專(zhuān)利名稱：：用于接種新生兒的改良的安卡拉痘苗病毒的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及病毒用于制備藥物的用途，所述藥物用于接種或治療新生的或產(chǎn)前的(neonatalorprenatalanimal)動(dòng)物(包括人)，其中所述病毒能感染新生的或產(chǎn)前的動(dòng)物(包括人)的細(xì)胞，但不能在新生的或產(chǎn)前的動(dòng)物(包括人)的體內(nèi)復(fù)制成感染性子代病毒。優(yōu)選病毒為改良的安卡拉痘苗病毒(ModifiedVacciniaVirusAnkara)。本發(fā)明具體涉及接種新生兒以抵抗與接種所用病毒屬于相同病毒組的病毒的感染。另外，本發(fā)明涉及接種新生兒以抵抗選自外源抗原和腫瘤抗原的抗原，其中腫瘤抗原和/或外源抗原不同于與病毒相關(guān)的抗原。本發(fā)明還涉及如上文所限定的病毒提高使樹(shù)突細(xì)胞或其前體細(xì)胞活化的因子的水平和/或增加樹(shù)突細(xì)胞或其前體細(xì)胞數(shù)目和/或提高干擾素(IFN)或IL-12的生成和/或細(xì)胞性含量(cellularcontent)的用途。
背景技術(shù)：
：動(dòng)物和人類(lèi)的天然環(huán)境含有多種感染因子，如病毒、細(xì)菌或真菌。其中很多感染因子可導(dǎo)致被感染宿主患病。在正常情況下，被感染宿主在一段時(shí)間之后可以從感染因子誘發(fā)的疾病中恢復(fù)。這種恢復(fù)歸功于動(dòng)物或人類(lèi)的免疫系統(tǒng)。免疫系統(tǒng)是人或動(dòng)物身體的一部分，它負(fù)責(zé)消滅感染因子。免疫應(yīng)答分為兩種，即特異性和非特異性(天然(innate))反應(yīng)，但這兩者密切合作。非特異性免疫應(yīng)答是抗多種外源物質(zhì)和感染因子的即發(fā)型防御。在抗病毒的天然免疫應(yīng)答中，干擾素(IFN)-α和IFN-β是控制最初的病毒復(fù)制并活化自然殺傷(NK)細(xì)胞以立即殺死感染細(xì)胞所必需。細(xì)胞內(nèi)的細(xì)菌或寄生蟲(chóng)病原體誘導(dǎo)IL-12，而IL-12上調(diào)NK細(xì)胞和/或一些T細(xì)胞亞群中的IFN-γ。被IFN-γ活化的NK細(xì)胞即可殺死細(xì)胞內(nèi)病原體。另外，IFN-γ也能活化巨噬細(xì)胞并使它們能殺死被內(nèi)化的病原體。迄今為止IFN-α/β最豐富的來(lái)源是樹(shù)突細(xì)胞(DC)，該細(xì)胞是一種能策略地分布于全身的特化細(xì)胞群體。其中，漿細(xì)胞樣DC或CD11c+CD8+DC是最佳的IFN-α/β生產(chǎn)者。被細(xì)胞內(nèi)非病毒病原體感染的CD8+DC是能分泌免疫防御早期步驟所至關(guān)重要的IL-12的關(guān)鍵細(xì)胞。一旦生物體首次受到具體外源物質(zhì)(抗原)的攻擊，一段時(shí)間后可誘發(fā)抗所述物質(zhì)的特異性免疫應(yīng)答。特異性免疫應(yīng)答的起始也需要DC的協(xié)作。這些細(xì)胞不斷地從外周淋巴器官轉(zhuǎn)移至次級(jí)淋巴器官、淋巴結(jié)或脾臟，在那里使原初(naive)T和B細(xì)胞再循環(huán)。DC所攜帶的運(yùn)送至這些器官的抗原將原初T細(xì)胞和B細(xì)胞活化為效應(yīng)T細(xì)胞和B細(xì)胞。為此，DC不僅攜帶抗原，而且其識(shí)別病原體的可塑性(plasticity)允許DC中不同的基因被活化，從而允許T細(xì)胞的被病原體調(diào)節(jié)的引發(fā)(priming)。特異性免疫應(yīng)答是高效率的，它負(fù)責(zé)保護(hù)從一種具體感染中恢復(fù)的個(gè)體抵抗所述具體感染。從而，再次被相同或極類(lèi)似感染因子感染僅導(dǎo)致很輕微的癥狀或根本不表現(xiàn)癥狀，這是因?yàn)橐汛嬖卺槍?duì)該感染因子的“現(xiàn)成的特異性免疫力”。所述免疫力和免疫記憶各自持續(xù)較長(zhǎng)時(shí)間，有時(shí)甚至持續(xù)終生。因此，免疫記憶的誘發(fā)可用于接種，即保護(hù)個(gè)體使其免受具體病原體的感染。為了進(jìn)行接種，免疫系統(tǒng)用疫苗攻擊，所述疫苗自身應(yīng)比欲誘發(fā)的免疫應(yīng)答所抗的病原體的害處要小。疫苗含有或表達(dá)那些出現(xiàn)在接種所針對(duì)的感染因子表面或由該感染因子表達(dá)的表位。因此，生物體可以被包含表位的疫苗免疫，從而抵抗含有該表位的感染因子的感染。典型的疫苗是減毒病毒或滅活病毒(如脊髓灰質(zhì)炎疫苗或天花病毒疫苗)、重組蛋白(如重組乙肝病毒S-蛋白)、熱滅活的細(xì)菌毒素(破傷風(fēng)梭菌(Clostridiumtetani)毒素)或細(xì)菌莢膜壁多糖(肺炎鏈球菌(Streptococcuspneumoniae))。由于傳染病會(huì)在新生兒和乳兒中造成很?chē)?yán)重的疾病，因此，有必要盡可能早地接種幼小或新生的動(dòng)物。需要接種的疾病的例子有痘病毒感染，包括天花病毒感染。然而，新生哺乳動(dòng)物的免疫系統(tǒng)尚未成熟，這一事實(shí)使成功接種新生兒的嘗試受阻。據(jù)認(rèn)為新生嬰兒和哺乳動(dòng)物的免疫系統(tǒng)需要經(jīng)過(guò)一段時(shí)間才能逐漸成熟。對(duì)于人類(lèi)而言，在生命的第一年內(nèi)逐漸成熟。這就是新生年齡組在周歲前對(duì)多種感染易感的原因(Gans等，J.Am.Med.Assoc.(1998)280，527-532)。更具體地，新生嬰兒的B-細(xì)胞功能微弱，樹(shù)突細(xì)胞的初級(jí)抗原呈遞有缺陷，T細(xì)胞增殖也是有限的(Gans等，J.Am.Med.Assoc.(1998)280，527-532)。剛出生時(shí)，脾臟中的T細(xì)胞水平比成人低1000倍。為了獲得至少是微弱的免疫，有人建議使用復(fù)制型病毒或含有佐劑的制劑來(lái)免疫。然而，使用復(fù)制病毒總是存在風(fēng)險(xiǎn)，由于T細(xì)胞是病毒清除所必需的，不成熟的免疫系統(tǒng)可能被病毒感染或活病毒疫苗所制服(Hassett等，J.Virol.(1997)71，7881-7888)。由于新生兒體內(nèi)Th-1輔助T細(xì)胞的細(xì)胞因子生成較弱，嬰兒的反應(yīng)主要是Th-2型。結(jié)果，不能征集細(xì)胞毒T細(xì)胞，也就無(wú)法清除病毒。哺乳動(dòng)物的情況與人的情況很類(lèi)似，即出生后的免疫系統(tǒng)尚未成熟。在新生小鼠中，脾臟CD4+T細(xì)胞的數(shù)目為80,000，CD8+T細(xì)胞的數(shù)目比成年小鼠脾臟中的低1000倍。另外，這些小鼠中的干擾素(IFN)生產(chǎn)系統(tǒng)不成熟。因此，新生小鼠不能通過(guò)IFN有效控制感染位點(diǎn)的細(xì)胞內(nèi)病原體的擴(kuò)增。此外，免疫細(xì)胞的低數(shù)目和有可能不足的活化期十分有限，以致于不能應(yīng)付快速擴(kuò)增的病原體或接種所用的復(fù)制病毒。由于與活病毒疫苗有關(guān)的風(fēng)險(xiǎn)，不推薦用復(fù)制病毒接種新生動(dòng)物，包括人。例如，建議不要用已被使用直至天花滅絕的痘苗病毒株，如病毒株Elstee、Copenhagen和NYCBH接種新生兒以抵抗天花病毒。根據(jù)美國(guó)最近的推薦，年齡小于12個(gè)月的幼兒不應(yīng)接種迄今為止可以買(mǎi)到的天花病毒疫苗。用含有佐劑的制劑接種新生兒的缺點(diǎn)是大量有害物質(zhì)被導(dǎo)入體內(nèi)。因此，只有在緊急情況下，例如在乙肝病毒感染時(shí)才會(huì)接種人類(lèi)新生兒。概括地說(shuō)，應(yīng)注意出生時(shí)免疫系統(tǒng)并不成熟。由于用有復(fù)制能力的病毒或含有佐劑的制劑接種具有顯著的缺點(diǎn)，德國(guó)年齡小于2個(gè)月(EmpfehlungderstandigenImpfkommissionSTICO，2001)或美國(guó)6周齡以下(ACIP“RecommendedChildhoodImmunizationSchedule，UnitedSates”)的嬰兒不能被接種。通過(guò)妊娠過(guò)程中或母乳喂養(yǎng)時(shí)從母親轉(zhuǎn)移至乳兒的母體抗體，可以部分補(bǔ)償免疫系統(tǒng)發(fā)育的延遲。然而，因多種原因，不是所有的嬰兒都能接受母乳喂養(yǎng)。因此，對(duì)人而言，有一段約6-8周的非常關(guān)鍵的時(shí)期，在這段時(shí)間內(nèi)，具有不成熟因而功能不完全的免疫系統(tǒng)的嬰兒不接受母體抗體，此時(shí)，接種通常是不成功的，或者十分危險(xiǎn)。在哺乳動(dòng)物，特別是有重要經(jīng)濟(jì)價(jià)值的動(dòng)物，如奶牛或陪伴動(dòng)物，如貓和狗中，情況非常類(lèi)似。為了降低花費(fèi)，小牛從母牛處接受的牛奶的量經(jīng)常急劇減少。取而代之的是，小牛接受奶粉、起子(starter)和特殊濃縮飼料的混合物，有時(shí)在出生后一周即開(kāi)始食用所述混合物。結(jié)果，小牛未接受必需量和種類(lèi)的母體抗體，以致于不成熟的免疫系統(tǒng)對(duì)感染非常敏感。另外，喂養(yǎng)小牛的農(nóng)夫和將它們養(yǎng)成肉牛的農(nóng)夫經(jīng)常是不同的人。來(lái)自不同養(yǎng)牛場(chǎng)的4至6周齡小牛被集中到一起，運(yùn)送至其它農(nóng)場(chǎng)用于產(chǎn)肉。此時(shí)，母體抗體水平低，免疫系統(tǒng)尚未發(fā)育完全，但動(dòng)物在脅迫條件下被暴露于新的感染因子。這增加了感染風(fēng)險(xiǎn)，而接種可以防止所述風(fēng)險(xiǎn)。在感染壓力大的養(yǎng)貓或養(yǎng)狗場(chǎng)也可發(fā)現(xiàn)類(lèi)似的情況。發(fā)明目的本發(fā)明的目的是提供分別接種新生人和動(dòng)物的方法，所述接種針對(duì)的是外源抗原和分別與人和動(dòng)物疾病相關(guān)的抗原。更具體地，本發(fā)明的目的是提供使新生動(dòng)物和人的免疫系統(tǒng)加速成熟的方法。本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供能接種新生動(dòng)物，包括人以抵抗痘病毒感染，特別是抗天花病毒感染的方法。