專利名稱：Ghrh類似物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及生長激素釋放激素(GHRH)類似物，更具體地，本發(fā)明涉及29個氨基酸以上的GHRH類似物，其在體外實驗中與人天然GHRH(1-29)NH2相比顯示對蛋白水解的抵抗性增加以及對人GHRH受體的高結(jié)合親合力。
背景技術(shù)：
生長激素(GH)是促生長的垂體前葉激素，負責調(diào)節(jié)生長并顯示合成代謝功能，例如刺激蛋白質(zhì)合成和分泌以及脂解。直到20世紀80年代，人GH(hGH)的唯一來源是死后采集的垂體腺。今天，hGH可通過遺傳工程大量獲得。
GH促進兒童生長并在成人代謝中起重要作用。兒童GH缺乏與生長遲緩或不能相關(guān)，而GH過量分別導致巨人癥(gigantism)或肢端肥大癥(acromegaly)。
GH在哺乳動物的垂體腺前葉的生長激素細胞(somatotroph cell)中產(chǎn)生，并終生分泌。其主要通過兩種下丘腦肽在腦內(nèi)收集GHRH，其促進GH分泌和合成；和生長激素釋放抑制因子，其抑制GH和GHRH。許多環(huán)境因子調(diào)節(jié)GH分泌。其中，胰島素-樣生長因子(IGF-1)受體代表重要的一種，這是由于它是肝對GH反應(yīng)而產(chǎn)生并作用于下丘腦以顯示對GH分泌的負反饋作用。
靶向GH軸的藥物制劑包括刺激GH釋放的合成GHRH；抑制GH釋放的生長激素釋放抑制因子類似物奧曲肽；用于在GH缺乏時取而代之的重組人GH(生長激素(somatotropin)，人蛋氨生長素)；和用于治療GH不敏感性的重組IGF-1(Laron-型侏儒癥)。
目前已檢測過的所有動物種類中，GH都隨年齡下降。在人中，21-31歲以后GH的量下降約每十年14％，以致到60歲時總24-小時GH產(chǎn)率減少一半。因此人在20歲時每天產(chǎn)生的GH為約500μg，在40歲時約200μg，且在80歲時為25μg。
從1985年起，生物合成的GH可用于處方，因此GH替代治療成為生長激素缺乏的治療選擇。在美國，如果采用嚴格的GH缺乏標準需要進行GH治療的兒童的數(shù)目為11,000，而如果將所有身高低于三分之一分布百分數(shù)的兒童作為候選者則達1,300,000。如果進行較低嚴格標準的治療，相應(yīng)的GH治療的費用每年1.55億-200億美元(Cuttler L.等.，1996)。目前，由于只有20,000名兒童接受GH治療，表明在美國限制兒科醫(yī)生在防止GH的濫用方面已經(jīng)顯示了令人滿意的結(jié)果(Finkelstein，B.S.等，1998)。
另一問題是注射傳統(tǒng)的生物合成GH時患者依從性較差。GH的復雜氨基酸結(jié)構(gòu)(191個氨基酸)在胃腸道中完全被破壞。
總之，GH不適合用于患有活躍的惡性疾病，良性顱內(nèi)高壓和增生性或增生前性糖尿病視網(wǎng)膜病的患者。
生長激素釋放激素(GHRH)是44個氨基酸的肽。數(shù)個作者報道GHRH(1-44)NH2的29個氨基酸的N末端片段GHRH(1-29)NH2顯示GHRH(1-44)NH2的全部生物活性。
GHRH首次從胰腺腫瘤中分離，隨后從各種動物的下丘腦中分離。除了下丘腦弓狀核以外，GHRH存在于其它下丘腦核團例如前交叉核中以及腦的其它區(qū)域例如邊緣系統(tǒng)中。GHRH-樣免疫反應(yīng)性和/或GHRH信使核糖核酸(mRNA)也見于胎盤，胃腸道，卵巢，睪丸，胸腺，脾和腎髓質(zhì)。
已經(jīng)在各種組織制備物和來自正常以及腫瘤性垂體，以及來自正常下丘腦、睪丸、卵巢、和腎髓質(zhì)的細胞培養(yǎng)物中對GHRH結(jié)合位點進行定位和表征。藥理學研究證實垂體和卵巢中有兩種群體的GHRH結(jié)合位點對應(yīng)受體的生理相關(guān)形式的高親合力和低容量結(jié)合位點，以及低親合力和高容量結(jié)合位點。
大鼠垂體GHRH結(jié)合位點的參數(shù)的變化出現(xiàn)在衰老的過程中，導致丟失高親合力結(jié)合位點。
已知GHRH在體內(nèi)快速降解。GHRH的降解模式已經(jīng)在血清和血漿，肝和靶組織例如垂體腺和下丘腦中說明。到目前為止鑒定的易被破壞的肽是R2-R3，R10-R11，R11-R12，R14-R15，R18-R19，R20-R21，R21-R22(Boulanger等Brain Res 1993；Boulanger等Peptides 1992)。此外，還已知這些氨基酸殘基的修飾可預防或減少蛋白水解以及導致GHRH及其類似物的作用時間延長(Girard P.等Eur J Clin Pharmacol 1987，32507-513)。
天然存在的GHRH的這些說明和限制導致發(fā)現(xiàn)了一類新的14種多取代的合成GHRH超激動劑(superagonist)，其顯示對大鼠垂體GHRH受體的親合力增加5-13倍，如美國專利5,854,216所述。該發(fā)明提供了GHRH受體的非毒性高敏感性和選擇性標記物肽以及標記物多克隆抗體。
此外，目前由學術(shù)組織或藥物/生物技術(shù)公司設(shè)計的GHRH類似物基于這些類似物的結(jié)構(gòu)改變，目的僅是提高它們在動物的生物實驗或體內(nèi)實驗中的半衰期。
目前，需要這樣的GHRH類似物，其可通過簡單的氨基酸多取代修飾而增加其對垂體GHRH受體親合力并延長其體內(nèi)半衰期。此外，需要在體內(nèi)證明GHRH類似物將能刺激動物體內(nèi)的GH分泌，并且它們將比天然GHRH(1-44)-NH2更有效。就此而言，在美國專利5,584,216中描述的GHRH類似物中進行選擇時觀察到意料之外的優(yōu)點。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供GHRH類似物，其滿足上述要求。相應(yīng)地，本發(fā)明涉及GHRH類似物，其用途和啟動GHRH-誘導的生物作用的方法。
根據(jù)第一方面，本發(fā)明涉及GHRH類似物、所述類似物的衍生物或其可藥用的鹽，其包含式XTyr-A2-Asp-Ala-lle-Phe-Thr-A8-A9-A10-Arg-Lys-Val-Leu-A15-Gln-Leu-Ser-Ala-Arg-A21-A22-Leu-Gln-Asp-lle-Met-Ser-Arg-A30-NH2，其中A2是Ala或D-Ala；A8是Asn，D-Asn或Ala；A9是Ser或Ala；A10是Tyr或D-Tyr；A15是Gly，Ala或D-Ala；A21是Lys或D-Lys；A22是Leu，D-Leu，Lys或Ala；和A30是鍵或者1-15個殘基的任何氨基酸序列；所述類似物，所述類似物的衍生物或其可藥用的鹽具有的體外效力指數(shù)基本上高于天然存在的GHRH的體外效力指數(shù)。
另一方面，本發(fā)明涉及包含上述類似物、其衍生物或鹽以及可藥用的載體的藥物組合物。
在另一方面，本發(fā)明涉及所述類似物在特異性刺激GH體內(nèi)釋放中的用途。
在另一方面，本發(fā)明涉及所述類似物在制備用于治療GH缺乏相關(guān)的疾病的藥物中的用途。
在另一方面，本發(fā)明涉及啟動GHRH誘導的生物作用的方法。
本發(fā)明及其優(yōu)點將通過閱讀以下對優(yōu)選實施方案的非限制性說明并參考附圖而更好地理解。


