專利名稱：白細(xì)胞失活元件的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及到一種白細(xì)胞失活元件和一種降低白細(xì)胞活性的方法。
背景技術(shù)：
在各種臨床情況中，經(jīng)常會發(fā)生急劇增加的致病性細(xì)胞免疫反應(yīng)，出現(xiàn)這種情況的例子有-心臟手術(shù)中心肺機(jī)的動脈或靜脈導(dǎo)管；-多處受傷或患敗血癥(敗血性休克)后的系統(tǒng)性免疫反應(yīng)綜合癥(SIRS)-由于過強(qiáng)的免疫活性導(dǎo)致的多器官功能不全綜合癥(MODS)在上述外科或臨床并發(fā)癥中，白細(xì)胞產(chǎn)生的非期待活性導(dǎo)致病人嚴(yán)重的致病性并發(fā)癥，為了避免這種情況，應(yīng)該將血流中激活的白細(xì)胞(特別是嗜中性白細(xì)胞)除去或直接使其失活?？衫媚壳巴ㄓ玫陌准?xì)胞過濾器，將越來越多的激活的細(xì)胞從血液中過濾除去，但是，仍然活著的白細(xì)胞產(chǎn)生并分泌致病性物質(zhì)(細(xì)胞因子、酶、氧自由基等)而導(dǎo)致現(xiàn)實疾病。有證據(jù)表明過濾網(wǎng)中的白細(xì)胞可能通過機(jī)械壓力和通過與細(xì)胞外表面接觸而再次激活，例如，更大量地分泌由激活的嗜中性白細(xì)胞產(chǎn)生的彈性蛋白酶，此外，彈性蛋白酶還對管壁的細(xì)胞外基質(zhì)發(fā)生作用，并阻斷肉皮細(xì)胞-細(xì)胞接觸，從而使管壁的滲透性增加，產(chǎn)生水腫，發(fā)炎加重及其它癥狀。
編程性細(xì)胞死亡是一種最重要的免疫系統(tǒng)調(diào)節(jié)元件，免疫相關(guān)細(xì)胞的這種編程性死亡使免疫系統(tǒng)在一種免疫反應(yīng)后，如抗微生物病原菌后的活性正?；Ａ硗?，在個體發(fā)育過程中，免疫系統(tǒng)必須殺死那些對內(nèi)生結(jié)構(gòu)或?qū)碜杂诃h(huán)境的天然抗原發(fā)生作用(例如自身免疫性疾病或過敏)的免疫細(xì)胞。由所謂的抗原呈遞細(xì)胞(aqc)激活的T細(xì)胞通常接受到幾種信息，由apc加工的抗體在MHC-I或MHC-II分子組中呈遞，假如T細(xì)胞受體與抗原的親和力太弱或不存在共刺激信號時(如，通過附著分子)，該細(xì)胞就會編程性死亡。產(chǎn)生編程性細(xì)胞死亡的另一必要機(jī)制是通過Fas/FasL路徑，在這個機(jī)制中，例如，管壁的內(nèi)皮細(xì)胞或其他的上皮細(xì)胞能表達(dá)FasL以阻止組織進(jìn)入激活的免疫細(xì)胞。
本發(fā)明所解決的問題本發(fā)明的目的是提供一種元件，該元件適于降低白細(xì)胞活性，從而減少白細(xì)胞分泌的致病性物質(zhì)。進(jìn)一步地，本發(fā)明提供一種用上述元件降低白細(xì)胞活性方法。
解決問題的方法本申請的發(fā)明人對被細(xì)胞肥大病毒感染的人眼視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞進(jìn)行研究后發(fā)現(xiàn)，由于與上皮細(xì)胞上的FasL接觸，激活的嗜中性白細(xì)胞喪失了保持或提高與上皮細(xì)胞的結(jié)合的能力，這種令人驚訝的結(jié)果被認(rèn)為是內(nèi)皮和各個組織為抗炎性事件的一種保護(hù)機(jī)制。在細(xì)胞-細(xì)胞接觸后幾分鐘內(nèi)就能觀察到嗜中性白細(xì)胞-效應(yīng)器-機(jī)制的這種功能性喪失，該功能性喪失好像完全(極大程度)獨立于嗜中性細(xì)胞中的編程性細(xì)胞死亡信號路徑?；谶@些令人驚訝的發(fā)現(xiàn)，如，F(xiàn)as/FasL路徑或白細(xì)胞-效應(yīng)器作用的其他早期抑制機(jī)制可以用于急性過量免疫反應(yīng)的試驗和臨床用途。
本發(fā)明的目的本發(fā)明提供了一種降低白細(xì)胞活性的元件，該元件包括一種載體和一個與該載體連接并適合與白細(xì)胞受體發(fā)生交互作用的配體。進(jìn)一步地，本發(fā)明提供了一種用所述元件降低白細(xì)胞活性的方法。
本發(fā)明的優(yōu)點是細(xì)胞的破壞活性在激活的白細(xì)胞與白細(xì)胞失活元件(LIM)結(jié)合后的幾分鐘內(nèi)就被抑制，這是由于白細(xì)胞細(xì)胞膜上的特異性受體與LIM中的相應(yīng)配體發(fā)生了接觸。該配體可以是蛋白，在與細(xì)胞膜上的受體接觸后產(chǎn)生一個信號，該信號刺激白細(xì)胞從而降低分泌活性和免疫原性。要達(dá)到這個目的，一種可能的方法是通過受體-配體交互反應(yīng)導(dǎo)入編程性細(xì)胞死亡，如Fas/FasL。
