專利名稱：不受異亮氨酸抑制的蘇氨酸操縱子的核苷酸序列以及使用包含其的轉(zhuǎn)化的宿主細(xì)胞生產(chǎn) ...的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及第-56至-18位核苷酸片段的全部或部分缺失的大腸桿菌蘇氨酸操縱子的核苷酸序列、包含上述核苷酸序列的重組載體、以及包含此重組載體的轉(zhuǎn)化的宿主細(xì)胞。本發(fā)明還提供了生產(chǎn)L-蘇氨酸的方法，包括培養(yǎng)轉(zhuǎn)化的宿主細(xì)胞。
背景技術(shù)：
L-蘇氨酸是一種廣泛用作飼料或食品添加劑的必需氨基酸。此外，L-蘇氨酸還用做醫(yī)學(xué)溶液或藥物合成的原材料。
L-蘇氨酸是使用由大腸桿菌(E.coli)、棒狀桿菌(Corynebacteriasp.)、沙雷氏菌(Serratia sp.)、或普羅威登斯菌(Providencia sp.)野生型菌株衍生的突變型菌株通過(guò)發(fā)酵過(guò)程生產(chǎn)的。突變株的例子包括氨基酸類似物或藥物抗性突變株，或者二氨基庚二酸、甲硫氨酸、賴氨酸或異亮氨酸的多種營(yíng)養(yǎng)缺陷型(日本專利公開(kāi)出版號(hào)Hei.2-219582；Appl.Microbiol.Biotechnol.，29550-553，1988；韓國(guó)專利號(hào)1992-8365)。
利用重組菌株的發(fā)酵過(guò)程也可用于生產(chǎn)L-蘇氨酸。日本專利公開(kāi)出版號(hào)Hei.5-10076公布了使用沙雷氏菌的重組菌株大規(guī)模生產(chǎn)蘇氨酸的方法，所述重組菌株包含具有天冬氨酸激酶、高絲氨酸激酶、高絲氨酸脫氫酶、和蘇氨酸合酶的遺傳信息的DNA片段。此外，日本專利公開(kāi)出版號(hào)Hei.1-289493還公開(kāi)了使用由對(duì)甲硫氨酸代謝拮抗物抗性的普羅威登斯菌菌株衍生的基因大量生產(chǎn)L-蘇氨酸的方法。
作為通過(guò)調(diào)控蘇氨酸操縱子的表達(dá)來(lái)生產(chǎn)蘇氨酸的方法，已經(jīng)公開(kāi)了用tac啟動(dòng)子取代蘇氨酸操縱子的啟動(dòng)子(WO 98/04715)以及用大腸桿菌λ噬菌體的cI阻遏物和PR啟動(dòng)子取代蘇氨酸操縱子的表達(dá)調(diào)控區(qū)(EP0593792B1)。
大腸桿菌的蘇氨酸生物合成操縱子是由基因thrA、thrB、和thrC組成。thrA基因編碼天冬氨酸激酶和高絲氨酸脫氫酶，thrB基因編碼高絲氨酸激酶，而thrC基因編碼蘇氨酸合酶。這些基因的前導(dǎo)序列和衰減子位于蘇氨酸操縱子之前(Proc.Natl.Acad.Sci.America(1979)，761706-1710)。SEQ ID NO1列出了包含前導(dǎo)序列、衰減子、和結(jié)構(gòu)thr基因的蘇氨酸操縱子的核苷酸序列的例子。SEQ ID NO1第337-339位核苷酸的ATG密碼子是蘇氨酸操縱子的起始密碼子。具體而言，蘇氨酸操縱子的表達(dá)受到蘇氨酸和異亮氨酸二者的胞內(nèi)水平的調(diào)控。這與色氨酸操縱子的調(diào)控機(jī)制類似(J.Bacteriology(1975)，161-166)。

發(fā)明內(nèi)容
為了構(gòu)建不受蘇氨酸或異亮氨酸抑制的蘇氨酸生產(chǎn)菌株，本發(fā)明人通過(guò)提供包含缺陷型衰減子區(qū)的突變型蘇氨酸操縱子而實(shí)現(xiàn)了本發(fā)明的目的。
因此，本發(fā)明提供了不受異亮氨酸抑制的蘇氨酸操縱子的核苷酸序列。
本發(fā)明還提供了包含上述蘇氨酸操縱子的核苷酸序列的重組載體。
本發(fā)明還提供了包含此重組載體的轉(zhuǎn)化的宿主細(xì)胞。
本發(fā)明進(jìn)一步提供了生產(chǎn)L-蘇氨酸的方法，包括培養(yǎng)轉(zhuǎn)化的宿主細(xì)胞。
依照本發(fā)明的一個(gè)方面，提供了第-56位至-18位39bp核苷酸片段的全部或部分缺失的大腸桿菌蘇氨酸操縱子的核苷酸序列，此區(qū)域是蘇氨酸操縱子結(jié)構(gòu)基因的衰減子區(qū)。在此情況中，從起始密碼子ATG的A(+1)開(kāi)始的上游區(qū)的核苷酸序列編為負(fù)數(shù)，下游區(qū)的核苷酸序列編為正數(shù)。除非另有說(shuō)明，否則核苷酸的編號(hào)方式如上文所定義。