發(fā)明詳述根據(jù)本發(fā)明，我們意外發(fā)現(xiàn)可以用病毒安全而有效地接種和/或治療新生的或產(chǎn)前的動(dòng)物(包括人)，其中所述病毒能感染新生的或產(chǎn)前的動(dòng)物(包括人)的細(xì)胞，但不能在所述細(xì)胞中復(fù)制成感染性的子代病毒。特別地，我們已證實(shí)本發(fā)明使用的病毒，如MVA，特別是MVA-BN及其衍生物(見(jiàn)下文)可以施用給新生兒，而未顯示出任何有害的效果。用病毒接種動(dòng)物導(dǎo)致抗接種所用病毒的特異性免疫應(yīng)答和/或抗外源抗原和下文將詳細(xì)解釋的腫瘤抗原的一般性接種。另外，本發(fā)明所用的病毒能誘發(fā)和/或增強(qiáng)免疫系統(tǒng)的成熟，這與樹(shù)突細(xì)胞數(shù)目和諸如干擾素的因子的增加有關(guān)。即使給動(dòng)物施用的制劑不含有佐劑，用本發(fā)明所用的病毒接種也是可能的。簡(jiǎn)單地說(shuō)，本發(fā)明所用的病毒能(i)在新生兒中引發(fā)有效的免疫應(yīng)答，(ii)無(wú)需佐劑即可被施用和(iii)不具有制服生物體的風(fēng)險(xiǎn)。根據(jù)本發(fā)明，第一次接種之后，產(chǎn)生的保護(hù)作用可維持至少5天，優(yōu)選至少7、14或28天。“能感染細(xì)胞”的病毒是表面具有能與宿主細(xì)胞相互作用的結(jié)構(gòu)的病毒，所述相互作用的程度能使病毒或至少病毒基因組摻入宿主細(xì)胞。盡管本發(fā)明所用病毒能感染宿主細(xì)胞，但它們不能在感染細(xì)胞中復(fù)制成感染性子代病毒。在本發(fā)明的上下文中，術(shù)語(yǔ)“不能在所述細(xì)胞中復(fù)制成感染性子代病毒的病毒”指的是其基因組至少部分被轉(zhuǎn)錄和翻譯成病毒蛋白質(zhì)或甚至被復(fù)制，然而，不能被包裝成感染性病毒顆粒的病毒。因此，本發(fā)明所用病毒是能導(dǎo)致宿主中的失敗感染的病毒。發(fā)生失敗感染的原因有兩個(gè)根據(jù)第一個(gè)原因，細(xì)胞可能對(duì)感染敏感，但在所述細(xì)胞中復(fù)制病毒必需的病毒基因并不是全都能被表達(dá)和/或存在于病毒基因組中，因此，該細(xì)胞可能不允許病毒復(fù)制。針對(duì)人細(xì)胞的本發(fā)明此類(lèi)病毒的例子是下文將要詳細(xì)解釋的改良安卡拉痘苗病毒(MVA)。根據(jù)第二個(gè)原因，失敗感染也可以是用缺損病毒感染細(xì)胞而引起的，所述缺損病毒缺乏病毒基因的全補(bǔ)充物。針對(duì)人細(xì)胞的本發(fā)明此類(lèi)病毒的例子是DISC-HSV1(缺損的單-周期單純皰疹病毒)，即局限于單個(gè)感染周期的單純皰疹病毒(Dilloo等，Blood1997，89119-127)。該病毒缺乏必需的糖蛋白H(gH)基因，但能在表達(dá)gH的補(bǔ)充細(xì)胞系中生長(zhǎng)至高滴度。在允許皰疹病毒生長(zhǎng)的非-補(bǔ)充細(xì)胞系中，局限于單個(gè)感染周期，導(dǎo)致釋放非感染性病毒。術(shù)語(yǔ)“不能被復(fù)制”優(yōu)選指在接種動(dòng)物的細(xì)胞中根本不能復(fù)制的病毒。然而，顯示出能被新生兒不成熟的免疫系統(tǒng)所控制的微弱殘留復(fù)制活性的病毒也落入本申請(qǐng)的范圍之內(nèi)。本發(fā)明的病毒可以是任何能感染動(dòng)物細(xì)胞，但不能在所述細(xì)胞中復(fù)制成感染性子代病毒的病毒。應(yīng)理解能感染第一種動(dòng)物的細(xì)胞，但不能在所述細(xì)胞中復(fù)制成感染性子代病毒的病毒在第二種動(dòng)物中可能有不同的表現(xiàn)。例如，對(duì)于人而言，MVA-BN及其衍生物(見(jiàn)下文)是能感染人細(xì)胞，但不能在人細(xì)胞中復(fù)制成感染性子代病毒的病毒。相同的病毒可在雞中復(fù)制，即在雞中，MVA-BN是能在雞細(xì)胞中復(fù)制成感染性子代病毒的病毒。本領(lǐng)域技術(shù)人員已知針對(duì)特定動(dòng)物種類(lèi)選擇何種病毒。測(cè)定病毒是否能在新生的或產(chǎn)前的動(dòng)物中復(fù)制的試驗(yàn)公開(kāi)于WO02/42480，該試驗(yàn)使用了AGR129小鼠品系。該小鼠模型獲得的結(jié)果對(duì)人也有指示作用。因此，本申請(qǐng)所用術(shù)語(yǔ)“不能復(fù)制成感染性子代病毒”對(duì)應(yīng)于WO02/42489中針對(duì)小鼠所用的術(shù)語(yǔ)“不能在體內(nèi)復(fù)制”。下文將描述該試驗(yàn)的細(xì)節(jié)。本發(fā)明的病毒優(yōu)選能在至少一種動(dòng)物的至少一種細(xì)胞中復(fù)制。因此，可以在給欲接種和/或治療的動(dòng)物給藥前擴(kuò)增病毒。有關(guān)例子可參見(jiàn)MVA-BN，該病毒能在CEF細(xì)胞中擴(kuò)增，但在新生的或產(chǎn)前的人中，是不能復(fù)制成感染性子代病毒的病毒。在此上下文中，應(yīng)注意被化學(xué)或物理滅活的病毒不具有該優(yōu)選實(shí)施方案的所有特性，因?yàn)闇缁畹牟《灸芨腥拘律幕虍a(chǎn)前的動(dòng)物(包括人)的細(xì)胞，不能在新生的或產(chǎn)前的動(dòng)物(包括人)中復(fù)制成感染性子代病毒，但這些病毒不能在至少一種動(dòng)物的至少一種細(xì)胞中復(fù)制。優(yōu)選病毒是DNA病毒。對(duì)于哺乳動(dòng)物細(xì)胞，特別是人細(xì)胞而言，更優(yōu)選DNA病毒選自DISC-皰疹病毒和改良安卡拉痘苗病毒(MVA)。改良安卡拉痘苗病毒(MVA)病毒與痘病毒科正痘病毒屬的成員痘苗病毒相關(guān)。在雞胚成纖維細(xì)胞上對(duì)安卡拉痘苗病毒株(CVA)連續(xù)進(jìn)行516次傳代即可產(chǎn)生MVA(有關(guān)評(píng)述可參見(jiàn)Mayr，A等，Infection3，6-14)。長(zhǎng)期傳代的后果是所得MVA病毒缺失了約31kb的基因組序列，因此，據(jù)描述其宿主細(xì)胞僅局限于鳥(niǎo)細(xì)胞(Meyer，H等，J.Gen.Virol.72，1031-1038)。已證實(shí)所得MVA在多種動(dòng)物模型中顯然是無(wú)毒力的(Mayr，A.&amp;Danner，K.Dev.Biol.Stand.41225-34)。另外，已在臨床試驗(yàn)中將MVA毒株用作抗人類(lèi)天花病的接種用疫苗(Mayr等，Zbl.Bakt.Hyg.I，Abt.Org.B167，375-390，Stickl等，Dtsch.med.Wschr.99，2386-2392)。這些研究涉及到120,000多個(gè)人，包括高風(fēng)險(xiǎn)的患者，這些研究證實(shí)與基于痘苗病毒的疫苗相比，MVA的毒力或感染性減低，但卻保持了良好的免疫原性。本發(fā)明優(yōu)選的毒株是保藏于歐洲動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)物保藏中心(ECACC)、保藏號(hào)為V00120707的MVA575，以及保藏于同一保藏機(jī)構(gòu)、保藏號(hào)為V000083008的MVA-BN以及它們的衍生物。對(duì)于人而言特別優(yōu)選的MVA毒株，優(yōu)選為最優(yōu)選的毒株，如MVA-BN及其衍生物的特性概述如下(i)能在雞胚成纖維細(xì)胞(CEF)和細(xì)胞系BHK中生殖復(fù)制，但不能在人細(xì)胞系HaCat中生殖復(fù)制，(ii)不能在體內(nèi)復(fù)制，(iii)與已知毒株MVA575(ECACCV00120707)相比，在致死攻擊模型中能誘發(fā)較高的免疫原性和/或(iv)與DNA-引發(fā)/痘苗病毒加強(qiáng)的方案相比，痘苗病毒引發(fā)/痘苗病毒加強(qiáng)的方案能誘發(fā)至少基本上相同的免疫力水平。本發(fā)明的優(yōu)選MVA毒株具有特性(ii)，即不能在欲接種或治療的生物體和/或下文解釋的相應(yīng)檢測(cè)系統(tǒng)中復(fù)制，優(yōu)選還具有一個(gè)上述的其它特性，更優(yōu)選還具有兩個(gè)上述的其它特性。最優(yōu)選的是具有上述所有特性的MVA毒株。對(duì)人類(lèi)而言，具有上述所有特性的MVA毒株的例子是MVA-BN。MVA-BN的優(yōu)選衍生物是除了特性(ii)外，還具有至少一個(gè)上述特性，更優(yōu)選至少兩個(gè)上述特性的衍生物。最優(yōu)選的是具有上述所有特性的MVA-BN衍生物。與測(cè)定MVA毒株是否具有一個(gè)或多個(gè)上述特性(i)至(iv)所用試驗(yàn)有關(guān)的詳細(xì)信息可參見(jiàn)WO02/42480。該出版物還公開(kāi)了如何獲得具有所需特性的病毒。WO02/42480特別提供了MVA-BN和MVA-BN衍生物之特性的詳細(xì)定義，并詳細(xì)公開(kāi)了測(cè)定MVA毒株是MVA-BN還是其衍生物所用的生物學(xué)試驗(yàn)。換句話說(shuō)，WO02/42480中公開(kāi)了MVA-BN的特性，有關(guān)評(píng)價(jià)MVA毒株是MVA-BN還是其衍生物所用生物學(xué)試驗(yàn)的描述，以及獲得MVA-BN或其衍生物的方法。下文簡(jiǎn)短概述了本領(lǐng)域技術(shù)人員如何獲得具有一個(gè)或多個(gè)上述特性的MVA毒株，以及他們?nèi)绾螜z測(cè)給定的MVA毒株是否具有一個(gè)或多個(gè)所述特性，并由此判斷所述毒株是否是本發(fā)明的最優(yōu)選病毒。不應(yīng)將下文的概述理解成對(duì)WO02/42480的限制。取而代之的是，將WO02/42480全文列入本文作為參考。在本申請(qǐng)中，所用術(shù)語(yǔ)“不能在細(xì)胞系HaCAT中生殖復(fù)制”(Boukamp等，1988，JCellBiol106(3)761-71)的定義與WO02/42480中的相同。因此，“不能在細(xì)胞系HaCat中生殖復(fù)制”的病毒是在人細(xì)胞系HaCat中擴(kuò)增比率低于1的病毒。在人細(xì)胞系HaCat中，用作本發(fā)明載體的病毒的擴(kuò)增率優(yōu)選為0.8或更低。