圖1說明根據(jù)本發(fā)明優(yōu)選實施方案，相對于天然人GRF(1-44)NH2肽以漸增劑量單次靜脈內(nèi)注射GHRH類似物以后，大鼠生長激素的分泌曲線圖。
圖2說明根據(jù)本發(fā)明的優(yōu)選實施方案，以漸增劑量單次皮下注射GHRH類似物后，大鼠生長激素的分泌曲線圖。
圖3說明根據(jù)本發(fā)明的優(yōu)選實施方案，以漸增劑量多次皮下注射GHRH類似物后，大鼠生長激素的分泌曲線圖。
優(yōu)選實施方案的描述本發(fā)明涉及GHRH類似物，其與人天然GHRH(1-29)NH2相比，在體外研究中顯示對蛋白水解的抵抗性增加并且對人GHRH受體的結(jié)合親和力相對較高。本發(fā)明人鑒定了這種GHRH類似物的常見氨基酸序列。應(yīng)理解術(shù)語“GHRH類似物”的意思是GHRH激動劑，更具體為以高親合力與GHRH受體結(jié)合并通過刺激垂體腺前葉的生長激素細胞釋放GH來增加血漿生長激素(GH)濃度的合成肽。
本發(fā)明還涉及包含本說明書中定義的GHRH類似物的組合物，以及這種GHRH類似物和/或組合物的使用方法。
GHRH類似物，其衍生物或鹽根據(jù)第一方面，本發(fā)明涉及GHRH類似物，其功能衍生物或可藥用的鹽。更具體地，本發(fā)明的GHRH類似物具有的氨基酸序列包含下式X
Tyr-A2-Asp-Ala-lle-Phe-Thr-A8-A9-A10-Arg-Lys-Val-Leu-A15-Gln-Leu-Ser-Ala-Arg-A21-A22-Leu-Gln-Asp-11e-Met-Ser-Arg-A30-NH2，且其中A2是Ala或D-Ala；A8是Asn，D-Asn或Ala；A9是Ser或Ala；A10是Tyr或D-Tyr；A15是Gly，Ala或D-Ala；A21是Lys或D-Lys；A22是Leu，D-Leu，Lys或Ala；和A30是鍵或者1-15個殘基的任何氨基酸序列。術(shù)語“殘基”用于指氨基酸時，表示通過消除羧基的羥基和氨基的一個氫從相應(yīng)的氨基酸衍生的基團。
此外，本發(fā)明的GHRH類似物具有的體外效力指數(shù)基本上高于天然存在的GHRH的體外效力指數(shù)。應(yīng)理解術(shù)語“天然存在的GHRH”包含hGHRH(1-29)NH2(天然GHRH肽的功能部分)和hGHRH(1-44)NH2(整個天然GHRH肽)。
本文使用的術(shù)語“體外效力指數(shù)”表示比較的手段，其通過將i-在表達hGHRH受體的BHK細胞中，GHRH類似物與天然hGHRH(1-29)NH2相比較而言的相對結(jié)合親合力，和ii-優(yōu)選在人血漿或人血清中保溫60或180分鐘后，所述化合物相對于hGHRH(1-29)NH2的相對體外蛋白水解抗性相乘得到。
本文使用的術(shù)語“相對高的結(jié)合親和力”指本發(fā)明的GHRH類似物對人GHRH受體的結(jié)合親和力比天然GHRH的結(jié)合親和力高至少約100倍。
本文使用的術(shù)語“對蛋白水解的抗性增加”指本發(fā)明的類似物在人血漿或血清中進行體外保溫的條件下，與天然GHRH相比其具有基本上相對較高的平均剩余量百分比，例如至少約50％。
根據(jù)本發(fā)明優(yōu)選實施方案，術(shù)語“基本較高”用于描述本發(fā)明GHRH類似物，其衍生物或鹽的體外效力指數(shù)，其表明體外效力指數(shù)比天然hGHRH(1-29)NH2的體外效力指數(shù)優(yōu)選至少高500倍，更優(yōu)選高1500倍，還更優(yōu)選高2500倍本文使用的術(shù)語“功能衍生物”如通常理解的那樣，指這樣的蛋白/肽序列，其具有基本上與本發(fā)明的GHRH類似物的生物活性相似的功能型生物活性。本發(fā)明GHRH類似物的功能衍生物可含有或不含有翻譯后修飾，例如共價結(jié)合的碳水化合物，條件是這種修飾對于執(zhí)行具體的功能不是必要的。術(shù)語“功能衍生物”包括本發(fā)明涉及的GHRH類似物的“片段”，“部分”，“變體”或“化學衍生物”。
可理解，式X是氨基酸(A)序列。通常，本文所用用于命名氨基酸的縮寫的根據(jù)是IUPAC-IUB Commission on Biochemical Nomenclature的建議(Biochemistry，1972，111726-1732)。更具體地，術(shù)語“氨基酸”在一般的肽化學的教科書中描述(Kipple，K.D，″Peptides and Amino Acids″，W.A.Benjamin，Inc.，New York，1966；″The Peptides″，E.D.Gross E.and Meienhofer J.，vol.1，Academic press，New York，1979)，并包括丙氨酸，精氨酸，天冬酰胺，天冬氨酸，半胱氨酸，谷氨酸，谷氨酰胺，甘氨酸，組氨酸，羥基賴氨酸，羥基脯氨酸，異亮氨酸，亮氨酸，甲硫氨酸，苯丙氨酸，脯氨酸，焦谷氨酸，肌氨酸，絲氨酸，蘇氨酸，色氨酸，酪氨酸和纈氨酸。
這里所述本發(fā)明GHRH肽優(yōu)選通過使用固相肽化學t-Boc-酸-不穩(wěn)定性(t-Boc-Acid-Labile)保護方案合成，所述方案由AthertonE.L.SheppardR.C.(″Solid-phase peptide synthesisa practical approach″，IRLpress，Oxford University press，Oxford，England，1989，pages 1-203)描述。應(yīng)理解本發(fā)明的GHRH類似物可通過本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的任何方法制備。
根據(jù)本發(fā)明，優(yōu)選天然形式的GHRH的多取代的不同組合。因此，在一種這樣的組合中，優(yōu)選的GHRH類似物包含上述式X并具有如下取代A2是D-Ala，A8是Ala，A15是Ala，A22是Lys。A9，A10，A21和A30如上文定義。
本發(fā)明另一種優(yōu)選類似物包含式X，其中A2是D-Ala，A10是D-Tyr，且A22是Lys。A8，A9，A15，A21和A30如上文定義。
根據(jù)本發(fā)明另一種優(yōu)選類似物，所述類似物包含式X，其中A2是D-Ala，A10是D-Tyr，A15是D-Ala且A22是Lys。A8，A9，A21和A30如上文定義。
藥物組合物根據(jù)另一方面，本發(fā)明涉及藥物組合物，其包含有效量的上述GHRH類似物，其功能衍生物或鹽，和可藥用的載體。
本文使用的術(shù)語“組合物”意圖包括包含所需量的本發(fā)明的GHRH類似物的產(chǎn)物?！翱伤幱玫摹敝杆鲚d體，稀釋劑或賦型劑必須和所述制劑中的GHRH類似物相容，并可給藥宿主且無副作用。本領(lǐng)域已知的適宜的可藥用的載體包括但不限于，無菌水，鹽水，葡萄糖，右旋糖或緩沖的溶液。載體可包括輔助試劑，包括但不限于稀釋劑，穩(wěn)定劑(即糖和氨基酸)，防腐劑，濕潤劑，乳化劑，pH緩沖劑，增粘添加劑，乳糖，色素等。本發(fā)明優(yōu)選的可藥用載體是鹽水溶液例如氯化鈉，優(yōu)選用0.9％的，或用于制備吸入用干粉制劑的乳糖。
使用方法根據(jù)本發(fā)明的其它方面，本發(fā)明涉及本發(fā)明的GHRH類似物或包含所述GHRH類似物的藥物組合物在特異性刺激GH體內(nèi)釋放以及制備用于治療GH缺乏相關(guān)疾病的藥物中的用途?！爸委煛敝钢委熜蕴幚砗头啦⌒曰蝾A防性措施。需要治療的對象包括患有所述疾病或GH缺乏的那些人和易于患所述疾病或GH缺乏的那些人，或者要預防所述疾病或GH缺乏的那些人。
根據(jù)本發(fā)明，術(shù)語“特異性刺激GH的體內(nèi)釋放”指本發(fā)明GHRH類似物的作用，在含有混合受體群的樣品中，所述GHRH類似物通過直接結(jié)合于GHRH受體活化GH釋放，但不通過直接結(jié)合于其它受體分子而活化GH釋放。
本發(fā)明的GH缺乏相關(guān)的疾病包括但不限于下丘腦垂體性侏儒癥，燒傷，骨質(zhì)疏松癥腎衰，骨不連合性骨折，急性/慢性虛弱性疾病(debilitating illness)或感染，傷口愈合，術(shù)后疾病，泌乳衰竭(lactation failure)，婦女不孕，癌癥患者的惡液質(zhì)，合成代謝/或分解代謝疾病，T-細胞免疫缺陷，神經(jīng)退行性病變，GHRH受體-依賴性腫瘤，衰老，睡眠疾病，肌內(nèi)消瘦性疾病(muscle wasting sease)。本文的肌內(nèi)消瘦性疾病可以是以下疾病之一肌肉減少癥(sarcopenia)，老年人身體虛弱，HIV和癌癥。更具體地，本發(fā)明藥物組合物的用途可以針對出現(xiàn)于化學治療和放射治療相關(guān)的副作用的癌癥患者。
在另一方面，本發(fā)明提供用于啟動哺乳動物中GHRH誘導的生物作用的方法。所述方法包括給藥該哺乳動物有效量的上述的GHRH類似物，所述類似物的功能衍生物或其可藥用的鹽，或者有效量的上述藥物組合物的步驟。
本文術(shù)語“GHRH-誘導的生物作用”包括但不限于調(diào)節(jié)睡眠，調(diào)節(jié)攝食和增加蛋白質(zhì)合成。本發(fā)明中觀察到給藥GHRH類似物后蛋白質(zhì)合成增加，即肌肉質(zhì)量增加或乳汁產(chǎn)量增加等，如Lapierre H.等(1995).J.DairySci.78804-815；Dubreuil，P.等(1996)Can J.Vet.Res.60(1)7-13；Lapierre H.等(1992)J.Anim.Sci.70(3)764-772；and Farmer C.等(1992)Biol.Neonate 61(2)110-117所述。
本文使用的術(shù)語“哺乳動物”指任何分類為哺乳動物的動物，包括人，家養(yǎng)和農(nóng)場動物，以及動物園動物，運動用動物或?qū)櫸?，例如狗，馬，貓，牛，豬等，其中需要GHRH受體活性的調(diào)節(jié)。本文使用的“調(diào)節(jié)”意圖包括激動(agonism)，和/或部分激動。
術(shù)語“有效量”指可激發(fā)研究者，獸醫(yī)，醫(yī)生或其它臨床工作者研究的組織，系統(tǒng)，動物或人的生物或臨床反應(yīng)量的GHRH類似物。換言之，治療具體疾病的化合物的有效量是足以緩解，或以某種方式減輕與所述疾病相關(guān)癥狀的量。這種量可以單次劑量或可根據(jù)使其有效的方案給藥。所述量可治愈疾病，但通常被給藥以緩解所述疾病的癥狀。術(shù)語“給藥”化合物應(yīng)理解為將本發(fā)明的GHRH類似物或本發(fā)明的組合物提供給需要治療的個體。
本發(fā)明的GHRH類似物和組合物可通過各種給藥途徑給予哺乳動物。例如，所述化合物可以無菌可注射制劑的形式給藥，例如無菌可注射的水性或油性混懸液。這些混懸液可根據(jù)本領(lǐng)域已知的技術(shù)、使用適宜的分散或濕潤劑以及懸浮劑來配制。所述無菌可注射制劑也可以是位于非毒性胃腸外可接受的稀釋劑或溶劑中的無菌可注射溶液或混懸液。它們可以經(jīng)胃腸外例如經(jīng)靜脈內(nèi)，或者通過肌肉內(nèi)注射或通過輸注給藥。本發(fā)明所述GHRH類似物和組合物也可配制成乳霜，軟膏，洗液，凝膠，滴液，栓劑，噴劑，液體或粉末等用于局部給藥。它們還可通過加壓氣溶膠分配器，鼻噴霧器，霧化器，計量的劑量吸入器，干粉吸入器，或膠囊給藥到受治療者的氣道。適宜劑量可根據(jù)例如以下因素而不同所述組合物中每種組分的量，所需的效果(快速或長期)，待治療的疾病或病癥，給要途徑，生物利用度，待治療哺乳動物的年齡和體重。在任何情況下，為給藥本發(fā)明的GHRH類似物和組合物，可使用本領(lǐng)域已知的方法。
實施例以下實施例說明本發(fā)明潛在應(yīng)用的較寬范圍，并不用于限制本發(fā)明的范圍?？蛇M行修飾和變化而不偏離本發(fā)明的精神和范圍。盡管任何與本文所述的方法和物質(zhì)類似或等同的方法或物質(zhì)可用于檢驗本發(fā)明的實踐中，但是描述了優(yōu)選方法和物質(zhì)。
實施例1根據(jù)GHRH受體結(jié)合親合力的體外數(shù)據(jù)首次選擇GHRH類似物根據(jù)兩月齡的Sprague Dawley雄性大鼠垂體前葉制備物中的受體親合力體外實驗數(shù)據(jù)，從美國專利5,854,216中描述的14種原始的多取代的GHRH類似物首次選擇候選物。新發(fā)明根據(jù)下述內(nèi)容進行所選的GHRH類似物對用hGHRH-R轉(zhuǎn)染的幼倉鼠腎(BHK)細胞中的人GHRH受體(hGHRH-R)的親合力，大鼠血清、人血漿或人血清中對蛋白水解的抵抗性。更具體地，通過與hGHRH(1-29)-NH2相比選擇優(yōu)選的候選藥物，其中i-它們在體外對大鼠垂體前葉中的hGHRH(1-44)-NH2結(jié)合位點，以及在體外對BHK表達細胞中的hGHRH-R的相對結(jié)合親合力增強；和ii-它們在體外對蛋白水解有相對抵抗性。
如下表1所示，合成肽與大鼠GHRH受體的相對結(jié)合親合力不能預測其與人受體的相對結(jié)合親合力。將注意到，從此以后，表1中的GHRH類似物將稱為GHRH類似物#1-5。
表1根據(jù)大鼠垂體前葉膜制備物和大鼠血清中的受體親合力和在體外對蛋白水解的抗性，以及BHK細胞膜制備物中的受體親合力對GHRH類似物的總體生物活性的預期的、理論上結(jié)合的影響進行優(yōu)先選擇。