依照本發(fā)明的另一個(gè)方面，提供了包含上述大腸桿菌蘇氨酸操縱子的核苷酸序列的重組載體。此重組載體可以通過(guò)常規(guī)方法制備，包括用諸如ApaI和PstI的限制酶消化大腸桿菌蘇氨酸操縱子和合適載體，然后進(jìn)行連接。合適的載體可以是例如噬菌體、質(zhì)粒、和粘粒。噬菌體和粘粒載體的例子包括pWE15、M13、λEMBL3、λEMBL4、λFIXII、λDASHII、λZAPII、λgt10、λgt11、Charon4A、和Charon21A。質(zhì)粒載體的例子包括pBR系列、pUC系列、pBluescriptII系列、pGEM系列、pTZ系列、和pET系列。此外，還可以使用能夠在諸如大腸桿菌和棒狀桿菌的多種宿主細(xì)胞中復(fù)制的多種穿梭載體。優(yōu)選的是，使用pECCG122(KFCC 10696)作為克隆載體，它已于1990年6月20日保藏于韓國(guó)微生物保存中心(KoreanFederation of Culture Collection，KFCC)。
依照本發(fā)明的另一個(gè)方面，提供了包含上述重組載體的新微生物。此微生物可以通過(guò)常規(guī)方法用重組載體轉(zhuǎn)化宿主細(xì)胞來(lái)制備(Sambrook，J.等人，第二版，1989，冷泉港實(shí)驗(yàn)室出版社)。
宿主細(xì)胞可以是革蘭氏陰性細(xì)菌。最優(yōu)選屬于埃希氏桿菌屬的細(xì)胞。具體而言，依照本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方案，使用大腸桿菌KCCM 10236(韓國(guó)專利申請(qǐng)?zhí)?001-6976)作為宿主細(xì)胞。大腸桿菌KCCM 10236是甲硫氨酸營(yíng)養(yǎng)缺陷型菌株，而且對(duì)蘇氨酸類似物(AHVα-氨基-β-羥基戊酸)、賴氨酸類似物(AECS-(2-氨基乙基)-L-半胱氨酸)、異亮氨酸類似物(α-氨基丁酸)、和甲硫氨酸類似物(乙硫氨酸)有抗性。此外，大腸桿菌KCCM 10236還在染色體DNA中具有一個(gè)額外拷貝的磷酸烯醇丙酮酸羧酶基因，而且thrA、thrB、和thrC基因中至少有一個(gè)以擴(kuò)增狀態(tài)存在，因而其L-蘇氨酸產(chǎn)量提高。在本發(fā)明中，通過(guò)使用大腸桿菌KFCC 10236作為宿主細(xì)胞證實(shí)了上述重組載體的效果。大腸桿菌KFCC 10236已于2000年12月29日保藏于韓國(guó)微生物保存中心(KFCC)。
依照本發(fā)明的另一方面，提供了生產(chǎn)L-蘇氨酸的方法，包括培養(yǎng)轉(zhuǎn)化的宿主細(xì)胞并由培養(yǎng)物回收L-蘇氨酸。優(yōu)選的是，使用大腸桿菌KCCM10236/pTHR(+)作為轉(zhuǎn)化的宿主細(xì)胞。
本發(fā)明生產(chǎn)L-蘇氨酸的方法可以在常規(guī)條件下進(jìn)行。雖然異亮氨酸和蘇氨酸的胞內(nèi)水平較高，但是L-蘇氨酸的生產(chǎn)并未受到抑制。因此，L-蘇氨酸的產(chǎn)量得到提高。
下文將通過(guò)實(shí)施例更具體的描述本發(fā)明。然而，下文實(shí)施例僅作舉例說(shuō)明目的，因而本發(fā)明不限于此。
實(shí)施例實(shí)施例1顯示了使用常規(guī)L-蘇氨酸生產(chǎn)菌株時(shí)培養(yǎng)基中的異亮氨酸濃度與L-蘇氨酸生物合成之間的關(guān)聯(lián)。由實(shí)施例1的菌株克隆蘇氨酸操縱子(下文簡(jiǎn)稱為“thr操縱子”)的核苷酸序列(實(shí)施例2)。然后，在包含此克隆thr操縱子的pTHR(-)載體上誘發(fā)突變(實(shí)施例3)，并選擇thr操縱子的表達(dá)不受異亮氨酸和蘇氨酸抑制的菌株(實(shí)施例4)。最后，在實(shí)施例5中，對(duì)選定菌株的thr操縱子進(jìn)行測(cè)序。結(jié)果是，thr操縱子中的部分衰減子缺失。