病毒的“擴(kuò)增比率”是由感染細(xì)胞產(chǎn)生的病毒(輸出Output)與在第一場(chǎng)所感染細(xì)胞的病毒最初用量(輸入Input)的比率(“擴(kuò)增比率”)。輸出和輸入之間的比率為“1”定義了下述擴(kuò)增狀況其中由感染細(xì)胞產(chǎn)生的病毒量與感染細(xì)胞的病毒的最初用量相等。保藏號(hào)為ECACCV00083008的病毒的“衍生物”優(yōu)選指復(fù)制特性與保藏的毒株實(shí)質(zhì)上相同，但其基因組的一個(gè)或多個(gè)部分顯示出差別的病毒。與保藏病毒具有相同“復(fù)制特性”的病毒是在CEF細(xì)胞和細(xì)胞系BHK、HeLa、HaCat和143B中以與保藏毒株類(lèi)似的擴(kuò)增比率復(fù)制，而在AGR120轉(zhuǎn)基因小鼠模型中檢測(cè)(見(jiàn)下文)，顯示出類(lèi)似的體內(nèi)復(fù)制的病毒。本申請(qǐng)中所用術(shù)語(yǔ)“不能在體內(nèi)復(fù)制”的定義與WO02/42480中的相同。因此，所述術(shù)語(yǔ)指的是如WO02/42480中所解釋的不能在人和小鼠模型中復(fù)制的病毒。WO02/42480中所用的小鼠不能產(chǎn)生成熟的B-和T-細(xì)胞(AGR129小鼠)。特別地，MVA-BN及其衍生物不能在用腹膜內(nèi)施用的107pfu病毒感染小鼠之后的至少45天，更優(yōu)選至少60天，最優(yōu)選90天的時(shí)間內(nèi)殺死AGR129小鼠。優(yōu)選顯示出“不能在體內(nèi)復(fù)制”之特性的病毒的進(jìn)一步的特征在于在用腹膜內(nèi)施用的107pfu病毒感染小鼠45天，優(yōu)選60天，最優(yōu)選90天之后，從AGR129小鼠的器官或組織中未回收到病毒。也可以使用任何其它小鼠品系來(lái)替代AGR129小鼠，所述小鼠品系不能產(chǎn)生成熟的B和T細(xì)胞，因此嚴(yán)重地?zé)o免疫應(yīng)答，并且對(duì)復(fù)制病毒高度易感。WO02/42480中解釋了測(cè)定MVA毒株是否具有“比已知毒株MVA575更高的免疫原性”所用的致死攻擊實(shí)驗(yàn)的細(xì)節(jié)。在所述致死攻擊模型中，在用有復(fù)制能力的痘苗病毒株，如WesternReserve毒株L929TK+或IHD-J感染之后，未接種的小鼠死亡。在致死攻擊模型描述的上下文中，用有復(fù)制能力的痘苗病毒感染被稱為“攻擊”。攻擊后4天，小鼠通常被殺死，通過(guò)使用VERO細(xì)胞的標(biāo)準(zhǔn)噬斑試驗(yàn)測(cè)定卵巢中的病毒滴度。測(cè)定未接種小鼠和用MVA-BN及其衍生物接種的小鼠的病毒滴度。更具體地，MVA-BN及其衍生物的特征在于在此試驗(yàn)中，用102TCID50/ml病毒接種之后，卵巢病毒滴度較未接種的小鼠相比降低了至少70％，優(yōu)選降低至少80％，更優(yōu)選降低至少90％。在優(yōu)選實(shí)施方案中，本發(fā)明的病毒，如MVA，特別是MVA-BN及其衍生物可用于引發(fā)/加強(qiáng)給藥?？梢韵仁褂貌《?，特別是本發(fā)明最優(yōu)選使用的MVA毒株，如MVA-BN及其衍生物以及攜有異源序列的相應(yīng)重組病毒有效引發(fā)天然動(dòng)物以及對(duì)痘病毒有現(xiàn)成的免疫力的動(dòng)物中的免疫應(yīng)答，然后再加強(qiáng)所述免疫應(yīng)答。因此，與DNA-引發(fā)/痘苗病毒加強(qiáng)的方案相比，本發(fā)明最優(yōu)選的病毒能在痘苗病毒引發(fā)/痘苗病毒加強(qiáng)的方案中誘發(fā)至少基本上相同的免疫力水平。如果經(jīng)WO02/42480中公開(kāi)的“試驗(yàn)1”和“試驗(yàn)2”之一，優(yōu)選為這兩個(gè)試驗(yàn)測(cè)定，與DNA-引發(fā)/痘苗病毒加強(qiáng)的方案相比，痘苗病毒引發(fā)/痘苗病毒加強(qiáng)方案中的CTL反應(yīng)至少基本上相同，即可認(rèn)為與DNA-引發(fā)/痘苗病毒加強(qiáng)的方案相比，痘苗病毒，特別是MVA毒株能在痘苗病毒引發(fā)/痘苗病毒加強(qiáng)方案中引發(fā)至少基本上相同的免疫力。更優(yōu)選與DNA-引發(fā)/痘苗病毒加強(qiáng)的方案相比，在至少一個(gè)試驗(yàn)中，痘苗病毒引發(fā)/痘苗病毒加強(qiáng)給藥之后的CTL反應(yīng)較高。最優(yōu)選兩個(gè)試驗(yàn)中的CTL反應(yīng)都比較高。本發(fā)明使用的病毒可以是非重組病毒，如MVA，即不含有異源核苷酸序列的病毒。非-重組痘苗病毒的例子是MVA-BN及其衍生物。或者，病毒可以是重組病毒，如含有其它對(duì)病毒而言為異源的核苷酸序列的重組MVA。本申請(qǐng)所用術(shù)語(yǔ)“異源的”指的是一般與天然病毒不密切相關(guān)的任意核酸序列組合，也將所述病毒稱為“重組病毒”。異源核酸序列優(yōu)選選自編碼至少一種抗原、抗原表位、有益蛋白質(zhì)和/或治療性化合物的序列。本申請(qǐng)所用術(shù)語(yǔ)“有益蛋白質(zhì)”指的是任何有助于保護(hù)動(dòng)物以使其免受選自腫瘤抗原和外源抗原的抗原攻擊的蛋白質(zhì)，其中腫瘤抗原和外源抗原不同于與病毒相關(guān)的抗原?；蛘?，更特別地，“有益蛋白質(zhì)”能有效增加可活化樹(shù)突細(xì)胞的因子的水平，和/或能有效增加樹(shù)突細(xì)胞的數(shù)目，和/或能有效增加干擾素(IFN)或IL-12的生成和/或細(xì)胞性含量。因此，所述有益蛋白質(zhì)的例子是干擾素，如IFN-α或IFN-β，IL-12，F(xiàn)lt-3-L和/或GM-CSF?？乖砦豢梢允侨魏文苷T發(fā)免疫應(yīng)答的表位。抗原表位的例子是得自下述生物體的表位惡性瘧蟲(chóng)(Plasmodiumfalciparum)，分枝桿菌(Mycobacteria)，流感病毒，選自黃病毒科、副粘病毒、肝炎病毒、人類(lèi)免疫缺陷病毒的病毒或?qū)е鲁鲅獰岬牟《?，如漢坦病毒或線狀病毒，即Ebola病毒或Marburg病毒。因此，例如，如果根據(jù)本發(fā)明使用表達(dá)異源表位的重組MVA接種新生兒，該治療的結(jié)果不僅僅因?yàn)槠涫姑庖呦到y(tǒng)的成熟加速而成為一般性的接種，還是抗異源MVA所表達(dá)的異源表位的特異性接種。由重組病毒中的異源核酸編碼的“治療性化合物”可以是例如治療性核酸，如反義核酸或具有所需生物活性的肽或蛋白質(zhì)。優(yōu)選將異源核酸序列插入病毒基因組的非-必需區(qū)?；蛘?，將異源核酸序列插入病毒基因組的天然缺失位點(diǎn)(有關(guān)MVA的情況公開(kāi)于PCT/EP96/02926中)。本領(lǐng)域技術(shù)人員已知如何將異源序列插入病毒基因組，如痘病毒基因組。本發(fā)明還提供了含有本發(fā)明的病毒，如MVA、例如用于在活的動(dòng)物體，包括人體中誘發(fā)免疫應(yīng)答的藥物組合物和疫苗。藥物組合物一般包括一種或多種藥物可接受的和/或準(zhǔn)許的載體、添加劑、抗生素、防腐劑、佐劑、稀釋劑和/或穩(wěn)定劑。所述輔助物質(zhì)可以是水、鹽水、甘油、乙醇、潤(rùn)濕劑或乳化劑、pH緩沖物質(zhì)等。適當(dāng)載體一般是代謝緩慢的大分子，如蛋白質(zhì)、多糖、聚乳酸、聚乙醇酸、聚合氨基酸、氨基酸共聚物、脂質(zhì)聚集體等。為了制備疫苗，應(yīng)將病毒或其重組體轉(zhuǎn)變?yōu)樯砜山邮艿男问?。轉(zhuǎn)變方法是本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的。對(duì)MVA和其它痘病毒而言，可基于制備抗天花接種所用痘病毒疫苗的經(jīng)驗(yàn)(如Stickl，H等，Dtsch.med.Wschr.99，2386-2392所述)來(lái)制備疫苗。例如，將純化的病毒以5×108TCID50/ml的滴度配制于約10mMTris，140mMNaClpH7.4中，并儲(chǔ)存于-80℃。為了制備疫苗注射劑，可在安瓿，優(yōu)選為玻璃安瓿中，將例如101-108個(gè)病毒(如MVA)顆粒凍干于100ml含有2％蛋白胨和1％人白蛋白的磷酸緩沖鹽水(PBS)內(nèi)?；蛘?，通過(guò)逐步冷凍干燥制劑中的病毒來(lái)生產(chǎn)疫苗注射劑。該制劑中可含有其它添加劑，如甘露糖醇、葡聚糖、糖、甘氨酸、乳糖或聚乙烯吡咯烷酮或其它添加劑，如抗氧化劑或惰性氣體，穩(wěn)定劑或適于體內(nèi)給藥的重組蛋白質(zhì)(如人血清白蛋白)。然后密封玻璃安瓿，將其儲(chǔ)存于4℃至室溫幾個(gè)月。然而，只要不需要用，優(yōu)選將安瓿儲(chǔ)存于低于-20℃的溫度下。為了接種或治療，可將凍干物溶解于0.1至0.5ml水溶液，優(yōu)選為生理鹽水或Tris緩沖液，再通過(guò)非腸道、肌內(nèi)或本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的任何其它給藥途徑，全身性或局部施用所述液體。本領(lǐng)域技術(shù)人員可以已知的方式最優(yōu)化給藥模式、劑量和給藥次數(shù)?？赏ㄟ^(guò)口服、鼻、肌內(nèi)、靜脈內(nèi)、腹膜內(nèi)、皮內(nèi)、子宮內(nèi)和/或皮下給藥施用本發(fā)明的病毒，特別是MVA。在小動(dòng)物中，優(yōu)選通過(guò)非腸道或鼻進(jìn)行免疫接種，而在較大的動(dòng)物或人中，優(yōu)選皮下、肌內(nèi)或口服接種。優(yōu)選以101TCID50(組織培養(yǎng)感染因子量)至109TCID50的劑量施用MVA。如上文所指出的，可在首次接種(“引發(fā)接種”)和二次接種(“加強(qiáng)接種”)中施用治療有效量的本發(fā)明病毒，特別是MVA，如MVA-BN及其衍生物。在本發(fā)明的上下文中，術(shù)語(yǔ)“動(dòng)物”也覆蓋人類(lèi)。更一般地，動(dòng)物是脊椎動(dòng)物，優(yōu)選為包括人的哺乳動(dòng)物。動(dòng)物的具體例子有如狗、貓的寵物，有重要經(jīng)濟(jì)價(jià)值的動(dòng)物，如小牛、牛、綿羊、山羊、馬、豬和其它動(dòng)物，如小鼠、大鼠。對(duì)于這些動(dòng)物和人來(lái)說(shuō)，MVA和DISC-HSV是特別優(yōu)選的病毒。