)行發(fā)芽，并在第十二天，當(dāng)伴隨部分子葉幾乎全部張開和首批葉發(fā)生情況下根發(fā)育良好的時候，將苗芽在廚房摻和機中處理。將重182克的56個脫離外殼的苗芽分成2組并且以相同重量的水摻和4分鐘。
從第二次摻和結(jié)束預(yù)留30分鐘后，為酶水解異黃酮苷，將所獲得的泥漿用另外400毫升水進(jìn)一步稀釋，并將其pH調(diào)節(jié)為pH4.2。將如此產(chǎn)生的懸浮液在之后的25分鐘期間時常攪拌。然后，將該懸浮液加熱到約62.5℃40分鐘，以便至少部分地凝固蛋白質(zhì)。過夜后，將該懸浮液在1號Whitman濾紙上過濾。過濾完成后，經(jīng)過數(shù)小時，將保留的物質(zhì)用新鮮的pH4.2的溶液沖洗數(shù)次(所使用的體積約640毫升)，一個周期超過數(shù)小時。
一天后，將所過濾的物質(zhì)在68℃鼓風(fēng)干燥，獲得伴有3.1g/100g濕度的14.4g物質(zhì)。讓其達(dá)到10％濕度水平獲得15.5g異黃酮富集的具有下列特征的羽扇豆?jié)饪s物。
表2A

*蛋白質(zhì)干燥重量基數(shù)32.9g/100g用石油溶劑油(petroleum spirits)(約750毫升，加熱至大約45-50℃)浸泡此濃縮物7小時，濾出2.58g脂質(zhì)和約127mg異黃酮。
在68℃鼓風(fēng)干燥，獲得11.69g物質(zhì)。讓所干燥的物質(zhì)達(dá)到與室內(nèi)濕度均衡使其重量增加到12.69g，每100g下列組成表2B


**40.4g/100g dwb。
每100g種子濃縮物產(chǎn)率-32.4g。
假設(shè)白羽扇豆具有澳大利亞平均蛋白質(zhì)含量39.5g/100g種子dwb，雖然其水平可低如31.8g/100g dwb，那么加熱(使酸性pH蛋白酶失活？)使每100g干燥種子蛋白質(zhì)保留率從9.3g升高到13.1g或使所期望的原始的羽扇豆種子蛋白質(zhì)提高三分之一或更高。為通過減少酶失活前時間增加蛋白質(zhì)保留蛋白質(zhì)效率，可期望使用絡(luò)合陽離子提高到市售豆類蛋白質(zhì)濃縮物生產(chǎn)所見的效率，保留約二分之一原始蛋白質(zhì)。
實施例3從低溫儲存后的發(fā)芽的白羽扇豆生產(chǎn)異黃酮富集的濃縮物，有加熱步驟以便增加蛋白質(zhì)保留。
將苦白意大利羽扇豆(Lupinus albus)，暫時確定為塔斯馬尼亞生長的Superlupe栽培品種，浸泡24小時伴2次1小時的空氣中斷，然后在其后每12小時浸泡約1小時。從無法生存的種子小心分離萌芽種子并確保種子個體有足夠的萌發(fā)空間。
將羽扇豆暴露于低強度間接的太陽光下并在約20-25℃室溫進(jìn)行發(fā)芽，并在第十二天，當(dāng)伴隨部分子葉幾乎全部張開和首批葉發(fā)生情況下根發(fā)育良好的時候，將苗芽放在浸濕的紙圍成的容器中并在6℃儲存8天。
在溫度允許調(diào)節(jié)到室溫(25.0℃)后，將苗芽在廚房摻和機(Panasonic model Super Blender)中處理。將63個脫離外殼的且每個苗芽平均重3.41g的苗芽分成2組并且在液化選項基礎(chǔ)上以相同重量的水摻和3分鐘。
從第二次摻和結(jié)束預(yù)留33分鐘后，為酶水解異黃酮苷，將所獲得的泥漿用另外400毫升水進(jìn)一步稀釋，并將其pH調(diào)節(jié)為pH4.1。將如此產(chǎn)生的懸浮液在之后的20分鐘期間時常攪拌。然后，將該懸浮液加熱到約62.5℃45分鐘，以便至少部分地凝固蛋白質(zhì)。過夜后，將該懸浮液在Whitman 1號濾紙上過濾。過濾完成后，將保留的物質(zhì)用新鮮的pH4.2的溶液沖洗數(shù)次(所使用的體積約680毫升)，一個周期超過數(shù)小時。