實(shí)施例1培養(yǎng)基中的異亮氨酸濃度與L-蘇氨酸生物合成之間的關(guān)聯(lián)在容積為30升的發(fā)酵罐中以補(bǔ)料—分批培養(yǎng)的方式培養(yǎng)大腸桿菌KCCM 10236菌株達(dá)77小時(shí)，將培養(yǎng)溫度維持于32℃，培養(yǎng)pH值為6.5，且通氣率為0.5至1.0vvm。使用自動(dòng)化氨基酸分析儀測(cè)定最終培養(yǎng)基中的氨基酸組成和濃度。結(jié)果顯示于表1。
表1大腸桿菌KCCM 10236培養(yǎng)基中的氨基酸組成和濃度

為了研究取決于L-異亮氨酸添加量的L-蘇氨酸的生產(chǎn)力，將0至0.4g/l的L-異亮氨酸加到發(fā)酵培養(yǎng)基中，并將由此得到的培養(yǎng)基在搖瓶中保溫48小時(shí)。結(jié)果顯示于表2。
表2L-異亮氨酸的添加對(duì)大腸桿菌KCCM 10236的L-蘇氨酸生產(chǎn)力的影響

如表2所示，在常規(guī)蘇氨酸生產(chǎn)菌株大腸桿菌KCCM 10236中，隨著L-異亮氨酸的量的增加，L-蘇氨酸的生產(chǎn)力迅速降低。
實(shí)施例2在大腸桿菌KCCM 10236中克隆thr操縱子的核苷酸序列由大腸桿菌KCCM 10236擴(kuò)增并克隆thr操縱子。用于擴(kuò)增thr操縱子的引物分別為SEQ ID NO3和SEQ ID NO4所列的thr-F和thr-R。使用GenBank數(shù)據(jù)庫(kù)(NCBI)設(shè)計(jì)引物序列。
使用ExpandTM高保真PCR系統(tǒng)(Boehringer Mannheim)擴(kuò)增5447bp包含啟動(dòng)子區(qū)的thr操縱子。PCR反應(yīng)混合物包含dNTP各200μM、引物各300nM、大腸桿菌KCCM 10236基因組DNA 0.1μg、含15mM MgCl2的1xExpand HF緩沖液、和ExpandTM高保真PCR系統(tǒng)酶混合物2.6U。如下進(jìn)行PCR反應(yīng)以擴(kuò)增thr操縱子95℃5分鐘，30個(gè)循環(huán)的95℃30秒、56℃30秒、以及68℃4分30秒。將PCR反應(yīng)液于68℃維持10分鐘，然后于4℃終止反應(yīng)。將擴(kuò)增得到的thr操縱子插入克隆載體pGEM-T(Promega，美國(guó))。然后，用包含thr操縱子的克隆載體轉(zhuǎn)化大腸桿菌DH5α以獲得pGEM-Thr載體。
用限制酶ApaI和PstI消化pGEM-Thr和pECCG(KFCC 10696)，然后使用常規(guī)方法連接thr操縱子和pECCG122載體。用連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化大腸桿菌DH5α，得到pTHR(-)載體。根據(jù)序列分析，克隆得到的thr操縱子包含SEQ ID NO1所列常規(guī)thr操縱子的核苷酸序列。
實(shí)施例3THR(-)的突變?yōu)榱嗽趖hr操縱子上誘發(fā)突變，將2μg包含thr操縱子的pTHR(-)DNA溶于200μl含200-500μg/ml N-甲基-N’-硝基-N-亞硝基胍的緩沖液(0.1M KH2PO4-1mM EDTA，pH6.0)中，并于37℃保溫10-30分鐘。使用常規(guī)酒精沉淀回收已誘發(fā)突變的載體，并用此回收載體轉(zhuǎn)化大腸桿菌W3110(ATCC27325)。然后，將轉(zhuǎn)化后的大腸桿菌W3110培養(yǎng)物涂布于含50mg/l卡那霉素的LB培養(yǎng)基上，以獲得在LB培養(yǎng)基上生長(zhǎng)的菌落。將菌落復(fù)制到含作為異亮氨酸類似物的異亮氨酸氧肟酸和作為蘇氨酸類似物的α-氨基-β-羥基戊酸(AHV)的選擇性基本培養(yǎng)基平板上和不含這些類似物的對(duì)照基本培養(yǎng)基平板上。選擇在選擇性基本培養(yǎng)基平板上生長(zhǎng)的菌株。復(fù)制平板三次后，選擇了27個(gè)候選菌株。然后，將選定候選菌株再次接種到含作為異亮氨酸類似物的異亮氨酸氧肟酸和作為蘇氨酸類似物的α-氨基-β-羥基戊酸(AHV)的選擇性基本培養(yǎng)基平板上，從而再次確認(rèn)候選菌株在選擇性基本培養(yǎng)基平板上的生長(zhǎng)。