如果使用的病毒能感染鳥(niǎo)的細(xì)胞，但不能在所述細(xì)胞中復(fù)制成感染性子代病毒，本發(fā)明還可用于有重要經(jīng)濟(jì)價(jià)值的鳥(niǎo)類(lèi)，如火雞、鴨、鵝和母雞。本說(shuō)明書(shū)中所用術(shù)語(yǔ)“家養(yǎng)動(dòng)物”優(yōu)選指哺乳類(lèi)家養(yǎng)動(dòng)物，更優(yōu)選指狗、貓、小牛、牛、綿羊、山羊、豬、馬、鹿。根據(jù)第一個(gè)可替代的實(shí)施方案，可將本發(fā)明的病毒、特別是MVA-BN及其衍生物用作特異性的疫苗，即用于引發(fā)能保護(hù)被接種的新生兒以使其免于疾病的免疫應(yīng)答，所述疾病是由與接種所用病毒屬于同一病毒組、科或?qū)俚膹?qiáng)毒病毒所引起的。例如，可以使用上文所定義的MVA，特別是MVA-BN及其衍生物接種新生嬰兒以抵抗痘病毒感染，特別是抗天花病毒感染。也可以使用MVA，特別是MVA-BN及其衍生物接種脊椎動(dòng)物以抵抗在獸醫(yī)學(xué)上很重要的痘病毒感染。根據(jù)第一個(gè)可替代的實(shí)施方案，用于接種的病毒可以是非-重組病毒，例如MVA-BN或其衍生物，或者是在病毒基因組中攜有非天然地存在于所述基因組中的基因的重組病毒。優(yōu)選重組病毒攜有有助于刺激免疫應(yīng)答的其它基因。此類(lèi)基因的例子是細(xì)胞因子基因和干擾素基因。根據(jù)第二個(gè)但相關(guān)的可替代實(shí)施方案，用攜有如上文所定義的異源核酸序列的重組病毒接種新生兒，以誘發(fā)抗異源核酸序列所表達(dá)的氨基酸序列的免疫應(yīng)答。例如，核酸序列可編碼如上文所定義的抗原或抗原表位。該實(shí)施方案中的重組病毒的例子是含有編碼抗原的異源核酸的重組MVA，特別是重組MVA-BN或其衍生物，所述抗原來(lái)自(i)除MVA以外的病毒，如HIV-1，HIV-2，登革病毒，西尼羅病毒，日本乙型腦炎病毒，麻疹病毒，(ii)腫瘤抗原，(iii)細(xì)菌，(iv)真菌。如果重組病毒所表達(dá)的抗原是例如HIV抗原，即可使用重組病毒在被接種的新生兒中誘發(fā)抗HIV和防AIDS的免疫應(yīng)答。在較寬泛的意義上，使用表達(dá)抗原或抗原表位的重組病毒誘發(fā)抗衍生出所述異源序列的感染因子和/或含有抗原或抗原表位的感染因子的免疫應(yīng)答。根據(jù)第三個(gè)可替代的實(shí)施方案，我們意外發(fā)現(xiàn)可以使用能感染新生的或產(chǎn)前的動(dòng)物(包括人)的細(xì)胞，但不能在新生的或產(chǎn)前的動(dòng)物(包括人)的體內(nèi)復(fù)制成感染性子代病毒的病毒制備藥物，用于保護(hù)動(dòng)物，特別是新生動(dòng)物(包括人)，使其抗選自腫瘤抗原和外源抗原的抗原，其中腫瘤抗原和/或外源抗原不同于與病毒相關(guān)的抗原。根據(jù)第三個(gè)可替代的實(shí)施方案，用本發(fā)明的病毒，特別是MVA，如MVA-BN及其衍生物接種的新生兒受到保護(hù)，能夠抵抗外源抗原，如感染因子的攻擊。因此，本發(fā)明的病毒，特別是MVA是新生兒的一般性疫苗，即通過(guò)用本發(fā)明的病毒，特別是MVA接種新生兒，新生兒的免疫系統(tǒng)更有能力對(duì)付外源抗原，如病毒。在實(shí)施例部分，所舉的例子是用MVA接種，隨后用1型單純皰疹病毒攻擊。因此，如果將本發(fā)明的病毒，特別是MVA用于接種新生兒，在關(guān)鍵的一段時(shí)間內(nèi)，接種動(dòng)物比未接種的動(dòng)物更能受到抗外源抗原的保護(hù)作用，一直到建立起功能性的和成熟的免疫系統(tǒng)為止。根據(jù)本發(fā)明，“腫瘤抗原和/或外源抗原不同于與病毒相關(guān)的抗原”。該術(shù)語(yǔ)應(yīng)被理解成根據(jù)此實(shí)施方案，本發(fā)明主要不想使用如MVA的病毒誘發(fā)抗病毒本身的免疫應(yīng)答。取而代之的是使用病毒誘發(fā)能保護(hù)宿主以分別抗與病毒不相關(guān)的外源抗原和腫瘤抗原的免疫應(yīng)答或至少是一般性的免疫刺激。術(shù)語(yǔ)“與病毒相關(guān)的抗原”指的是病毒顆粒的表位和抗原以及被病毒感染的細(xì)胞表面因病毒基因組表達(dá)所產(chǎn)生的抗原和表位。在此實(shí)施方案的上下文中，術(shù)語(yǔ)“外源抗原”指的是任何不是動(dòng)物體的天然部分或組分的抗原和表位。特別地，外源抗原是得自感染因子和毒素的抗原和表位。典型的感染因子是病毒，如皰疹病毒、逆轉(zhuǎn)錄病毒、狂犬病毒、彈狀病毒、腺病毒；細(xì)菌，如沙門(mén)氏菌、支原體、腦膜炎球菌、嗜血桿菌；朊病毒或真菌。本發(fā)明的興趣不僅在于接種動(dòng)物以抵抗外源抗原，在可替代的實(shí)施方案中，還適于接種動(dòng)物以抵抗腫瘤抗原?！澳[瘤抗原”是與某些腫瘤疾病相關(guān)的抗原。腫瘤抗原是腫瘤患者的基因組所編碼的最常見(jiàn)的抗原。因此，嚴(yán)格說(shuō)來(lái)，腫瘤抗原不是外源抗原。然而，腫瘤抗原在腫瘤中以顯著的量出現(xiàn)，而正常組織中腫瘤抗原的量顯著較低，最常見(jiàn)的情況是在正常組織中根本發(fā)現(xiàn)不了腫瘤抗原。腫瘤抗原的例子是本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的，包括例如MAGE抗原。由于接種動(dòng)物能導(dǎo)致免疫系統(tǒng)的活化和/或加速成熟，隨后導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞的破壞，因此，MVA能有效地抗這些腫瘤抗原。術(shù)語(yǔ)“抵抗抗原的保護(hù)作用”是指產(chǎn)生針對(duì)外源或腫瘤抗原的免疫應(yīng)答。如果外源抗原是感染因子，宿主則受到抵抗所述感染因子的保護(hù)作用，即宿主產(chǎn)生了抗所述抗原的免疫應(yīng)答。因此，感染因子的感染導(dǎo)致較不嚴(yán)重的疾病或根本不導(dǎo)致疾病。不應(yīng)將術(shù)語(yǔ)“保護(hù)”理解成總有抗外源或腫瘤抗原的100％保護(hù)作用。取而代之的是，本申請(qǐng)所用術(shù)語(yǔ)“保護(hù)”指的是任何有助于動(dòng)物分別對(duì)付外源抗原和腫瘤抗原的有益效果。根據(jù)本發(fā)明，在首次接種之后，這種保護(hù)作用能發(fā)揮至少5天，優(yōu)選為至少7，14或28天。換句話說(shuō)，如果動(dòng)物分別在5，7，14和28天之后與所述抗原接觸，被接種和/或治療的動(dòng)物受到保護(hù)，能例如抗外源抗原。在本發(fā)明的上下文中，誘發(fā)或增強(qiáng)免疫系統(tǒng)成熟和/或活化免疫系統(tǒng)可以解釋用本發(fā)明的病毒，特別是用MVA接種新生兒的效果。在本發(fā)明的上下文中，術(shù)語(yǔ)“誘發(fā)或增強(qiáng)免疫系統(tǒng)成熟”特別地指與對(duì)照相比，能快速增加接種者體內(nèi)的樹(shù)突細(xì)胞或其前體。在本說(shuō)明書(shū)中，術(shù)語(yǔ)“免疫系統(tǒng)的加速成熟”和“增強(qiáng)免疫系統(tǒng)的成熟”可以互換使用?！盎罨庖呦到y(tǒng)”的特征在于細(xì)胞表面能減輕細(xì)胞/細(xì)胞相互作用或運(yùn)輸?shù)姆肿雍图に氐谋磉_(dá)和/或細(xì)胞分泌出所述分子和激素。特定的受體接收這些信號(hào)并作出反應(yīng)。特別的活化標(biāo)記為Flt3-L，IL-12，IFN-α，MHC-II和CD8，特別是CD8α(見(jiàn)下文)。免疫系統(tǒng)的加速發(fā)育/成熟與活化和/或移動(dòng)(morbilization)樹(shù)突細(xì)胞(DC)或其前體細(xì)胞的因子的水平增加，和/或樹(shù)突細(xì)胞及其前體細(xì)胞數(shù)目的增加，和/或干擾素或IL-12的生成和/或細(xì)胞性含量增加相關(guān)。被本發(fā)明的病毒，特別是MVA誘導(dǎo)的DC前體細(xì)胞的例子是漿細(xì)胞樣DC前體，它對(duì)抗病毒感染的防御非常重要，并且似乎能產(chǎn)生IFNα/β。更具體地，增強(qiáng)免疫系統(tǒng)成熟的定義優(yōu)選為DC上存在的表面標(biāo)記，如MHC-II，CD40和/或CD80/86至少增加2倍。優(yōu)選在血液中可檢測(cè)到所述增加。其它可表征增強(qiáng)免疫系統(tǒng)成熟的標(biāo)記是Flt3-L，IL-12，IFN-α，MHC-II和CD8(見(jiàn)下文)。另外，加速免疫系統(tǒng)成熟優(yōu)選與下述現(xiàn)象相關(guān)，即與未接受MVA-BN的對(duì)照動(dòng)物相比，給新生動(dòng)物施用MVA-BN7天之后，血液和/或脾臟中CD11c陽(yáng)性細(xì)胞的數(shù)目至少增加1.5倍，優(yōu)選至少增加2.0倍。另外，增強(qiáng)免疫系統(tǒng)成熟優(yōu)選與下述現(xiàn)象相關(guān)，即與年齡匹配的對(duì)照相比，用本發(fā)明的病毒接種新生兒2天之后，F(xiàn)lt3-L的濃度至少增加1.5倍，更優(yōu)選至少增加2.0倍。在此上下文中，應(yīng)注意能以其表面表型表征的鼠和人DC群體的表型和功能之間有關(guān)聯(lián)(Hochrein等，2002.Hum.Immunol.631103)。使用一系列表面標(biāo)記(MacDonald等，2002.Blood.1004512)的流式細(xì)胞計(jì)數(shù)可以測(cè)定血液中的DC，所述標(biāo)記也可鑒定出特殊的DC群體，如漿細(xì)胞樣DC(Dzionek等，2002.HumImmunol.631133；Dzionek等，2000.J.Immunol.1656037)。使用類(lèi)似的技術(shù)，也可檢測(cè)出其它人組織中的DC(Summers等，2001.Am.J.Pathol.159285)。根據(jù)本發(fā)明，也可以使用如上文所定義的病毒來(lái)治療新生的或產(chǎn)前的動(dòng)物，以使活化和/或移動(dòng)樹(shù)突細(xì)胞(DC)或其前體細(xì)胞的因子的水平增加，和/或樹(shù)突細(xì)胞及其前體細(xì)胞數(shù)目增加，和/或干擾素或IL-12的生成和/或細(xì)胞性含量增加。已闡明用MVA-BN接種之后，漿細(xì)胞樣樹(shù)突細(xì)胞制備出顯著更多的IL-12，所產(chǎn)生的IFN-α增加，并能上調(diào)MHC-II和CD8a。