專利名稱：一種膠陀螺菌及以該菌種人工培育膠陀螺的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及真菌人工培育領(lǐng)域，尤其涉及一種膠陀螺(又稱膠鼓菌)及以該菌種人工培育膠陀螺的方法。
背景技術(shù)：
膠陀螺Bulgaris inquinans(pers·)Fr·俗稱拱嘴蘑，在分類學(xué)上屬膠鼓菌屬，膠陀螺種，別名膠陀螺。其子實(shí)體于夏、秋季節(jié)生于櫟、樺等闊葉樹的新倒木及枯枝上，有時(shí)在香菇、木耳段木上與之共同生長。此菌有毒，食用后能引起嘴巴紅腫，經(jīng)加工可食用。目前由于發(fā)現(xiàn)膠陀螺有很高的臨床醫(yī)療價(jià)值，從中分離到麥角甾醉、半乳糖醇和草酸等成分，國內(nèi)外對它的藥用價(jià)值正在進(jìn)行深入研究，它屬藥用真菌。然而自然界的野生及膠陀螺產(chǎn)量很少，隨著膠陀螺在醫(yī)藥方面的廣泛應(yīng)用，對其進(jìn)行人工培養(yǎng)擴(kuò)大產(chǎn)量合理保護(hù)資源，就顯得尤為重要。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明需要解決的技術(shù)問題是提供一種膠陀螺菌的生產(chǎn)菌種。
本發(fā)明需要解決的另一個(gè)技術(shù)問題是公開利用該膠陀螺菌(螺鼓菌)菌種人工培育膠陀螺的方法，以滿足有關(guān)部門的需要。
本發(fā)明的技術(shù)方案如下本發(fā)明所提供的膠陀螺菌種屬于Bulgaris inquinans(pers.)Fr.(膠鼓菌屬，膠陀螺種)，是由吉林省白山市江源縣大陽岔林場冰湖溝天然次生林柞樹新鮮倒木上的膠陀螺子實(shí)體分離得到的一種新的菌株(即Bi-II·FA菌株)，應(yīng)用本菌株經(jīng)過栽培實(shí)驗(yàn)長出膠陀螺子實(shí)體，經(jīng)過鑒定驗(yàn)證無誤后確認(rèn)分離得到的該菌種確實(shí)屬于膠鼓菌，該菌種已于2003年1月16日在中國微生物菌種保藏管理委員會(huì)保藏，保藏號(hào)為CGMCCNo.0883。
膠陀螺菌種Bi-II·FA菌株具有如下性質(zhì)1、菌落外觀(1)呈明顯的三種顏色，外緣呈灰白色，向里淺黃色，中間黃褐色；(2)菌絲呈短絨毛狀；(3)菌種保藏時(shí)間超過三個(gè)月后，菌落顏色加深，呈深褐色。
2、鏡檢(1)菌絲粗壯，分枝較多；(2)美藍(lán)單染色著色深；(3)可見大量生長點(diǎn)，無空泡；(4)無雜菌污染。
3、生理生化特征(1)PH值要求5-7；(2)生長最適宜溫度20-25℃；(3)對氧的需求好氣性。
(4)抗老化特性抗老化特性能力強(qiáng)，傳代15代不退化，各項(xiàng)指標(biāo)穩(wěn)定。
4、培養(yǎng)基成分MMN培養(yǎng)基根據(jù)文獻(xiàn)及上述復(fù)栽的實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明該膠陀螺菌(即Bi-II·FA菌株)屬于膠鼓菌屬，膠陀螺種，本發(fā)明的膠陀螺菌種傳代15代以上不退化，屬于抗老化能力、穩(wěn)定性代謝能力強(qiáng)的菌株。一種菌種的性能如何，不僅要求它的生活能力強(qiáng)，生長發(fā)育速度快，保證產(chǎn)品的質(zhì)量，又要考慮它的代謝能力，能否穩(wěn)定，所需提取有效活性成分的多寡，是確定菌種性能重要考核條件，本菌株保證了上述要求條件。
利用分離后的膠陀螺菌Bi-II·FA菌株進(jìn)行人工培養(yǎng)膠陀螺子實(shí)體，采用固態(tài)→液態(tài)→固態(tài)的工藝路線，包括如下步驟斜面培養(yǎng)、液體深層發(fā)酵種子培養(yǎng)、子實(shí)體培養(yǎng)和出菇管理。