實(shí)施例4測(cè)定不受異亮氨酸抑制的thr操縱子的核苷酸序列以及thr操縱子對(duì)異亮氨酸的抗性使用常規(guī)方法，由在實(shí)施例3中得到的27個(gè)候選菌株回收已誘發(fā)突變的pTHR(*)載體，然后用pTHR(*)載體轉(zhuǎn)化蘇氨酸生產(chǎn)菌株大腸桿菌KCCM 10236。將重組大腸桿菌KCCM 10236菌株涂布到含50mg/l卡那霉素的LB培養(yǎng)基上，以獲得在LB培養(yǎng)基上生長(zhǎng)的菌落。將得到的包含pTHR(*)載體的重組菌株共135株在表3的固體培養(yǎng)基上進(jìn)行培養(yǎng)。然后，將每種培養(yǎng)物的一滿環(huán)接種到含有表4的發(fā)酵培養(yǎng)基的搖瓶中，并培養(yǎng)48小時(shí)。分析L-蘇氨酸的累積量。根據(jù)分析結(jié)果，與親本菌株大腸桿菌KCCM 10236相比，有兩種包含pTHR(*)的菌株生產(chǎn)蘇氨酸的水平分別提高了14％和22％。具體而言，將由后一種菌株獲得的pTHR(*)載體命名為pTHR(+)載體。在將pTHR(+)載體插入大腸桿菌W3110(ATCC27325)后，將得到的菌株命名為大腸桿菌w3110/pTHR(+)，然后于2002年4月16日保藏于韓國(guó)微生物保存中心(KFCC)(保藏號(hào)KCCM-10371)。
為了測(cè)定重組菌株大腸桿菌KCCM 10236(pTHR)對(duì)L-異亮氨酸的抗性，檢查含不同濃度L-異亮氨酸的培養(yǎng)基中的蘇氨酸生產(chǎn)力。結(jié)果顯示于表5。
表3用于蘇氨酸生產(chǎn)的固體培養(yǎng)基

表4用于蘇氨酸生產(chǎn)的液體培養(yǎng)基


表5L-異亮氨酸濃度對(duì)包含pTHR(+)的大腸桿菌KCCM 10236中L-蘇氨酸生產(chǎn)力的影響

如表2和5所示，與親本菌株大腸桿菌KCCM 10236相比，取決于L-異亮氨酸濃度增加的L-蘇氨酸生產(chǎn)力的降低比率顯著減小。由此可見(jiàn)，pTHR(+)載體包含用于L-蘇氨酸生物合成的不受L-異亮氨酸抑制的突變型thr操縱子。
實(shí)施例5突變位點(diǎn)的鑒定為了鑒定實(shí)施例4中得到的thr操縱子中的突變位點(diǎn)，分析pTHR(+)載體中thr操縱子的核苷酸序列。為此進(jìn)行PCR反應(yīng)，以0.1mg pTHR(+)為模板，2mM thr-F(SEQ ID NO3)為引物，再加入1μl BigDyeTMTerminator Cycle Sequencing v2.0 Ready Reaction(PE Biosystems)。PCR條件如下95℃變性30秒，56℃退火30秒，72℃擴(kuò)增30秒。30個(gè)循環(huán)后，于4℃終止反應(yīng)。使用ABI PRISM 3100 Genetic Analyzer(AppliedBiosystems)測(cè)定擴(kuò)增得到的核苷酸序列。根據(jù)分析的結(jié)果，發(fā)現(xiàn)位于結(jié)構(gòu)性thr操縱子前面第-56至-18位的39bp核苷酸序列缺失。得到的thr操縱子核苷酸序列列于SEQ ID NO2。
研究得到的thr操縱子中蘇氨酸的生產(chǎn)力。為此，在裝有用于蘇氨酸生產(chǎn)的培養(yǎng)基的搖瓶中培養(yǎng)三種菌株大腸桿菌KCCM 10236、大腸桿菌KCCM 10236/pTHR(+)、和大腸桿菌KCCM 10236/pECCG。評(píng)估各菌株的蘇氨酸生產(chǎn)力。
具體而言，將三種菌株在含有表3用于蘇氨酸生產(chǎn)的培養(yǎng)基的容器中于32℃培養(yǎng)過(guò)夜。將得到的每一種單菌落的一滿環(huán)接種到25ml表4的培養(yǎng)基中，并于32℃以250rpm培養(yǎng)48小時(shí)。通過(guò)高效液相色譜(HPLC)檢測(cè)產(chǎn)生的L-蘇氨酸的濃度。結(jié)果顯示于表6。
表6搖瓶中親本菌株和選定重組菌株之間蘇氨酸產(chǎn)量的比較