施用本發(fā)明所用病毒之后IL-12的增加倍數(shù)優(yōu)選為2倍、更優(yōu)選為100倍、500倍、1000倍、2500倍或5000倍。與年齡匹配的對(duì)照相比，用本發(fā)明的病毒，最優(yōu)選用MVA-BN或其衍生物接種新生兒2天之后，F(xiàn)lt3-L的濃度增加倍數(shù)優(yōu)選為1.5倍，更優(yōu)選為2.0倍。術(shù)語(yǔ)“活化樹(shù)突細(xì)胞或其前體”指的是通過(guò)由激素和刺激物驅(qū)動(dòng)的尚不清楚的細(xì)胞期，DC成熟為抗原呈遞細(xì)胞。DC的中間體被稱為前體。這些不成熟的DC到達(dá)外周。不同的(抗原性)刺激物活化DC。在被活化的樹(shù)突細(xì)胞中被上調(diào)的活化標(biāo)記特別地是Flt3-L，IL-12，IFN-α，MHC-II和CD8a(見(jiàn)下文)。應(yīng)注意激素如GM-CSF導(dǎo)致外周產(chǎn)生更多不成熟的DC。因?yàn)镚M-CSF導(dǎo)致骨髓、血液和外周器官(細(xì)胞不得不遷移至此)中產(chǎn)生更多的DC前體，該現(xiàn)象被稱為“樹(shù)突細(xì)胞或其前體的移動(dòng)”。該定義也用于本說(shuō)明書(shū)中。因此，如果欲使活化樹(shù)突細(xì)胞(DC)或其前體細(xì)胞的因子的水平增加，和/或樹(shù)突細(xì)胞或其前體細(xì)胞數(shù)目增加，和/或干擾素或IL-12的生成和/或細(xì)胞性含量增加，接種動(dòng)物(包括人)特別有用。能活化樹(shù)突細(xì)胞的因子具體包括Flt3-L(Lyman等，Cell1993，751157-1167)和GM-CSF。本發(fā)明的典型干擾素是IFN-α和IFN-β。本發(fā)明所用的病毒誘導(dǎo)Flt3-L，假定因所述誘導(dǎo)而觀察到一些有益效果。在本申請(qǐng)的上下文中，新生動(dòng)物或人被定義為尚不具有成熟免疫系統(tǒng)的動(dòng)物或人。成熟免疫系統(tǒng)的特征在于能完全活化先天免疫系統(tǒng)，并且所有已知的T和B細(xì)胞功能和產(chǎn)物皆已到位，特別是免疫球蛋白同種型，如IgA和IgE。因此，不成熟的免疫系統(tǒng)的特征在于相對(duì)于成年動(dòng)物或人而言，T細(xì)胞、B細(xì)胞和樹(shù)突細(xì)胞的數(shù)目較少，IFN的產(chǎn)量也較低，次級(jí)淋巴器官未完全成熟。更具體地，本發(fā)明上下文中的“新生兒”的定義為與成年動(dòng)物的脾臟CD4+細(xì)胞平均數(shù)目相比，具有的脾臟CD4+細(xì)胞數(shù)目?jī)?yōu)選要少至少2倍，更優(yōu)選少至少20倍，更優(yōu)選少至少200倍，更優(yōu)選少至少2,000倍，最優(yōu)選少至少20,000倍的新生動(dòng)物。對(duì)4周齡的小鼠而言，免疫系統(tǒng)是成熟的。對(duì)人而言，可能需要6個(gè)月至1年才能成熟。對(duì)貓和狗而言，免疫系統(tǒng)通常在6月齡時(shí)成熟，對(duì)小牛、綿羊和豬而言，免疫系統(tǒng)在4-12周齡時(shí)成熟。優(yōu)選在免疫系統(tǒng)成熟之前，用本發(fā)明的病毒，特別是MVA進(jìn)行接種。然而，由于在出生后成熟速度幾乎呈指數(shù)增長(zhǎng)，因此最優(yōu)選在出生后盡可能早地用本發(fā)明的病毒，特別是MVA進(jìn)行接種。由于在所有相關(guān)的家養(yǎng)動(dòng)物和人中，免疫系統(tǒng)不會(huì)在早于出生后4周的時(shí)間內(nèi)成熟，一般優(yōu)選在出生后4周內(nèi)，更優(yōu)選在出生后2周內(nèi)，甚至更優(yōu)選在出生后1周內(nèi)，最優(yōu)選在出生后3天內(nèi)，用本發(fā)明的病毒，特別是MVA進(jìn)行接種。這些一般性的期限可用于所有重要的家養(yǎng)動(dòng)物，特別是所有重要的家養(yǎng)哺乳動(dòng)物，包括人。本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)意識(shí)到下述事實(shí)在本發(fā)明的上下文中，甚至年齡較大的動(dòng)物也被當(dāng)成是新生動(dòng)物，因此，當(dāng)出生4周后免疫系統(tǒng)仍不成熟時(shí)，也可對(duì)年齡較大的動(dòng)物進(jìn)行成功接種。因此，對(duì)人而言，可以在出生后6個(gè)月內(nèi)，更優(yōu)選在出生后3個(gè)月內(nèi)，更優(yōu)選在出生后2個(gè)月內(nèi)，更優(yōu)選在出生后4周內(nèi)，更優(yōu)選在出生后2周內(nèi)，甚至更優(yōu)選在出生后1周內(nèi)，最優(yōu)選在出生后3天內(nèi)進(jìn)行接種。由于如果將病毒施用于不成熟的免疫系統(tǒng)，將能觀察到本發(fā)明的病毒，特別是MVA作為一般性疫苗的最佳效果，優(yōu)選接種甚至尚未出生的動(dòng)物，包括人。對(duì)有重要經(jīng)濟(jì)價(jià)值的動(dòng)物，如?；蜇i而言，必需進(jìn)行出生前接種。如果胎盤(pán)允許病毒通過(guò)，簡(jiǎn)單地通過(guò)接種母體動(dòng)物即可接種出生前的動(dòng)物。因此，在具有胎盤(pán)內(nèi)皮絨毛膜的動(dòng)物，如狗、貓、大鼠和小鼠中或具有胎盤(pán)血絨毛膜的動(dòng)物，如包括人的靈長(zhǎng)類(lèi)動(dòng)物中，接種母體動(dòng)物以接種出生前動(dòng)物非常有應(yīng)用前景。在具有胎盤(pán)絨毛膜上皮的動(dòng)物，如牛和綿羊中或具有胎盤(pán)韌帶絨毛膜的動(dòng)物，如豬和馬中，優(yōu)選通過(guò)子宮給藥接種出生前動(dòng)物。當(dāng)然，對(duì)于具有胎盤(pán)內(nèi)皮絨毛膜或血絨毛膜的動(dòng)物而言，也可進(jìn)行這種給藥方式。由于本發(fā)明的病毒，特別是MVA能導(dǎo)致免疫系統(tǒng)的加速成熟，并且由于本發(fā)明的病毒，特別是MVA因此可用作一般性的疫苗，故被接種的動(dòng)物受到抗多種疾病的保護(hù)。更具體地，可以使用本發(fā)明的病毒，特別是MVA接種貓以利于一般性的健康和抗貓皰疹病毒或貓感染性腹膜炎?？梢越o狗使用本發(fā)明的病毒，特別是MVA以利于一般性的健康和抗呼吸道相關(guān)(病毒)疾病?？梢越o豬，特別是增肥的豬使用本發(fā)明的病毒，特別是MVA以利于一般性的健康和抗嗜血桿菌或支原體感染。應(yīng)指出優(yōu)選實(shí)施方案是在新生的或產(chǎn)前的動(dòng)物中使用本發(fā)明的病毒，特別是MVA，以保護(hù)所述動(dòng)物，使其抗外源抗原和/或腫瘤抗原，其中腫瘤抗原不同于與接種所用病毒相關(guān)的抗原。然而，該實(shí)施方案并不局限于新生的或產(chǎn)前的動(dòng)物。取而代之的是，在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明可以對(duì)所有年齡的動(dòng)物實(shí)施，因?yàn)橐部梢栽诔赡陝?dòng)物中觀察到有益效果。因此，根據(jù)該實(shí)施方案，如上文所定義的病毒，特別是MVA-BN及其衍生物可用于保護(hù)動(dòng)物(包括人)以抵抗選自腫瘤抗原和外源抗原的抗原，其中腫瘤抗原和/或外源抗原不同于與病毒相關(guān)的抗原。如上所述，本發(fā)明所用的病毒能感染動(dòng)物細(xì)胞，但不能在所述細(xì)胞中復(fù)制成感染性的子代病毒。上文針對(duì)新生兒給出的所有信息、定義，包括對(duì)保護(hù)作用期限的定義，實(shí)施例以及優(yōu)選、更優(yōu)選和最優(yōu)選的實(shí)施方案也適用于本實(shí)施方案，根據(jù)此實(shí)施方案，病毒也可施用于成年動(dòng)物。與新生動(dòng)物相反，成年動(dòng)物的免疫系統(tǒng)已經(jīng)成熟。不過(guò)，由于某些疾病或僅僅因?yàn)閯?dòng)物的年齡，動(dòng)物免疫系統(tǒng)可能被削弱。特別是在無(wú)免疫應(yīng)答的群體和老年群體中，給動(dòng)物施用本發(fā)明的病毒，特別是MVA可特別地通過(guò)增加活化和/或移動(dòng)樹(shù)突細(xì)胞(DC)或其前體細(xì)胞的因子的水平，和/或增加樹(shù)突細(xì)胞或其前體細(xì)胞的數(shù)目，和/或增加干擾素或IL-12的生成和/或細(xì)胞性含量，而具有有益效果。因此，甚至在成年動(dòng)物中，施用本發(fā)明的病毒，特別是MVA可導(dǎo)致免疫系統(tǒng)對(duì)付外源抗原和/或腫瘤抗原的能力提高。換句話說(shuō)，本發(fā)明所用的病毒可用于一般性地活化免疫系統(tǒng)。本發(fā)明還涉及用于制備給動(dòng)物(包括人)施用的藥物的本發(fā)明的病毒，特別是MVA，其中所述藥物能增加活化樹(shù)突細(xì)胞的因子的水平，和/或增加樹(shù)突細(xì)胞的數(shù)目，和/或增加干擾素(IFN)或IL-12的生成和/或細(xì)胞性含量。上文給出的所有針對(duì)其它實(shí)施方案的定義也可用于本實(shí)施方案。根據(jù)此實(shí)施方案，本發(fā)明的主要目的不是誘發(fā)抗外源抗原和/或腫瘤抗原的保護(hù)作用。取而代之的是，此實(shí)施方案的目的是治療疾病，所述疾病的特征為活化樹(shù)突細(xì)胞的因子水平低，和/或樹(shù)突細(xì)胞的數(shù)目不足或太少，和/或干擾素(IFN)或IL-12的生成和/或細(xì)胞性含量低。因此，根據(jù)此實(shí)施方案，用本發(fā)明的病毒，特別是MVA治療能保護(hù)動(dòng)物使其免受變態(tài)反應(yīng)或自身免疫病。如果給新生動(dòng)物施用本發(fā)明的病毒，特別是MVA，該治療也非常有應(yīng)用前景。另外，根據(jù)另一個(gè)實(shí)施方案，本發(fā)明的病毒，如MVA，特別是MVA-BN及其衍生物可特別地用于在無(wú)免疫應(yīng)答的動(dòng)物，如被SIV感染的猴(CD4＜400/μl血液)或無(wú)免疫應(yīng)答的人中誘發(fā)免疫應(yīng)答。術(shù)語(yǔ)“無(wú)免疫應(yīng)答”描述了個(gè)體的免疫系統(tǒng)狀況，它僅顯示出不完全的免疫應(yīng)答，或抗感染因子的防御效力降低。