表1中的GHRH類似物的號分別對應(yīng)美國專利5,854,216的27-28頁中的表11中的13，11，7，14和8。*，與hGHRH(1-29)-NH2相比較的值；+，使用[125I-Tyr10]hGHRH(1-44)-NH2在結(jié)構(gòu)-親合力研究中作為放射性配體。
實施例2本發(fā)明的天然GHRH和GHRH類似物的加工-試驗性測定1-競爭結(jié)合測定125I-GHRH結(jié)合測定如以前描述的進行(Boulanger L，等(1999)Neuroendocrinology 70117-127)，使用[125 I-Tyr″]hGHRH(1-44)NH2作為放射配體。在總共300μl的50mM Tris-乙酸鹽緩沖液(pH7.4)中，利用BHK(幼倉鼠腎)570細胞膜制備物(25μg蛋白/測定管)進行競爭實驗，其中人(h)GHRH(1-29)NH2、hGHRH(1-44)NH2或GHRH類似物濃度增加(0-1000nM)，所述緩沖液含有5mM MgCl2，5mM EDTA和0.42％BSA。在存在1μM hGHRH(1-29)NH2的條件下測定非特異性結(jié)合。達平衡時進行保溫(23℃，60min)，并通過離心終止(12,000g，5min，4℃)。沉淀中的放射活性含量通過γ-計數(shù)測定。在每次實驗中測定hGHRH(1-29)NH的親合力以評估該實驗的有效性并測定所述類似物的相對親合力。利用Ligand計算機程序分析表2和3中報告的GHRH類似物的競爭曲線，并測定它們的IC50(Gaudreau P.等(1992) J Med Chem，351864-1869)。
2-血清和血漿中的體外蛋白水解測定10μl 300μM hGHRH(1-29)NH 2或GHRH類似物的溶液溶于二甲基亞砜(DMSO)中，并在以下條件之一中保溫a-在聚丙烯試管中，190μl來自2月齡Sprague Dawley雄性大鼠的血清(以1/100稀釋于picopure水中)中，在37℃保溫0，8，15，30或60分鐘；b-190μl的人健康志愿者血漿(得自人全血(Human Whole Blood)Na EDTA，男性，不服用藥物(AlgorithmePharma Inc.)；項目MTL-P2-155；LotMTLP2155-01，由LAB Dev Int提供)；和c-在聚丙烯試管中，190μl從人健康志愿者收集的血清(批號X409(由LAB Dev Int提供))中，在37℃保溫0，60，120，180或420分鐘。通過加入800μl冰冷的終止緩沖液(磷酸鉀緩沖液，使用三氟乙酸(TFA)酸化至pH 0.8，并煮沸5分鐘(僅對大鼠血清)。離心(12000g，5min，4℃)后(僅對大鼠血清)，使血清-肽混合物通過調(diào)節(jié)的Sep-Pak C-18株來從血清蛋白中提取剩余的天然GHRH或GHRH類似物。天然GHRH或所述類似物在2ml 50％乙腈-0.01％TFA/50％0.01％含水TFA中洗脫。200μl提取的肽，代表時間0時的1μg GHRH或類似物，所述提取的肽使用一個μ-Bonda pakC18柱(1μm顆粒大小，0.39×15cm)(大鼠血清)或兩個C18中聯(lián)柱(人血清和血漿)以及由NaClO4 0.01M，pH 2.5和乙腈組成的二元溶解體系，通過分析HPLC定量。使用在45分鐘內(nèi)由30％變?yōu)?0％(大鼠血清)的乙腈或由30％變50％(人血清和血漿)的乙腈的線性梯度。在214nm監(jiān)測完整肽的洗脫，并通過估計峰表面面積確定剩余物濃度(Boulanger L，等(1993)Brain Res 61639-47；BoulangerL，等(1992)Peptides 13681-689)。
3-天然GHRH或GHRH類似物的體內(nèi)給藥在成年雌性大鼠(處理開始時為26-34周齡)和雄性Beugle狗中研究人GHRH類似物#5(人[D-Ala2，D-Tyr10，Ala15，Lys22]GHRH(1-29)NH2類似物)刺激GH分泌的能力。
i-向大鼠體內(nèi)給藥在用于注射USP的0.9％氯化鈉溶液中的人GHRH類似物#5通過靜脈內(nèi)(IV)或皮下(SC)注射一次性給藥雌性大鼠，然后觀察14天，如表2所示。給藥以前，所有劑量配制劑都使用0.22μm的濾紙過濾以保證無菌。計算GHRH類似物#5的實際給藥劑量并根據(jù)所述動物的最近體重進行調(diào)整。每天在大約相同的時間給藥，即在9:00am±30分鐘給藥。
表2將GHRH類似物#5體內(nèi)給藥雌性大鼠