一天后，將所過濾的物質(zhì)在68℃鼓風(fēng)干燥，獲得伴有2.5g/100g濕度的9.86g物質(zhì)。讓其達(dá)到10％濕度水平獲得10.67g異黃酮富集的下列羽扇豆?jié)饪s物表3A

*蛋白質(zhì)干燥重量基數(shù)29.1g/100g用石油溶劑油(約750毫升，加熱至大約45-50℃)浸泡此濃縮物7小時，濾出0.46g脂質(zhì)和約98mg異黃酮。
在68℃鼓風(fēng)干燥，獲得9.30g物質(zhì)。讓所干燥的物質(zhì)達(dá)到與室內(nèi)濕度均衡使其重量增加到10.00g，每100g下列組成作為允許達(dá)到與室內(nèi)濕度均衡的產(chǎn)物，每100g表3B

**30.8g/100g dwb。
每100g種子濃縮物產(chǎn)率-22.7g。
從粉碎發(fā)芽白羽扇豆提取，干燥并用甲醇提取，通過質(zhì)子核磁共振和與紫外線光譜法結(jié)合的高壓液相色譜分析過的酸不溶的異黃酮苷元的分析表明多數(shù)是伴有較少量2’-羥基染料木黃酮的染料木黃酮，和少量的其他異黃酮類。
本發(fā)明的方法考慮到使用相對簡單的方法生產(chǎn)相當(dāng)大量特異性異黃酮苷元，其可按比例放大用作飼料或飲食添加劑的類黃酮濃縮物的大規(guī)模生產(chǎn)。從脫脂大豆原料常規(guī)生產(chǎn)含異黃酮的濃縮物，發(fā)現(xiàn)含三種異黃酮，順序為染料木黃酮＞黃豆苷原＞glycitrins。當(dāng)一定范圍的發(fā)芽的豆類細(xì)胞損壞時，發(fā)現(xiàn)它們不僅產(chǎn)出每原始種子量相當(dāng)高水平的酸溶液不溶的異黃酮苷元，直至大于大豆種子總異黃酮含量6倍，而且異黃酮的種類組成也可徹底不同。
因而，本發(fā)明提供這種可能濃縮物有較高異黃酮含量但組分不同，諸如伴有比染料木黃酮更大量的黃豆苷原(發(fā)芽的大豆)，或伴有染料木黃酮苷元比例非常高(白羽扇豆和狹葉羽扇豆兩者的栽培品種的苗芽)，經(jīng)修飾的染料木黃酮(白羽扇豆和狹葉羽扇豆兩者的栽培品種的苗芽)和其中異黃酮基本上是formonentin比鷹嘴豆素A(biochanin A)為1比1或2比1的濃縮物(相應(yīng)為desi和Kabuli鷹嘴豆苗芽)。
這些異黃酮生化性質(zhì)上不同，從而在它們的作用和對健康的好處方面不同，并因此不需要限制為單一的異黃酮合并成分。利用萌發(fā)的豆類苗芽的方法使更加市場區(qū)分的特制產(chǎn)品能夠生產(chǎn)。
實施例4從發(fā)芽的狹葉羽扇豆生產(chǎn)異黃酮富集的濃縮物將從市場谷物出口商得到的收獲約6個月的gungurru栽培品種的狹葉(狹葉)羽扇豆(Lupinus angustifolius)(平均種子重量0.15g)浸泡24小時，伴2次1小時的空氣中斷，然后在其后每12小時浸泡約1小時。
在約25℃的室溫讓羽扇豆發(fā)芽并暴露于低強度間接的太陽光下。8天后，當(dāng)從為萌發(fā)的種子中分離所有的苗芽，并將苗芽放在浸濕的紙圍成的容器中在6℃儲存5天半。
在約25℃的室溫讓羽扇豆發(fā)芽。在這階段，羽扇豆的二等分的子葉張開并分隔很遠(yuǎn)，且部分首批葉已經(jīng)發(fā)育到要分離小葉但未到小葉變平的時刻。莖約6-7cm長，從變色的頂部算起的根長度達(dá)8.8cm。
在溫度允許調(diào)節(jié)到室溫(25℃)后，將苗芽移出并在廚房摻和機(Panasonic model Super Blender)中處理。將468個脫離外殼的且平均重1.14g(每個苗芽)的苗芽分成4組并且在液化選項基礎(chǔ)上以相同重量的水摻和3分鐘。將第1組與第2組及第3組與第4組的摻合產(chǎn)物合并成每組約534g的兩個組。在這個時刻，懸浮液的溫度相應(yīng)為32℃和33℃。