所述的斜面培養(yǎng)，所用的培養(yǎng)基為MMN培養(yǎng)基，PH為5-7，培養(yǎng)溫度為20-25℃，培養(yǎng)時(shí)間為12-18天；所述的液體深層發(fā)酵種子培養(yǎng)包括搖瓶種子培養(yǎng)或發(fā)酵罐培養(yǎng)。
所述的搖瓶種子培養(yǎng)，所用培養(yǎng)基成分包括蛋白胨1.5％，酵母膏0.1％，葡萄糖3％、MgSO40.05％，KH2PO40.05％；PH5-7；接種量為斜面與搖瓶之比1∶8；培養(yǎng)溫度為20-25℃，培養(yǎng)時(shí)間為8-10天，旋轉(zhuǎn)式搖床的轉(zhuǎn)速為160-200轉(zhuǎn)/分鐘。
所述及的子實(shí)體培養(yǎng)包括發(fā)酵瓶(袋)培養(yǎng)或雜木段培養(yǎng)(1)發(fā)酵瓶(袋)培養(yǎng)所用培養(yǎng)基為麥粒、蔗糖、蛋白胨的混合物，其配方為麥粒80％，硬木屑15％，蔗糖1.5％，蛋白胨1％，培養(yǎng)溫度為20-25℃，0.5kg/cm2條件下滅菌處理，接種后培養(yǎng)時(shí)間30-35天；(2)木段培養(yǎng)所選用的木段最好采用柞木或其它硬雜木段，接種前先采用常規(guī)方法進(jìn)行滅菌處理其中所述的出菇管理，包括適時(shí)打開瓶蓋或脫袋處理，溫度為15-24℃，濕度為80％以上，通風(fēng)，至長成膠陀螺子實(shí)體。
在人工培養(yǎng)過程中，為擴(kuò)大產(chǎn)量，增加菌種數(shù)量還可在搖瓶種子培養(yǎng)之后，增加種子罐培養(yǎng)，培養(yǎng)基與搖瓶種子培養(yǎng)所用培養(yǎng)基相同pH消前為5-7，接種量為10％；溫度為20-25℃，空氣流量0.4-0.5V/V，罐壓0.5-0.6kg/cm2，培養(yǎng)時(shí)間為7-8天。
本發(fā)明提供的膠陀螺菌種，安全性高，在規(guī)范實(shí)施過程中不危及人類健康或動(dòng)、植物病原或污染環(huán)境。經(jīng)系統(tǒng)考核傳代15代以上不退化，屬于抗老化能力、穩(wěn)定性和代謝能力較強(qiáng)的菌株。本發(fā)明公開的人工培養(yǎng)的方法具有設(shè)計(jì)的工藝路線合理，長出子實(shí)體的時(shí)間比按常規(guī)的人工培養(yǎng)方法提前1個(gè)月左右以上，具有生長快，產(chǎn)量高，代謝產(chǎn)物穩(wěn)定的特點(diǎn)，具有較高的實(shí)際應(yīng)用價(jià)值，利用膠陀螺或其菌絲體的有效成分，制作治療銀屑病、皮炎、白癲風(fēng)或濕疹等皮膚病的藥物，提供一個(gè)長遠(yuǎn)的、科學(xué)的藥源途徑。
具體實(shí)施例方式
實(shí)施例1斜面菌種培養(yǎng)采用MMN培養(yǎng)基，pH為6消前，培養(yǎng)溫度20-25℃，該菌萌發(fā)快，菌種接后4天內(nèi)形成以接種塊為基點(diǎn)的明顯菌溶。大約15天左右菌溶長滿管，菌落外觀呈明顯的三種顏色，外緣呈灰白色，向里淺黃色，中間黃褐色。菌絲呈短絨毛狀。通過鏡檢，可以明顯觀察到菌絲粗壯，分枝較多，美藍(lán)單染色著色深，可見大量生長點(diǎn)，無空泡，無雜菌污染。
搖瓶種子培養(yǎng)所用的培養(yǎng)基成分為蛋白胨1.5％，酵母膏0.1％，葡萄糖2％，MgSO40.05％，KH2PO40.05％，高壓滅菌，壓力1kg/cm2，30min，冷卻后接種PH6.5；接種量為斜面與搖瓶之比1∶8，即一個(gè)斜面接8個(gè)250毫升的搖瓶(裝量100毫升)；培養(yǎng)溫度20-25℃；旋轉(zhuǎn)式搖床180轉(zhuǎn)/分鐘。培養(yǎng)時(shí)間9天，菌球濕重達(dá)40％以上(濕重的測定方法取100毫升培養(yǎng)液置于量筒中，靜置15分鐘，觀察菌球的沉降的刻度的百分?jǐn)?shù))；味感為水果香味；鏡檢觀察到菌絲著色深，粗壯，分枝多，生長點(diǎn)明顯可見，未見雜菌污染，即可作為搖瓶種子備用。