*陰性對照(第1組)動物僅接受載體(NaCl)。
**陽性對照(第12組)動物僅接受hGHRH(1-44)。
為進行藥效研究，通過在以下時間點進行頸靜脈穿刺，在每個時間點(最多3個時間點/動物)從兩只動物/每組中收集血樣(大約1.3ml)給藥前，給藥后4，10，15，45分鐘和5小時。所有血樣都收集到EDTA鉀管中，并在冷凍條件下(2-8℃，1500g，10分鐘)離心。
ii-大鼠生長激素測定血漿GH由Linco Diagnostic Service利用其自己的試劑盒測定。
Linco大鼠生長激素放射免疫測定試劑盒(RIA)(RGH-45HK)意圖定量測定血清，血漿和組織胚培養(yǎng)基中的大鼠生長激素。它是完全同源性的測定，這是由于所述抗體是針對重組大鼠生長激素激發(fā)的，并且示蹤劑(tracer)和標準物都是用相同的重組大鼠生長激素制備的。該試劑盒包括完成RIA所需的標準物，抗體，示蹤劑，質(zhì)量控制劑，沉淀劑和緩沖劑。所述測定在以下條件下進行過夜；在室溫平衡保溫；樣品體積100μl血清，血漿或細胞培養(yǎng)基。所用標記物為125I-大鼠生長激素(20,000CPM/管)。
該測定的結(jié)果是ED80＝1.0±0.1ng/mlED50＝4.7±0.2ng/mlED20＝23.1±0.7ng/ml最后，該測定的特異性如下大鼠生長激素100％；大鼠催乳素＜0.1％；豬生長激素＜0.5％；人生長激素＜0.1％。
iii-體內(nèi)給藥到雄性Beagle狗用于注射USP的0.9％氯化鈉溶液中的人GHRH類似物#5在第3，5和8天分別以0.01，0.1，和1mg/kg體重的劑量水平通過皮下(SC)注射到大約8個月的雄性狗，如表3所示。在第1天，所述狗接受對照(載體)制品，且在第11天，所述動物接受0.01mg/kg劑量水平的陽性對照hGHRH(1-44)NH2。在給藥前，所有劑量的配制劑都通過0.22μm的濾紙過濾以保證該配制劑無菌。計算GHRH類似物#5的實際給藥劑量并根據(jù)所述動物的最近體重進行調(diào)整。每天在大約相同的時間給藥，即在9:00am±30分鐘給藥。
表3將GHRH類似物#5體內(nèi)給藥到雄性Beagle狗