如表6所示，與親本菌株大腸桿菌KCCM 10236相比，重組菌株大腸桿菌KCCM 10236/pTHR(+)的蘇氨酸生產(chǎn)力提高了22％。當(dāng)存在高濃度(200mg/l)異亮氨酸時(shí)，親本菌株大腸桿菌KCCM 10236的蘇氨酸生產(chǎn)力降低了46％。另一方面，大腸桿菌KCCM 10236/pTHR(+)的蘇氨酸生產(chǎn)力僅僅降低了18.9％。由此可見(jiàn)，包含本發(fā)明thr操縱子的菌株增強(qiáng)了對(duì)異亮氨酸抑制作用的抗性。
工業(yè)適用性根據(jù)上文描述顯而易見(jiàn)的是，本發(fā)明提供了第-56至-18位的39bp核苷酸片段的全部或部分缺失的大腸桿菌thr操縱子的核苷酸序列，此39bp區(qū)段是thr操縱子結(jié)構(gòu)基因的衰減子區(qū)。此外，本發(fā)明還提供了包含thr操縱子的核苷酸序列的重組載體以及包含重組載體的轉(zhuǎn)化的宿主細(xì)胞。
因此，即使存在異亮氨酸，本發(fā)明的轉(zhuǎn)化的宿主細(xì)胞仍能大量生成L-蘇氨酸。
生物材料國(guó)際保藏和存活證明(譯文)

生物材料國(guó)際保藏和存活證明(譯文)

生物材料國(guó)際保藏和存活證明(譯文)

序列表<110>CJ株式會(huì)社<120>不受異亮氨酸抑制的蘇氨酸操縱子的核苷酸序列以及使用包含其的轉(zhuǎn)化的宿主細(xì)胞生產(chǎn)L-蘇氨酸的方法<160>4<170>KopatentIn 1.71<210>1<211>5020<212>DNA<213>大腸桿菌(Escherichia coli)<400>1agcttttcat tctgactgca acgggcaata tgtctctgtg tggattaaaa aaagagtgtc 60tgatagcagc ttctgaactg gttacctgcc gtgagtaaat taaaatttta ttgacttagg 120tcactaaata ctttaaccaa tataggcata gcgcacagac agataaaaat tacagagtac 180acaacatcca tgaaacgcat tagcaccacc attaccacca ccatcaccat taccacaggt 240aacggtgcgg gctgacgcgt acaggaaaca cagaaaaaag cccgcacctg acagtgcggg 300cttttttttt cgaccaaagg taacgaggta acaaccatgc gagtgttgaa gttcggcggt 360acatcagtgg caaatgcaga acgttttctg cgtgttgccg atattctgga aagcaatgcc 420aggcaggggc aggtggccac cgtcctctct gcccccgcca aaatcaccaa ccacctggtg 480gcgatgattg aaaaaaccat tagcggccag gatgctttac ccaatatcag cgatgccgaa 540cgtatttttg ccgaactttt gacgggactc gccgccgccc agccggggtt cccgctggcg 600
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<223>突變的蘇氨酸操縱子序列
<400>2agcttttcat tctgactgca acgggcaata tgtctctgtg tggattaaaa aaagagtgtc 60tgatagcagc ttctgaactg gttacctgcc gtgagtaaat taaaatttta ttgacttagg 120tcactaaata ctttaaccaa tataggcata gcgcacagac agataaaaat tacagagtac 180acaacatcca tgaaacgcat tagcaccacc attaccacca ccatcaccat taccacaggt 240aacggtgcgg gctgacgcgt acaggaaaca cagaaaaaag gtaacgaggt aacaaccatg 300cgagtgttga