本發(fā)明的描述本發(fā)明的元件適合用Shaldon導(dǎo)管導(dǎo)入到病人的血流中，或?qū)氲叫姆螜C(jī)的循環(huán)中。
該元件優(yōu)選地包含一個直徑如10cm的塑料外殼，其血液導(dǎo)入導(dǎo)管和血液導(dǎo)出導(dǎo)管與心肺機(jī)的管連接相適應(yīng)。在該元件中有一個載體，如表面被修飾的三維折疊的聚酯膜，其用于結(jié)合激活的白細(xì)胞而通過受體誘導(dǎo)性信號使他們失活和死亡(如導(dǎo)入編程性細(xì)胞死亡)。該載體的材料可以是任何適于結(jié)合配體的材料，此處使用的術(shù)語“結(jié)合”包括配體與上述載體的共價和非共價結(jié)合，如，鹽結(jié)合，疏水反應(yīng)和親水結(jié)合。進(jìn)一步地，該配體可以是直接或非直接地與載體結(jié)合，其中非直接地結(jié)合包括為了更好地呈遞配體通過一個結(jié)合介質(zhì)的結(jié)合，如一個長鏈分子，或者通過含有該配體并通過其他的結(jié)合反應(yīng)與載體結(jié)合的細(xì)胞結(jié)合。
本發(fā)明的LIM適于任何白細(xì)胞，如B-淋巴細(xì)胞、T淋巴細(xì)胞、粒性白細(xì)胞和嗜中性白細(xì)胞。
影響血流、血壓或血流動性的該元件的其他參數(shù)與已用于臨床的常規(guī)白細(xì)胞過濾器相同。
實施例112井培養(yǎng)板的井中裝入聚酯膜(孔的大小為40μm)，與不同濃度的功能性激活的抗Fas(CD95)IgM抗體培養(yǎng)過夜，使用下列對照-沒有膜的井-有膜，但沒有與抗體預(yù)培養(yǎng)的井-有膜，但與不相關(guān)的IgM抗體預(yù)培養(yǎng)的井。
將Fas表達(dá)(Fas+)和Fas刪除(Fas-；在表面不表達(dá)Fas)Jurkat細(xì)胞以1×106/ml的濃度加到井中培養(yǎng)24h。通過流式細(xì)胞儀用膜聯(lián)蛋白結(jié)合測試法(annexin binding assay)定量檢測編程性細(xì)胞死亡率和壞死率。
結(jié)果培養(yǎng)后預(yù)處理井中的Fas-Jurkat細(xì)胞在膜聯(lián)蛋白V結(jié)合性方面沒有表現(xiàn)出明顯地提高，相反，表現(xiàn)出明顯的依賴于IgM抗體濃度的編程性細(xì)胞死亡誘導(dǎo)性。

在上述對照中，沒有發(fā)現(xiàn)編程性細(xì)胞死亡誘導(dǎo)性，用新分離地嗜中性白細(xì)胞獲得了相似的結(jié)果。


圖1顯示了本發(fā)明的結(jié)果。
權(quán)利要求
1.一種降低白細(xì)胞活性的元件，該元件包括一個載體和一個與該載體連接并適于與白細(xì)胞受體發(fā)生交互反應(yīng)的配體。
2.權(quán)利要求1的元件，其中的配體是適于與受體發(fā)生特異性反應(yīng)的蛋白。
3.權(quán)利要求1或2的元件，其中的配體與一種結(jié)合介質(zhì)連接，該結(jié)合介質(zhì)與載體相連。
4.權(quán)利要求3的元件，其中的結(jié)合介質(zhì)是細(xì)胞。
5.權(quán)利要求4的元件，其中的結(jié)合介質(zhì)是細(xì)胞，配體是FasL蛋白。
6.權(quán)利要求1-4任一項的元件，其中的配體是一種抗白細(xì)胞受體的抗體。
7.權(quán)利要求6的方法，其中的配體是一種抗白細(xì)胞Fas蛋白的抗體。
8.一種通過與權(quán)利要求1-7任一項的元件中的配體接觸來降低白細(xì)胞活性的方法。
9.權(quán)利要求8的方法，其中的白細(xì)胞在與配體接觸后分泌的細(xì)胞因子和/或酶和/或氧自由基的量比接觸前分的分泌量低。
10.權(quán)利要求8或9的方法，其中與細(xì)胞連接的配體與白細(xì)胞受體的交互反應(yīng)降低了白細(xì)胞與細(xì)胞結(jié)合的親和力方面的活性。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種降低白細(xì)胞活性的元件，該方法包括一個載體和一個與該載體連接并適合于與白細(xì)胞受體發(fā)生交互反應(yīng)的配體。進(jìn)一步地，本發(fā)明提供了一種用所述元件降低白細(xì)胞活性的方法。本發(fā)明的優(yōu)點是激活的白細(xì)胞在與白細(xì)胞激活元件結(jié)合后，該細(xì)胞的破壞效果在幾分鐘內(nèi)就被抑制。
文檔編號C12N5/078GK1558915SQ02818833
公開日2004年12月29日 申請日期2002年9月16日 優(yōu)先權(quán)日2001年9月27日
發(fā)明者馬丁·舒爾茨, 馬丁 舒爾茨 申請人:白血球保健股份有限公司