*陰性對照(第1組)動物僅接受載體(NaCl)。
**陽性對照(第12組)動物僅接受hGHRH(1-44)。
為進行藥效研究，通過在以下時間點進行頸靜脈穿刺，從每種處理的狗收集血樣(大約1.0ml)給藥前，給藥后7，15，22，30，45和60分鐘。所有血樣都收集到EDTA鉀管中，并在冷凍條件下(2-8℃，1500g，10分鐘)離心。
iv-犬生長激素測定血漿GH由Linco Diagnostic Service利用其自己的試劑盒測定。Linco豬/犬生長激素放射免疫測定試劑盒(RIA)(RGH-45HK)意圖定量測定血清，血漿和組織胚培養(yǎng)基中的生長激素。它是完全同源性的測定，這是由于所述抗體是針對重組豬生長激素激發(fā)的，并且示蹤劑和標準物都是用重組豬生長激素制備的。由于豬生長激素和犬生長激素的氨基酸序列相同，為豬生長激素研發(fā)的測定法用于測定犬生長激素水平時的效率相同。該試劑盒包括完成RIA所需所有成分(標準物，抗體，示蹤劑，質(zhì)量控制劑，沉淀劑和緩沖劑)。測定在以下條件下進行過夜，在室溫平衡保溫；樣品體積100μl血清，血漿或細胞培養(yǎng)基。所用標記物為125I-豬/犬生長激素(18,000CPM/管)。
該測定的結(jié)果是ED80＝2.3±0.2ng/mlED50＝9.8±0.5ng/mlED20＝41.8±1.4ng/ml最后，該測定的特異性如下豬生長激素100％；豬催乳素＜0.1％；犬生長激素100％；人催乳素＜0.5％。
實施例3大鼠血清中類似物與hGHRH(1-29)NH2的體外蛋白水解抗性比較如表4中所示，保溫60分鐘以后，所有GHRH類似物顯示出比hGHRH(1-29)NH2明顯更高的剩余濃度。此外，GHRH類似物#5的剩余濃度明顯高于GHRH類似物1，2或3中的任一種。因此，除了GHRH類似物#4以外，這些結(jié)果表明使用上述測定時，GHRH類似物#5在體外對蛋白水解的抗性最好。
表4大鼠血清中類似物與hGHRH(1-29)NH2的體內(nèi)蛋白水解抗性比較