本發(fā)明還涉及通過(guò)施用本發(fā)明的病毒，特別是改良安卡拉痘苗病毒(MVA)，保護(hù)動(dòng)物(包括人)以抵抗選自腫瘤抗原和外源抗原的抗原的方法，其中腫瘤抗原和/或外源抗原不同于與病毒相關(guān)的抗原。在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及治療動(dòng)物(包括人)以增加活化樹(shù)突細(xì)胞的因子的水平，和/或增加樹(shù)突細(xì)胞的數(shù)目，和/或增加干擾素(IFN)或IL-12的生成和/或細(xì)胞性含量的方法，所述方法包括施用改良安卡拉痘苗病毒(MVA)。發(fā)明簡(jiǎn)述病毒用于制備藥物的用途，所述藥物用于接種或治療新生的或產(chǎn)前的動(dòng)物(包括人)，其中所述病毒能感染新生的或產(chǎn)前的動(dòng)物(包括人)的細(xì)胞，但不能在新生的或產(chǎn)前的動(dòng)物(包括人)的體內(nèi)復(fù)制成感染性子代病毒。治療或接種新生的或產(chǎn)前的動(dòng)物(包括人)的方法，所述方法包括施用病毒，其中所述病毒能感染新生的或產(chǎn)前的動(dòng)物(包括人)的細(xì)胞，但不能在新生的或產(chǎn)前的動(dòng)物(包括人)的體內(nèi)復(fù)制成感染性子代病毒。接種或治療新生的或產(chǎn)前的動(dòng)物(包括人)的病毒，其中所述病毒能感染新生的或產(chǎn)前的動(dòng)物(包括人)的細(xì)胞，但不能在新生的或產(chǎn)前的動(dòng)物(包括人)的體內(nèi)復(fù)制成感染性子代病毒。如上所述的用途、方法或病毒，其中病毒是DNA病毒。如上所述的用途、方法或病毒，其中病毒選自DISC-皰疹病毒和改良安卡拉痘苗病毒(MVA)。如上所述的用途、方法或病毒，其中MVA毒株是保藏于歐洲動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)物保藏中心(ECACC)，保藏號(hào)為V00083008的MVA-BN及其衍生物。如上所述的用途、方法或病毒，其中通過(guò)口服、鼻、肌內(nèi)、靜脈內(nèi)、腹膜內(nèi)、皮內(nèi)、子宮內(nèi)和/或皮下給藥施用MVA。如上所述的用途、方法或病毒，其中在首次接種(“引發(fā)接種”)和二次接種(“加強(qiáng)接種”)中施用治療有效量的MVA。如上所述的用途、方法或病毒，其中給動(dòng)物(包括人)施用其量至少為101TCID50(組織培養(yǎng)感染因子量)的MVA。如上所述的用途、方法或病毒，其中接種用于抵抗痘病毒感染。如上所述的用途、方法或病毒，其中痘病毒感染是天花病毒感染。如上所述的用途、方法或病毒，其中病毒基因組含有至少一個(gè)異源核酸序列。如上所述的用途、方法或病毒，其中異源核酸序列選自編碼至少一種抗原、抗原表位和/或治療性化合物的序列。如上所述的用途、方法或病毒，其中接種用于抵抗衍生出所述異源序列的感染因子或含有至少一種抗原或抗原表位的感染因子。如上所述的用途、方法或病毒，其中接種是為了保護(hù)動(dòng)物(包括人)以抵抗選自腫瘤抗原和外源抗原的抗原，其中腫瘤抗原和/或外源抗原不同于與病毒相關(guān)的抗原。如上所述的用途、方法或病毒，其中外源抗原選自感染因子和毒素。如上所述的用途、方法或病毒，其中感染因子選自病毒、細(xì)菌、朊病毒和真菌。如上所述的用途、方法或病毒，其中使用接種或治療以誘發(fā)或增強(qiáng)免疫系統(tǒng)的成熟和/或活化。如上所述的用途、方法或病毒，其中使用治療(i)增加活化和/或移動(dòng)樹(shù)突細(xì)胞或其前體細(xì)胞的因子的水平，(ii)增加樹(shù)突細(xì)胞或其前體細(xì)胞的數(shù)目，或(iii)增加干擾素(IFN)或IL-12的生成和/或細(xì)胞性含量。如上所述的用途、方法或病毒，其中活化樹(shù)突細(xì)胞的因子是Flt3-L和/或GM-CSF。如上所述的用途、方法或病毒，其中干擾素是IFNα和/或IFNβ。含有上述病毒的藥物組合物。含有上述病毒的疫苗。附圖簡(jiǎn)述圖1A在出生后24-48小時(shí)內(nèi)，用106p.f.u.MVA或DISCHSV-1注射新生小鼠一次，或用生理鹽水(NaCl)處理新生小鼠以用作對(duì)照。在出生后7天，通過(guò)流式細(xì)胞計(jì)數(shù)，用全DC標(biāo)記CD11c測(cè)定外周血中的這些細(xì)胞。圖中顯示出3至5次實(shí)驗(yàn)的平均和標(biāo)準(zhǔn)誤差。圖1B與圖1A相同的實(shí)驗(yàn)。然而，通過(guò)流式細(xì)胞計(jì)數(shù)測(cè)定脾臟中的CD11c細(xì)胞。圖1C與圖1A相同的實(shí)驗(yàn)。然而，通過(guò)流式細(xì)胞計(jì)數(shù)測(cè)定腹膜液中的CD11c細(xì)胞。圖2如左欄所示，用MVA-BN接種小鼠。2周后，通過(guò)流式細(xì)胞計(jì)數(shù)測(cè)定脾臟和血液中CD11c+單和CD11c+/CD8+雙陽(yáng)性細(xì)胞的百分比。圖3在1和5天齡時(shí)，用MVA或作為對(duì)照的NaCl注射新生小鼠。8天齡時(shí)，通過(guò)ELISA測(cè)定這些小鼠血清中的鼠Flt3-L，所給出的數(shù)值單位為pg/ml。圖4在出生24-48小時(shí)之內(nèi)，用106p.f.u.MVA注射新生小鼠一次，或用NaCl處理以用作對(duì)照。7天齡時(shí)，將所有小鼠暴露于100×LD50HSV-1毒株F。監(jiān)測(cè)存活小鼠的數(shù)目達(dá)21天。圖5按圖4的方法處理小鼠。數(shù)據(jù)表示用100LD50HSV-1的9次不同的攻擊實(shí)驗(yàn)。沒(méi)有對(duì)照動(dòng)物在攻擊中存活。圖6在出生當(dāng)天用MVA-BN接種，隨后進(jìn)行致死痘苗病毒攻擊的成年小鼠的存活。用MVA-BN(2.5×107TCID50)接種3窩、每窩各6只1天齡幼仔(18只小鼠)，4周齡(成年小鼠)時(shí)，用致死劑量的痘苗病毒進(jìn)行攻擊。MVA-BN接種顯然能在新生小鼠中誘發(fā)保護(hù)性的免疫力，該免疫力一直能持續(xù)到成年期。實(shí)施例下述實(shí)施例將進(jìn)一步闡明本發(fā)明。本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)能較好地理解不能以任何方式將所提供的實(shí)施例解釋成本發(fā)明提供的技術(shù)僅限于用在這些實(shí)施例中。實(shí)施例1(i)MVA-BN和DISC-HSV在新生動(dòng)物中誘導(dǎo)CD11c+和CD8+表型的DC第一套實(shí)驗(yàn)新生小鼠的IFN系統(tǒng)不成熟，因此具有天生的免疫缺陷。目前已知為IFN最佳生產(chǎn)者的DC的數(shù)目和活化狀態(tài)尚未被分析。通過(guò)多種刺激物可在體外及體內(nèi)誘導(dǎo)DC。在這些研究中，檢測(cè)了受控的MVA-BN復(fù)制是否能誘導(dǎo)DC，并且分析了它們的表型。在出生后1-2天內(nèi)，有些情況下在出生后5天，用106噬斑形成單位(p.f.u.)的MVA-BN或僅用鹽水注射小鼠組。通過(guò)FACS分析兩組中各個(gè)小鼠的血液和脾細(xì)胞，并比較數(shù)據(jù)。7至8只小鼠的數(shù)據(jù)表明用MVA-BN治療使CD11c+細(xì)胞增加2-3倍，伴隨著MHCII表達(dá)的增加以及CD4或CD8型T細(xì)胞存在量的增加，成熟B細(xì)胞的標(biāo)記CD19/54的減少表示這些細(xì)胞遷移至除脾臟以外的器官中，或者表示B細(xì)胞前體早就征集至其它譜系，特別是攜有早期B細(xì)胞標(biāo)記(B220)的漿細(xì)胞表型的DC中。三個(gè)不同實(shí)驗(yàn)的數(shù)據(jù)顯示出再現(xiàn)性和顯著差異。用不同的復(fù)制受控的病毒疫苗DISC-HSV-1進(jìn)行的實(shí)驗(yàn)在新生兒引發(fā)之后，誘發(fā)出類(lèi)似量的CD11c+細(xì)胞。結(jié)果簡(jiǎn)述于圖1A-C。為了進(jìn)一步研究血液和脾臟中的DC亞群并分析用MVA-BN治療的長(zhǎng)期效果，分析2周齡動(dòng)物血液和脾臟中的細(xì)胞。在此時(shí)間點(diǎn)，經(jīng)治療動(dòng)物的脾臟中的CD11c+細(xì)胞數(shù)目約兩倍于1周齡動(dòng)物，但在出生時(shí)用病毒單次治療導(dǎo)致2周后脾臟中這些細(xì)胞的數(shù)目增加3倍(圖2)。在血液中也觀察到類(lèi)似的效果，不同之處在于CD11c+/CD8a+約高4倍。在出生后7天用MVA-BN單次治療導(dǎo)致CD11c+/CD8a+增加13至40倍，而對(duì)CD11c+細(xì)胞的效果較不顯著。正如所預(yù)期的，在出生時(shí)和第7天進(jìn)行的兩次接種對(duì)CD11c+細(xì)胞具有顯著效果。多種效果示于圖2。第二套實(shí)驗(yàn)與對(duì)照小鼠相比，在出生時(shí)用2.5×107TCID50MVA-BN接種的1周齡小鼠的脾臟和血液中顯示出不同的免疫相關(guān)細(xì)胞群體的組合(表1)。在血液中，CD8陽(yáng)性淋巴細(xì)胞群體增加，NK細(xì)胞的數(shù)目也有所增加。CD11c陽(yáng)性細(xì)胞的數(shù)目約比對(duì)照高3倍，B-細(xì)胞(B220和CD19雙陽(yáng)性的細(xì)胞)的百分比顯著降低。經(jīng)免疫動(dòng)物和對(duì)照之間脾臟中的細(xì)胞總數(shù)不變。與血液中相反，接種動(dòng)物的脾臟比對(duì)照具有更多的CD4陽(yáng)性T淋巴細(xì)胞，NK細(xì)胞的數(shù)目未增加。與血液類(lèi)似，CD8陽(yáng)性淋巴細(xì)胞的相對(duì)數(shù)目增加，而B(niǎo)-細(xì)胞數(shù)目減少。與對(duì)照相比，CD11c陽(yáng)性細(xì)胞的百分比約高3倍。當(dāng)4只未治療的對(duì)照的脾臟中CD11c陽(yáng)性細(xì)胞的數(shù)目為3.6％，而4只經(jīng)MVA-BN接種的小鼠中的相應(yīng)數(shù)值為4.8％時(shí)，我們首先認(rèn)為用MVA-BN接種5天后，樹(shù)突細(xì)胞的百分比有差異。