agttcggcgg tacatcagtg gcaaatgcag aacgttttct gcgtgttgcc 360gatattctgg aaagcaatgc caggcagggg caggtggcca ccgtcctctc tgcccccgcc 420aaaatcacca accacctggt ggcgatgatt gaaaaaacca ttagcggcca ggatgcttta 480cccaatatca gcgatgccga acgtattttt gccgaacttt tgacgggact cgccgccgcc 540cagccggggt tcccgctggc gcaattgaaa actttcgtcg atcaggaatt tgcccaaata 600aaacatgtcc tgcatggcat tagtttgttg gggcagtgcc cggatagcat caacgctgcg 660ctgatttgcc gtggcgagaa aatgtcgatc gccattatgg ccggcgtatt agaagcgcgc 720ggtcacaacg ttactgttat cgatccggtc gaaaaactgc tggcagtggg gcattacctc 780gaatctaccg tcgatattgc tgagtccacc cgccgtattg cggcaagccg cattccggct 840gatcacatgg tgctgatggc aggtttcacc gccggtaatg aaaaaggcga actggtggtg 900cttggacgca acggttccga ctactctgct gcggtgctgg ctgcctgttt acgcgccgat 960tgttgcgaga tttggacgga cgttgacggg gtctatacct gcgacccgcg tcaggtgccc1020gatgcgaggt tgttgaagtc gatgtcctac caggaagcga tggagctttc ctacttcggc1080
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<223>Thr-F引物序列<400>3ctggtcgact ggttacaaca acg<210>4<211>23<212>DNA<213>人工序列<220>
<223>Thr-R引物序列<400>4
ggactaacgt aatttccgca gcc2權(quán)利要求
1.一段大腸桿菌蘇氨酸操縱子的核苷酸序列，所述大腸桿菌缺失全部或部分衰減子。
2.依照權(quán)利要求1的核苷酸序列，其為SEQ ID NO2中所示缺失39bp(第-56至-18位)的蘇氨酸操縱子。
3.一種重組載體，其包含依照權(quán)利要求1或2的核苷酸序列。
4.依照權(quán)利要求3的重組載體，其中用于重組載體的克隆載體是由KFCC10696獲得的pECCG122。
5.依照權(quán)利要求3的重組載體，其為pTHR(+)。
6.一種轉(zhuǎn)化的宿主細(xì)胞，其包含依照權(quán)利要求3的重組載體。
7.依照權(quán)利要求6的轉(zhuǎn)化的宿主細(xì)胞，其中所述宿主細(xì)胞是大腸桿菌或棒狀桿菌。
8.依照權(quán)利要求6的轉(zhuǎn)化的宿主細(xì)胞，其中所述宿主細(xì)胞是大腸桿菌KCCM 10236。
9.一種生產(chǎn)L-蘇氨酸的方法，其包括培養(yǎng)依照權(quán)利要求6的轉(zhuǎn)化的宿主細(xì)胞和由所述培養(yǎng)物回收L-蘇氨酸。
全文摘要
提供了第－56至－18位核苷酸片段的全部或部分缺失的大腸桿菌蘇氨酸操縱子的核苷酸序列，包含上述核苷酸序列的重組載體、以及包含此重組載體的轉(zhuǎn)化的宿主細(xì)胞。本發(fā)明還提供了生產(chǎn)L－蘇氨酸的方法，包括培養(yǎng)轉(zhuǎn)化的宿主細(xì)胞。
文檔編號(hào)C12N15/52GK1653180SQ03811059
公開(kāi)日2005年8月10日 申請(qǐng)日期2003年5月15日 優(yōu)先權(quán)日2002年5月15日
發(fā)明者李禧宗, 金成俊, 成珍錫, 宋錫元, 樸英薰 申請(qǐng)人:Cj株式會(huì)社