所示的值表示GHRH類似物的3-4次實驗的平均值±SEM，以及hGHRH(1-29)NH2的19次實驗的平均值±SEM。
實施例4在人血漿和血清中類似物與hGHRH(1-29)NH2的蛋白水解抗性比較現(xiàn)在參照表5和6，可看出hGHRH(1-44)NH2，hGHRH(1-29)NH2和三種RH類似物的體內(nèi)蛋白水解抗性的值。所述抗性表示為在人血漿(表5)和人血清(表6)中，在0-420分鐘的保溫時間內(nèi)，每種肽的平均剩余量(以百分比表示)。更具體地，所述的值代表平均值，標準偏差和與3-7次實驗平均值的標準誤差。
如表5中具體所示，對于GHRH的天然形式，180-420分鐘的保溫時間導致所述肽的平均剩余量明顯降低。反之，保溫180分鐘以后，所有三種(3)類似物仍代表相對較高的平均剩余量(68-81％)。此外，甚至在保溫420分鐘以后，GHRH類似物#5仍代表75％的平均剩余量。利用雙尾不配對t檢驗及Welch校正，以P＜0.05確定為統(tǒng)計學顯著性，在類似物剩余量和人GHRH(1-29)NH2的比較中觀察到顯著差異。通過進一步的統(tǒng)計學分析，還觀察到人血漿中hGHRH(1-29)NH2的剩余量明顯低于GHRH類似物#1，3和5任一的剩余量(P＜0.01)。然而，這些類似物的平均剩余量之間沒有明顯差異。
參考表6，可理解在保溫420分鐘的條件下，雖然hGHRH(1-29)NH2完全消失，GHRH類似物#5保持在其初始濃度的50％。
因此，在人血漿和血清中保溫的條件下，天然形式的GHRH的剩余量明顯低于其類似物的剩余量。
表5在人血漿中保溫的條件下，天然GHRH和GHRH類似物的體外蛋白水解抗性

IT保溫時間；SEM與平均值的標準誤差；SD標準偏差；n實驗次數(shù)。
表6.在人血清中保溫的條件下，天然GHRH和GHRH類似物的體外蛋白水解抗性

IT保溫時間；SEM與平均值的標準誤差；SD標準偏差；n實驗次數(shù)。
實施例5天然形式和類似物形式的GHRH與hGHRH受體的結(jié)合親合力如表7所示，在人GHRH(1-44)NH2IC50和GHRH類似物#5的IC50之間沒有觀察到統(tǒng)計學意義，表明該GHRH類似物對人GHRH受體的親合力至少和天然人GHRH(1-44)NH2一樣高。
所述值表示對類似物以一式三份進行的3次實驗的平均值±SEM，以及對hGHRH(1-44)NH2以一式三份進行的2次實驗的平均值±SEM。IC50是抑制125I-GHRH特異性結(jié)合的50％的肽濃度，通過用于分析競爭性曲線的LIGAND程序測定。
表7.在表達人GHRH受體的BHK細胞膜制備物中人GHRH類似物#5和hGHRH(1-44)NH2的體外結(jié)合親合力

實施例6在表達人GHRH受體的BHK細胞膜制備物中hGHRH(1-29)NH2類似物和hGHRH(1-29)NH2的體外結(jié)合親合力以及所述類似物的體外蛋白水解抗性對于表8-11中表示的結(jié)合測定結(jié)果，其中的值表示以一式三份對類似物進行的8次獨立試驗的平均值±SEM，以及以一式三份對hGHRH(1-29)NH2進行的4次實驗的平均值±SEM。IC50是抑制125I-GHRH特異性結(jié)合的50％的肽濃度，通過用于分析競爭性曲線的LIGAND程序測定。通過取得hGHRH(1-29)-NH2/IC50類似物的IC50比值獲得相對親合力。
對于表9-11中表示的蛋白水解測定結(jié)果，所示值表示5次獨立實驗的平均值±SEM。
如表8所示，GHRH類似物#1，2，3和5對其受體顯示的接合親合力明顯高于hGHRH(1-29)NH2。此外，盡管GHRH類似物#1和#5對人GHRH受體的相對結(jié)合親合力之間沒有明顯差異，但是GHRH類似物#5的親合力明顯高于#3的親合力。
表8.表達人GHRH受體的BHK細胞中GHRH類似物的體外相對結(jié)合親合力


表9.在人血漿中保溫60分鐘后GHRH類似物的體外效力指數(shù)

*0時間時起始含量的％；R1在表達人GHRH受體的BHK細胞中，化合物與hGHRH(1-29)NH2比較的相對結(jié)合親和力；R2所述化合物與hGHRH(1-29)NH2比較的相對體外蛋白水解抗性。
如表9所示，GHRH類似物#1，3和5的體外效力指數(shù)分別達到758，404和1671。換言之，與天然hGHRH(1-29)NH2相比，這三種(3)類似物對其受體同時具有明顯較高的結(jié)合親合力，并在于人血漿中體外保溫60分鐘的條件下對蛋白水解具有明顯較好的抗性。此外，如下表10所示，所述GHRH類似物在人血漿中保溫180分鐘時的體外效力指數(shù)甚至更高。
表10.在人血漿中保溫180分鐘時GHRH類似物的體外效力指數(shù)

*0時間時起始含量的％；R1在表達GHRH受體的BHK細胞中，化合物與hGHRH(1-29)NH2比較的相對結(jié)合親和力±SEM；R2所述化合物與hGHRH(1-29)NH2比較的相對體外蛋白水解抗性±SEM。
下一個步驟是檢測在人血清中保溫后是否得到相同的結(jié)果。GHRH類似物#5的結(jié)果見表11。再一次，在人血清中保溫60或180分鐘時，GHRH類似物#5與天然hGHRH(1-29)NH2相比仍顯示較高的體外效力指數(shù)。
表11在人血清中保溫60和1 80分鐘后GHRH類似物#5的體外效力指數(shù)