與對(duì)照相比，相同量的經(jīng)UV-滅活的MVA-BN在接種新生小鼠之后不會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞群體發(fā)生任何顯著改變(數(shù)據(jù)未顯示)?？梢匀我膺x擇最初的接種劑量。滴定接種物之后，我們選擇標(biāo)準(zhǔn)劑量2.5×106TCID50進(jìn)行接種(比最初實(shí)驗(yàn)低10倍)。此劑量可誘導(dǎo)最多數(shù)目的DC(表2)。表1.用2.5×107TCID50MVA-BN免疫接種1周后，在新生小鼠血液和脾臟細(xì)胞中誘導(dǎo)的改變*Mann-WhitneyU-檢驗(yàn)表2.1天齡wt小鼠和用MVA治療后7天內(nèi)的、基因被定向破壞的小鼠脾臟中CD11c陽(yáng)性細(xì)胞的誘導(dǎo)aWt＝C57BL/6或129Sv/Ev小鼠。b重組活化基因缺失的RAG小鼠(即沒(méi)有功能性的T和B細(xì)胞)。cI型(IFN-α和-β)和II型(IFN-γ)IFN受體基因被定向破壞的AG129。(ii)MVA-BN優(yōu)先誘導(dǎo)漿細(xì)胞樣樹(shù)突細(xì)胞(pDC)根據(jù)其它作者的看法，將也表達(dá)CD45RA或CD45R的CD11c陽(yáng)性細(xì)胞看成是pDC(Asselin-Paturel等，2001，NatImmunol，121144)。我們想知道MVA-BN是否能誘使pDC增加。為此進(jìn)行了進(jìn)一步的實(shí)驗(yàn)，其中分析了CD11c陽(yáng)性細(xì)胞上的CD45RA或CD45R。與兩個(gè)對(duì)照組(未治療組3.0±0.3％，p＝0.01；UV-滅活的MVA-BN治療組3.0±0.2％，p＝0.006，Mann-WhitneyU-試驗(yàn))相比，經(jīng)MVA-BN治療的小鼠中，CD11c和CD45R雙陽(yáng)性細(xì)胞的百分比顯著較高(5.6±0.7％)。(iii)用MVA-BN治療的新生小鼠具有升高的血清Flt3-L水平Flt3-L是導(dǎo)致成年動(dòng)物DC水平提高的造血因子。在人以及可能在小鼠中，該因子最豐富的來(lái)源是活化的T細(xì)胞。為了測(cè)定DC數(shù)目的增加是否是誘導(dǎo)的Flt3-L造成的，比較經(jīng)MVA-BN治療的小鼠的血清與經(jīng)模擬治療的動(dòng)物的血清中該因子的存在。與經(jīng)模擬治療的動(dòng)物的血清相比，在第2和第5天接受治療的動(dòng)物的血清中具有2倍的Flt3-L水平。因此，F(xiàn)lt3-L可能是一種負(fù)責(zé)增加DC數(shù)目的因子(圖3)。施用MVA-BN之后，評(píng)價(jià)新生小鼠中Flt3-L誘導(dǎo)的時(shí)間進(jìn)程。在新生小鼠中，MVA-BN接種在24小時(shí)內(nèi)誘導(dǎo)Flt3-L濃度的增加。48小時(shí)之后，誘導(dǎo)達(dá)到最大值，第7天時(shí)仍存在誘導(dǎo)，而第7天通常是分析脾細(xì)胞并檢測(cè)HSV-1抗性的時(shí)間(見(jiàn)下文)。與年齡匹配的對(duì)照動(dòng)物相比，在經(jīng)接種的小鼠中，接種后24小時(shí)和48小時(shí)，血清中的Flt3-L濃度增加2倍。實(shí)施例2(i)經(jīng)MVA-BN治療的新生小鼠能在100至500LD50HSV-1的攻擊中存活出生后1或2天，用標(biāo)準(zhǔn)劑量的MVA-BN治療小鼠組，并在7-8天齡時(shí)用100至500LD50單純皰疹病毒1(HSV-1)進(jìn)行攻擊(圖4)。經(jīng)MVABN治療的小鼠能在HSV1攻擊中存活，而所有對(duì)照小鼠都在接種攻擊病毒后的5-6天內(nèi)死亡。為了進(jìn)一步支持這些觀察結(jié)果，用40只經(jīng)MVABN治療的小鼠和45只對(duì)照小鼠進(jìn)行9次攻擊實(shí)驗(yàn)。80％以上經(jīng)病毒治療的小鼠能在攻擊中存活，而對(duì)照小鼠全部死亡(圖5)。在分開(kāi)的一套實(shí)驗(yàn)中，用MVA-BN治療出生時(shí)的小鼠(2.5×106TCID50/小鼠)。第8天，用103(1LD50)或105(100LD50)PFUHSV-1進(jìn)行攻擊。用MVA-BN接種之后，65％的小鼠能在可殺死100％對(duì)照小鼠的病毒劑量(100LD50)中存活，而90％的小鼠能在可殺死45.5％對(duì)照小鼠的劑量(1LD50)中存活。在其它實(shí)驗(yàn)中，用HSV-1感染以7只為一組的、用UV-滅活MVA-BN接種過(guò)的小鼠。其中的5只在7天內(nèi)死亡。其余2只動(dòng)物停止生長(zhǎng)并在第22和29天死亡。因此，用MVA-BN治療的小鼠已獲得增加的HSV-1抗性，這與活的MVA-BN，而不是滅活的MVA-BN相關(guān)。在用不具有功能性T細(xì)胞的小鼠所做的對(duì)照實(shí)驗(yàn)中，已測(cè)定用MVA-BN接種后的抗HSV-1保護(hù)作用不是MVA-BN誘導(dǎo)的交叉-反應(yīng)的細(xì)胞毒T-淋巴細(xì)胞所致。檢測(cè)用MVA-BN接種之后，DC細(xì)胞是否負(fù)責(zé)保護(hù)小鼠以使其免受HSV-1感染。為此，從經(jīng)MVA治療的小鼠中轉(zhuǎn)移細(xì)胞4小時(shí)之后，用5×104PFUHSV-1攻擊首次用于實(shí)驗(yàn)的8天齡小鼠。在第一個(gè)實(shí)驗(yàn)中，將出生當(dāng)天用MVA-BN治療過(guò)的8天齡小鼠的脾細(xì)胞分成DC富集(低密度)和DC貧瘠(高密度)組分。從DC富集組分中接受了5×106個(gè)細(xì)胞的小鼠50％能在攻擊中存活，而所有接受了少10倍的DC富集懸浮液的小鼠或未經(jīng)治療的小鼠都在5天內(nèi)死亡。第二種方法是將從出生當(dāng)天用MVA-BN治療過(guò)的8天齡小鼠中正分離的CD11c陽(yáng)性細(xì)胞轉(zhuǎn)移至首次用于實(shí)驗(yàn)的年齡匹配的小鼠體內(nèi)。含有80％以上來(lái)自MVA-BN治療小鼠的CD11c陽(yáng)性細(xì)胞的2×106脾細(xì)胞懸浮液能保護(hù)首次用于實(shí)驗(yàn)的小鼠，使其免受HSV-1感染。相反，4只未經(jīng)治療的幼鼠以及其它8只未經(jīng)治療的動(dòng)物在攻擊后死亡。另外，接受相同量脾細(xì)胞的小鼠或從陰性組分中接受相當(dāng)于1個(gè)脾臟的細(xì)胞量(50×106個(gè)細(xì)胞)的小鼠未顯示出增加的HSV-1抗性。因此，CD11c陽(yáng)性細(xì)胞能保護(hù)小鼠，使其免受HSV-1感染?，F(xiàn)有技術(shù)中已描述施用MVA之后，在約24小時(shí)的時(shí)間范圍內(nèi)，有短期的保護(hù)作用(Vilsmeier，B.，Berl.Munch.Tierarztl.Wschr.112(1999)，329-333)。盡管所述出版物中所用的病毒不是不能在所用新生的或產(chǎn)前的動(dòng)物體內(nèi)復(fù)制成感染性子代病毒的病毒，檢測(cè)Vilsmeier所公開(kāi)的作用模式是否類(lèi)似于本申請(qǐng)所描述的作用模式。更具體地，Vilsmeier公開(kāi)了MVA，特別是滅活的MVA能誘導(dǎo)paramunity約達(dá)24小時(shí)。為了檢測(cè)paramunity作用是否也能被看成是本申請(qǐng)公開(kāi)的保護(hù)作用，用MVA-BN或滅活的MVA-BN接種出生24小時(shí)的小鼠。用致死劑量的HSV-1(105PFUHSF-1f)攻擊7天齡小鼠。未接種的對(duì)照小鼠在攻擊6天后死亡。用滅活的MVA-BN接種的小鼠也未獲得抗HSV-1攻擊的保護(hù)。這些小鼠中的DC細(xì)胞數(shù)目未提高。相反，用未滅活的MVA-BN接種的小鼠獲得了抗HSV-1攻擊的顯著保護(hù)作用。攻擊30天后，80％以上的小鼠仍然存活。接種2天后，在血清中發(fā)現(xiàn)了升高的血清Flt3-L。脾臟中的DC數(shù)目增加。增強(qiáng)的Flt3-L與DC數(shù)目增加有關(guān)。這進(jìn)一步證實(shí)了paramunity作用不負(fù)責(zé)所觀察到的保護(hù)作用。(ii)MVA-BN在新生動(dòng)物中誘導(dǎo)一直持續(xù)至成年期的特異性免疫力用MVA-BN(2.5×107TCID50)(腹膜內(nèi))接種1天齡C57BI/6小鼠(組的大小為18)。接種后4周，當(dāng)認(rèn)為小鼠成年時(shí)，用致死劑量(1×104TCID50)的痘苗病毒W(wǎng)esternReserve(VV-WR)攻擊這些小鼠。除了一只動(dòng)物外，所有其它經(jīng)MVA-BN接種的動(dòng)物都能存活。相反，所有用安慰劑接種的動(dòng)物都在7天內(nèi)死亡，并表現(xiàn)出嚴(yán)重的臨床癥狀，如毛皮發(fā)皺、體重減輕和活力下降。顯然，這能清楚地闡明MVA-BN接種不僅對(duì)新生動(dòng)物是安全的，而且能誘導(dǎo)抗致死痘苗病毒(MVA-BN的相關(guān)病毒)感染的保護(hù)性免疫應(yīng)答。<tablesid="table3"num="003"><tablewidth="853">申請(qǐng)人或代理人檔案號(hào)BN44PCT國(guó)際申請(qǐng)?zhí)?lt;/table></tables>關(guān)于微生物保藏的說(shuō)明(細(xì)則13之二)<tablesid="table4"num="004"><tablewidth="853">A.以下說(shuō)明涉及說(shuō)明書(shū)第6頁(yè)，第13行所述的微生物。B.保藏事項(xiàng)其它保藏在補(bǔ)充頁(yè)中□歐洲細(xì)胞培養(yǎng)物保藏中心(ECACC)保藏單位名稱EuropeanCollectionofCellCultures保藏單位地址(包括郵政編碼和國(guó)名)英國(guó)，WiltshireSP4OJG，Salisbury，應(yīng)用微生物學(xué)和研究中心CenterforAppliedMicrobiology&amp;ResearchSalisburyWiltshireSP4OJGUnitedKingdom保藏日期2000年12月07日保藏號(hào)00120707C.