從摻和結(jié)束預(yù)留90分鐘后，為酶水解異黃酮苷，將所獲得的兩個懸浮液終產(chǎn)物(泥漿)在另外水中進(jìn)一步稀釋成最終重量800g并將其pH調(diào)節(jié)為pH4.5。將如此產(chǎn)生的懸浮液在之后的60分鐘期間時常攪拌，然后將該懸浮液在粗紙上過濾。過濾完成后，將保留的物質(zhì)用新鮮的pH4.5的溶液沖洗數(shù)次(所使用的體積約500毫升)，共用2.5小時。
一天后，將所過濾的物質(zhì)在68℃鼓風(fēng)干燥，然后，讓其達(dá)到與空氣濕度均衡，獲得24.57g和22.62g相應(yīng)物質(zhì)，等于每100g原始種子70g和64.4g。濃縮物的己烷可提取脂質(zhì)含量測定為約5.3g/100g。
空氣干燥物質(zhì)中的異黃酮水平分別為268mg/100g，和305mg/100g，或相等于每100g原始種子188mg和196mg。
從粉碎發(fā)芽gungurru狹葉羽扇豆，干燥并用甲醇提取，通過質(zhì)子核磁共振和與紫外線光譜法結(jié)合的高壓液相色譜分析過的所提取的酸不溶的異黃酮苷元的分析表明多數(shù)(約三分之二)是伴有較少量2’-羥基染料木黃酮的染料木黃酮，和少量的7-羥基-4’-甲氧異黃酮，及單獨地和雙重地異戊(間)二烯酯化的(prenylated)異黃酮。
實施例5A從新鮮的(非冷藏的)發(fā)芽大豆生產(chǎn)異黃酮富集濃縮物從大型食物成分商店購買未知栽培品種的大豆(Glycine max)，將未區(qū)分大小的種子(平均種子重量0.175g)浸泡24小時，伴2次1小時的空氣中斷，然后在其后每12小時浸泡約1小時。
在約25℃的室溫讓大豆發(fā)芽并暴露于低強度間接的太陽光下。6天半后，大部分苗芽從它們的種殼中長出，子葉為綠色并在垂直的莖上向水平彎曲，部分子葉張開但沒有出現(xiàn)首批葉。根達(dá)6cm長，莖達(dá)8cm長。
將苗芽在廚房摻和機(Panasonic model Super Blender)中處理。將重189.5g的269個脫離外殼的苗芽以相同重量的水摻和超過3分鐘。在摻和結(jié)束的時候，其溫度為35.4℃。
從摻和結(jié)束預(yù)留1小時后，為酶水解異黃酮苷，將所獲得的泥漿在另外400ml水中進(jìn)一步稀釋并將其pH調(diào)節(jié)為pH4.5。在5℃過夜后，將該懸浮液在粗紙上過濾。過濾完成后，將保留的物質(zhì)用新鮮的pH4.5的溶液沖洗3次(所使用的體積約400毫升)，共用2小時。
一天后，將所過濾的物質(zhì)在68℃鼓風(fēng)干燥，然后，讓其達(dá)到與空氣濕度均衡，獲得等于每100g原始種子54.7g的24.57g物質(zhì)。濃縮物的己烷可提取脂質(zhì)含量測定為約21.6g/100g。
在空氣干燥物質(zhì)中的異黃酮水平為680mg/100g，或相等于每100g原始種子370mg。
實施例5B從冷藏的發(fā)芽大豆生產(chǎn)異黃酮富集濃縮物與在實施例5A中相同的植物物質(zhì)，即從大型食物成分商店購買的未知栽培品種的大豆(Glycine max)，將未區(qū)分大小的種子，平均種子重量0.175g，浸泡24小時，伴2次1小時的空氣中斷，然后在其后每12小時浸泡約1小時。
在約25℃的室溫讓大豆發(fā)芽并暴露于低強度間接的太陽光下。6天半后，將苗芽從沒有萌發(fā)的種子中分離并放置在浸濕的紙圍成的容器中在6℃儲存6天半。
在溫度允許調(diào)節(jié)到室溫(25℃)后，將苗芽從容器中移出，并在廚房摻和機(Panasonic model Super Blender)中處理。在這一階段，大部分子葉剛剛開始分離但在外末端保持壓合在一起，一小部分有首批葉從兩片子夜之間長出。莖長達(dá)到11cm，根長達(dá)到8cm。