*0時間時起始含量的％；R1在表達人GHRH受體的BHK細胞中，化合物與hGHRH(1-29)NH2比較的相對結(jié)合親和力±SEM；R2所述化合物與hGHRH(1-29)NH2比較的相對體外蛋白水解抗性±SEM。
實施例7GHRH類似物在特異性刺激體內(nèi)GH釋放中的用途本發(fā)明涉及GHRH類似物在特異性刺激體內(nèi)GH釋放中的用途。這種用途基于以下背景。
將所有影響GH合成和分泌的因素綜合在一起導致脈沖模式的釋放，從而難以解釋單次測定的血漿GH水平。血中的基本GH濃度非常低。在兒童和年輕成人中，生長激素釋放最多的時間是在深睡眠開始后不久。GH分泌的模式是短暫的，每天由6-8個脈沖，且各個脈沖之間的水平非常低，并且與睡眠循環(huán)的階段3和4相關(guān)，但這種相關(guān)性隨年齡增長而變得不明顯。這些脈沖中的一些與飲食，壓力，鍛煉和慢波睡眠有關(guān)。
女性的GH脈沖更頻繁出現(xiàn)，并且血漿GH基礎(chǔ)水平更高，而男性的GH脈沖較少但波幅較高。在人類，在24小時的晝夜跨度中通常有一次高分泌脈沖和一些低分泌脈沖。睡眠階段的延遲，提前或中斷將改變相應(yīng)的主要GH分泌脈沖。至少在人類，GH分泌也通過內(nèi)源性生理節(jié)律控制。當睡眠周期由正常時間改變時，一些GH仍根據(jù)內(nèi)源性生物鐘在夜間較早的時候分泌。GH分泌在生長期和成年期早期最高。在人中，分泌速率在30-40歲時開始降低。隨著年齡增長，白天的分泌脈沖首先降低，而睡眠相關(guān)的GH脈沖仍保持。
在動物中，更難發(fā)現(xiàn)GH分泌和睡眠之間的關(guān)系，這是因為許多動物種類在24小時的晝夜跨度中通常具有數(shù)個睡眠階段。然而，在數(shù)種哺乳動物中證實睡眠中血漿GH水平升高(Van Cauter綜述，E.等Sleep，1998，21553-566)。在神經(jīng)科學廣泛使用的動物模型大鼠中，GH分泌為脈沖性的，大約3.3小時為一周期。該節(jié)律與周期長度相同的超(uetradian)晝夜睡眠-蘇醒節(jié)律相關(guān)，使得GH脈沖最多比睡眠早約24分鐘(Mitsugi，N.andKimura，F(xiàn).Neuroendocrinol.，1985，41125-130)。在白天短期(3h)完全睡眠剝奪導致大鼠在剝奪期的GH分泌降低(Kimura，F(xiàn).and Tsai，C.-W.J.Physio.(Lond.)，1984，353305-315)。
為評估GHRH類似物的這種用途，進行以下實驗。更具體地，目的是評估當通過皮下或靜脈內(nèi)注射一次性將GHRH類似物#5給藥雌性Sprague-Dawley大鼠然后觀察14天時，GHRH類似物#5的藥效和藥代動力曲線以及急性毒性，以及當通過皮下注射將GHRH類似物以遞增劑量給藥Beagle狗和至少兩天的清除期(washout period)后，所述GHRH類似物的藥效曲線。上述GHRH類似物是酰胺化的合成2 9氨基酸肽的合成乙酸鹽的變體，其對應(yīng)天然存在的人生長激素-釋放激素(GHRH)的氨基末端部分，并在位置2，10，15和22具有四個氨基酸取代。
實驗結(jié)果i大鼠研究按照一式兩份盲性檢測每個樣品，并且結(jié)果表示兩份樣品的數(shù)學平均值。血漿和樣品的來源對于分析者而言是未知的。
用于檢測大鼠GH的大鼠血漿的結(jié)果顯示在下表12中。表12中的每個值表示兩只動物的數(shù)學平均值。隨后用所述數(shù)據(jù)對時間作圖，并將靜脈內(nèi)給藥的藥效曲線表示在圖1中，而將皮下給藥的藥效曲線表示在圖2中。
生長激素在不同時間的曲線下面積(AUC)顯示在表13中。
所得數(shù)據(jù)顯示靜脈內(nèi)和皮下給藥GHRH類似物#5激發(fā)劑量-依賴性反應(yīng)將GH分泌到周圍血中。觀察到GH水平有明顯的動物間差異。這證實了其它觀察結(jié)果。
大多數(shù)動物顯示循環(huán)生長激素的給藥前濃度升高。在GHRH或NaCl注射后300分鐘(5小時)，在所有組的大鼠中GH濃度有升高的趨勢。
表12在不同時間點成年雌性大鼠對GHRH類似物5#給藥產(chǎn)生反應(yīng)得到的大鼠生長激素分泌的幅度

BW體重；ND未測定。
如表12中所示，大鼠生長激素(ng/mL)以一式兩份測定。所示值表示每個時間點兩只動物的平均值。途徑表示給藥途徑為皮下(SC)或靜脈內(nèi)(IV)。
表13通過GH曲線下面積(AUC)測定的成年雌性大鼠對GHRH類似物5#給藥產(chǎn)生反應(yīng)得到的總大鼠生長激素分泌

BW體重。
如表1 3所示，途徑表示皮下(SC)或靜脈內(nèi)(IV)給藥途徑。此外，GH AUC在GHRH給藥后45，120或300分鐘測定。
i對狗的研究按照一式兩份盲性檢測每個樣品，并且結(jié)果表示兩份樣品的數(shù)學平均值。血漿和樣品的來源對于分析者而言是未知的。
用于檢測犬GH的犬血漿的結(jié)果顯示在下表14中。隨后用所述數(shù)據(jù)對時間作圖，并將皮下給藥的藥效曲線表示在圖3中。
所述數(shù)據(jù)顯示皮下給藥GHRH類似物#5激發(fā)劑量-依賴性反應(yīng)將GH分泌到周圍血中。
根據(jù)注射的劑量，在GHRH注射后約30-50分鐘，GH濃度有升高的趨勢。
將GHRH類似物給藥大鼠和狗以后，沒有觀察到治療相關(guān)的臨床癥狀。
表148月齡Beagle狗對GHRH類似物#5給藥的反應(yīng)而在不同時間點所得的犬生長激素分泌水平