補(bǔ)充說(shuō)明(必要時(shí))本欄內(nèi)容有補(bǔ)充頁(yè)□我們要求，所述被保藏的微生物的樣品，只能根據(jù)相關(guān)專(zhuān)利法規(guī)，例如，EPC法規(guī)28(4)；英國(guó)專(zhuān)利法規(guī)1995，附錄2，第3段；澳大利亞細(xì)則3.25(3)；丹麥專(zhuān)利實(shí)施條例22和33(3)；以及任何另一指定國(guó)的相應(yīng)的法律法規(guī)，發(fā)放給獨(dú)立的專(zhuān)業(yè)人員，而前提是此種行為在指定國(guó)是可行的并且也是被指定國(guó)的法律所充許的。D.本說(shuō)明是為下列指定國(guó)作的(如果說(shuō)明不是為所有指定國(guó)而作的)E.補(bǔ)充說(shuō)明(必要時(shí))下列說(shuō)明將隨后向國(guó)際局提供(指出說(shuō)明的類(lèi)別，例如“保藏物的編號(hào)”)</table></tables>PCT/RO/134表(1998年7月)應(yīng)用微生物學(xué)和研究中心以及歐洲細(xì)胞培養(yǎng)物保藏中心本文件在此證明，根據(jù)1977年頒布的布達(dá)佩斯條約，該病毒(保藏號(hào)V00120707)已于2000年12月7日被歐洲細(xì)胞培養(yǎng)物保藏中心接受為專(zhuān)利保藏。Dr.PJPacker質(zhì)量經(jīng)理，ECACC附錄3第14頁(yè)布達(dá)佩斯條約關(guān)于用于專(zhuān)利程序的國(guó)際認(rèn)可的微生物保藏國(guó)際局表格收件人BAVARIANNORDICRESEARCHINSTITUTEGMBHFRAUNHOFERSTRASSE18BD-82152MARTINSRIED德國(guó)保藏人的姓名和地址當(dāng)適用于細(xì)則6.4(d)時(shí)，所述的日期為國(guó)際保藏單位的資格被認(rèn)定的日期。Ormsp/4(只此一頁(yè))附錄3第24頁(yè)布達(dá)佩斯條約關(guān)于用于專(zhuān)利程序的國(guó)際認(rèn)可的微生物保藏國(guó)際局表格收件人存活證明BAVARIANNORDICRESEARCH由下一頁(yè)所指明的國(guó)際保藏單INSTITUTEGMBH位根據(jù)細(xì)則10.2出具FRAUNHOFERSTRASSE18BD-82152MARTINSRIED德國(guó)應(yīng)接到此存活證明的單位的名稱和地址1指的是初始保藏日，或者，當(dāng)進(jìn)行了新的保藏或保藏的轉(zhuǎn)換時(shí)，指的是最相關(guān)的日期(新保藏的日期或是轉(zhuǎn)保藏的日期)。2對(duì)于那些法規(guī)10.2(a)(ii)和(iii)所代表的情況，指的是最近的存活性檢驗(yàn)。3用打叉表示選定。表格BP/4(第1頁(yè))附錄3第25頁(yè)4如果要求該信息并且如果檢驗(yàn)為陰性，則填寫(xiě)此項(xiàng)。分析試驗(yàn)的證書(shū)產(chǎn)物描述MVA-575保藏號(hào)00120707批準(zhǔn)人＿＿ECACC質(zhì)量主管日期＿＿＿＿分析試驗(yàn)的證書(shū)產(chǎn)物描述MVA-575保藏號(hào)00120707批準(zhǔn)人＿＿ECACC質(zhì)量主管日期＿＿＿＿關(guān)于微生物保藏的說(shuō)明(細(xì)則13之二)PCT/RO/134表(1998年7月)應(yīng)用微生物學(xué)和研究中心以及歐洲細(xì)胞培養(yǎng)物保藏中心本文件在此證明，根據(jù)1977年頒布的布達(dá)佩斯條約，該病毒(保藏號(hào)V00083008)已于2000年8月30日被歐洲細(xì)胞培養(yǎng)物保藏中心接受為專(zhuān)利保藏。Dr.PJPacker質(zhì)量經(jīng)理，ECACCBP/4表格(第1頁(yè))附錄3第25頁(yè)4如果要求該信息并且如果檢驗(yàn)為陰性，則填寫(xiě)此項(xiàng)。附錄3第24頁(yè)布達(dá)佩斯條約關(guān)于用于專(zhuān)利程序的國(guó)際認(rèn)可的微生物保藏國(guó)際局表格收件人存活證明BAVARIANNORDICRESEARCH由下一頁(yè)所指明的國(guó)際保INSTITUTEGMBH藏單位根據(jù)細(xì)則10.2出具FRAUNHOFERSTRASSE18BD-82152MARTINSRIED德國(guó)應(yīng)接到此存活證明的單位的名稱和地址1指的是初始保藏日，或者，當(dāng)進(jìn)行了新的保藏或保藏的轉(zhuǎn)換時(shí)，指的是最相關(guān)的日期(新保藏的日期或是轉(zhuǎn)保藏的日期)。2對(duì)于那些法規(guī)10.2(a)(ii)和(iii)所代表的情況，指的是最近的存活性檢驗(yàn)。3用打叉表示選定。附錄3第14頁(yè)布達(dá)佩斯條約關(guān)于用于專(zhuān)利程序的國(guó)際認(rèn)可的微生物保藏國(guó)際局表格收件人BAVARIANNORDICRESEARCHINSTITUTEGMBHFRAUNHOFERSTRASSE18BD-82152MARTINSRIED德國(guó)保藏人的姓名和地址當(dāng)適用于細(xì)則6.4(d)時(shí)，所述的日期為國(guó)際保藏單位的資格被認(rèn)定的日期。Ormsp/4(只此一頁(yè))權(quán)利要求1.病毒用于制備藥物的用途，所述藥物用于接種或治療新生的或產(chǎn)前的動(dòng)物，包括人，其中所述病毒能感染新生的或產(chǎn)前的動(dòng)物(包括人)的細(xì)胞，但不能在新生的或產(chǎn)前的動(dòng)物(包括人)的體內(nèi)復(fù)制成感染性子代病毒。2.用于接種或治療新生的或產(chǎn)前的動(dòng)物(包括人)的病毒，其中所述病毒能感染新生的或產(chǎn)前的動(dòng)物(包括人)的細(xì)胞，但不能在新生的或產(chǎn)前的動(dòng)物(包括人)的體內(nèi)復(fù)制成感染性子代病毒。3.根據(jù)權(quán)利要求1或2中任一項(xiàng)的用途或病毒，其中所述病毒是DNA病毒。4.根據(jù)權(quán)利要求1至3中任一項(xiàng)的用途或病毒，其中所述病毒選自DISC-皰疹病毒和改良安卡拉痘苗病毒(MVA)。5.根據(jù)權(quán)利要求4的用途或病毒，其中所述MVA毒株是保藏于歐洲動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)物保藏中心(ECACC)，保藏號(hào)為V00083008的MVA-BN及其衍生物。6.根據(jù)權(quán)利要求4至5中任一項(xiàng)的用途或病毒，其中所述MVA通過(guò)口服、鼻、肌內(nèi)、靜脈內(nèi)、腹膜內(nèi)、皮內(nèi)、子宮內(nèi)和/或皮下給藥施用。7.根據(jù)權(quán)利要求4至6中任一項(xiàng)的用途或病毒，其中所述MVA在首次接種(“引發(fā)接種”)和二次接種(“加強(qiáng)接種”)中以治療有效量施用。8.根據(jù)權(quán)利要求4至7中任一項(xiàng)的用途或病毒，其中所述MVA施用給動(dòng)物(包括人)的量至少為101TCID50(組織培養(yǎng)感染因子量)。9.根據(jù)權(quán)利要求4至8中任一項(xiàng)的用途或病毒，其中所述接種用于抵抗痘病毒感染。10.根據(jù)權(quán)利要求9的用途或病毒，其中所述痘病毒感染是天花病毒感染。11.根據(jù)權(quán)利要求1至10中任一項(xiàng)的用途或病毒，其中所述病毒的基因組含有至少一種異源核酸序列。12.根據(jù)權(quán)利要求11的用途或病毒，其中異源核酸序列選自編碼至少一種抗原、抗原表位和/或治療性化合物的序列。13.根據(jù)權(quán)利要求11至12中任一項(xiàng)的用途或病毒，其中所述接種用于抵抗衍生出所述異源序列的感染因子或含有至少一種抗原或抗原表位的感染因子。14.根據(jù)權(quán)利要求1至8或11至12中任一項(xiàng)的用途或病毒，其中所述接種是為了保護(hù)動(dòng)物(包括人)以抵抗選自腫瘤抗原和外源抗原的抗原，其中所述腫瘤抗原和/或外源抗原不同于與所述病毒相關(guān)的抗原。15.根據(jù)權(quán)利要求14的用途或病毒，其中所述外源抗原選自感染因子和毒素。16.根據(jù)權(quán)利要求15的用途或病毒，其中所述感染因子選自病毒、細(xì)菌、朊病毒和真菌。17.根據(jù)權(quán)利要求1至8中任一項(xiàng)的用途或病毒，其中所述接種或治療用于誘發(fā)或增強(qiáng)免疫系統(tǒng)的成熟和/或活化。18.根據(jù)權(quán)利要求1至8中任一項(xiàng)的用途或病毒，其中所述治療用于(i)增加使樹(shù)突細(xì)胞或其前體細(xì)胞活化和/或移動(dòng)的因子的水平，(ii)增加樹(shù)突細(xì)胞或其前體細(xì)胞的數(shù)目，或(iii)增加干擾素(IFN)或IL-12的生成和/或細(xì)胞性含量。19.根據(jù)權(quán)利要求18的用途或病毒，其中使樹(shù)突細(xì)胞活化的因子是Flt3-L和/或GM-CSF。20.根據(jù)權(quán)利要求18至19中任一項(xiàng)的用途或病毒，其中干擾素是IFNα和/或IFNβ。全文摘要本發(fā)明涉及病毒用于制備藥物的用途，所述藥物用于接種或治療新生的或產(chǎn)前的動(dòng)物(包括人)，其中所述病毒能感染新生的或產(chǎn)前的動(dòng)物(包括人)的細(xì)胞，但不能在新生的或產(chǎn)前的動(dòng)物(包括人)的體內(nèi)復(fù)制成感染性子代病毒。優(yōu)選病毒為改良的安卡拉痘苗病毒。本發(fā)明具體涉及接種新生兒以抵抗與接種所用病毒屬于相同病毒組的病毒的感染。另外，本發(fā)明涉及接種新生兒以抵抗選自外源抗原和腫瘤抗原的抗原，其中腫瘤抗原和/或外源抗原不同于與病毒相關(guān)的抗原。本發(fā)明還涉及如上文所限定的病毒提高能活化樹(shù)突細(xì)胞或其前體細(xì)胞的因子水平和/或增加樹(shù)突細(xì)胞或其前體細(xì)胞數(shù)目和/或提高干擾素(IFN)或IL－12的生成和/或細(xì)胞性含量的用途。文檔編號(hào)C12N7/00GK1646158SQ03808786公開(kāi)日2005年7月27日申請(qǐng)日期2003年4月16日優(yōu)先權(quán)日2002年4月19日發(fā)明者保羅·查普林,馬克·蘇特,馬塞厄斯·阿克曼,馬科·弗朗奇尼,薩拜因·沃爾斯蒂特,漢斯·P·赫夫蒂申請(qǐng)人:巴法里安諾迪克有限公司