將重253.7g的298個脫離外殼的苗芽以相同重量的水摻和超過3分鐘。在摻和結(jié)束的時候，其溫度為35℃。
從第二次摻和結(jié)束預(yù)留1小時零1刻鐘后，為酶水解異黃酮苷，將所獲得的泥漿在另外400ml水中進(jìn)一步稀釋并將其pH調(diào)節(jié)為pH4.5。在放置1小時后，將該懸浮液在粗紙上過濾。過濾完成后，將保留的物質(zhì)用新鮮的pH4.5的溶液沖洗一次(所使用的體積約200毫升)，共用2小時。
一天后，將所過濾的物質(zhì)在68℃鼓風(fēng)干燥，然后，讓其達(dá)到與空氣濕度均衡，獲得等于每100g原始種子47.3g的24.64g物質(zhì)。濃縮物的己烷可提取脂質(zhì)含量測定為約13.3g/100g。
在空氣干燥物質(zhì)中的異黃酮水平為450mg/100g，或相等于每100g原始種子236mg。
從粉碎發(fā)芽的大豆，干燥并用甲醇提取，通過質(zhì)子核磁共振和與紫外線光譜法結(jié)合的高壓液相色譜分析過的所提取的酸不溶的異黃酮苷元的分析表明異黃酮為少數(shù)的染料木黃酮(28％)和剩余，約72％，伴7-羥基-4’-甲氧異黃酮的黃豆苷原。
實施例6從發(fā)芽的Kabuli鷹嘴豆生產(chǎn)異黃酮富集濃縮物將從地中海食物成分商店購買的未知栽培品種(平均重量0.51g)的Kabuli或gabanzo綱鷹嘴豆(Cicer arietinum)浸泡24小時，伴2次1小時的空氣中斷，然后在其后每12小時浸泡約1小時。
在約25℃的室溫讓鷹嘴豆發(fā)芽并暴露于低強度間接的太陽光下。10天半后，苗芽處于在莖上有3到4個嫩葉之間的階段。子葉沒有全部張開，種殼是過度限制性的。新芽達(dá)到4.5cm長，根達(dá)到8cm長，伴良好發(fā)育的側(cè)根達(dá)到1.7cm長。
將苗芽在廚房摻和機(Panasonic model Super Blender)中處理。將重130g的99個脫殼的苗芽以相同重量的水摻和3分鐘。
從摻和結(jié)束預(yù)留1小時后，為酶水解異黃酮苷，將所獲得的泥漿在另外260ml水中進(jìn)一步稀釋并將其pH調(diào)節(jié)為pH4.5。將所得泥漿在室溫放置約2小時，然后于粗紙上過濾前在0℃另外儲存1個半小時，在過濾后，將保留的固體用大量的pH4.5的水溶液沖洗，總的體積約500毫升。
一天后，將所過濾的物質(zhì)在65℃鼓風(fēng)干燥，然后，讓其達(dá)到與空氣濕度均衡，獲得等于每100g原始種子72g的36.81g物質(zhì)。濃縮物的己烷可提取脂質(zhì)含量測定為約9.9％。
在空氣干燥物質(zhì)中的異黃酮水平為915mg/100g，或相等于每100g原始種子660mg。
從粉碎發(fā)芽的Kabuli鷹嘴豆，干燥并用甲醇提取，通過質(zhì)子核磁共振和與紫外線光譜法結(jié)合的高壓液相色譜分析過的所提取的酸不溶的異黃酮苷元的分析表明異黃酮基本上是在約65∶35比率的7-羥基-4’-甲氧異黃酮和鷹嘴豆素A，伴微量pratensein和染料木黃酮。
實施例7從發(fā)芽的Desi鷹嘴豆生產(chǎn)異黃酮富集濃縮物將從地中海食物成分商店購買的未知栽培品種的Desi綱鷹嘴豆(Cicer arietinum)，未區(qū)分大小等級但伴隨平均重量0.121g，浸泡24小時，伴2次1小時的空氣中斷，然后在其后每12小時浸泡約1小時。
在約25℃的室溫讓鷹嘴豆發(fā)芽并暴露于低強度間接的太陽光下。7天半后，苗芽處于在莖頂部有第3個葉插入(bracket)的階段，根和苗具有改變的長度，但根最高達(dá)7.2cm長且莖達(dá)到4.1cm長。