種子罐培養(yǎng)培養(yǎng)基同搖瓶種子培養(yǎng)，pH為6，溫度為25℃，空氣流量0.45V/V，罐壓0.55kg/cm2；接種量為種子罐裝量的13％。培養(yǎng)7天左右，當(dāng)外觀形態(tài)檢查到菌球濕重50％以上；味感呈水果香味；鏡檢觀察到菌絲著色深，粗壯，分枝多，生長點(diǎn)明顯可見，未見雜菌污染，即可進(jìn)行發(fā)酵瓶(袋)培養(yǎng)。
發(fā)酵瓶(袋)培養(yǎng)所用培養(yǎng)基配方為麥粒80％，木屑15％，蔗糖1.5％，蛋白胨1％，溫度為25℃；pH6培養(yǎng)約32天。
外觀檢查有茂密的灰白色菌絲長滿全瓶，在瓶壁邊緣有少量的淺黃色菌絲及黑色疣狀物，無雜菌污染，鏡檢觀察到菌絲著色深，粗壯，分枝多，生長點(diǎn)明顯可見及大量橢圓形膠陀螺孢子。
出菇管理發(fā)酵瓶(袋)培養(yǎng)30天菌絲長滿全瓶后，繼續(xù)發(fā)育，陸續(xù)形成黑色疣狀物(即原基)，打開瓶蓋或脫袋處理，對溫度要加大溫差刺激，同時(shí)增加濕度在80％以上，加強(qiáng)適當(dāng)通風(fēng)，繼續(xù)生長發(fā)育，長成膠陀螺子實(shí)體。經(jīng)鑒定，子實(shí)體的形態(tài)子襄盤(即子實(shí)體)散生或叢生，短柄，陀螺形，伸展后呈淺杯狀，直徑3-15mm。外部銹褐色，有成簇的絨毛。子實(shí)體干時(shí)粗皺，菌柄斷面角質(zhì)，有黑褐色和棕色相交織的紋理，質(zhì)地堅(jiān)硬，不易折斷。子實(shí)層黑色、平滑。子襄近棒形，有長柄，有孢子部分長。孢子單行排列或在子襄上端雙行排列，且無色；有油滴；上述形態(tài)與野生膠陀螺子實(shí)體相同。
實(shí)施例2其它步驟與實(shí)施例1相同，子實(shí)體培養(yǎng)采用柞木段培養(yǎng)。
取直徑8厘米新材，切成10公分長木段，常壓滅菌10小時(shí)，取出淋干水份，降溫至30℃，打孔至木質(zhì)部，間距15公分，接種，接種后套寬指袋，套蓋，外包棉制品保溫發(fā)菌，當(dāng)菌絲長滿時(shí)移到栽培室，按栽培池要求進(jìn)行(潔凈)，按正常出菌條件進(jìn)行(同上)處理。栽培方式室外自然堆放，溫度21℃，濕度70％，不光照(越暗越好)，適度通風(fēng)。
權(quán)利要求
1.一種膠陀螺(膠鼓菌)Bi-II·FA菌株CGMCC N0.0883。
2.一種以膠陀螺(膠鼓菌)Bi-II·FA菌株CGMCC N0.0883進(jìn)行人工培育膠陀螺的方法，其特征在于包括對膠陀螺(膠鼓菌)Bi-II·FA進(jìn)行培養(yǎng)。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于包括如下步驟斜面培養(yǎng)，液體深層發(fā)酵種子培養(yǎng)，子實(shí)體培養(yǎng)，出菇管理。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的人工培育膠陀螺的方法，其特征在于，所述及的斜面培養(yǎng)所用的培養(yǎng)基為MMN培養(yǎng)基。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的人工培育膠陀螺的方法，其特征在于，所述及的斜面培養(yǎng)的條件為pH5-7消前，培養(yǎng)溫度為20-25℃。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的人工培育膠陀螺的方法，其特征在于，所述及的斜面培養(yǎng)所用的培養(yǎng)時(shí)間為12-18天。