數(shù)據(jù)說明以上所示數(shù)據(jù)明顯證明了合成GHRH類似物#5識別大鼠和狗垂體中的GHRH受體，且激發(fā)GH反應(yīng)并分泌到循環(huán)中。在大鼠中，所述反應(yīng)在峰高度和峰AUC方面都是劑量-依賴性的。單次皮下注射后的峰值分泌在10-15分鐘之間，并在靜脈內(nèi)注射后在4-10分鐘之間出現(xiàn)所述峰值。從脈沖幅度和AUC而言，對GHRH類似物#5反應(yīng)出現(xiàn)的GH分泌比對天然hGHRH(1-44)NH2反應(yīng)出現(xiàn)的GH分泌高兩倍以上。最高GHRH類似物#5單次IV劑量誘導瞬時生長激素細胞脫敏作用。
在狗中的情況與大鼠相同，對GHRH類似物#5發(fā)生反應(yīng)導致的GH分泌是劑量依賴性的。單次皮下注射后的峰值分泌在5-15分鐘之間出現(xiàn)，而且還存在對鹽水或天然GHRH反應(yīng)時沒有觀察到的第二GH峰，表明在犬血漿中所述類似物的穩(wěn)定性較長。GH對GHRH類似物#5的反應(yīng)明顯高于對天然hGHRH(1-44)NH2(AUC未測定)反應(yīng)導致的GH分泌。
結(jié)論已經(jīng)建立了體內(nèi)試驗原理(proof-of-concept)。GHRH(1-29)NH2合成類似物的氨基酸序列為H-Tyr D-Ala2AspAla lle Phe Thr Asn serD-Tyr10Arg Lys Val LeuD-Ala15Gln LeuSer Ala Arg Lys Lys22Leu Gin Asp He MetSerArg-NH2，其中Ala2，Tyr10，Gly15，和Leu22已經(jīng)被D-Ala2，D-Tyr10，D-Ala15和Lys22取代，所述類似物與大鼠和狗垂體中的生長激素上的GHRH受體結(jié)合，并刺激生長激素以劑量依賴的方式進行分泌和釋放。
GHRH類似物#5在體內(nèi)的效力比天然的44氨基酸GHRH至少高兩倍。
權(quán)利要求
1.GHRH類似物、所述類似物的功能衍生物或其可藥用的鹽，其包括式XTyr-A2-Asp-Ala-Ile-Phe-Thr-A8-A9-A10-Arg-Lys-Val-Leu-A15-Gln-Leu-Ser-Ala-Arg-A21-A22-Leu-Gln-Asp-Ile-Met-Ser-Arg-A30-NH2，其中，A2是Ala或D-Ala；A8是Asn，D-Asn或Ala；A9是Ser或Ala；A10是Tyr或D-Tyr；A15是Gly，Ala或D-Ala；A21是Lys或D-Lys；A22是Leu，D-Leu，Lys或Ala；和A30是鍵或者為1-15個殘基的任何氨基酸序列；所述類似物，所述類似物的功能衍生物或其鹽具有的體外效力指數(shù)基本上高于天然存在的GHRH的體外效力指數(shù)。
2.權(quán)利要求1的GHRH類似物，其功能類似物或鹽，其中所述類似物選自下組，其中-A2是D-Ala，A8是Ala，A15是Ala，A22是Lys；A9，A10，A21和A30如權(quán)利要求1中定義；-A2是D-Ala，A10是D-Tyr，且A22是Lys；A8，A9，A15，A21和A30如權(quán)利要求1中定義；且-A2是D-Ala，A10是D-Tyr，A15是D-Ala，且A22是Lys；A8，A9，A21和A30如權(quán)利要求1中定義。
3.權(quán)利要求1的GHRH類似物，其功能類似物或鹽，其中所述類似物選自下組，其中A2是D-Ala，A8是Ala，A15是Ala，A22是Lys；A9，A10，A21和A30如權(quán)利要求1中定義。
4.權(quán)利要求1的GHRH類似物，其功能類似物或鹽，其中所述類似物選自下組，其中A2是D-Ala，A10是D-Tyr，且A22是Lys；A8，A9，A15，A21和A30如權(quán)利要求1中定義。
5.權(quán)利要求1的GHRH類似物，其功能類似物或鹽，其中所述類似物選自下組，其中A2是D-Ala，A10是D-Tyr，A15是D-Ala，且A22是Lys；A8，A9，A21和A30如權(quán)利要求1中定義。
6.權(quán)利要求1-5任一的GHRH類似物，其中所述體外效力指數(shù)比天然存在的GHRH的體外效力指數(shù)高至少500倍。
7.權(quán)利要求6的類似物，其中所述體外效力指數(shù)比天然存在的GHRH的體外效力指數(shù)高至少1500倍。
8.權(quán)利要求7的類似物，其中所述體外效力指數(shù)比天然存在的GHRH的體外效力指數(shù)高至少2500倍。
9.一種藥物組合物，包含-有效量的權(quán)利要求1-8任一定義的GHRH類似物，所述類似物的功能衍生物或其可藥用的鹽；和-可藥用的載體。
10.有效量的權(quán)利要求1-8任一定義的GHRH類似物，所述類似物的功能衍生物或其可藥用的鹽，或權(quán)利要求9定義的藥物組合物在特異性刺激體內(nèi)GH釋放中的用途。
11.有效量的權(quán)利要求1-8任一定義的GHRH類似物，所述類似物的功能衍生物或其可藥用的鹽，或權(quán)利要求9定義的藥物組合物在制備用于治療GH缺乏相關(guān)的疾病的藥物中的用途。
12.權(quán)利要求11的用途，其中所述疾病選自下丘腦垂體性侏儒癥，燒傷，骨質(zhì)疏松癥，腎衰，骨不連合性骨折，急性/慢性消耗性疾病或感染，傷口愈合，術(shù)后疾病的發(fā)病率降低，泌乳衰竭，婦女不孕，癌癥患者的惡液質(zhì)，組織代謝和/或分解代謝疾病，T-細胞免疫缺陷，神經(jīng)退行性病變，GHRH受體-依賴性腫瘤，衰老，睡眠疾病，肌內(nèi)消瘦性疾病，所述肌內(nèi)消瘦性疾病見于例如肌肉減少癥的患者，虛弱的老年人，HIV患者和患有放射治療和化學治療-相關(guān)的副作用的癌癥患者。
13.根據(jù)權(quán)利要求12的用途，其中所述肌內(nèi)消瘦性疾病選自肌肉減少癥，老年人身體虛弱，HIV和癌癥。
14.啟動哺乳動物中GHRH-誘導的生物作用的方法，所述方法包括以下步驟-將有效量的權(quán)利要求1-8任一定義的GHRH類似物、所述類似物的功能衍生物或其可藥用的鹽，或權(quán)利要求9定義的藥物組合物給藥所述哺乳動物。
15.權(quán)利要求14的方法，其中所述GHRH-誘導的生物作用選自調(diào)節(jié)睡眠疾病，調(diào)節(jié)攝食疾病和蛋白質(zhì)合成增加。
16.權(quán)利要求15的方法，其中所述蛋白質(zhì)合成的增加導致肌肉質(zhì)量增加或乳汁產(chǎn)量增加。
全文摘要
本發(fā)明涉及生長激素釋放激素(GHRH)類似物。更具體地，本發(fā)明涉及29個或以上氨基酸的合成GHRH類似物，同時在體外實驗中所述合成GHRH類似物與人天然GHRH(1－29)NH
文檔編號C12N15/16GK1688696SQ03822291
公開日2005年10月26日 申請日期2003年9月17日 優(yōu)先權(quán)日2002年9月18日
發(fā)明者皮里特·高德里厄 申請人:蒙特利爾大學醫(yī)療中心