將苗芽在廚房摻和機(Panasonic model Super Blender)中處理。將重183g的410個脫殼的苗芽以相同重量的水摻和3分鐘。
從摻和結(jié)束預(yù)留1小時后，為酶水解異黃酮苷，將所獲得的泥漿以另外376ml水進(jìn)一步稀釋并將其pH調(diào)節(jié)為pH4.5。經(jīng)過另外2.25小時后，將所得泥漿于粗紙上過濾，其后，將保留的固體用大量的pH4.5的水溶液沖洗，總的沖洗的體積約350毫升。
一天后，將所過濾的物質(zhì)在68℃鼓風(fēng)干燥，然后，讓其達(dá)到與空氣濕度均衡，獲得33.67g物質(zhì)，等于每100g原始種子68g。濃縮物的己烷可提取脂質(zhì)含量測定為約6.4g/100g。
在空氣干燥物質(zhì)中的異黃酮水平為428mg/100g，或相等于每100g原始種子290mg。
從粉碎發(fā)芽的Desi鷹嘴豆，干燥并用甲醇提取，通過質(zhì)子核磁共振和與紫外線光譜法結(jié)合的高壓液相色譜分析過的所提取的酸不溶的異黃酮苷元的分析表明異黃酮基本上是在約55∶45比率的7-羥基-4’-甲氧異黃酮和鷹嘴豆素A，伴微量7-羥基-4’-甲氧異黃酮。
其他對本領(lǐng)域技術(shù)人員顯而易見的修改或改編包括在本發(fā)明的范圍內(nèi)。
在本說明書的上下文中，除非另有說明，將術(shù)語“包括”或其變化形式理解為包含所述的整體或整體組，但不排除任何其它的整體或整體組。
權(quán)利要求
1.從含有合適的類黃酮苷和/或其復(fù)合物的植物物質(zhì)生產(chǎn)類黃酮苷元的濃縮物的方法，該方法包括下列步驟(i)以酶促方式將類黃酮苷或其復(fù)合物轉(zhuǎn)化成類黃酮苷元；和(ii)調(diào)節(jié)pH以使類黃酮苷元變得相對不溶并形成含有它們的濃縮物。
2.從含有合適的類黃酮苷和/或其復(fù)合物的植物物質(zhì)生產(chǎn)富集類黃酮濃縮物的方法，該方法包括下列步驟(i)使所述植物物質(zhì)的細(xì)胞結(jié)構(gòu)破壞以實現(xiàn)將類黃酮苷或其復(fù)合物酶轉(zhuǎn)化成類黃酮苷元；(ii)調(diào)節(jié)pH以使類黃酮苷元變得相對不溶并形成含有它們的濃縮物。
3.從含有合適的類黃酮苷和/或其復(fù)合物的植物物質(zhì)生產(chǎn)富集類黃酮濃縮物的方法，該方法包括下列步驟(i)使所述植物物質(zhì)的細(xì)胞結(jié)構(gòu)破壞并加入另外的外生酶以實現(xiàn)將類黃酮苷或其復(fù)合物酶轉(zhuǎn)化成類黃酮苷元；(ii)調(diào)節(jié)pH以使類黃酮苷元變得相對不溶并形成含有它們的濃縮物。
4.從含有合適類黃酮苷和/或其復(fù)合物的萌發(fā)的苗芽形式的植物物質(zhì)生產(chǎn)類黃酮苷元濃縮物的方法，該方法包括以下步驟(i)在預(yù)定溫度將萌發(fā)的苗芽冷卻預(yù)定的時間；(ii)將類黃酮苷或其復(fù)合物酶促轉(zhuǎn)化成類黃酮苷元；和(iii)調(diào)節(jié)pH以使可溶性類黃酮苷元變得相對不溶并形成含有它們的提取物。
全文摘要
從含有合適的類黃酮苷和/或其復(fù)合物的植物物質(zhì)生產(chǎn)類黃酮苷元的濃縮物的方法，該方法包括下列步驟(i)以酶促方式將類黃酮苷或其復(fù)合物轉(zhuǎn)化成類黃酮苷元；和(ii)調(diào)節(jié)pH以使類黃酮苷元變得相對不溶并形成含有它們的濃縮物。
文檔編號A23L1/30GK1537169SQ02815068
公開日2004年10月13日 申請日期2002年7月1日 優(yōu)先權(quán)日2001年6月29日
發(fā)明者R·G·華萊士, R G 華萊士 申請人:比奧雷克斯健康有限公司