7.根據(jù)權(quán)利要求3所述的人工培育膠陀螺的方法，其特征在于，液體深層發(fā)酵種子培養(yǎng)所用的培養(yǎng)基成分包括蛋白胨、酵母膏、葡萄糖、MgSO4和KH2PO4。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的人工培育膠陀螺的方法，其特征在于，液體深層發(fā)酵種子培養(yǎng)的條件為pH5～7消前，培養(yǎng)溫度為20～25℃。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的人工培育膠陀螺的方法，其特征在于，搖瓶種子培養(yǎng)的培養(yǎng)時(shí)間為8～10天。
10.根據(jù)權(quán)利要求3所述的人工培育膠陀螺的方法，其特征在于，所述及的子實(shí)體培養(yǎng)為發(fā)酵瓶(袋)培養(yǎng)，所用培養(yǎng)基為麥粒、木屑、蔗糖、蛋白胨的混合物。
11.根據(jù)權(quán)利要求10所述的人工培育膠陀螺的方法，其特征在于，培養(yǎng)溫度為20-25℃；pH5-7消前。
12.根據(jù)權(quán)利要求10或11所述的人工培育膠陀螺的方法，其特征在于，所述的發(fā)酵瓶(袋)培養(yǎng)，培養(yǎng)時(shí)間為30-35天。
13.根據(jù)權(quán)利要求3所述的方法，其特征在于，所述及的子實(shí)體培養(yǎng)為硬雜木段培養(yǎng)。
14.根據(jù)權(quán)利要求13所述的方法，其特征在于，所選用的木段為柞木。
15.根據(jù)權(quán)利要求3所述的人工培育膠陀螺的方法，其特征在于，其中所述的出菇管理，包括適時(shí)打開瓶蓋或脫袋處理。
16.根據(jù)權(quán)利要求15所述的人工培育膠陀螺的方法，其特征在于，其中所述的出菇管理的條件為溫度15-24℃，濕度為80％以上。
17.根據(jù)權(quán)利要求3-16任一項(xiàng)所述的人工培育膠陀螺的方法，其特征在于，在搖瓶種子培養(yǎng)之后，為擴(kuò)大菌種量可進(jìn)行種子罐培養(yǎng)，培養(yǎng)基與搖瓶種子培養(yǎng)所用培養(yǎng)基相同，接種量為種子罐裝量的10-15％；溫度為20-25℃，培養(yǎng)時(shí)間為7-8天。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種膠陀螺膠鼓菌及以該菌種人工培育膠陀螺的方法。本發(fā)明公開了一種膠陀螺膠鼓菌Bi－II·F菌株，經(jīng)過鑒定驗(yàn)證無誤后確認(rèn)分離得到的該菌種確實(shí)屬于膠鼓菌屬，保藏號(hào)為CGMCC No.0883。本發(fā)明還公開了利用Bi－II·F菌株進(jìn)行人工培養(yǎng)膠陀螺的方法，包括如下步驟斜面培養(yǎng)、液體深層發(fā)酵種子培養(yǎng)、子實(shí)體培養(yǎng)和出菇管理。本發(fā)明公開的人工培養(yǎng)的方法具有設(shè)計(jì)的工藝路線合理，長出子實(shí)體的時(shí)間比常規(guī)的人工培養(yǎng)方法提前1個(gè)月左右，具有生長快，產(chǎn)量高，代謝產(chǎn)物穩(wěn)定的特點(diǎn)，具有較高的實(shí)際應(yīng)用價(jià)值。利用膠陀螺或其菌絲體的有效成分，制作治療銀屑病、皮炎、白癲風(fēng)或濕疹等皮膚病的藥物，具有很好的治療效果。
文檔編號(hào)C12N1/14GK1532277SQ0311588
公開日2004年9月29日 申請日期2003年3月19日 優(yōu)先權(quán)日2003年3月19日
發(fā)明者方中華 申請人:中國高科集團(tuán)股份有限公司, 上海高科生物工程有限公司